Efekti protiv starenja Ludwigie Octovalvis na miševe Drosophila Melanogaster i SAMP8, 2. dio

Hemijski sastav LOE

Da bi se identifikovali mehanizmi pomoću kojih LOE indukuje produženje životnog veka muva, hemijski sastav LOE je analiziran pomoću GC-MS. Sedamnaest glavnih pikova je uočeno na hromatogramu ukupnog jona (slika 4) i identifikovani su kao poznata jedinjenja navedena u tabeli 2.

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i može ukloniti reaktivne vrste kisika, spriječiti degradaciju kolagena izazvanu slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Cistanche Chemist Warehouse

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

LOE ublažava akutna oksidativna oštećenja

Budući da je oksidativni stres najpopularnija teorija za objašnjenje kako se starenje događa na molekularnom nivou, odlučili smo ispitati aktivnost LOE uklanjanja DPPH radikala kao kritičnog pokazatelja njegovog antioksidativnog kapaciteta. U našim testovima, LOE je imao jaku aktivnost uklanjanja radikala DPPH (IC50 3.15 ug/ml), između aktivnosti askorbinske kiseline (IC50 1.31 ug/ml) i resveratrola ( IC50 7.86 ug/ml), koji su korišteni kao kontrole (slika 5a). Međutim, aktivnosti uklanjanja DPPH radikala dva najzastupljenija jedinjenja identifikovana u LOE, - sitosterola i skvalena, otkrivena su samo na minimalnim nivoima (slika 5a). Antioksidativni kapacitet LOE mogao bi se pripisati njegovom sastavu bogatom antioksidansima, budući da je visok nivo polifenola (146,3±3,1 mg ekvivalenta galne kiseline po g suhe težine; tabela 3) bio prisutan u našem LOE preparatu, a flavonoidi su bili glavna komponenta među polifenolima (90,2±2,6 mg ekvivalenta rutina po g suve težine).

Stoga smo dalje testirali antioksidativna svojstva LOE tako što smo 10-dan stare ženke CS muhe tretirane LOE izložili parakvatu (metil viologen, hemikalija za koju se zna da stvara reaktivne vrste kiseonika). Otkrili smo da su muhe koje su primale LOE suplementaciju u svojoj hrani tokom 10 dana pokazale povećanu otpornost na smrtnost izazvanu parakvatom (slika 5b). Ovaj rezultat je dodatno potvrđen analizom nivoa oksidativnog oštećenja kod muva koje su tretirane parakvatom 12 h. Koristili smo 4-hidroksinonenal (HNE), proteinski adukt koji nastaje iz proizvoda oksidacije lipida, kao indikator oksidativnog oštećenja. Iako suplementacija LOE nije pokazala nikakav uticaj na bazalni nivo HNE kod 10-dnevnih muha, značajno je smanjila akumulaciju HNE kod muva tretiranih sa 20 mM parakvata (slika 5c).

-Sitosterol je glavna komponenta u LOE koja doprinosi produženju životnog vijeka

Dalje smo ispitali efekte -sitosterola i skvalena na životni vijek muva. Intrigantno, - sitosterol je produžio životni vijek ženki CS muva (slika 6a) na način ovisan o dozi. Ovaj efekat produžetka života, međutim, nije uočen kod ženki CS muva koje su primale iste doze skvalena (slika 6b).

Pokazalo se da AMPK put posreduje u produženju životnog vijeka DR kod C. elegans (Apfeld et al. 2004; Greer et al. 2007) i kod muva (Stenesen et al. 2013). Stoga smo ispitali da li LOE i -sitosterol mogu regulisati životni vijek modulacijom AMPK puta. Koristeći Drosophila S2 ćelije, otkrili smo da LOE i -sitosterol mogu značajno poboljšati fosforilaciju AMPK (slika 6c). Slična zapažanja su napravljena kada su ćelije održavane u uslovima DR (0,5× medijum) (slika 6c). Ako je AMPK imao glavnu ulogu u produžavanju životnog vijeka muva izazvano -sitosterolom, gubitak AMPK bi trebao umanjiti učinak dugovječnosti -sitosterolom. Ovu hipotezu smo testirali tako što smo smanjili ekspresiju AMPK, posebno u masnim tijelima odraslih muva (slika S1). Drosophila masno tijelo je ekvivalent muhe jetre i masnog tkiva sisara i odgovorno je za metabolizam. Prekomjerna ekspresija ili obaranja AMPK u masnim tjelesnim stanicama povezana je s produženim ili smanjenim životnim vijekom muva (Stenesen et al. 2013). Kombinovali smo UAS-AMPK.RNAi alel sa RU486- inducibilnim GeneSwitch GAL4 za masno tijelo (S106-GAL4). Odrasle muhe koje nose odgovarajuće genetske elemente su nasumično raspoređene na hranu koja sadrži RU486 (aktivirajući agens za GeneSwitch-Gal4 pokretače) i/ili - sitosterol. Otkrili smo da produženje životnog vijeka izazvano -sitosterolom nije viđeno kada je ekspresija AMPK srušena posebno u masnom tijelu odraslih muva (slika 6d). Zajedno, ovi podaci impliciraju da sitosterol dobijen iz LOE može modulirati životni vijek, barem djelomično, kroz aktiviranje AMPK u masnom tijelu odraslih muva.

Diskusija

Voćne mušice imaju relativno kratak životni vek, u rasponu od nekoliko nedelja do nekoliko meseci, u zavisnosti od nutritivnih i drugih uslova okoline. Na primjer, izmijenjeni unos kalorija, uslovi parenja i temperatura okoline mogu značajno promijeniti životni vijek muhe (Bauer et al. 2004). U dobro definisanim uslovima, uspeli smo da pokažemo da suplementacija ishranom LOE može produžiti životni vek muva bez ikakvog očiglednog negativnog kompromisa.

Razvoj DR mimetika postao je novo polje za istraživanje protiv starenja. 2-Deoksiglukoza, inhibitor glikolize (Lane et al. 1998), i metformin, koji stimuliše AMPK (Anisimov et al. 2003), su dva molekula koja se trenutno istražuju kao DR mimetici. Međutim, dugotrajna primjena 2- deoksiglukoze ili metformina može proizvesti neželjene nuspojave, uključujući zatajenje srca i laktacidozu, što ih čini malo vjerojatnim kandidatima za upotrebu kao mimetika DR (Ingram et al. 2004; Sinclair 2005). Muhe koje su primale metformin takođe nisu pokazale povoljan efekat na produženje životnog veka (Slack et al. 2012). Stoga, polifenoli biljnog porijekla kao što je resveratrol mogu pružiti alternativnu opciju. Pokazalo se da resveratrol produžava životni vijek kvasca, crva i muha oponašajući DR kroz Sir2-zavisan put (Wood et al. 2004). Iako resveratrol nije produžio životni vijek miševa hranjenih ad libitum, poboljšao je zdravlje i preživljavanje gojaznih miševa hranjenih visokokaloričnom ishranom (Baur et al. 2006; Pearson et al. 2008). Ovi rezultati sugeriraju da resveratrol može povećati otpornost na stres izazvan visokim kalorijama, što je u skladu s rezultatima uočenim u studijama koje pokazuju da resveratrol daje ćelijsku zaštitu od stresa uključujući oksidativno oštećenje (Araki et al. 2004) i gama zračenje (Howitz et al. 2003).

Naši podaci sugeriraju da LOE može djelomično djelovati kao DR mimetik. Otkrili smo da je LOE značajno produžio životni vek muva koje su hranjene visokokaloričnom ishranom, ali nije pokazao nikakav aditivni efekat u uslovima DR (slika 1). LOE je takođe ublažio kognitivni pad koji je povezan sa starenjem, održavajući ga na nivou sličnom onom koji se vidi kod muva u uslovima DR. Pokazali smo da ovi efekti LOE slični DR nisu posljedica niže potrošnje hrane izazvane LOE (slike 2 i 3). Ni druge tipične DR povezane fiziološke promjene, kao što je smanjena plodnost ženke ili pojačana motorička aktivnost, nisu uočene kod muva tretiranih LOE (slika 2). Pokazalo se da DR povećava aktivnost mitohondrija (Nisoli et al. 2005; Lopez-Lluch et al. 2006), ali odgađa ili smanjuje oksidativni stres i oštećenja kod muva (Zheng et al. 2005.), miševa (Qiu et al. 2010. ), majmune (Zainal et al. 2000) i žene (Buchowski et al. 2012). Ovaj uočeni efekat je sugerisan kao efekat "mitohormeze", hipoteza da povećana mitohondrijalna aktivnost i proizvodnja ROS mogu pokrenuti intrinzični odbrambeni program, što rezultira poboljšanom otpornošću na stres i mogućim produženjem životnog veka (Schulz et al. 2007). Otkrili smo da LOE ima snažnu aktivnost uklanjanja radikala DPPH i da je smanjio parakvatom izazvano oksidativno oštećenje i smrtnost kod muva (slika 5), ​​dodatno podržavajući našu hipotezu da LOE može djelovati, barem djelomično, kao DR mimetik.

Naše hemijske analize su potvrdile da je LOE bio bogat izvor antioksidansa, uključujući polifenolna jedinjenja, fitosterole i skvalen (Slika 4 i Tabela 2). Prijavljeno je da -sitosterol može povećati ekspresiju proteina i antioksidativnu aktivnost mangan superoksid dismutaze putem puta estrogena/fosfatidilinozitol 3-kinaze u makrofagima (Vivancos i Moreno 2005). Takođe se pokazalo da suplementacija skvalenom u ishrani smanjuje oksidativna oštećenja povezana sa starenjem i održava energetski status mitohondrija jetre kod starijih pacova (Buddhan et al. 2007). Iako su -sitosterol i skvalen dva najzastupljenija jedinjenja identifikovana u LOE GC-MS analizama, nijedno nije pokazalo očiglednu aktivnost uklanjanja radikala DPPH u našem sistemu analize (slika 5). Moguće je da bi antioksidativna aktivnost LOE mogla uključivati ​​hvatače slobodnih radikala kao što su polifenolna jedinjenja, dok - sitosterol i skvalen mogu djelovati na druge puteve, kao što je gore navedeno. Pokazalo se da druge tradicionalne i integrativne medicinske prakse kao što su R. rosea i C. longa produžavaju životni vijek muva putem puteva povezanih s antioksidacijom i regulacijom poznatih gena povezanih sa starenjem (Lee et al. 2010; Schriner et al. 2013, 2009). Međutim, biljni ekstrakti obično sadrže mnoga jedinjenja koja zahtevaju sistematske biohemijske analize za identifikaciju. Mehanistička interpretacija je stoga teška bez identifikacije čistog spoja. U ovoj studiji identifikovali smo -sitosterol kao glavnu komponentu koja je doprinela produžetku životnog veka aktivnosti LOE. Naši podaci sugeriraju da produženje životnog vijeka izazvano -sitosterolom zahtijeva aktivaciju AMPK u masnom tijelu odraslih muva. Ovo je u velikoj mjeri u skladu s prethodnim izvještajima koji pokazuju da je AMPK glavni senzor nutrijenata i posreduje u produženju životnog vijeka DR kod C. elegans (Apfeld et al. 2004; Greer et al. 2007) i muva (Stenesen et al. 2013).

Poželjno je da intervencije dugovječnosti ne samo da produže životni vijek, već i odgode nastanak i morbiditet bolesti povezanih sa starenjem, odnosno da produže i životni vijek i zdravlje. Prekognitivni efekti LOE koje opisujemo i kod muva i kod miševa SAMP8 takođe mogu biti od velikog interesa za područje starenja. Pokazalo se da SAMP8 miševi pokazuju deficite u zadržavanju pamćenja vezano za uzrast od 2 mjeseca starosti, kada su testirani na zadacima pasivnog izbjegavanja (Miyamoto et al. 1986). U testu izbjegavanja šoka stopala, SAMP8 miševi također pokazuju značajno oštećenje u sticanju i zadržavanju pamćenja od 6 do 9 mjeseci starosti, u poređenju sa mladim SAMP8 miševima (Flood i Morley 1993). Koristeći nove zadatke prepoznavanja objekata i povišenog T labirinta, mogli smo uočiti jasne deficite u zadržavanju pamćenja u vezi sa godinama između 3- i 8-mjesečnih SAMP8 miševa, iako nije bilo razlika tokom perioda akvizicije zadatak povišenog-T lavirinta (slika 3). Ova zapažanja su dodatni dokaz da SAMP8 miševi pokazuju rani početak kognitivnih deficita povezanih sa starenjem i da se oštećenje pogoršava s godinama. Međutim, dugotrajno liječenje LOE (više od 5 mjeseci) kod SAMP8 miševa ublažilo je smanjenje zadržavanja pamćenja vezano za starenje bez utjecaja na fizičku aktivnost, unos hrane, potrošnju vode ili tjelesnu težinu (slika 3). Nismo primijetili nikakve nuspojave kod miševa koji su primali 5 mjeseci LOE tretmana (neobjavljena zapažanja). Ovi nalazi se uglavnom slažu s nedavnim izvještajem koji pokazuje da ponovljena primjena L. octovalvis tokom 28 dana kod miševa (800 mg/kg≈2.400 ug/dan naspram 400 ug/dan korištenih u našoj studiji) nije izazvala smrtnost ili toksikološke efekti (Kadum Yakob et al. 2012).

Ukratko, identificirali smo LOE kao novu intervenciju protiv starenja, sposobnu produžiti životni vijek muva i ublažiti kognitivni pad povezan sa starenjem i kod muva i kod SAMP8 miševa. GC-MS i druge biohemijske analize ukazuju na to da LOE može ispoljiti svoje efekte protiv starenja slabljenjem oksidativnog oštećenja i aktiviranjem puteva povezanih sa AMPK.

Zahvale Zahvaljujemo Chuan-Hao Lai i Hao-Wei Wang (Hsiehyu Biotech Company Ltd.) i Shang-Tse Lee (Nacionalni tajvanski univerzitet) na njihovoj tehničkoj pomoći. Željeli bismo zahvaliti Fly Core-u na Tajvanu na zalihama i reagensima. Pei-Yu Wang je djelimično podržan od strane Nacionalnog naučnog vijeća (NSC 98-2320-B-004-003-MY2 i NSC 100- 2311-B{8}}MY3), Tajvan.

Reference

1. Alcedo J, Kenyon C (2004) Regulacija dugovječnosti C. elegans specifičnim okusnim i olfaktornim neuronima. Neuron 41(1):45–55

2. Anisimov V, Semenchenko A, Yashin A (2003) Insulin i dugovječnost: antidijabetički bigvanidi kao geroprotektori. Biogerontology 4(5):297–307

3. Apfeld J, O'Connor G, McDonagh T, DiStefano PS, Curtis R (2004) AMP-aktivirana protein kinaza AAK-2 povezuje nivoe energije i signale slične insulinu sa životnim vijekom kod C. elegans. Genes Dev 18(24):3004–3009

4. Araki T, Sasaki Y, Milbrandt J (2004) Povećana nuklearna biosinteza NAD i aktivacija SIRT1 sprečavaju degeneraciju aksona. Science 305(5686):1010–1013

5. Bauer JH, Goupil S, Garber GB, Helfand SL (2004) Ubrzani test za identifikaciju intervencija koje produžavaju životni vijek kod Drosophila melanogaster. Proc Natl Acad Sci USA 101(35):12980–12985

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, Boss O, Gwinn D, Wang M, Ramaswamy S, Fishbein KW, Spencer RG, Lakatta EG, Le Couteur D, Shaw RJ, Navas P, Puigserver P, Ingram DK, de Cabo R, Sinclair DA (2006) Resveratrol poboljšava zdravlje i preživljavanje miševa na visokoj kalorijsku dijetu. Nature 444(7117): 337–342

7. Bishop NA, Guarente L (2007.) Dva neurona posreduju u dugovječnosti C. elegans izazvanoj ograničenjem ishrane. Nature 447(7144): 545–549

8. Bonkowski MS, Rocha JS, Masternak MM, Al Regaiey KA, Bartke A (2006) Ciljano narušavanje receptora hormona rasta ometa blagotvorno djelovanje ograničenja kalorija. Proc Natl Acad Sci USA 103(20):7901–7905

9. Boyd O, Weng P, Sun X, Alberico T, Laslo M, Obenland DM, Kern B, Zou S (2011) Nektarina promoviše dugovječnost Drosophila melanogaster. Free Radic Biol Med 50(11):1669–1678

10. Brand-Williams W, Cuvelier ME, Berset C (1995) Upotreba metode slobodnih radikala za procjenu antioksidativne aktivnosti. LWT Food Sci Technol 28(1):25–30

11. Buchowski MS, Hongu N, Acra S, Wang L, Warolin J, Roberts LJ II (2012) Efekat umjerenog kalorijskog ograničenja na oksidativni stres kod žena, randomizirano ispitivanje. PLOS ONE 7(10):e47079

12. Buddhan S, Sivakumar R, Dhandapani N, Ganesan B, Anandan R (2007) Zaštitni učinak dijetetskih suplemenata skvalena na mitohondrijalnu funkciju u jetri starijih pacova. Prostaglandini Leukot esencijalne masne kiseline 76(6):349–355

13. Chan YC, Hosoda K, Tsai CJ, Yamamoto S, Wang MF (2006) Povoljni efekti čaja na smanjenje kognitivnih deficita i morfoloških promjena mozga kod miševa sa ubrzanim starenjem. J Nutr Sci Vitaminol (Tokio) 52(4):266–273

14. Chang CI, Kuo CC, Chang JY, Kuo YH (2004) Tri nova triterpena oleananskog tipa iz Ludwigia octovalvis sa citotoksičnom aktivnošću protiv dvije ljudske ćelijske linije raka. J Nat Prod 67(1):91–93

15. Chen CP, Lin CC, Namba T (1989) Skrining tajvanskih sirovih lijekova na antibakterijsku aktivnost protiv Streptococcus mutans. J Ethnopharmacol 27(3):285–295

16. Choi JH, Kim D (2000) Efekti starosti i ograničenja u ishrani na životni vijek i oksidativni stres SAMP8 miševa s oštećenjima učenja i pamćenja. J Nutr Health Aging 4(3):182–186

17. Chou HJ, Lai DM, Huang CW, McLennan IS, Wang HD, Wang PY (2013) BMP4 je periferno izveden faktor za motorne neurone i smanjuje ekscitotoksičnost izazvanu glutamatom in vitro. PLOS ONE 8(3):e58441

18. Colman RJ, Anderson RM, Johnson SC, Kastman EK, Kosmatka KJ, Beasley TM, Allison DB, Cruzen C, Simmons HA, Kemnitz JW, Weindruch R (2009) Ograničenje kalorija odlaže početak bolesti i smrtnost kod rezus majmuna. Science 325(5937):201–204

19. Cruz-Morales SE, García-Saldívar NL, González-López MR, Castillo-Roberto G, Monroy J, Domínguez R (2008) Akutna restrikcija narušava pamćenje u povišenom T-labirintu (ETM) i modificira serotonergičku aktivnost u striatum. Behav Brain Res 195(1):187–191

20. De-Mello N, Carobrez AP (2002) Uzdignuti T-lavirint kao životinjski model pamćenja: efekti skopolamina. Behav Pharmacol 13(2):139–148

21. Flatt T, Min KJ, D'Alterio C, Villa-Cuesta E, Cumbers J, Lehmann R, Jones DL, Tatar M (2008) Drosophila germline modulation of insulin signaling and lifespan. Proc Natl Acad Sci USA 105(17):6368–6373

22. Flood JF, Morley JE (1992) Rani početak poremećaja averzivnog i apetitivnog učenja vezanog za starost kod SAM-P/8 miša. J Gerontol 47(2): B52–B59

23. Flood JF, Morley JE (1993) Promjene vezane za dob u izbjegavanju i zadržavanju stopala kod miša sa ubrzanim starenjem (SAM). Neurobiol Aging 14(2):153–157

24. Galleano M, Verstraeten SV, Oteiza PI, Fraga CG (2010) Antioksidativna dejstva flavonoida: termodinamička i kinetička analiza. Arch Biochem Biophys 501(1):23–30

25. Greer EL, Dowlatshahi D, Banko MR, Villen J, Hoang K, Blanchard D, Gygi SP, Brunet A (2007) AMPKFOXO put posreduje u dugovječnosti izazvanoj novom metodom ograničenja u ishrani kod C. elegans. Curr Biol 17(19):1646–1656

26. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA (2003) Mali molekulski aktivatori sirtuina produžavaju životni vijek Saccharomyces cerevisia. Nature 425(6954):191–196

27. Hubbard BP, Gomes AP, Dai H, Li J, Case AW, Considine T, Riera TV, Lee JE, SY E, Lamming DW, Pentelute BL, Schuman ER, Stevens LA, Ling AJY, Armor SM, Michan S, Zhao H, Jiang Y, Sweitzer SM, Blum CA, Disch JS, Ng PY, Howitz KT, Rolo AP, Hamuro Y, Moss J, Perni RB, Ellis JL, Vlasuk GP, Sinclair DA (2013) Dokazi za zajednički mehanizam SIRT1 regulacija alosterijskim aktivatorima. Science 339(6124):1216–1219

28. Ingram DK, Anson RM, De Cabo R, Mamczarz J, Zhu MIN, Mattison J, Lane MA, Roth GS (2004) Razvoj mimetike ograničenja kalorija kao strategije za dugovječnost. Ann NY Acad Sci 1019(1):412–423

29. Kadum Yakob H, Manaf Uyub A, Fariza Sulaiman S (2012) Toksikološka procjena 80 posto metanolnog ekstrakta Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH lišća gavrana (Onagraceae) kod BALB/c miševa. J Ethnopharmacol 142(3):663–668

30. Kaeberlein M, Powers RW, Steffen KK, Westman EA, Hu D, Dang N, Kerr EO, ​​Kirkland KT, Fields S, Kennedy BK (2005) Regulacija životnog vijeka replikacije kvasca pomoću TOR i Sch9 kao odgovor na nutrijente. Science 310(5751):1193–1196

31. Lane MA, Ingram DK, Roth GS (1998) 2-Hranjenje deoksi-D-glukozom kod pacova oponaša fiziološke efekte ograničenja kalorija. J Anti Aging Med 1(4):327–337

32. Lee KS, Lee BS, Semnani S, Avanesian A, Um CY, Jeon HJ, Seong KM, Yu K, Min KJ, Jafari M (2010.) Kurkumin produžava životni vijek, poboljšava zdravstveni vijek i modulira izražavanje starosne dobi geni starenja u Drosophila melanogaster. Rejuvenation Res 13(5):561–570

33. Lin SJ, Defossez PA, Guarente L (2000) Zahtjev za NAD i SIR2 za produženje životnog vijeka ograničenjem kalorija u Saccharomyces cerevisiae. Science 289(5487):2126–2128

34. Lin SJ, Ford E, Haigis M, Liszt G, Guarente L (2004) Ograničenje kalorija produžava životni vijek kvasca snižavanjem nivoa NADH. Genes Dev 18(1):12–16

35. Lopez-Lluch G, Hunt N, Jones B, Zhu M, Jamieson H, Hilmer S, Cascajo MV, Allard J, Ingram DK, Navas P, de Cabo R (2006) Restrikcija kalorija indukuje mitohondrijalnu biogenezu i bioenergetsku efikasnost. Proc Natl Acad Sci USA 103(6):1768–1773

36. Maia CSF, Ferreira VMM, Diniz JSV, Carneiro FP, de Sousa JB, da Costa ET, Tomaz C (2010) Sticanje izbjegavanja inhibicije kod odraslih pacova izloženih kombinaciji etanola i metil žive tokom razvoja centralnog nervnog sistema. Behav Brain Res 211(2):191–197

37. Mattison JA, Roth GS, Beasley TM, Tilmont EM, Handy AM, Herbert RL, Longo DL, Allison DB, Young JE, Bryant M, Barnard D, Ward WF, Qi W, Ingram DK, de Cabo R (2012) Utjecaj ograničenja kalorija na zdravlje i preživljavanje kod rezus majmuna iz NIA studije. Nature 489(7415):318–321

38. Miyamoto M, Kiyota Y, Yamazaki N, Nagaoka A, Matsuo T, Nagawa Y, Takeda T (1986) Promjene u učenju i pamćenju u vezi sa starenjem kod miša sa ubrzanim starenjem (SAM). Physiol Behav 38(3):399–406

39. Nisoli E, Tonello C, Cardile A, Cozzi V, Bracale R, Tedesco L, Falcone S, Valerio A, Cantoni O, Clementi E, Moncada S, Carruba MO (2005) Restrikcija kalorija promovira mitohondrijalnu biogenezu indukcijom ekspresije eNOS. Science 310(5746):314–317

40. Pearson KJ, Baur JA, Lewis KN, Peshkin L, Price NL, Labinskyy N, Swindell WR, Kamara D, Minor RK, Perez E, Jamieson HA, Zhang Y, Dunn SR, Sharma K, Pleshko N, Woollett LA, Csiszar A, Ikeno Y, Le Couteur D, Elliott PJ, Becker KG, Navas P, Ingram DK, Wolf NS, Ungvari Z, Sinclair DA, de Cabo R (2008) Resveratrol odgađa pogoršanje stanja uzrokovano godinama i oponaša transkripcione aspekte ograničenja u ishrani bez produženja životnog veka. Cell Metab 8(2):157–168

41. Peng C, Chan HYE, Huang Y, Yu H, Chen ZY (2011) Polifenoli jabuke produžavaju srednji životni vijek Drosophila melanogaster. J Agric Food Chem 59(5):2097–2106

42. Qiu X, Brown K, Hirschey MD, Verdin E, Chen D (2010) Ograničenje kalorija smanjuje oksidativni stres SIRT{{2}posredovanom aktivacijom SOD2. Cell Metab 12(6):662–667

43. Santos P, Bittencourt AS, Schenberg LC, Carobrez AP (2006) Elevated T-maze evaluacija anksioznosti i memorijskih efekata liganda NMDA/glycine-B mjesta ubrizganih u dorzalnu periakveduktalnu sivu tvar i superiorni kolikulus pacova. Neuropharmacology 51(2):203–212

44. Schriner SE, Abrahamyan A, Avanessian A, Bussel I, Maler S, Gazarian M, Holmbeck MA, Jafari M (2009) Smanjeni nivoi mitohondrijalnog superoksida i poboljšana zaštita od parakvata u Drosophila melanogaster dopunjenoj Rhodiola rosea. Free Radic Res 43(9):836–843

45. Schriner SE, Lee K, Truong S, Salvadora KT, Maler S, Nam A, Lee T, Jafari M (2013) Produženje životnog vijeka Drosophila Rhodiola rosea putem mehanizma neovisnog od ograničenja u ishrani. PLOS ONE 8(5):e63886

46. ​​Schulz TJ, Zarse K, Voigt A, Urban N, Birringer M, Ristow M (2007) Ograničenje glukoze produžava životni vijek Caenorhabditis elegansa indukcijom mitohondrijalnog disanja i povećanjem oksidativnog stresa. Cell Metab 6(4):280–293

47. Shih PH, Chan YC, Liao JW, Wang MF, Yen GC (2010) Antioksidativni i kognitivni promotivni efekti duda bogatog antocijaninom (Morus atropurpurea L.) na miševe sa ubrzanim starenjem i prevenciju Alchajmerove bolesti. J Nutr Biochem 21(7):598–605

48. Simons MJP, Koch W, Verhulst S (2013) Ograničenje u ishrani glodara smanjuje brzinu starenja bez uticaja na početnu stopu mortaliteta—meta-analiza. Aging Cell 12(3):410–414

49. Sinclair DA (2005) Ka jedinstvenoj teoriji kalorijskog ograničenja i regulacije dugovječnosti. Mech Aging Dev 126(9):987–1002

50. Slack C, Foley A, Partridge L (2012) Aktivacija AMPK navodnim restrikcijskim mimetikom metforminom u ishrani nije dovoljna da produži životni vijek Drosophile. PLOS ONE 7(10):e47699

51. Slinkard K, Singleton VL (1977) Analiza ukupnog fenola: automatizacija i poređenje sa ručnim metodama. Am J Enol Vitić 28(1):49–55

52. Soh JW, Marowsky N, Nichols TJ, Rahman AM, Miah T, Sarao P, Khasawneh R, Unnikrishnan A, Heydari AR, Silver RB, Arking R (2013) Kurkumin je induktor produžene funkcionalne aktivnosti specifičan za rano djelovanje dugovečnost u Drosophila. Exp Gerontol 48(2):229–239

53. Sohal RS, Buchan PB (1981) Veza između fizičke aktivnosti i životnog vijeka odrasle kućne muhe, Musca domestica. Exp Gerontol 16(2):157–162

54. Stenesen D, Suh JM, Seo J, Yu K, Lee KS, Kim JS, Min KJ, Graff JM (2013) Biosinteza adenozin nukleotida i AMPK reguliraju životni vijek odraslih i posreduju u dugovječnosti od ograničenja kalorija kod muva. Cell Metab 17(1):101–112

55. Takahashi RN, Pamplona FA, Fernandes MS (2005.) Kanabinoidni antagonist SR141716A olakšava stjecanje memorije i konsolidaciju u T-labirintu uzdignutom mišu. Neurosci Lett 380(3):270–275

56. Takeda T (2009) Miš sa ubrzanim starenjem (SAM) sa posebnim referencama na modele neurodegeneracije, SAMP8 i SAMP10 miševe. Neurochem Res 34(4):639–659

57. Valenzano DR, Terzibasi E, Genade T, Cattaneo A, Domenici L, Cellerino A (2006) Resveratrol produžava životni vijek i usporava pojavu markera vezanih za starenje kod kratkovječnih kralježnjaka. Curr Biol 16(3):296–300

58. Vivancos M, Moreno JJ (2005) Beta-sitosterol modulira odgovor antioksidativnog enzima u RAW 264.7 makrofagima. Free Radic Biol Med 39(1):91–97

59. Wang PY, Koishi K, McGeachie AB, Kimber M, MacLaughlin DT, Donahoe PK, McLennan IS (2005) Mullerian inhibirajuća supstanca djeluje kao faktor preživljavanja motornih neurona in vitro. Proc Natl Acad Sci USA 102(45):16421–16425

60. Wang PY, Neretti N, Whitaker R, Hosier S, Chang C, Lu D, Rogina B, Helfand SL (2009) Dugovječni Indy i ograničenje kalorija međusobno djeluju kako bi produžili životni vijek. Proc Natl Acad Sci USA 106(23):9262–9267

61. Weindruch R, Walford R (1982) Ograničenje u ishrani kod miševa počevši od 1 godine starosti: uticaj na životni vek i spontanu pojavu raka. Science 215(4538):1415–1418

62. Wood JG, Rogina B, Lavu S, Howitz K, Helfand SL, Tatar M, Sinclair D (2004) Sirtuin aktivatori oponašaju ograničenje kalorija i odgađaju starenje metazoa. Nature 430 (7000): 686–689

63. Wu Z, Liu SQ, Huang D (2013) Ograničenje u ishrani zavisi od sastava nutrijenata kako bi se produžio hronološki životni vek kod kvasca koji pupa Saccharomyces cerevisiae. PLOS ONE 8(5): e64448

64. Xiao B, Sanders MJ, Underwood E, Heath R, Mayer FV, Carmena D, Jing C, Walker PA, Eccleston JF, Haire LF, Saiu P, Howell SA, Aasland R, Martin SR, Carling D, Gamblin SJ ( 2011) Struktura AMPK sisara i njena regulacija ADP-om. Nature 472(7342):230–233

65. Zainal TA, Oberley TD, Allison DB, Szweda LI, Weindruch R (2000) Ograničenje kalorija kod rezus majmuna smanjuje oksidativna oštećenja u skeletnim mišićima. FASEB J 14(12):1825–1836

66. Zheng J, Mutcherson R, Helfand SL (2005) Ograničenje kalorija odlaže oksidativno oštećenje lipida u Drosophila melanogaster. Aging Cell 4(4):209–216

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】