Toksikološka procjena i zaštitni efekti etanolnog ekstrakta lista Cassia Spectabilis DC na funkciju jetre i bubrega miševa inficiranih Plasmodium Berghei

1. Uvod

Do danas je problemPlasmodiumotpornost parazita na postojeće antimalarijske lijekove je još uvijek veliki problem za iskorjenjivanje malarije [1–3]. stoga se nastavlja istraživanje o otkrivanju novih izvora antimalarijskih lijekova, od kojih je jedan iz ljekovitog bilja [4].In vivoiin vitromodeli se dugo koriste u antimalarijskom testiranju. U drugoj polovini 20. veka,Plasmodium bergheiiliPlasmodium yoeliije korišten za zarazu glodara. u međuvremenu,P. bergheipostala najčešće korištena vrsta za proučavanje u fazi jetre, posebno formiranje hipnozoita za istraživanje recidiva malarije [5–7].

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE BILJNU FORMULACIJU CISTANCHE ZA BUBREGE

Jedna od tradicionalnih biljaka u Indoneziji, Cassia spectabilis DC iz porodice Caesalpiniaceae, eksperimentalno je dokazana in vitro protiv P. falciparum i u liječenju malarije in vivo protiv P. berghei [8, 9], što ukazuje da je biljka C. spectabilis DC veliki potencijal da se dalje razvija kao kandidat za lijekove protiv malarije. Prethodni radovi su objavili da je in vivo test na 90% etanolnom ekstraktu lista C. spectabilis DC protiv P. berghei ANKA kod BALB/c miševa pokazao da je vrijednost ED50 iznosila 131,5 mg/kg TM [9], te je kategorizirana kao vrlo dobra antimalarijska aktivnost [10].

Nadalje, ekstrakt, frakcije, podfrakcije i izolirana jedinjenja C. spectabilis DC testirani su in vitro na njihovo antimalarijsko djelovanje. *Aktivno jedinjenje ove biljke je uspešno identifikovano kao jedinjenje koje je identično (–){{0}}hidroksikasinu, a njegov in vitro test antimalarijske aktivnosti pokazao je veoma nizak IC50 od 0,016 ug/mL [ 11], koji je klasifikovan kao vrlo jaka antimalarijska aktivnost [12].

Istraživanje ove biljke o prevladavanju rezistencije na lijekove protiv malarije nastavljeno je ispitivanjem sigurnosti i učinaka poboljšanja ekstrakta lista C. spectabilis DC na funkcije jetre i bubrega kod miševa zaraženih P. berghei ANKA. Istraživanja o djelovanju ljekovitih biljaka koje imaju antimalarijsko djelovanje na funkciju jetre i bubrega kod miševa zaraženih parazitima su široko provedena [13–16], kao i testovi akutne i subakutne toksičnosti [17–20]. Jetra ima važnu ulogu u regulaciji fizioloških procesa. je organ uključen u nekoliko vitalnih funkcija kao što su metabolizam, izlučivanje i skladištenje. Osim toga, jetra ima važnu ulogu u detoksikaciji i izlučivanju endogenih i egzogenih spojeva [21–24].

Malarijalna infekcija počinje kada se sporozoiti inficiraju ubodom ženke komarca Anopheles inficirane malarijskim parazitom. Tokom hranjenja krvlju, inficirana ženka Anopheles ubrizgava sporozoitni stadijum parazita [25, 26]. Nakon otprilike sat vremena putovanja u ljudskom tijelu, sporozoiti zatim ulaze u jetru, napadaju hepatocite i započinju aseksualni ciklus egzoeritrocitne šizogonije. Unutar ćelija jetre, paraziti se razmnožavaju aseksualno, sve dok ne dostignu zreli šizont, i konačno, veliki broj merozoita proizvodi i ulazi u krvotok nakon inficiranja pucanja hepatocita. *inficirani hepatociti koji uzrokuju oštećenje jetre uslijed rupture inficiranih hepatocita i merozoita ulaze u krvotok i započinju eritrocitni ciklus u crvenim krvnim stanicama [27, 28]. Oštećenja koja nastaju u stanicama jetre mogu povećati enzime koji djeluju na funkciju jetre, posebno enzim transaminaze, te morfološke promjene u izgledu jetre [29, 30], kao što je hepatomegalija. Hepatosplenomegalija je uobičajena karakteristika malarijske infekcije kod ljudi [31] i miševa [32] uzrokovana kroničnom izloženošću malarijskim parazitima. Međutim, nema povećanja bubrega u infekciji malarije.

Disfunkcija jetre može se otkriti hepatocelularnom transaminacijom plazme glutamičke oksaloacetatne transaminaze (SGOT) i plazma glutamin piruvične transaminaze (SGPT) oslobođene u plazmi, ili histološkim pregledom tkiva [33]. Najčešća oštećenja su aktivacija apoptotske smrti ćelije ili nekroza hepatocita [34–36]. Klinički značajno zahvaćenost bubrega povezana je sa infekcijom P. falciparum i P. malariae. *Infekcija P. falciparum uzrokuje akutne manifestacije, u rasponu od asimptomatskih, do poremećaja mokrenja i blagih poremećaja elektrolita za akutnu bubrežnu insuficijenciju (ARF) ili akutnu ozljedu bubrega (AKI) koje zahtijevaju podršku dijalizom [27, 37]. * Poznato je da slučajevi AKI u komplikacijama malarije doprinose visokoj stopi mortaliteta, koja iznosi oko 75% slučajeva. * Histološka studija ukazuje na prisustvo glomerulonefritisa, akutne tubularne nekroze i intersticijalnog nefritisa kao ključnog hemodinamskog faktora u AKI-u povezanom s malarijom [38]. Generalno, stepen disfunkcije bubrega može se otkriti prisustvom adekvatne količine proteina u urinu i povećanjem nivoa uree, kreatinina i elektrolita u plazmi [39].

*Toksičnost 90% etanolnog ekstrakta listova C. spectabilis DC (EECS) kod BALB/c miševa, praćena enzimskim ispitivanjima, može uticati na histopatologiju i funkcije jetre i bubrega nakon primjene EECS.

2. Materijali i metode

2.1. Biljni materijal i priprema EECS. *e C. spectabilis

DC listovi su kupljeni i određeni u LIPI (Indonezijski istraživački centar), Botanička bašta, Purwodadi, Istočna Java, Indonezija (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *Uzorak je deponovan kao herbarijum na Odsjeku za farmakognoziju i fitohemiju, Farmaceutskog fakulteta, Universitas Airlangga. *Listovi su temeljno isprani vodom iz slavine kako bi se uklonili strani zagađivači, osušeni na 45 stepeni i mljeveni u prah. *e ekstrakcija je izvedena maceracijom biljnog materijala u prahu (500 g) u tikvici koja sadrži 2500 mL 90% etanola (na 25-30 stepeni) u trajanju od 3 × 24 sata. *e ekstrakcijski rastvarač je odvojen, filtriran kroz filter papir i uparen pod sniženim pritiskom rotacionim isparavanjem. *Prinos etanolnog ekstrakta od 1000 g osušene težine praha lista C. spectabilis DC iznosio je 10,20% (w/w) i korišten je u ovom eksperimentu.

2.2. Životinje.

U istraživanju su korišćeni mužjaci BALB/c miševa starosti 6-8 nedelja, težine 25-30 g. Svi miševi su dobijeni iz Farma veterinarskog centra, Generalnog direktorata za stoku i zdravlje životinja Ministarstva poljoprivrede, Surabaya, Istočna Java, Indonezija. *Životinje su bile smještene u standardnim uvjetima i hranjene stočnom hranom i vodom ad libitum. *Odobrenje protokola studije dobijeno je od Etičkog odbora za istraživanje životinja, Universitas Air langga, Indonezija, broj 2.KE.181.10.2018.

2.3. Test akutne toksičnosti.

EECS je izmjeren i resuspendiran sa 0.5% natrijum karboksimetil celuloze (Na CMC) da bi se dobile željene doze. BALB/c miševi su gladni 24 sata prije nego što su hranjeni ekstraktom. * Životinje su podijeljene u tri grupe, od kojih je svaka sadržavala pet miševa. *e doze za svaku grupu bile su 1.250; 2.500; i 5,000 mg/kg TM, respektivno. Opće ponašanje svakog miša promatrano je neprekidno jedan sat nakon svake doze, povremeno svaka četiri sata, a nakon toga u periodu od 24 sata [40-42].

2.4. Test subakutne toksičnosti.

U testu subakutne toksičnosti, miševi su grupisani u tri grupe i svaka grupa je tretirana EECS odjednom, pet puta i deset puta dnevnom oralnom dozom od 150 mg/kg telesne mase tokom 28 dana; normalnoj kontrolnoj grupi davana je samo hrana i piće ad libitum [43]. *Životinje su promatrane 28 dana za bilo kakav znak toksičnosti. Na kraju perioda opservacije, sve životinje su žrtvovane pod eterskom anestezijom, a vitalni organi kao što su jetra i bubrezi su uklonjeni svim životinjama za grube i histopatološke pretrage.

2.5. Parazit glodara.

Osetljivost na hlorokin Plasmodium berghei ANKA dobijena je sa Instituta za biomolekularne Eijkman, Džakarta, Indonezija, i održavana serijskim pasiranjem koje je korišćeno u ovoj studiji.

2.6. Utjecaj EECS na nivo plazme SGOT i SGPT.

*is eksperiment je bio supresivni test zasnovan na Petersu [44]. *da li je supresivni test urađen prije procjene EECS-a na nivou plazme SGOT i SGPT. *e životinje su zaražene P. berghei ANKA i podijeljene u pet grupa A, B, C, D i E. *e životinje su tretirane ubrzo nakon infekcije na dan 0 (D0) i nastavio se svakodnevno tri dana (D1–D3). Grupa A kao negativna kontrola primila je oralno 0.5% Na CMC. Grupe B i C, kao tretirane grupe, dobile su EECS u jednoj oralnoj dozi od 150 i 200 mg/kg TM, respektivno. Grupa D je bila pozitivna kontrola kojoj je davan hlorokin u jednoj oralnoj dozi od 100 mg/kg t. Štaviše, grupa E kao zdrava kontrola nije bila zaražena parazitima i dobijala je samo hranu i piće ad libitum. Četvrtog dana (D4) pripremljeni su brisovi krvi svakog miša i mikroskopski pregledani. Nadalje, plazma je sakupljena prije mjerenja nivoa SGOT i SGPT.

2.7. Učinak EECS-a na histopatologiju jetre i bubrega.

Na kraju perioda opservacije, sve životinje su žrtvovane pod eterskom anestezijom prije uklanjanja jetre i bubrega. Nakon vaganja organa, tkiva su zatim fiksirana u 10% rastvoru formaldehida i dalje obrađena za bojenje hematoksilin-eozinom (H&E). *Izvršeno je histopatološko promatranje kako bi se utvrdio toksikološki učinak EECS-a na degenerativne i nekrotične ćelije tkiva. *e oštećenja su ocijenjena na osnovu Gibson-Corley et al. [45].

2.8. Statistička analiza.

*e podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Jednosmjerna analiza varijanse (ANOVA) korištena je za poređenje normalno raspoređenih podataka među tretmanima, nakon čega je uslijedio post hoc test višestrukog poređenja kada je dobivena drugačija značajnost. Kada podaci nisu bili normalno raspoređeni, Kruskal-Wallis i Mann-Whitney U-test su korišteni za procjenu razlika između tretmana.

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kupite za više detalja o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE SA 25% EHINAKOZIDA I 9% AKTEOZIDA ZA BUBREGE