Metode detekcije cirkulirajućeg egzosomalnog PD-L1

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Još uvijek postoji nedostatak prihvaćenih i mainstream metoda za detekciju cirkulirajućeg egzosomalnog PD-L1. Tradicionalne metode detekcije egzosoma kao što su enzimski imunosorbentni test (ELISA) i analiza protoka mogu se koristiti za otkrivanje PD-L1 u cirkulirajućim egzosomima, a ELISA je trenutno najčešće korištena metoda. ELISA metoda može kvantitativno otkriti sadržaj PD-L1 u cirkulirajućim egzosomima i jednostavna je za rad. Protočna citometrija se može koristiti za kvantitativno otkrivanje cirkulirajućeg egzosomalnog PD-L1 u velikim uzorcima, ali zahtijeva visoku opremu za detekciju. Uz dubinsko istraživanje egzosoma, obogaćuju se i razvijaju metode detekcije egzosomalnih proteina i nukleinskih kiselina, a uvedene su i neke nove metode u oblasti detekcije PD-L1 u cirkulirajućim egzosomima (slika).

Detection ofcirkulirajućiegzosomalniPD-L1

1. Digitalni PCR

Zbog male količine nukleinske kiseline sadržane u egzosomima, konvencionalnim metodama detekcije teško je precizno otkriti broj kopija njihovih gena. Digitalna PCR tehnologija je metoda detekcije nukleinskih kiselina sa izuzetno visokom osjetljivošću i apsolutnom kvantifikacijom. Njegova osjetljivost može doseći nivo jedne molekule nukleinske kiseline, tako da ima prednosti u otkrivanju sadržaja nukleinske kiseline u egzosomima. Istraživači su koristili digitalnu PCR tehnologiju za preciznu kvantitativnu analizu broja kopija PD-L1 mRNA u egzosomima plazme pacijenata s melanomom i karcinomom pluća nemalih stanica i otkrili vezu između broja kopija egzosomalne PD-L1 mRNA u plazmi i korelacije anti-PD1 između efekata tretmana. Uvođenje digitalne PCR tehnologije značajno je poboljšalo sposobnost detekcije egzosomalne PD-L1 mRNA, što je od velikog značaja za istraživanje egzosomalnog PD-L1. Međutim, može postojati nekonzistentnost između sadržaja egzosomalne PD-L1 mRNA i ekspresije PD-L1 proteina. Stoga, samo otkrivanje egzosomalne PD-L1 mRNA može imati određene nedostatke, koji zahtijevaju daljnja istraživanja i pojašnjenje.

Pustinjski cistanche protiv raka ima koristi od ekstrakta cistanchea

2. ELISA

ELISA je tradicionalna imunološka metoda analize koja se često koristi za otkrivanje malih molekularnih proteina u plazmi ili mediju kulture. Ima visoku osjetljivost i može se kvantitativno analizirati. ELISA se također može koristiti za otkrivanje egzosomalnog PD-L1 proteina i može postići kvantitativnu detekciju velikih serija uzoraka. Komplet za detekciju PD-L1 proteina zasnovan na principu ELISA metode je takođe primenjen za kvantitativnu detekciju egzozomalnog PD-L1 proteina u plazmi. Chen et al. konstruisao sistem za detekciju egzosomalnog PD-L1 proteina zasnovanog na principu ELISA, koji je korišćen za detekciju egzosomalnog PD-L1 proteina dobijenog iz medijuma ćelijske kulture ili plazme. Opseg linearne detekcije bio je {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA je dobra metoda za otkrivanje egzosomalnog proteina PD-L1, koji se lako kvantitativno detektuje i ima dobru ponovljivost. Međutim, zbog prisustva slobodnog proteina PD-L1 u plazmi, to će ometati njegovu preciznost. Stoga ova metoda otkriva cirkulaciju. Osjetljivost i specifičnost egzosomalnog proteina PD-L1 još treba dalje istražiti.

Korijen herba cistanche: protiv raka

3. Metoda analize protoka

Protočna citometrija se često koristi za otkucavanje i brojanje ćelija ili drugih bioloških čestica suspendovanih u tečnosti, pa je ova metoda takođe uvedena u detekciju i brojanje egzosoma. THEODORAKIS et al. prvo je koristio hromatografiju za prvo razdvajanje egzozoma u plazmi pacijenata sa karcinomom glave i vrata, a zatim je koristio analizu protoka za otkrivanje i brojanje PD-L1-pozitivnih egzozoma. Ekspresija PD-L1 proteina je izražena kao intenzitet fluorescencije. Rezultati pokazuju da metoda ima dobru reproduktivnost u otkrivanju egzosomalnog proteina PD-L1, a njena intraindividualna varijacija je 7 posto kada se radi više paralelnih testova na jednom uzorku pacijenta. Istovremeno, kako bi potvrdili tačnost metode, istraživači su koristili konfokalnu fluorescentnu analizu kao referentnu metodu za detekciju egzosomalnog proteina PD-L1. Paralelno su testirana tri uzorka, a rezultati su upoređeni i utvrđeno je da su rezultati protočne citometrije i konfokalne fluorescentne analize bili vrlo konzistentni, što ukazuje da je protočna citometrija precizna metoda za kvantitativnu analizu egzosomalnog PD-L1. Pored toga, LUX et al. je također uspješno otkrio ekspresiju egzosomalnih PD-L1 i c-Met proteina u serumu pacijenata s karcinomom gušterače protočnom citometrijom, ali učinak metode detekcije treba dalje proučavati. Trenutno su lansirani i analizatori protoka koji se posebno koriste za detekciju egzosoma, kao što je Apogee ultra-osetljivi analizator nano-protoka, koji je pogodniji za detekciju proteina egzosoma od tradicionalnih analizatora protoka.

Prednosti dodatka ekstrakta cistanche tubulosa: protiv tumora i raka

4. Surface-Enhanced Raman Scattering Technology

Ramanovo ramansko raspršivanje (SERS) je vrlo osjetljiva tehnika spektroskopije otiska prsta koja se široko koristi u biomedicinskim poljima. Trenutno, naučnici koriste SERS tehnologiju za otkrivanje egzosomalnog proteina PD-L1. Istraživači su prvo koristili TiO2-modificirane magnetne kuglice da nespecifično adsorbiraju egzosome u plazmi, a zatim su koristili SERS sonde povezane sa PD-L1 antitijelima da modificiraju nanočestice zlata, a zatim inkubiraju uzorke egzosoma sa nanočesticama zlata. Formira kompleksnu strukturu nanočestica magnetne kuglice-egzozoma-zlata i na kraju koristi magnetno polje da obogati i odvoji kompleks, a zatim se postavi na laserski konfokalni Raman spektrometar za detekciju, kako bi se realizirala detekcija PD-L1 pozitivnih egzosoma. . Detekcija sadržaja tijela. Ova metoda ima visoku osjetljivost detekcije, a njena najniža granica detekcije može doseći 1 PD-L1 plus egzosom/μL plazme. Osim toga, istraživači su koristili ovu metodu za otkrivanje grupe uzoraka različitih koncentracija. Rezultati su pokazali da je intenzitet SERS linearno povezan sa logaritmom koncentracije uzoraka egzosoma, što ukazuje da metoda detekcije ima dobru stabilnost i može se direktno koristiti u plazmi. Otkrijte egzosome bez dodatnog koraka izolacije egzosoma. Trenutno postoji nekoliko studija o direktnoj primeni SERS tehnologije na detekciju egzosomalnog PD-L1 proteina, ali je sprovedeno istraživanje o primeni SERS tehnologije na detekciju drugih egzosoma, koje takođe ima važnu referencu. za detekciju egzosomalne vrijednosti PD-L1 proteina.

Situacija rasta pustinjskog cistanchea

5. HOLMES-ExoPD-L1 metoda

HOLMES-ExoPD-L1 metoda je nova metoda detekcije egzosomalnog PD-L1 proteina. U ovoj metodi, dizajniran je novi MJ5C aptamer koji cilja na PD-L1 protein, koji može efikasno da veže PD-L1 protein na membrani egzosoma i nije ometan glikozilacijom PD-L1 proteina. U ovoj metodi, fluorescentno označeni MJ5C aptamer i egzosomi su prvo ko-inkubirani u tankoj kapilari da se vežu jedan za drugi, a infracrveni laser je fokusiran u tanku kapilaru kako bi se formirao temperaturni gradijent mikronske skale. Stope termoforeze slobodnog MJ5C aptamera i egzosomalnih MJ5C aptamernih kompleksa bile su značajno različite, a termoforetsko iscrpljivanje slobodnog aptamera bilo je brže nego kod kompleksa egzosom-aptamer. odvojeno. Stoga, pod dejstvom ekscitacione svetlosti, sadržaj egzosomalnog PD-L1 proteina može se odrediti detekcijom intenziteta fluorescencije fluorescentno obeleženih aptamera. Metoda ima visoku osjetljivost i granicu detekcije od 17,6 pg/mL. Osim toga, ima i prednosti manjeg volumena uzorka i kratkog vremena detekcije. To je vrlo originalna metoda za detekciju egzosomalnog PD-L1 proteina, što je vrlo važno za razvoj novog. Metoda detekcije egzosomalnog PD-L1 proteina ima prosvjetljujuću vrijednost.

Antitumorski: dodatak cistanche

Egzozomalni PD-L1 ima široku perspektivu primjene u području imunoterapije malignih tumora i postao je jedno od žarišta u području istraživanja egzosoma. U poređenju sa detekcijom tkivne ekspresije PD-L1, detekcija cirkulišućeg egzosomalnog PD-L1 je lakša za dobijanje uzoraka i sprovođenje detekcije u realnom vremenu, uz izbegavanje problema heterogenosti tkiva uzrokovanog patološkim uzorkovanjem; egzosomalni PD-L1 takođe dovodi do imunosti na tumor. Važan je uzrok bijega i povezan je s progresijom malignih tumora, a može postati važan indikator za procjenu bolesti i predviđanje prognoze. Osim toga, očekuje se da će se nivoi egzosoma PD-L1 u plazmi koristiti za skrining pacijenata koji su pogodni za anti-PD-L1 imunoterapiju i predviđanje njihovog odgovora na liječenje. Međutim, još uvijek postoji nedostatak priznatih i učinkovitih metoda za detekciju cirkulirajućih egzosoma PD-L1. Neophodno je uspostaviti idealan cirkulirajući egzosom sa jednostavnim ili bez razdvajanja, manjom potražnjom za uzorkom, visokom osjetljivošću, dobrom ponovljivošću i manje osjetljivim signalima detekcije. Metoda za detekciju PD-L1 in vivo. Metoda detekcije cirkulirajućeg egzosomalnog PD-L1 još uvijek zahtijeva daljnja dubinska istraživanja, ali se vjeruje da će razvojem i primjenom novih metoda detekcije u budućnosti, cirkulirajući egzosomalni PD-L1 moći bolje voditi anti-PD1 imunoterapiju i koristi se u dijagnostici i liječenju malignih tumora. igraju važniju ulogu.