Trombomodulin je pojačan u bubrezima žena s preeklampsijom
Mar 22, 2022
Endotelni glikoprotein trombomodulin reguliše koagulaciju, vaskularnu upalu i apoptozu. Ububreg, trombomodulin štiti barijeru glomerularne filtracije izazivajući preslušavanje između glomerularnog endotela i podocita. Nekoliko glomerularnih patologija karakterizira gubitak glomerularnog trombomodulina. Kod žena sa preeklampsijom, nivoi rastvorljivog trombomodulina u serumu su povećani, što verovatno odražava gubitak iz glomerularnog endotela. Namjerili smo da istražimo da li je ekspresija trombomodulina smanjena u bubrezima žena s preeklampsijom i štakora izloženih inhibitoru angiogeneze. Ekspresija trombomodulina je ispitana imunohistohemijom i qPCR inbubrežniobdukciono tkivo prikupljeno od 11 žena sa preeklampsijom, 22 kontrolne trudnice i 11 netrudnih žena sa hipertenzijom. dalje,bubreziispitivani su pacovi koji su liječeni povećanim dozama sunitiniba ili sunitiniba u kombinaciji sa antagonistima endotelinskih receptora. Nivo proteina glomerularnog trombomodulina bio je povećan ububrezižena sa preeklampsijom. Paralelno, kod pacova koji su bili izloženi sunitinibu, glomerularni trombomodulin je bio povišen na dozno ovisan način, a regulacija glomerularnog trombomodulina je prethodila nastanku histopatoloških promjena. Selektivna ETAR blokada, ali ne i dvostruka ETA/BR blokada, normalizirala je povećanje ekspresije trombomodulina i albuminuriju izazvano sunitinibom. Predlažemo da se ekspresija glomerularnog trombomodulina povećava u ranoj fazioštećenje bubregaizazvana antiangiogenim stanjima. Povećanje ovog nefroprotektivnog proteina u glomerularnim endotelnim stanicama može poslužiti kao mehanizam za zaštitu barijere glomerularne filtracije kod preeklampsije.
Ključne riječi;otkazivanja bubrega; bubreg; oštećenje bubrega; Disfunkcija bubrega; bubrežna tkiva; bubrežni
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI BUBREZU/BUBREZU
Preeklampsija pogađa 3-5 posto trudnica i važan je uzrok morbiditeta i mortaliteta majki i novorođenčadi1. Preeklampsiju karakteriše disfunkcija placente i placentalna proizvodnja nekoliko antiangiogenih i proinfamatornih faktora (npr. rastvorljivi Flt-1, rastvorljivi endoglin i TNF-alfa), koji doprinose sistemskoj endotelnoj disfunkciji, povećanju vaskularnog otpora i komplikacije na više organa2. Thebubregčesto se javlja kod žena s preeklampsijom, sa simptomima u rasponu od blage proteinurije do proteinurije nefrotskog raspona iotkazivanja bubregau kasnijim stadijumima bolesti3. Patološke promjene ububrezikod žena sa preeklampsijom karakteriziraju endotelini, brisanje nastavka stopala podocita i gubitak podocita4,5. Ono što pokreće ove patološke promjene nije u potpunosti razjašnjeno.Disfunkcija bubregakod preeklampsije je vjerovatno uzrokovana poremećajem signalnih puteva uključenih u održavanje barijere glomerularne filtracije6. Na primjer, povećani nivoi antiangiogenog faktora rastvorljivog Flt-1 dovode do poremećene VEGF signalizacije u glomerulu, što dovodi do poremećaja glomerularne filtracijske barijere, proteinurije i glomerularne endotelioze7,8. U skladu s tim, lijekovi koji inhibiraju angiogenu signalizaciju kao što je sunitinib povezani su sa štetnim efektima koji oponašaju preeklampsijububregfenotip9. Još jedan važan medijator hipertenzije ipovreda bubregakod preeklampsije i inhibicije VEGF-a je endotelinski sistem10. Endotelin je snažan vazokonstriktor koji proizvode endotelne stanice koje signaliziraju putem tipa endotelina
Receptor (ETAR) na glatkim mišićnim ćelijama krvnih sudova, što dovodi do vazokonstrikcije11. Suprotno tome, prijenos signala endotelina preko receptora endotelina tipa B (ETBR) dovodi do proizvodnje dušikovog oksida i prostaciklina koji potiču vazodilataciju11,12. ETR blokada, a posebno selektivni ETAR antagonizam, efikasno smanjuje krvni pritisak i proteinuriju u modelima preeklampsije i VEGF-inhibicije glodara13. Slično, nedavno smo pokazali da selektivna ETAR blokada spašavabubrežnifenotip pacova izloženih VEGF-inhibiciji14. Trombomodulin je transmembranski glikoprotein koji se prvenstveno eksprimira u endotelnim stanicama i komponenta je endotelnog površinskog glikokaliksa15. Trombomodulin održava vaskularnu homeostazu regulacijom koagulacije, upale i apoptoze15,16. Kod žena s preeklampsijom, zabilježeni su povećani nivoi rastvorljivog trombomodulina u serumu17, što vjerovatno utiče na povećano cijepanje ektodomena trombomodulina iz endotela18. Trombomodulin igra ključnu ulogu u održavanju barijere glomerularne fltracije kod dijabetičkih miševa: poremećena signalizacija trombomodulina dovodi do povećane apoptoze glomerularnih endotelnih stanica i podocita i povećane aktivacije glomerularnog komplementa, što rezultira pogoršanom proteinurijom2, glomerularnom glomerijom. Dakle, trombomodulin ima važne citoprotektivne efekte na barijeru glomerularne fltracije, a poremećaj trombomodulinske signalizacije može biti uključen ubolest bubregakod preeklampsije. U ovoj studiji smo istraživali da li je ekspresija trombomodulina smanjena ububrezižena sa preeklampsijom i kod pacova modela VEGF-inhibicije. Nadalje, istražili smo ulogu endotelinskog sistema na ekspresiju bubrežnog trombomodulina u ovom modelu pacova korištenjem selektivnog ETAR antagonista i dvojnog ETA/BR antagonista.
Metode
Materijal za pacijente. Kohorta bubrežne autopsije korišćena u ovoj studiji je opisana ranije (videti:21). Ukratko, provedena je nacionalna pretraga Holandskog registra za patologiju (PALGA) kako bi se prikupilabubrežnih tkivaod pacijenata koji su bili trudni i kod kojih su potvrđeni slučajevi preeklampsije. Osim toga, uključene su dvije kontrolne grupe: (1) trudnice bez hipertenzivnog poremećaja prije ili tokom trudnoće i (2) mlade žene koje nisu trudne s anamnezom hronične hipertenzije. Podaci o patologiji povezani su sa evidencijom Nacionalnog komiteta za smrtnost majki Holandskog akušerskog društva. Preeklampsija je definisana na osnovu dijagnostičkih kriterijuma Međunarodnog društva za proučavanje hipertenzije u trudnoći (ISSHP)22. Parafin-embeddedbubregUzorci od 11 žena sa preeklampsijom, 22 kontrolne grupe sa normotenzivnim trudnoćom i 11 kontrolna grupa koje nisu trudne bile su dostupne za ovu studiju. Svi uzorci autopsije su šifrirani, a zatim obrađeni i analizirani anonimno u skladu sa holandskim nacionalnim etičkim smjernicama (Kodeks za pravilnu sekundarnu upotrebu ljudskog tkiva, Nizozemska federacija medicinskih naučnih društava). Ovu studiju je odobrio Odbor za medicinsku etiku Medicinskog centra Univerziteta u Leidenu (broj licence P12.107).
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI FUNKCIJU BUBREGA/BUBREGA
Pacovi. Eksperimenti su izvedeni u skladu sa smjernicama iz Direktive 2010/63/EU Evropskog parlamenta i Holandskog Zakona o eksperimentima na životinjama, nakon dobijanja odobrenja Erasmus Medical Center Animal Ethics Committee (licenca broj 118-16-01). Mužjaci Wistar Kyoto pacova (WKY, 280–300 g) su dobijeni u dobi od 10 sedmica. Životinje su bile smještene u eksperimentalnoj prostoriji s temperaturom održavanom na 21-22 stepena i ciklusom svjetlo/mrak 12-h. Životinje su imale pristup standardnoj laboratorijskoj hrani za pacove i vodi ad libitum. U ovoj studiji korišćena su dva različita eksperimenta, sa detaljnim metodama i fenotipom ovih životinja objavljenim ranije14,23. Ukratko, pacovi su liječeni različitim dozama sunitiniba sa ili bez ETR antagonista tokom 8 dana. Aortni krvni pritisak meren je radiotelemetrijom. Prije i nakon primjene tretmana(a), pacovi su smješteni u metaboličke kaveze 48 h. Prvi dan je korišten za aklimatizaciju, a drugi dan za prikupljanje uzoraka 24-h urina. U prvoj studiji, štakori su nasumično raspoređeni da primaju nisku, srednju ili visoku dozu sunitiniba (7, 14 ili 26,7 mg/kg/dan po sunitinib-L-malatu (Sutent, Pfizer), respektivno) ili vehikuluma tokom 8 dana . Na kraju eksperimenta, pacovi su eutanazirani sa 60 mg/kg pentobarbitala intraperitonealno i iskrvavljeni putem punkcije abdominalne vene23. U drugoj studiji, štakorima je davan vehikulum ili srednja doza sunitiniba (14 mg/kg/dan po) samostalno ili u kombinaciji sa macitentanom (dvostruki ETA/BR antagonist, 100 mg/kg/dan po) ili sitaksentanom (selektivni ETAR antagonist, 30 ili 100 mg/kg/dan po). Na kraju eksperimenta, pacovi su eutanazirani predoziranjem anestezijom Forane (izofluran) i iskrvavljeni putem punkcije trbušne vene14. U obje studije, nakon eutanazije,bubrezisu brzo izrezani za naknadne analize.
Renalna histologija.Sekcije bubrega su slijepo procijenjene od strane patologa za prisustvo ili odsustvo otoka endotelnih ćelija, otoka epitelnih ćelija, ishemije i intraepitelnog proteina. Za elektronski mikroskop su ispitana dva glomerula, prisustvo glomerularnih endotelina i morfologija podocita. Histopatološki nalazi kod ljudi i životinja izloženih različitim koncentracijama sunitiniba objavljeni su ranije21,23.
Imunohistohemija.Sekcije bubrega su deparafinizovane. Toplotno indukovano uzimanje antigena izvedeno je korišćenjem citratnih (anti-humanih trombomodulinskih antitijela) ili Tris/EDTA (anti-pacovskih trombomodulinskih i anti-ETAR antitijela) pufera. Peroksidaza je blokirana u rastvoru vodikovog peroksida 20 minuta.Bubreguzorci su inkubirani sa mišjim monoklonskim antihumanim trombomodulinom (1:200, Leica Biosystems, Danvers), zečjim monoklonskim anti-mišjim/pacovskim trombomodulinom (1:2000, Abcam) ili zečjim poliklonskim anti-ETAR (1:700, Invitrogen, Carlsbad) antitelo jedan sat na sobnoj temperaturi. Vezivanje primarnog antitijela je vizualizirano s peroksidazom obilježenim antimišjim ili obilježenim anti-zečjim polimerom (Dako, Danska) i diaminobenzidinom kao hromogenom.
Analiza bojenja.Bojenje trombomodulinom i ETAR-om su ocijenila dva nezavisna posmatrača zaslijepljena u pogledu kliničke dijagnoze i liječenja (CCLA i MB). Dvadeset pet nasumično odabranih glomerula po uzorku je ocijenjeno korištenjem semi-kvantitativne skale kako slijedi: 0, odsutno; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 posto glomerularnog bojenja. Reprezentativni primjeri različitih rezultata prikazani su na dodatnim slikama S1, S2, S3. Slaganje među posmatračima bilo je minimalno dovoljno u svim eksperimentima za bodovanje (κ veće ili jednako 0,5). Kada su posmatrači različito ocenili glomerule, postignut je konsenzus.
qPCR.Kvantitativni PCR je izvršen da se kvantifikuje ekspresija mRNA trombomodulina i ET AR. RNK je izolovana TRIzol reagensom (Life Technologies, San Francisco, CA, SAD). Sinteza cDNK izvršena je sa AMV reverznom transkriptazom (Roche, Basel, Švicarska), a SYBR Green kvantitativni PCR urađen je prema protokolu proizvođača (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, USA). Prajmer sekvence su opisane u Dodatnoj tabeli S1. Ekspresija je mjerena metodom komparativnog ciklusa praga i normalizirana na ekspresiju hipoksantin fosforiboziltransferaze. Izvršena je analiza krivulje topljenja kako bi se provjerila specifičnost primjene.
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI BUBREŽNU/BUBREZNU DIJALIZU
Statistička analiza.Varijacija među promatračima određena je korištenjem kapa statistike. Normalno raspoređeni kontinuirani podaci analizirani su korištenjem jednosmjerne ANOVA praćene post-hoc testom najmanje značajne razlike za planirana poređenja grupa u paru. Za analizu razlika u rezultatu ekspresije glomerularnog trombomodulina između grupa u kohorti autopsije korišćena je ordinalna logistička regresija za grupisane podatke sa generalizovanim jednadžbama za procenu (GEE). Za analizu navodnih korelacija između ekspresije trombomodulina i histopatoloških ili kliničkih nalaza korištena je Pearsonova korelacija. Oblici trombomodulina i krivulja ET AR odgovora u rasponu doza sunitiniba ispitani su pomoću regresijskih linija. str<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Rezultati Glomerularni trombomodulin je povećan u bubrezima žena sa preeklampsijom. Bojenje trombomodulinom analizirano je u uzorcima bubrega 11 žena sa preeklampsijom,22 normotenzivne kontrolne grupe trudnica i 11 kontrola hipertenzije koje nisu trudne. Kontrolne osobe s hipertenzijom bile su starije od žena iz druge 2 studijske grupe; u poređenju sa kontrolnom skupinom trudnica, žene s preeklampsijom imale su dužu trudnoću i viši krvni tlak (Dopunska tabela S2). Bez obzira na prisustvo trombomodulina u glomerulu, trombomodulin je bio prisutan u peritubularnim kapilarama u svim ispitivanim uzorcima (dodatna slika S1). U glomerulima, izgleda da ekspresija trombomodulina potiče iz vaskularnog pola (slika 1A). U proseku, ekspresija glomerularnog trombomodulina bila je veća kod pacijenata sa preeklampsijom u poređenju sa trudnicama i kontrolnom skupinom sa hipertenzijom (slika 1); u poređenju sa preeklampsijom, kontrolne grupe su imale niže rezultate ekspresije glomerularnog trombomodulina (kontrolne grupe trudnica, OR: 3.0; 95 posto -CI: (1,1, 7,8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Ekspresija glomerularnog trombomodulina kod pacova izloženih sunitinibu.Kako bismo bolje razumjeli naše nalaze u preeklampsijibubrezi,Bojenje glomerularnim trombomodulinom proučavano je kod pacova izloženih rastućim dozama inhibitora VEGF-receptora sunitiniba. Primjena sunitiniba rezultirala je povećanjem krvnog tlaka i proteinurije na način ovisan o dozi23. Pacovi izloženi niskoj dozi sunitiniba nisu imali histopatološke anomalije; endotelini su uočeni ububrezipacova izloženih srednjim i visokim dozama sunitiniba; naslage fibrina su viđene samo u glomerularnim kapilarama životinja izloženih visokoj dozi sunitiniba23. Nijedan od glomerula kod pacova nije bio negativan na trombomodulin. Protein glomerularnog trombomodulina povećan je u bubrezima pacova izloženih niskim i srednjim dozama sunitiniba (p < 0.05,="" slika="" 2a),="" ali="" ne="" i="" kod="" štakora="" izloženih="" najvišoj="" dozi="" sunitinib.="" u="" prilog="" ovim="" nalazima,="" regresijski="" model="" je="" pokazao="" da="" su="" nivoi="" proteina="" glomerularnog="" trombomodulina="" bili="" nelinearno="" povezani="" sa="" dozom="" sunitiniba="" kao="" statistički="" značajna="" kvadratna="" relacija="" (slika="" 2b,="" y="2.829" plus="" 0).="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">oštećenje bubregaizazvano inhibicijom VEGF-a. Kod štakora liječenih niskim i srednjim dozama sunitiniba, ali ne i kod štakora liječenih visokom dozom sunitiniba, glomerularno ETAR bojenje je povećano u poređenju sa kontrolnim štakorima (p < {{0}}.0="" 1,="" sl.="" 2c).="" paralelno="" sa="" nivoima="" trombomodulina,="" glomerularni="" etar="" nivoi="" su="" bili="" kvadratno="" povezani="" sa="" dozom="" sunitiniba="" (y="0.642" plus="" 0.087x−0.003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
Tretman ETAR blokatorom sitaksentanom normalizuje ekspresiju trombomodulina.Da bi se ispitalo da li je ekspresija trombomodulina regulisana endotelinskom signalizacijom, pacovi izloženi srednjoj dozi sunitiniba lečeni su agensima za blokiranje ETR. Tretman selektivnim ETAR antagonistom (sitaxentan) normalizirao je krvni tlak i albuminuriju kod pacova liječenih sunitinibom14 (dodatna slika S4). Suprotno tome, liječenje dvostrukim ETA/BR antagonistom (macitentan) rezultiralo je normalizacijom krvnog tlaka, ali ne i normalizacijom albuminurije izazvane sunitinibom14 (dodatna slika S4).
Ekspresija mRNA trombomodulina povećana je u bubrezima pacova izloženih sunitinibu u poređenju sa kontrolama (slika 3A, str.<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Diskusija
Ovdje pokazujemo da je nefroprotektivni protein trombomodulin povećan ububregglomerula žena sa preeklampsijom. Nadalje, pokazujemo da se kod pacova koji su bili izloženi inhibitoru angiogeneze sunitinibu, glomerularni trombomodulin povećava na dozno ovisan način, a povećanje glomerularnog trombomodulina prethodi nastanku histopatoloških manifestacija. Konačno, pokazujemo da blokiranje ETAR-a normalizira regulaciju glomerularnog trombomodulina izazvanu sunitinibom. Naši nalazi sugeriraju da se regulacija glomerularnog endotelnog trombomodulina javlja u ranoj fazi preeklampsije.oštećenje bubregai služi kao mehanizam za zaštitu barijere glomerularne fltracije. Naša studija je prva koja je prijavila povećanu ekspresiju glomerularnog trombomodulina u preeklampsiji. S obzirom da smo prethodno otkrili da je u posteljici žena s preeklampsijom trombomodulin snižen24,
povećani nivoi rastvorljivog trombomodulina ektodomena u serumu kod pacijenata sa preeklampsijom17 mogu biti izvedeni iz glomerularnog endotela. Nadalje, pronašli smo inverznu povezanost između ekspresije glomerularnog trombomodulina i prisustva glomerularnih endotelina, što sugerira da regulacija trombomodulina služi kao zaštitni mehanizam glomerula. Ovu ideju podržavaju pretklinički dokazi kod dijabetičkih miševa, u kojima trombomodulin kritički čuva preživljavanje glomerularnih stanica i potiskuje aktivaciju glomerularnog komplementa19,20. Za razliku od našeg nalaza da antiangiogeno stanje povećava nivoe glomerularnog trombomodulina, prethodna studija je pokazala da tretman sFlt-1 smanjuje ekspresiju glomerularnog trombomodulina kod pacova sa polumjesečastim glomerulonefritisom25. Hara i sar.25 nisu proučavali efekat sFlt-1 na glomerularni trombomodulin kod zdravih pacova. Stoga, iako se povećani nivoi upalnih faktora također nalaze u preeklampsiji, smanjenje glomerularnog trombomodulina u ovoj studiji može se objasniti visokom glomerularnom upalom prisutnom u glomerulonefritisu (proinflamatorni citokini, aktivacija komplementa), koji snažno potiskuje ekspresiju trombomodulina26. .
Kako bismo razjasnili da li je kod preeklampsije glomerularni trombomodulin povećan kao rezultat sistemske inhibicije VEGF-receptora, proučavali smo ekspresiju trombomodulina kod pacova izloženih sunitinibu. Sunitinib ovisno o dozi povećava glomerularni trombomodulin pri niskim i srednjim dozama, ali ne i pri najvišoj dozi. Kako histološke promjene nisu uočene u bubrezima pacova izloženih niskim dozama sunitiniba23, povećanje ekspresije glomerularnog trombomodulina prethodilo je nastanku histopatološkog oštećenja glomerula izazvanog sunitinibom. Kod pacova koji su bili izloženi srednjoj dozi sunitiniba, uočen je najviši nivo ekspresije glomerularnog trombomodulina, što je direktno povezano sa količinom albuminurije. Histopatološki fenotip bubrega naših slučajeva preeklampsije kod ljudi bio je uporediv s oštećenjem bubrega štakora liječenih srednjom dozom sunitiniba: endotelini su uočeni u 6 od 11 preeklampsije
slučajevi i mikrotrombi su uočeni u 1 od 11 slučajeva preeklampsije21, dok su u modelu štakora pacovi tretirani srednjom dozom imali endoteline, a štakori tretirani najvišom dozom imali su endoteline u kombinaciji sa naslagama fibrina23. Predlažemo da se ekspresija glomerularnog trombomodulina povećava u ranoj fazi preeklampsije i angiogene inhibicije, kao zaštitni mehanizam za neutralizaciju antiangiogenog stresa na barijeru glomerularne fltracije. Nasuprot tome, kod pacova tretiranih najvišim dozama, ekspresija trombomodulina je smanjena na kontrolne nivoe. Nedavna studija je otkrila da su dimenzije sloja endotelnog glikokaliksa smanjene kod žena s teškom preeklampsijom s ranim početkom27. Stoga također predlažemo da je kod pacova tretiranih visokim dozama sunitiniba zahvaćen endotelni glikokaliks, što izaziva interakciju između trombomodulina i enzima, čime se doprinosi proteolitičkom cijepanju i gubitku glomerularnog trombomodulinskog proteina. U našim slučajevima preeklampsije, povećani nivoi glomerularnog trombomodulina bili su povezani sa manje glomerularnih endotelina, lezijom direktno uzrokovanom poremećenom glomerularnom VEGF signalizacijom. In vitro studije su identifikovale VEGF kao moćan faktor indukcije ekspresije trombomodulina u endotelnim ćelijama28. Stoga, povećanje renalnog trombomodulina pod antiangiogenim stanjima kao što su preeklampsija i angiogena inhibicija može izgledati kontraintuitivno. Zanimljivo je da je jedna studija pokazala da je VEGF povećan u glomerulima žena sa preeklampsijom29, što vjerovatno odražava glomerularni kompenzacijski mehanizam u pokušaju da se nadoknadi smanjena bioraspoloživost VEGF-a. Prema tome, regulacija trombomodulina može biti uzrokovana kompenzacijskim povećanjem glomerularnog VEGF-a u sistemskim antiangiogenim uvjetima. Nadalje, endotelinska signalizacija može biti uključena u regulaciju glomerularnog trombomodulina. Nivo endotelina u plazmi je povećan kod žena sa preeklampsijom30 i povezan je sa sistemskim nivoima sFlt-131,32. U našem modelu štakora, oba tretmana sa sitaksentanom (ETAR antagonist) i macitentanom (dvostruki ETA/BR antagonist) rezultirala su normalizacijom hipertenzije izazvane sunitinibom kod naših pacova14. Međutim, samo liječenje sitaksentanom (ETAR antagonistom) normaliziralo je pojačanu regulaciju bubrežnog trombomodulina uzrokovanu sunitinibom i smanjilo albuminuriju. Ovo sugerira da je regulacija bubrežne ekspresije trombomodulina neovisna o oštećenju endotela posredovanom hipertenzijom, što je također podržano nedostatkom povećane ekspresije trombomodulina kod naših hipertenzivnih kontrolnih pacijenata. Ostaje da se ispita da li ETAR indukuje ekspresiju trombomodulina preko sistemskih efekata ili putem signalizacije u glomerularnim endotelnim ćelijama specifično. Zanimljivo je da je ekspresija trombomodulina normalizirana samo na nivou mRNA nakon ETAR blokade kod pacova tretiranih sunitinibom, ali ne i na nivou proteina. Ovo neslaganje se može objasniti posttranslacijskim efektima, poluživotom proteina i faktorima koji utiču na cijepanje trombomodulina iz endotela.
Trombomodulin ima važna antiinflamatorna svojstva, koja uključuju inhibiciju infiltracije leukocita sekvestriranjem proinflamatornih molekula kao što su Lewis y antigen i HMGB-133,34, smanjujući aktivnost NF-κB35 i inhibirajući aktivaciju komplementa20. Ranije smo izvijestili da je u našim slučajevima preeklampsije aktivacija glomerularnog komplementa povećana u usporedbi s kontrolnom skupinom trudnica i hipertenzivnih osoba36. To sugerira da regulacija glomerularnog endotelnog trombomodulina u preeklampsiji djeluje kao protuupalni i antikomplementni mehanizam. Pored svojih dobro poznatih antiinflamatornih efekata, nedavna studija je otkrila da trombomodulin ima proinflamatorna svojstva; trombomodulin vezuje integrine leukocita LFA-1 i Mac1, čime se promoviše adhezija leukocita na endotel in vitro37. Povećanje glomerularnog trombomodulina stoga može direktno doprinijeti glomerularnoj upali i oštećenju. Moramo priznati ograničenja naše studije. Prvo, žene s preeklampsijom kod kojih smo ispitivali ekspresiju glomerularnog trombomodulina sve su umrle zbog posljedica preeklampsije. Ovo ove žene čini specifičnom podgrupom pacijenata s preeklampsijom i stoga rezultati ove studije možda neće biti primjenjivi na sve žene koje razviju preeklampsiju. Drugo, mužjaci pacova tretirani sunitinibom korišćeni su kao model za proučavanje regulacije trombomodulina u antiangiogenim uslovima. Štaviše, sunitinib dovodi do inhibicije različitih receptorskih tirozin kinaza i nije specifičan inhibitor VEGF-a. Jasno je da ovaj model ne oponaša u potpunosti preeklampsiju, međutim, liječenje sunitinibom dovodi do hipertenzije i proteinurije23. Stoga smo mogli koristiti ovaj model za proučavanje regulacije trombomodulina u antiangiogenim uvjetima. Unatoč ograničenjima naše studije, ona daje zanimljive uvide u mehanizme oštećenja bubrega u preeklampsiji. U zaključku, ekspresija bubrežnog trombomodulina je povećana u preeklampsiji i u modelu angiogene inhibicije izazvane sunitinibom. Nagađamo da povećanje nivoa glomerularnog trombomodulina odražava reno-protektivni mehanizam kao odgovor na antiangiogeni stres na barijeru glomerularne fltracije. Nadalje, liječenje antagonistom ETAR-a normaliziralo je ekspresiju mRNA bubrežnog trombomodulina istovremeno sa smanjenjem proteinurije kod pacova liječenih sunitinibom. Potrebno je više istraživanja o ulozi trombomodulina u barijeri glomerularne fltracije.
