Antidepresivi i aktivnosti za poboljšanje kognitivnih sposobnosti tradicionalne kineske biljke Cistanche Ⅰ
Jun 23, 2022
Abstract
Više od deset posto ljudi pati od barem jedne epizode depresije i povezanih mentalnih poremećaja u životu, a depresija i povezani mentalni poremećaji jedan su od najvećih svjetskih javnozdravstvenih problema. Teorija višestrukih sistema smatra da je disregulacija višestrukih sistema u osnovi patogeneze depresije i povezanih mentalnih poremećaja, te su hitno potrebne nove terapije zasnovane na teoriji disregulacije višestrukih sistema. U ovoj studiji je antidepresivno dejstvo odvarka od biljkeCistanche deserticolaYCMa andCistanche tubulosaje pregledan. biljkaCistanchedekocija je značajno smanjila period nepokretnosti u testu suspenzije repa miša. Miševi tretirani dekocijom bilja pokazali su poboljšanu sposobnost prostornog učenja i pamćenja u Morrisovom testu vodenog lavirinta. Grupe tretirane dekocijom bilja pokazale su smanjenu aktivnost monoamin oksidaze (MAO); koncentracija dopamina (DA) u mozgu je povećana, što ukazuje na biljkuCistanchedekocija je poboljšala razdražljivost živaca; koncentracija kortikosterona u serumu (CORT) je smanjena, što pokazuje da su miševi imali koristi od smanjenog nivoa stresa. Dakle, antidepresivna efikasnost i mehanizamtradicionalno kinesko biljeCistanchesu istražene u ovoj studiji. biljkaCistanchepokazao potencijal da se razvije kao komplementarna i alternativna terapija za depresiju.
1. Uvod
Depresija i srodni poremećaji raspoloženja, s procjenom od 12 do 17 posto populacije koja doživi barem jednu epizodu u životu, su među vodećim uzrocima mentalnih invaliditeta i smatraju se jednim od najvećih svjetskih problema javnog zdravlja. Od posebne važnosti, značajan dio pacijenata s depresijom pati od gubitka pamćenja, problema s koncentracijom, smanjene energije ili umora, gubitka interesa ili zadovoljstva u hobijima i aktivnostima, poteškoća sa spavanjem, ranim jutarnjim buđenjem ili prekomjernim spavanjem. Iako su neuralni supstrati za abnormalnost depresije i srodnih sindroma nejasni, općenito je prihvaćeno da oštećenje neuroplastičnosti i ćelijske otpornosti dovodi do patofiziologije depresije i uspješno liječenje može ovisiti o intervenciji razine neurotransmitera. Pristup liječenju depresije u osnovi se zasniva na klasičnoj hipotezi monoaminskog sistema, koja tvrdi da poremećaj regulacije monoamina posebno serotonina (5-HT) i norepinefrina (NE) doprinosi patogenezi depresije, te intervenciji neurotransmiterskog sistema dopaminom. agonisti i dopamin-noradrenergički modulatori bi ublažili simptome velikog depresivnog poremećaja. Iako se široko propisuju, kurativna efikasnost antidepresiva je upitna, a nuspojava se ne može zanemariti jer značajan dio pacijenata ne reaguje na manipulaciju monoaminskim sistemom. Nedavno, nove teorije o patogenezi depresije ukazuju na to da više sistema, uključujući upalne puteve, put oksidativnog stresa, osovinu hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda (HPA), metabolički i bioenergetski sistem, neurotrofne puteve, glutamatni sistem, opioidni sistem i holinergičkog sistema, usko su povezani sa pojavom depresije. Dokazi pokazuju da je višestruka ciljana intervencija proizvela bolju efikasnost od jedne pojedinačne ciljne intervencije. Hitno su potrebne nove terapije zasnovane na teoriji višestruke sistemske disregulacije.
Traženje više detalja o Cistanche pogodnostima
Biljni proizvodi su navodno konzumirali više od polovine američke populacije; Interes i potražnja za biljem ili biljnim proizvodima kao dopunskim načinom liječenja depresije rastu u cijelom svijetu. Utvrđeno je da više ljekovitih biljaka pokazuje blagotvorno djelovanje na ublažavanje depresije. Biljke za koje se navodi da imaju učinak suzbijanja depresije i poboljšanja kognitivnih funkcija uključuju morsku krkavinu,Ginkgo biloba,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Kombinovana primena ferulinske kiseline i piperina pokazala je sinergistički efekat sličan antidepresivu kod miševa manipulisanjem monoaminergičkim sistemom. Albiflorin je karakteriziran visokim selektivnim afinitetom prema neurotransmiterskim receptorima i transporterima i značajno povećanim ekstracelularnim koncentracijama 5-HT i NE u hipotalamusu štakora koji se slobodno kreću. Ljekovita biljkaMelissa officinalisL. je ublažio depresivno ponašanje miševa tako što je utjecao na nivo serotonergičkog neurotransmitera. Ove biljke ili dekocije, razvijene kao alternativni lijekovi za depresiju, pomažu u ublažavanju simptoma depresije i pružaju novi izvor za razvoj antidepresiva. biljkaCistanchevrste, rasprostranjene u sušnim zemljama i pustinjama sjevernog dijela Kine, tradicionalno su kinesko ljekovito bilje i široko se koristi za liječenje raznih bolesti više od 1,000 godine u Kini. Višestruka efikasnost biljkeCistanchedekocija se kreće između afrodizijaka [14], koji podstiču imunitet [15], antioksidativno [16] i hepatoprotektivno [17] svojstva.C. deserticoladekocije induciraju steroidogene enzime testisa [18], pospješuju erektilni odgovor penisa i skraćuju period latencije erektilne reakcije kod kastriranih štakora [19]. biljkaCistancheprijavljeno je da inhibira aktivnosti dopaminergičkih neurona regulacijom gena inhibitorne apoptoze i neurotrofnih faktora [20].C. tubulosadekocije su popravile kognitivnu disfunkciju uzrokovanu A 1-42 putem blokiranja taloženja amiloida i oživljavanja holinergičke i hipokampalne dopaminergičke neuronske funkcije [21]. Neuroprotektivno svojstvo biljakaCistancheimplicira terapeutski potencijal kod kognitivnih bolesti. Depresija je uobičajeni mješoviti oblik emocionalnih reakcija sa zaboravom i kognitivnim padom kao uobičajenim simptomima [22]. biljkaCistancheobično se koristio kao tradicionalna kineska medicina za liječenje zaborava; štoviše, nedavni izvještaj pokazuje da je rana primjena kukuruznog brašna dopunjena saC. tubulosaje koristan za promicanje dugovječnosti i učenje povezano s mirisom i poboljšanje pamćenja kod nekralježnjakaDrosophilamodel [23]. Ove činjenice ukazuju na poboljšanje kognitivnih sposobnosti biljkeCistanche; ovdje, u ovom istraživanju, po prvi put smo okarakterisali antidepresivno svojstvo i njegov odnos sa aktivnostima poboljšanja kognitivnih sposobnosti u modelu sisara regulacijom monoaminskog sistema i HPA ose. Rasvjetljavanje svojstva antidepresiva i preliminarnog mehanizma biljkeCistanchemože proširiti spektar primjene ljekovitog biljaCistanche, koji bi se mogao razviti kao alternativni lijek za depresiju.
2. Materijali i metode antidepresivne funkcije Cistanchea
2.1. Biljni materijal i priprema decokcija od Cistanche
C. deserticolaYCMa je dobijen iz Nei Mongolske autonomne regije, Kina;C. tubulosaje dobijen iz autonomne regije Xinjiang Uygur, Kina. Prije odvarka, biljka (C. deserticolaYCMa iliC. tubulosa) je pregledan kako bi se otkrio sadržaj ehinakozida i verbaskozida pomoću HPLC (tečne hromatografije visokih performansi) (Milford, MA, Waters, SAD), a prihvatljivi proizvod (prema Farmakopeji Narodne Republike Kine) korišten je za eksperimente na životinjama . Dekocija je dobijena na osnovu metode isparavanja vode koju je razvio Centar za istraživanje prehrambenog i zdravstvenog inženjerstva pri Državnom ministarstvu obrazovanja, Univerziteta Sun Yat-sen. OsušeniCistanche deserticolaYCMa od 125 g je razbijen i prosijan sitom 120-, a zatim je prah rastvoren u 3 L ultra čiste vode, zagrevan na 100 stepen 2 h, zatim ohlađen na sobnu temperaturu i prosijan ; supernatant je recikliran. Talog je zatim rastvoren u 2 L ultra čiste vode i zatim zagrevan 1,5 h i ohlađen kao što je gore pomenuto da bi se supernatant reciklirao; sediment je zatim korišten za recikliranje supernatanta. Sadržaj svih supernatanta je obogaćen rotacionim vakuumskim isparivačima na 60 stepeni; konačno je koncentracija sirovog lijeka postavljena na 0,5 g/ml i proizvod je pohranjen na -20 stepeni.
2.2. Analiza ehinakozida i verbaskozida HPLC analizom
HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) je korišćen za merenje kvalitativnog i kvantitativnog testa ehinakozida i verbaskozida; verbaskozid (čistoća > 93 procenta) i ehinakozid (čistoća > 93 procenta) kupljeni su od Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova (Peking, Kina) i korišteni kao standardna kontrola.
2.3. Briga o životinjama i eksperimentalno ponašanje na Cistancheu
Subjekti su bili SPF (bez specifičnih patogena) mužjaci Kunming miševa težine 21-25 grama, koje je nabavio Centar za medicinske eksperimentalne životinje provincije Guangdong. Životinje su bile smještene u plastičnim kavezima (deset po kavezu); Uslovi okoline su podešeni na sledeći način: vlažnost 40~70 procenata, sobna temperatura 21 ± 1 stepen, i period svetlosti i mraka 12 h : 12 h. Sve eksperimente na životinjama odobrio je Komitet za etiku na životinjama Univerziteta Sun Yat-sen.
2.4. Test repnog ovjesa na Cistancheu
Test ovjesa repa urađen je prema protokolu koji su opisali Cryan et al. [24] sa skromnim promjenama. Ukratko, 21. dana, miševi su obješeni za rep pomoću metalnih vješala vezanih najlonskim kateterom, sa glavom na visini 50 mm od poda. Miševi su obješeni na udicu na ljepljive trake 10~20 mm od kraja repa i izolirani akustički i vizualno klapnama. Pokreti tijela miša su zabilježeni, a respiratorni pokreti su zanemareni. Prije dana eksperimenta, miševi su suspendirani na 8 minuta radi adaptacije.
2.5. Morrisov test vodenog lavirinta na Cistancheu
Test vodenog lavirinta urađen je prema opisu Vorheesa et al. [25–27] pomoću uređaja koji je razvila Kineska akademija medicinskih nauka. Korišćen je kružni bazen (prečnik 150 cm) napunjen vodom (26 ± 1 stepen; visina oboda (udaljenost od površine vode do ivice zida): 10 cm), kružna platforma za spasavanje (prečnik: 11 cm; rastojanje između središnje tačke platforme i bazena zid: 27 cm) bio je potopljen 1–1,5 cm ispod površine vode, a područje testiranja je osvijetljeno indirektnim osvjetljenjem (50 ± 10 luxa) kako bi se izbjegle refleksije. Korištene su četiri početne lokacije, S, S, E i W. Za test prostornog učenja, životinje su svakodnevno trenirane 9-11 dana na fiksnoj startnoj lokaciji. Period latencije bijega se mjeri kako bi se prikazala prostorna memorija i sposobnost učenja miševa. Ako miševi ne mogu pronaći ili se popeti na platformu, miševi bi bili odvedeni do platforme i ostali 10 s. Nakon odmora od 60 s, onda bi se započelo sa sljedećom sesijom treninga. Podaci dobiveni iz posljednjeg testa prostornog učenja korišteni su kao osnovna vrijednost za oblikovanje. Od 23. do 28. dana urađen je navigacijski test i prostorna sonda. Test navigacije po mjestu trajao je 6 dana i rađen je u 13 sati, životinje su stavljene u vodu sa glavom okrenutom prema zidu bazena u smjeru kazaljke na satu i zabilježen je period latencije (unutar 2 min). Nakon što je obavljen test navigacije po mjestu, platforma je uklonjena. Miševi su stavljeni u vodu sa glavom okrenutom prema zidu bazena na nasumičnoj lokaciji, a zabilježeni su trag kretanja i frekvencija kojom su miševi plivali tamo gdje se nalazila platforma u roku od 2 minute. Trag kretanja je zabilježen multifunkcionalnim autonomnim snimačem kretanja miševa (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Kina).
2.6. Detekcija MAO aktivnosti
MAO aktivnost je mjerena korištenjem MAO detekcionog kompleta (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina) i detekcija je urađena prema protokolu proizvođača. Dobijen je homogenat iz moždanog tkiva; 500μBio sam pomešan sa 300μl agenta 1 i 300μl agensa 2, inkubiran 3 h na 37 stepeni, a zatim sukcesivno dodavan sa 300μl, Agensa 3, 3 ml Agensa 4, i mešati 2 min. Reakciona smjesa je centrifugirana 3,000 rpm tokom 10 min, a optička gustina supernatanta je određena ultraljubičastim i spektrofotometrom vidljivog spektra (Lambda 25, PerkinElmer, SAD) korištenjem ekscitacionog svjetla od 242 nm.
2.7. Enzimski imunosorbentni test neurotransmitera i ACTH i CORT
Komplet za detekciju dopamina (DA), norepinefrina (NE) i 5-hidroksitriptamina (5-HT) za enzimski imunosorbentni test (ELISA) kupljen je od BLUE GENE-a, Šangaj. Kompleti za ELISA detekciju kupljeni su od Qiyun Biotech, Guangzhou.
Postupci su sljedeći: eksperiment je izveden na sobnoj temperaturi. Obložite jažice PVC mikrotitarske ploče antitijelom za hvatanje na 1-10μKoncentracija g/mL u karbonatnom/bikarbonatnom puferu (pH 9,6). Zatvorite ploču i inkubirajte preko noći 4 stepena; isprati ploču sa PBS/tween 3 puta, a nespecifična mesta vezivanja su blokirana Block Solution-om; zatim operite ploču sa PBS/tween 3 puta. Standardi i uzorci se razblažuju u rastvoru za blokiranje i 100μl se dodaje u bunar ploče, a ploča se zatvara i inkubira na 37 stepeni 1 h. Dodajte 100μl razblaženo detekciono antitelo i inkubirajte ploču na 37 stepeni 1 h; operite ploču sa PBS/Tween 3 puta. Dodajte 50μl rastvor za razvijanje boje i držite ploču dalje od svetlosti i inkubirajte je na sobnoj temperaturi 15 minuta; 50μl stop pufer se dodaje da se reakcija zaustavi. Izmjerite optičku gustoću (OD) za svaku jažicu pomoću čitača mikroploča postavljenog na 405 nm za 30 min.
2.8. Statistička analiza
Svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM (standardna greška srednje vrijednosti), značajna razlika je analizirana pomoću t-test ili jednosmjerna ANOVA praćena Duncanovim testom višestrukog dometa koristeći SPSS 16.0, i razlike između grupa saP< 0.05 smatrani su statistički značajnim.