Interleukin-22 izveden iz T ćelija pokreće ekspresiju CD155 ćelijama raka da potisne funkciju NK ćelije i promoviše metastaze
Oct 10, 2023
SAŽETAK
Iako T ćelije mogu ispoljiti snažan antitumorski imunitet, podskup T pomoćnih (Th) ćelija koje proizvode interleukin-22 (IL-22) u tumorima dojke i pluća povezan je sa lošim ishodom pacijenata. Ovdje smo ispitali mehanizme pomoću kojih ove T ćelije doprinose bolesti. U mišjim modelima raka pluća i dojke, konstitucijska i T stanica-specifična delecija Il22 smanjila je metastaze bez utjecaja na rast primarnog tumora. Brisanje IL-22 receptora na ćelijama raka smanjuje metastaze do stepena sličnog onom koji se vidi kod miševa sa nedostatkom IL-22-. IL-22 inducira visoku ekspresiju CD155, koji se vezuje za aktivirajući receptor CD226 na NK ćelijama. Pretjerana aktivacija dovela je do smanjenih količina CD226 i funkcionalno oštećenih NK stanica, što je povećalo metastatsko opterećenje. IL-22 signalizacija je također povezana sa ekspresijom CD155 u ljudskim skupovima podataka i sa lošim ishodima pacijenata. Uzeti zajedno, naši nalazi otkrivaju imunosupresivno kolo aktivirano IL-22 izvedenim iz T ćelija koje promovira metastaze u plućima.
Prednosti cistanche tubulosa-Antitumor
UVOD
Glavni znak neoplastične progresije i primarni uzrok smrtnosti od raka je sposobnost ćelija raka da se diseminiraju na sekundarna mjesta i formiraju metastaze.1,2 Formiranje metastaza može se spriječiti imunološkim nadzorom koji uključuje prirodni ubicu (NK), citotoksični , i T pomoćne (Th) 1 ćelije.3,4 Nasuprot tome, regulatorne T ćelije (Treg), cirkulirajući monociti i IL-17A izvedeni iz Th ćelija formiraju imunosupresivno mikrookruženje, omogućavajući imunološki bijeg i promovirajući metastaze. 4–6 Stoga je od ključne važnosti identificirati signalne kaskade koje definiraju funkciju pro- vs. antitumogenih imunih ćelija.7,8 Interleukin-22 (IL-22) je citokin koji proizvodi Th17 i, kod ljudi, takođe po Th1 podskupini, za koju se zna da potiče rast ćelija raka, poboljšava migraciju, štiti od apoptoze, indukuje epitelnu tranziciju u mezenhimsku tranziciju i održava stabljiku malignih ćelija.9–13 Takođe promoviše ranu karcinogenezu, delujući na prekursorskim lezijama ili nezrelim matičnim ćelijama raka.14–18 IL-22-ćelije koje proizvode ćelije, uglavnom Th ćelije, ali i gama delta (gd) T ćelije, nepromenljive prirodne T (iNKT) ćelije i urođene limfoidne ćelije (ILCs ), otkriveni su u primarnim lezijama karcinoma.19–24 IL-22 se eksprimira na biološki relevantnim nivoima u karcinomu dojke, debelog crijeva, pluća, želuca i hepatocelularnog karcinoma.9,11,12,25,26 U većini studija , njegova ekspresija je povezana sa lošom prognozom, višim stadijumom bolesti i bržom progresijom tumora.13,22–24,27–29 IL-22 djeluje isključivo preko IL-22 receptora (IL{{40 }}R) koji se sastoji od dvije podjedinice, IL-22RA1 i IL-10RB.30,31 Djelovanje izlučenog IL-22 je modulirano inhibitorom, IL{{47} } vezujući protein (IL-22BP, IL-22RA2), homolog IL-22RA1, koji uglavnom proizvode mijeloične ćelije.32,33 U uslovima stabilnog stanja, IL -22 je esencijalni homeostatski citokin na epitelnim barijerama kao što su crijeva, pluća i koža.34,35 Na ovim mjestima, IL-22 promovira zaštitu, regeneraciju i popravak radi održavanja integriteta barijere,36, 37 i njegovo odsustvo pogoršava karcinogenezu izazvanu upalom.13,38 Zajedno, ovi podaci ističu široke, kontekstualno zavisne funkcije IL-22 u fiziološkim i patološkim stanjima. Nakon vezivanja za receptor, IL-22 pokreće Janus kinaze Jak1 i Tyk2 da fosforiliraju STAT3, STAT1 ili STAT5, ali IL-22 može pokrenuti druge nizvodne puteve, uključujući kaskadu protein kinaza aktiviranih mitogenom (MAPK) ili PI3K-AktmTOR signalizacija, u zavisnosti od ćelijskog konteksta.13,36,39–44 Ova raznolikost signalnih puteva se odražava u mnoštvu fizioloških efekata koji su povezani sa IL-22 signalizacijom, uključujući one opisane gore, kao i zaštitu od genotoksičnog oštećenja i indukcije antibakterijskih peptida, sluzi, pro- i antiinflamatornih citokina i hemokina.36,38,39,45,46 Ćelije raka induciraju proizvodnju IL-22 iz Th ćelija kod pacijenata sa karcinomom dojke i pluća.12,47,48 Oslobađanje IL-1b izazvano NLRP3 inflamazomom inducira proizvodnju IL-22 iz T ćelija u tumoru, i oba IL-22+ Th ćelije i NLRP3-IL-1b potpis mogu se naći u uzorcima tumora raka dojke i pluća.48,49 Ovdje smo postavili da ocrtamo mehanizam kojim IL-22 promovira napredovanje raka dojke i pluća. Otkrili smo da IL-22 potiče širenje metastaza u pluća, otkrivajući krug u kojem IL{104}} posreduje imunosupresiju u metastatskoj niši promovirajući ekspresiju CD155 na stanicama raka, što je povezano sa smanjenom ekspresijom CD226 na NK ćelije i smanjenu proizvodnju interferona-g (IFNg). Klinički podaci pokazuju da je aktivacija takvih puteva povezana s ishodima pacijenata.
REZULTATI
Prednosti suplementa cistanche-povećavaju imunitet
IL-22 utiče na diseminirane ćelije raka u singenim mišjim modelima karcinoma pluća i dojke
To understand the impact of the IL-22-IL-22R1 signaling axis on cancer progression, we analyzed syngeneic murine models of breast and lung carcinoma. As cancer patients mostly succumb to metastatic disease, we recapitulated this with phenotypically relevant models. We implanted either 4T1 breast cancer or Line-1 lung cancer cells subcutaneously (s.c.) in the right flank of wild-type mice (WT) and mice lacking IL-22 expression (Il22 / ) (Figure 1A). IL-22 did not impact the outgrowth of the primary tumors in either model (Figures 1B and 1C). Upon reaching pre-defined termination criteria (tumor >225 mm2 ili ulceracija), pluća su bila glavno metastatsko mjesto u našem modelu s povremenim metastazama pronađenim na drugim mjestima (nije prikazano). Il22 / miševi su pokazali smanjenu metastatsku diseminaciju Line-1 i 4T1 ćelija u pluća u poređenju sa životinjama divljeg tipa nezavisno od veličine primarnog tumora koristeći različite metode detekcije metastaza (Slike 1B, 1C i S1A). Također smo primijetili sličan metastatski fenotip u ortotopskom modelu raka dojke, gdje su 4T1 ćelije implantirane u masni jastučić dojke (slika S2B). Sve korištene metode slijepog makroskopskog brojanja, klonogenih testova ili histologije pokazale su visoku konzistentnost u otkrivanju manjeg metastatskog opterećenja kod Il22 / životinja (Slike 1B, 1C i S1C). Ovo implicira ključnu ulogu IL-22 u metastatskom procesu. Zatim smo forsirali metastaze intravenskom injekcijom ćelija raka, koja zaobilazi potrebu za odvajanjem tkiva i invazijom (slika 1D). Intravenske (iv) injekcije obe ćelijske linije odražavale su fenotip u potkožnom modelu. Zaista bismo mogli potvrditi niže metastatsko opterećenje kod Il22 / miševa (Slike 1E i 1F). Ovi rezultati ukazuju na specifičnu ulogu IL-22 u diseminiranim ćelijama u cirkulaciji. Da bismo uočili efekte specifične za soj, koristili smo model raka dojke E0771 (Slika 1G).50,51 Intravenska injekcija E0771- GFP ćelija otkrila je smanjeno metastatsko opterećenje kod Il22 / životinja potvrđeno protočnom citometrijom (Slike 1H i S1D). Slično, uočili smo niže metastatsko opterećenje u jetri miševa kada su E0771-GFP ćelije ubrizgane intrasplenično (slika S1E). Cijelo lijevo plućno krilo miševa ubrizganih E0771-GFP optički je očišćeno slijedeći iDISCO protokol za kvantificiranje metastaza mikroskopijom svjetlosnog lista in situ (Slika 1I).52 Ovdje su Il22 / miševi pokazali smanjenu sklonost razvoju metastaza , dok se veličina vizualiziranih metastaza nije razlikovala i nije imala specifičan obrazac njihove lokalizacije (Slika 1J). Ukratko, IL-22 je djelovao na diseminirane ćelije raka, omogućavajući metastaze raka dojke i pluća u pluća.
T ćelije su relevantni izvor IL-22 u metastatskoj niši u plućima
Prethodno smo identifikovali CD4+ T ćelije kao glavni izvor IL-22 u primarnim humanim tumorima pluća i uzorcima bronhoalveolarnog ispiranja.12,47,48 Da ocrtamo izvor IL-22 u pluća naših modela, intravenozno smo ubrizgali E0771 ćelije u Foxp3mRFP Il17aGFPIl22sgBFP životinje i kvantificirali IL-22+ ćelije pomoću protočne citometrije (Slike 2A i S2A).53 Populacije su definirane kao CD{{14}{14} }} i dvostruko negativne (DN) (CD4 , CD8 ) ab T ćelije (CD3+ gdTCR NK1.1 ), gd T ćelije (CD3+ gdTCR+ NK1.1 ) i CD{{ 26}} NK1.1+ i CD3 NK1.1+ ćelije (slike 2B i S2B). Uočili smo povećanje udjela CD4+, CD8+ T ćelija i NK1.1+ ćelija koje proizvode IL-22 u plućima životinja kojima je ubrizgan tumor ( Slike 2C, S2C i S2D). Ovdje su CD4+ i CD8+ T ćelije činile većinu ćelija koje proizvode IL-22- kod miševa koji nose tumor (slika 2C). Štaviše, identifikovali smo da takve CD4+ T ćelije proizvode IL-22, ali ne i IL-17A (slika 2D). Ove ćelije su imale nisku ekspresiju CD44, potvrđujući njihov fenotip pamćenja u skladu sa našim prethodnim zapažanjima (Slika S2E).48 Da bismo dalje istražili ove nalaze na modelima, koristili smo intracelularno bojenje za procjenu proizvodnje IL-22 u liniji{ {56}} sc model, koji je dao slične rezultate osim za smanjeni udio CD8+ T ćelija IL-22 proizvođača (slike S2F–S2I). Također smo mogli identificirati da IL-22+ ćelije nisu ko-eksprimirali IFNg, što izdvaja mišje IL-22 proizvođače iz Th1 podskupine (Slika 2G).49 Nadalje, koristili smo konfokalnu mikroskopiju na preciznom rezanju rezove pluća reporterskih životinja kako bi se ispitala njihova prostorna distribucija u plućima miševa kojima je ubrizgan tumor. Ovdje bismo mogli identificirati da se takvi IL-22 i IL-17A proizvođači lokaliziraju gotovo isključivo na metastatskim žarištima (Slika 2E). Kao što je pokazano protočnom citometrijom, nismo našli nikakvu korelaciju između IL-22 i IL-17A produkcije iz reporterskih ćelija u metastatskim žarištima, što ukazuje da su IL-22 i IL-17 zaista proizvode dvije različite ćelijske podskupine. Također smo potvrdili da su veliki dio ćelija koje proizvode IL-22- CD4+ T ćelije (slika 2E). Kako su ovi podaci ukazali na dominantnu ulogu T ćelija u proizvodnji IL-22, generisali smo Il22floxCd4cre miša sa uslovnom delecijom Il22 u svim zrelim T ćelijama (Slika 2F). Kada su bili izazvani E0771-GFP ćelijama, Il22floxCd4cre miševi su imali smanjenu sklonost razvoju metastaza u plućima, što podsjeća na fenotip uočen kod globalnog Il22 / životinja (Slika 2F). Međutim, takođe možemo potvrditi da je cre-rekombinaza pod kontrolom CD4 promotora potpuno ukinula proizvodnju IL-22 ne samo u CD4+, već i u CD8+ T ćelijama izolovanim iz slezene Il22floxCd4cre miševa, i stoga se ovaj model nije mogao koristiti za preciziranje specifičnog izvora IL-22 (slika S2J). Da bismo potvrdili ulogu Th ćelija kao ključnog izvora IL-22 u našem modelu, prenijeli smo divlje i Il22 / CD4+ T ćelije u Rag1 / II22/ životinje koje su naknadno primile E{{ 104}} GFP ćelije iv (Slika 2G). Ovdje bismo mogli potvrditi da je proizvodnja IL{106}} adaptivno prenesenim CD4+ T ćelijama dovoljna za promicanje metastaza u plućima u našem modelu, ali se ukida kada se koriste CD{108}} T ćelije izolovane iz II22 / životinja (Slika 2G). Važno je da je na razlike u metastazama uticalo presađivanje T ćelija nakon transfera (Slika S2K). U zaključku, identificirali smo Th ćelije kao dovoljan izvor IL-22 koji pokreće metastaze u plućima miševa koji nose tumor, a zatim smo pokušali identificirati relevantnu ciljnu ćeliju.
Slika 1. IL-22-nokaut smanjuje broj plućnih metastaza, ali ne utiče na rast tumora kod singenih mišjih modela karcinoma pluća i dojke
Slika 2. T ćelije su primarni izvor IL-22 u plućima miševa koji nose tumor
Ekspresija IL-22RA1 na tumorskim ćelijama je neophodna za formiranje metastaza
Ekspresija IL-22RA1 je ograničena na nehematopoetske ćelije i služi kao ograničavajući faktor za IL-22 signalizaciju. Da bismo ispitali njegov utjecaj na metastatski fenotip, generisali smo stabilnu deleciju Il22ra1 u 4T1 i Line{8}} ćelijama (Slika 3A). U skladu s našim prethodnim nalazima, rast tumora 4T1 Il22ra1 ćelija uglavnom nije bio pogođen u poređenju sa 4T1 kontrolnim ćelijama (Slika 3B). Međutim, miševi kojima su ubrizgane 4T1 Il22ra1 ćelije sc ili iv imali su manje makroskopskih i klonogenih metastaza u plućima u poređenju sa kontrolnim 4T1 ćelijama (Slike 3B i 3C). Da bismo potvrdili da ovaj efekat nije zavisan od klona, generirali smo i analizirali tri klona Line-1 Il22ra1 i testirali ih protiv tri kontrolna klona, što je dalo slične rezultate (slike 3D i 3E). Ovo potvrđuje da su ćelije raka koje eksprimiraju IL{{31}RA1-relevantna meta IL-22 u pokretanju metastaza u plućima. Da bismo isključili efekte metodologije van cilja, koristili smo IL-22BP da inhibiramo IL-22 signalizaciju. Uspostavili smo ćelijske linije 4T1 i Line{39}} koje konstitutivno luče IL-22BP (Il22ra2+) (Slika S3A). Kada su ubrizgane sc, ćelije Line{44}} Il22ra2+ rasle su uporedivo sa kontrolnom na mjestu implantacije, kao što je ranije viđeno na modelima Il22ra1 i Il22 / miševima, iako su 4T1 Il22ra2+ ćelije rasle sporije (slika S3B). Ovdje su ćelije 4T1 Il22ra{58}} imale značajno smanjen broj metastaza kada su ubrizgane sc (Slike S3B i S3C). Uprkos većoj varijabilnosti, ćelije Line{61}} Il22ra2+ takođe su formirale manje metastaza kada su ubrizgane sc ili iv (Slike S3D i S3E). Dakle, neutralizacija IL-22 kroz IL-22BP je u velikoj mjeri oponašala fenotip uočen kod Il22ra1 ćelija i Il22 / miševa, potvrđujući relevantnost citokina za metastatski proces.
Prednosti suplementa cistanche-povećavaju imunitet
IL-22 kontrolira rast tumorskih ćelija tokom rane faze metastatskog presađivanja
To determine the role of IL-22 signaling during the dissemination process, we analyzed the kinetics of metastatic seeding in our models. For this, we injected 4T1-GFP cells i.v. and analyzed lungs at 12 and 48 h after injection (Figure S4A). We used confocal microscopy to quantify the numbers of GFP+ colonies (defined as cell clusters of >100 mm) i pojedinačne ćelije po mm2 plućnog tkiva (slika S4B). Nismo mogli otkriti razlike 12 h nakon injekcije, što ukazuje na to da IL-22 možda neće u velikoj mjeri utjecati na sjeme (Slike S4C i S4D). Međutim, u vremenskoj tački 48-h, broj GFP+ ćelija i kolonija se smanjio u plućima Il22 / miševa (slike S4C i S4D). Ovo ukazuje na ulogu IL-22 u pokretanju ranih metastaza u plućima. Da bismo procijenili brzinu proliferacije, miševima smo istovremeno ubrizgali 5-etinil-20 -deoksiuridin (EdU) 4 h prije ispitivanja 12, 24, 48 h i 7 dana nakon injekcije tumora (Slika S4E) . Slično mikroskopskom brojanju, nismo otkrili razlike u broju GFP+ ćelija ranije od 48 sati nakon injekcije (slike S4F-S4G). Nasuprot tome, mogli smo otkriti razlike u inkorporaciji EdU, što ukazuje na veću frakciju ćelija koje se dijele tek 7. dana nakon injekcije (slika S4G). Stoga smatramo da su razlike u opterećenju tumorom pluća na koje utiče IL-22 uočene već nakon 48 h posredovane mehanizmom neovisnim o proliferaciji.
Slika 3. Ekspresija IL-22RA1 na tumorskim ćelijama je neophodna za formiranje metastaza
IL-22 reguliše ekspresiju CD155 na tumorskim ćelijama i na taj način potiče metastaze
Na osnovu naših nalaza da IL-22 djeluje na IL-22ra1+ ćelije raka kako bi promovirao metastaze, izvršili smo masovno sekvenciranje RNA 4T1 ćelija tretiranih IL-22 kako bismo dalje razgraničili osnovni mehanizam (GEO: GSE202314) (Slika 4A). Otkrili smo 147 gena koji su bili različito regulirani. Od njih, ekspresija 133 gena je povećana, a 14 smanjena nakon tretmana IL-22 (Slike 4B i S5A). Potvrđivali smo Pvr (receptor poliovirusa, Pvr) kao jednu od najznačajnije povećanih meta koristeći qPCR (slika S5B). Ovo je značajno jer je CD155, proizvod Pvr, prekomjerno eksprimiran kod različitih karcinoma i posjeduje svojstva promicanja tumora, uključujući metastaze.54–56 Da bismo potvrdili naše nalaze, procijenili smo ekspresiju CD155 u IL{20}}stimuliranom 4T1, Linija-1 i ćelije E0771 protočnom citometrijom (slika 4C). Otkrili smo povećanje ekspresije CD155 u svim ćelijskim linijama tokom 72 h (Slike 4D i 4E), ali ovaj efekat je izostao u ćelijama kojima nedostaje IL-22RA1 (Slika S5C). Zatim smo procijenili uticaj IL-22 na ekspresiju CD155 u E0771-GFP ćelijama iz pluća miševa koji nose tumor (slika 4F). Ovdje bismo mogli potvrditi da ćelije implantirane u Il22/miševi imaju nižu ekspresiju CD155, što je u korelaciji sa manjim dijelom E0771-GFP ćelija otkrivenih protočnom citometrijom (slike 4G i 4H). Da bismo potvrdili ulogu CD155 u metastazama, uspostavili smo Pvr Line-1 i 4T1 ćelijske linije (Slike 4I, S5D i S5G). Iako je to malo uticalo na njihov kapacitet da rastu potkožno (slike S5E i S5F), ukinulo je sposobnost formiranja metastaza u plućima (slike 4J i S5H). Mogli bismo preokrenuti ovaj proces konstitutivnom ekspresijom CD155 u Pvr ćelijama nezavisno od regulacije izazvane IL-22-(Pvr+).
Slika 4. IL-22 signalizacija povećava ekspresiju CD155 na površini tumorskih ćelija i daje otpornost na kontrolu metastaza
U ovom okruženju, mogli bismo inducirati metastaze u plućima Il22 / miševa, naglašavajući vezu između ova dva molekula i njihovu ulogu kao posrednika metastatskog procesa (Slike 4K i S5I).
CD155 na tumorskim stanicama povezan je sa smanjenom ekspresijom CD226 na NK stanicama i smanjenom proizvodnjom IFNg
CD155 igra suštinsku ulogu u proliferaciji i adheziji u ćelijama raka,54-57 između ostalog. Nismo otkrili nedostatke u proliferaciji Line-1 Pvr ćelija in vitro (podaci nisu prikazani). Važno je da CD155 ima ćelijsku ekstrinzičnu pro-metastatsku ulogu tako što se vezuje za imunomodulatorne receptore CD96, CD226 ili TIGIT na površini NK i T ćelija.54–56,58,59 Da bismo precizno odredili vezujuće partnere CD155, analizirali smo antitumorski odgovori u plućima miševa koji sadrže 4T1-luciferazu+ ćelije (4T1-Luc) (Slika 5A). Koristeći in vivo sistem za snimanje (IVIS) potvrdili smo da su divlji tip i Il22 / miševi imali slično zasejavanje tumorskih ćelija do 5. dana nakon injekcije, a razlike u opterećenju tumorom su se povećale tokom dvije sedmice (Slike 5B i 5C) . Zaista, defekt proizvodnje IFNg od strane NK ćelija, ali ne i drugih tipova ćelija, pokazao je gubitak humoralnih efektorskih mehanizama (Slike 5D, 5E i S6A) i bio je u korelaciji sa većim opterećenjem tumora (Slika S6B). Ovaj efekat je konzistentno pronađen u modelu Line-1 sc (slike S6C–S6E). Ispitano čip citometrijom, 60 uzoraka od 4T1- miševa sa plućnim metastazama pokazalo je povećanu ekspresiju CD155 u metastatskim žarištima u WT, ali ne i kod Il22 / životinja (Slike 5F i S6F). Pronašli smo veću infiltraciju NK ćelija u metastatska žarišta Il22 / ali ne i WT životinja, što ukazuje na veću aktivaciju i potvrđuje ovisnost o NK stanicama kao antitumorskim efektorskim stanicama (slika 5F). CD226, ali ne TIGIT ili CD96, bio je različito eksprimiran NK ćelijama i, u manjoj mjeri, CD8+ T ćelijama u plućima divljeg tipa i Il22 / životinja (Slike 5G i S6G-S6H). CD226 je ko-receptor neophodan za aktivaciju efektorskih funkcija NK i CD8 T ćelija. Stoga smo krenuli da istražimo njegovu patofiziološku relevantnost u našem modelu.61–64
cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem
Blokada CD226 poništava antimetastatski fenotip životinja sa nedostatkom IL-22-
Prekomjerna CD{0}}posredovana signalizacija prisutna u mikrookruženju tumora može izazvati internalizaciju i degradaciju CD226 u efektorskim ćelijama.61,63 Da bismo ocrtali ulogu prekomjerne ekspresije CD155 na CD226 i kasniji antitumorski odgovor, ubrizgali smo 4T1 kontrolu i Pvr+ ćelije iv kod Il22/ miševa, a dve grupe su takođe dobile anti-CD226 blokirajuće antitelo (480.1) (Slika 6A). I Pvr+ ćelije i blokada CD226 mogle bi na sličan način promovirati metastaze u plućima kod Il22 / miševa, a ovi efekti nisu sinergizirali (Slika 6B). Slično našim prethodnim zapažanjima kod divljih životinja, ovo je bilo dovoljno da inhibira proizvodnju IFNg od strane NK ćelija (slika 6C). Konačno, otkrili smo smanjenje ekspresije CD226 na NK ćelijama kod miševa kojima je ubrizgan Pvr{23}}u poređenju sa kontrolnim ćelijama. Ovo je u korelaciji sa smanjenim kapacitetom ovih NK ćelija da proizvode IFNg (slika 6D). Nadalje, ispitali smo potencijal agonističkog TIGIT antitijela (IG9) da inhibira aktivaciju NK ćelija kod Il22 / životinja i blokade CD96 (3.3) da spriječi inhibiciju funkcije NK ćelija (slika 6E). Ni TIGIT agonist ni CD96 antagonist nisu promijenili broj metastaza u poređenju sa Il22/životinjama koje su primile kontrolne ili Pvr{33}}T1 ćelije, respektivno (slika 6F). Kada se aktivira, TIGIT bi mogao inhibirati proizvodnju IFNg iz CD8+ T, ali ne i NK ćelija (Slika 6G). Dakle, IL-22- CD155 osa pokreće smanjenu ekspresiju CD226 u NK ćelijama i čini ih inertnim u mikrookruženju tumora.
Ekspresija CD155 dopunjuje potpis gena IL-22 kod pacijenata sa karcinomom dojke i pluća
Konačno, procijenili smo kliničku važnost CD155 u kontekstu IL-22-IL-22RA1 ose. Ekspresija CD155 sama po sebi je povezana sa nepovoljnom prognozom kod različitih entiteta raka.54 Analizirali smo podatke o sekvenciranju RNK iz atlasa genoma raka (TCGA), adenokarcinoma pluća (TCGA: LUAD, n=504) i HER2- pozitivni uzorci pacijenata iz skupova podataka invazivnog karcinoma dojke (TCGA: BRCA, n=110). Fokusirali smo se na ključne gene povezane s IL-22-: IL22RA1, IL22RA2, IL10RB i PVR. Da bismo stratificirali kohorte pacijenata, koristili smo aglomerativno grupiranje, metodu grupiranja bez nadzora, što je rezultiralo u tri glavna klastera (Slike 7A i 7B). Ovo je otkrilo karakteristične obrasce ekspresije gena: klaster 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, IL10RBmed, PVRhi), klaster 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, IL10RBhi, PVRlo) i klaster 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, IL10RBlo, PVRmed) (Slika 7C). Ovi klasteri su bili ravnomjerno raspoređeni u ove dvije kohorte (Slika 7D). Pacijenti u klasteru 0 i LUAD skupu podataka klasteru 2 imali su lošije preživljavanje od pacijenata u klasteru 1 (Slika 7E). Preživljavanje klastera 1 i 2 nije se razlikovalo u obje kohorte (Slika 7E). Nadalje, izračunali smo ograničeno srednje vrijeme preživljavanja (RMST) za klastere 0 i 1 kako bismo kvantifikovali razliku u očekivanom vremenu preživljavanja do pet godina praćenja, što je rezultiralo sa 361,18 dana za LUAD i 93,23 dana za BRCA (Slika 7F). Klasteri 0 i 1 su imali razlike u učestalosti patoloških faza bolesti unutar njih u LUAD, ali ne i u BRCA kohorti (Slika 7G). Važno je da takve razlike u preživljavanju između klastera (IL22RA1hiPVRhi) i 1 (IL22RA1loPVRlo) uglavnom potiču od pacijenata koji su dijagnosticirani u ranim (I i II), ali ne i u naprednim stadijumima bolesti (III i IV) (Slika S7A). Da bismo procenili uticaj svakog gena na preživljavanje, koristili smo Coxov model proporcionalnih opasnosti. I IL22RA1 (omjer opasnosti [HR]=1.23) i PVR (HR=1.28) utiču na preživljavanje, dok IL22RA2 i IL10RB nisu promijenili opasnost u LUAD kohorti (Slika S7B). Štaviše, samo CD226 (p=0.06), ali ne i TIGIT ili CD96, ima tendenciju da utiče na preživljavanje, u skladu sa našim nalazima u pretkliničkim modelima (Slika S7B). Koristili smo CIBERSORTx algoritam dekonvolucije na LUAD kohorti da procijenimo da li obrasci ekspresije gena naših klastera imaju utjecaj na infiltraciju imunoloških stanica kod pacijenata.65 Zanimljivo je da postoji povećanje CIBERSORTx jedinica za aktivirane NK ćelije u klasteru 1 u poređenju sa klasterima 0 i 2 kod LUAD pacijenata, dok nije bilo razlika u NK ćelijama u mirovanju ili aktiviranim CD{80}} memorijskim T ćelijama (slika S7C) sa sličnim trendom u BRCA kohorti (slika S7D). Zajedno, ovi rezultati iz kliničkih kohorti pokazuju važnost regulatorne veze između IL-22 i CD155 iz T ćelija.
Slika 5. Ekspresija CD226 je veća na NK ćelijama kod Il22–/– miševa
DISKUSIJA
U ovoj studiji smo otkrili mehanizam pomoću kojeg T ćelije proizvode IL-22 za promicanje metastaza u plućima na mišjim modelima raka pluća i dojke. Mehanički, T ćelije na metastatskim žarištima u plućima, pretežno CD4+, proizvode IL-22 koji signalizira direktno preko svog receptora eksprimiranog u ćelijama raka, promovišući ekspresiju pro-metastatskog molekula CD155.{{ 5}},58,59 Uprkos dobro proučenoj ekspresiji CD155 od pan-kancera i njegovoj unutrašnjoj i ekstrinzičnoj ulozi u progresiji raka,54 put odgovoran za regulaciju CD155 u malignim ćelijama ostaje neuhvatljiv.66–68 Pokazali smo da IL{{ 15}} je povećao ekspresiju CD155 u ćelijskim linijama raka pluća i dojke in vitro i in vivo, dok je njegova konstitutivna ekspresija omogućila metastaze kod Il22 / miševa, u poređenju sa kontrolnim i deficitarnim ćelijama. Povećana ekspresija CD155 u mikrookruženju tumora pluća dovela je do smanjenja kostimulativne molekule CD226 na NK ćelijama, smanjujući njihovu lokalizaciju na metastaze i proizvodnju IFNg, što je u korelaciji sa većim opterećenjem tumora. U našim prethodnim studijama, otkrili smo akumulaciju T ćelija koje proizvode IL-22-u uzorcima tumora pacijenata sa karcinomom pluća bez malih ćelija (NSCLC).12,48 Pokazali smo da ćelije raka pokreću NLRP3- zavisno lučenje IL-1b koje indukuje takvu proizvodnju IL-22 uglavnom iz Th ćelija.18 Vrijedi napomenuti da kod ljudi, zbog razlika u Th ćelijskim profilima citokina, IL{{ 31}} se također indukuje u Th1 ćelijama. Moguće je da bi to moglo narušiti antitumorski imuni odgovor. Važno je da takve Th1 varijante mogu djelomično objasniti hiperprogresiju raka nakon aktivacije T stanica nakon blokade kontrolne tačke.69 U skladu s našim prethodnim zapažanjima, potvrdili smo akumulaciju CD-a-22-koji proizvode CD4+ i CD{{38} } T ćelije, ali i NK1.1+ ćelije, u metastatskoj niši u plućima životinja ubrizganih tumorom. Važno je napomenuti da smo uočili razlike specifične za soj u akumulaciji takvih IL-22-proizvodnih CD8+ T ćelija u našim modelima. Međutim, ukidanje proizvodnje IL-22 u ukupnim zrelim T ćelijama bilo je dovoljno da se rekapitulira efekat koji smo primijetili kod životinja s nedostatkom IL{45}.70 Također, usvajanje CD{47}} T ćelija u Rag / II22 / miševi je bio dovoljan da izazove metastaze u plućima, ukazujući na glavnu ulogu Th ćelija kao izvora IL-22. Suprotno tome, naši prethodni nalazi ukazuju na to da je uprkos akumulaciji CD8+ T ćelija u uzorcima tumora, njihov doprinos IL-22 bazenu mali.48 U svakom slučaju, karakterizacija takvog CD{{53 }} IL-22-proizvodnje T ćelija je od suštinskog značaja da se pažljivo procijene njihova pro- ili antitumorska svojstva kako se pojavljuju novi podaci o ovoj subpopulaciji.71,72 Također, primarna uloga NK i NKT ćelija u kontroli tumora nadmašuje njihovu potencijalni doprinos formiranju metastaza putem IL-22, koji je uočen u eksperimentu Rag / II22 / adaptivnog transfera na životinjama bez zrelih T stanica, ali koje imaju funkcionalne NK stanice.37 Ovu hipotezu dalje podržavaju naši nalazi u metastatskim žarišta gdje su NK ćelije pronađene u većoj količini nego citotoksične T ćelije, naglašavajući NK ćelije kao bitne igrače u kontroli tumora u odsustvu IL-22. Važno je napomenuti da smo se fokusirali na proizvođače IL-22 na metastatskim žarištima u plućima, ali nismo razmatrali njihovo porijeklo, klonalnost ili njihovu distribuciju u krvi ili limfnim organima. Štaviše, različiti izvori IL-22 promoviraju progresiju tumora na način ovisan o kontekstu posredovanom pleiotropnim djelovanjem ovog citokina. Shodno tome, slične ćelije koje proizvode IL-22- u različitim odjeljenjima (pluća naspram slezine nasuprot limfnom čvoru) mogu različito utjecati na protumoralne fenotipove ili nemaju funkciju ovisno o kontekstu, što će se morati dalje istražiti. Studije o raku u više navrata izvještavaju da IL-22 utiče na razvoj i rast primarnih tumora i, na kraju, na neoplastičnu progresiju.26,73–76 Ova ideja je uglavnom opravdana sposobnošću promicanja migracije, invazije i stabla ćelija raka. in vitro i time promoviše formiranje metastaza.76,77 Važno je da ablacija IL-22 može ublažiti imunosupresivno mikrookruženje u Kras-mutantnom modelu karcinoma pluća.14 U trenutnoj studiji, pokazali smo da je povećano metastatsko opterećenje bilo direktan efekat IL-22 na diseminirane tumorske ćelije IL-22RA1+, što je rezultiralo povećanim rastom kolonija. Važno je da naši podaci formalno ne isključuju utjecaj na ne-tumorske stanice. Kao takav, utjecaj IL-22 na diseminaciju tumorskih stanica kroz intrinzično djelovanje endogeno eksprimiranog IL-22R opširno je istaknut od strane Giannoua i sur.78
Slika 6. CD226 signalizacija je neophodna za proizvodnju IFNg iz NK ćelija
Pokazali smo da je Pvr jedan od gena sa povećanom ekspresijom na ćelijama raka nakon liječenja IL-22. U ovom kontekstu, ćelije sa nedostatkom CD155- formirale su nekoliko metastaza, kako kod divljeg tipa tako i kod Il22 / miševa, i, što je važno, ponovno uvođenje CD155 nam je omogućilo da rekonstituišemo metastatski fenotip. Intrinzična uloga CD155 u ćelijama raka je dobro proučavana i poznato je da utiče na zasijavanje, proliferaciju tumorskih ćelija i migraciju.56,57 Međutim, Pvr ćelije nisu pokazivale inhibiranu proliferaciju ili migraciju u našim rukama, i zasejavanje tumorskih ćelija nije bio pogođen kod Il22 / miševa. Prvobitno identifikovan na ćelijama koje predstavljaju antigen, CD155 služi kao ekstrinzični promotor progresije tumora koji potiskuje funkciju NK i T ćelija vezivanjem za CD96 i TIGIT na njihovoj površini i izaziva internalizaciju i smanjenje CD226.56,61–64,79–85Due u odnosu na svoju imunosupresivnu funkciju, CD155 u ćelijama raka i domaćinima ispoljava pro-metastatska svojstva i predložen je kao meta za blokadu inhibicije kontrolne tačke.61,86 NK ćelije primaju kostimulacijski signal od ćelija koje predstavljaju antigen preko CD226. 87 Međutim, prekomjerna stimulacija CD226 u mikrookruženju tumora dovodi do internalizacije i degradacije.63 Ovo se obično suprotstavlja CD96 i TIGIT, koji vežu CD155 s većim afinitetom.58 Zanimljivo je da je poznato da 4T1 stanice induciraju smanjenje CD226 kod infiltracije tumora. limfociti i potiskuju proizvodnju IFNg.88 Ovdje smo pokazali da nedostatak IL-22 održava ekspresiju CD226 na NK i CD8+ T ćelijama. Međutim, samo NK ćelije su imale dramatično veće kapacitete za proizvodnju IFNg iu obrnutoj korelaciji sa metastatskim opterećenjem. Zanimljivo je da je aktivacija TIGIT signalizacije u našoj studiji inhibirala proizvodnju IFNg iz CD8+ T, ali ne i NK ćelija i nije bila dovoljna za povećanje metastatskog opterećenja. Slično, drugi receptor za CD155, CD96, nije bio ni različito reguliran kod Il22 / miševa niti je njegova inhibicija spriječila metastaze, što ukazuje da CD155 ne potiskuje NK ćelije preko CD96 u našem modelu. Ovo naglašava specifičnu regulaciju antitumorskih odgovora od strane CD155 i njegovih različitih partnera za vezivanje.
Prednosti suplemenata cistanche-kako ojačati imuni sistem
Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Enhance Immunity
【Tražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Utvrđen je utjecaj CD155 na prognozu i njegovu ulogu u patogenezi raka pluća, dojke, debelog crijeva i drugih tipova karcinoma.79–85 Postoji veliki broj dokaza o prognostičkoj važnosti IL-22 i njemu srodnih gena u različitim entitetima raka.10,21,27,75,89–91 Međutim, neke studije navode da nema utjecaja ekspresije IL-22 na preživljavanje.12 Iako ove razlike mogu biti posljedica heterogenosti u populacija pacijenata, uzorkovanje i problemi izvještavanja, mnoge od ovih studija se fokusiraju na jedan gen povezan sa IL-22 signalizacijom. Ovdje smo koristili aglomerativno grupisanje da bismo uočili obrasce ekspresije IL22RA1, IL22RA2, IL10RB i PVR u LUAD i BRCA kohortama u TCGA i povezali ih s kliničkim podacima. Ovde smo identifikovali tri obrasca ekspresije ovih gena: obrazac 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, PVRhi), obrazac 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, PVRlo) i obrazac 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, PVRmed). Identifikovali smo da se visoka ekspresija IL22RA1 poklapa sa visokom ekspresijom PVR, što je takođe dovelo do loših ukupnih ishoda preživljavanja, posebno kod pacijenata sa dijagnostikovanim ranim (I i II), ali ne i uznapredovalim (III i IV), patološkim stadijima, naglašavajući specifičnu ulogu ovog mehanizma. Suprotno tome, visoka ekspresija IL22RA2, također poznata kao IL-22BP, bila je u korelaciji sa nižom ekspresijom PVR i boljim preživljavanjem.18,34 Treći obrazac je odgovarao potpuno niskoj ekspresiji i predstavljao je imunološki hladne tumore.92 Duž ovih linija , CIBERSORTx dekonvolucija je pokazala da klaster 1 karakterizira visoka ekspresija IL22RA2 karakterizira genski potpis za aktivirane, ali ne mirne, NK ćelije u poređenju s drugim klasterima. Pokazalo se da ekspresija CD226 stratificira pacijente u pogledu ishoda u nekoliko kliničkih ispitivanja NSCLC.93 Međutim, zbog dvostrukog načina pre- i posttranslacijske regulacije CD226, ekspresija se ne odražava uvijek u podacima sekvenciranja mRNA.94 Stoga, studije koje se fokusiraju o posttranslacijskoj regulaciji CD226 procijeniti njegovu ekspresiju u kliničkim uzorcima koristeći bojenje antitijela.63 Ipak, prilikom ispitivanja TCGA skupa podataka o odnosu partnera koji se vezuju za CD155 i preživljavanja, samo je CD226 imao trend ka boljoj prognozi (log (HR)) {{57 }}.24, p=0.06), dok TIGIT i CD96 nisu pokazali nikakvu korelaciju sa preživljavanjem. Važno je da su tumorske ćelije dizajnirane da luče IL-22BP formirale manje metastaza, naglašavajući potencijal IL-22 puta za ciljanu terapijsku intervenciju. Ovo bi moglo suprotstaviti prekomjernu ekspresiju CD155 tumora, čije direktno ciljanje ostaje izazovno zbog složene mreže ko-receptora. Dalje treba napomenuti da su dugoročni efekti neutralizacije IL-22 na metastaze nepoznati, ali bi mogli imati direktan utjecaj na terapijsko razmatranje T ćelija ili dati obrazloženje za neutralizaciju IL-22 korištenjem antitijela sa korisni sigurnosni profil, kao što je fezakinumab (proba NCT01941537) ili projektovani IL-22 sa dizajnom zasnovanim na strukturi.39,95 Ukratko, identifikovali smo prekomjernu ekspresiju CD155 na tumorskim stanicama izazvanu IL-22- kao mehanizam koji pogoduje metastatskom izrastanju. Ova suštinska uloga u prognozi naglasila je potencijal IL-22 kao terapeutske mete kod raka. Do sada je neutralizacija IL-22 predložena uglavnom kao strategija za liječenje autoimunih bolesti.31,49 Naši podaci o IL-22BP kao neutralizatoru IL-22, koji je fenokopirao globalni nedostatak IL-22, podržao je terapeutski potencijal za ciljanje IL-22-IL-22R1 ose i trebalo bi ga dalje istraživati u pretkliničkim i kliničkim studijama.
REFERENCE
1. Hanahan, D., i Weinberg, RA (2011). Obilježja raka: sljedeća generacija. Ćelija 144, 646–674. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011. 02.013.
2. Massague´, J., i Obenauf, AC (2016). Metastatska kolonizacija cirkulirajućim tumorskim stanicama. Nature 529, 298–306. https://doi.org/10.1038/ nature17038.
3. Renner, P., Rovira, J., Klein, C., Schlitt, HJ, Geissler, EK, i Kroemer, A. (2014). KLRG1(+) prirodne ćelije ubice štite od plućne metastatske bolesti imunološkim nadzorom. OncoImmunology 3, e28328. https://doi.org/10.4161/onci.28328.
4. Mohme, M., Riethdorf, S., i Pantel, K. (2017). Cirkulirajuće i diseminirane tumorske ćelije - mehanizmi imunološkog nadzora i bijega. Nat. Rev. Clin. Oncol. 14, 155–167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc. 2016.144.
5. Briukhovetska, D., Do¨ rr, J., Endres, S., Libby, P., Dinarello, CA, i Kobold, S. (2021). Interleukini u raku: od biologije do terapije. Nat. Rev. Cancer 21, 481–499. https://doi.org/10.1038/s41568-021-00363-z.
6. Kitamura, T., Qian, BZ, i Pollard, JW (2015). Promocija metastaza imunološkim stanicama. Nat. Rev. Immunol. 15, 73–{4}}. https://doi.org/10.1038/ nri3789.
7. Galon, J., i Bruni, D. (2020). Imunologija tumora i evolucija tumora: isprepletene istorije. Imunitet 52, 55–81. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.12.018.
8. Page`s, F., Mlecnik, B., Marliot, F., Bindea, G., Ou, FS, Bifulco, C., Lugli, A., Zlobec, I., Rau, TT, Berger, dr.med. , et al. (2018). Međunarodna validacija konsenzusa Immunoscore za klasifikaciju raka debelog crijeva: studija prognoze i tačnosti. Lancet 391, 2128–2139. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(18)30789-X.
9. Rui, J., Chunming, Z., Binbin, G., Na, S., Shengxi, W., i Wei, S. (2017). IL-22 promovira napredovanje raka dojke regulacijom HOXB-AS5. Oncotarget 8, 103601–103612. https://doi.org/10.18632/ oncotarget.22063.
10. Kryczek, I., Lin, Y., Nagarsheth, N., Peng, D., Zhao, L., Zhao, E., Vatan, L., Szeliga, W., Dou, Y., Owens, S. ., et al. (2014). IL-22(+)CD4(+) T ćelije promovišu stabljiku kolorektalnog karcinoma putem STAT3 aktivacije transkripcionog faktora i indukcije metiltransferaze DOT1L. Imunitet 40, 772–784. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2014.03.010.
11. Jiang, R., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., Wang, X., and Sun, B. (2011). Interleukin-22 promoviše humani hepatocelularni karcinom aktivacijom STAT3. Hepatology 54, 900–909. https://doi.org/10.1002/ hep.24486.
12. Kobold, S., Vo¨ lk, S., Clauditz, T., K€ upper, NJ, Minner, S., Tufman, A., D€ uwell, P., Lindner, M., Koch, I ., Heidegger, S., et al. (2013). Interleukin-22 se često eksprimira u karcinomu malih i velikih ćelija pluća i potiče rast ćelija raka otpornih na hemoterapiju. J. Thorac. Oncol. 8, 1032–1042. https://doi.org/10.1097/JTO.0b013e31829923c8.
13. Hernandez, P., Gronke, K., i Diefenbach, A. (2018). Kvaka-22: interleukin-22 i rak. EUR. J. Immunol. 48, 15–31. https://doi.org/10. 1002/eji.201747183.
14. Khosravi, N., Caetano, MS, Cumpian, AM, Unver, N., De la Garza Ramos, C., Noble, O., Daliri, S., Hernandez, BJ, Gutierrez, BA, Evans, SE, et al. (2018). IL22 promoviše Kras-mutantni rak pluća indukcijom protumornog imunološkog odgovora i zaštitom svojstava stabljike. Cancer Immunol. Res. 6, 788–797. https://doi.org/10.1158/ 2326-6066.CIR-17-0655. 15. Li, H., Mou, Q., Li, P., Yang, Z., Wang, Z., Niu, J., Liu, Y., Sun, Z., Lv, S., Zhang, B ., i Yin, C. (2019). MiR-486-5p inhibira IL-22-indukovanu epitelno-mezenhimsku tranziciju ćelija raka dojke potiskivanjem Dock1. J. Cancer 10, 4695–4706. https://doi.org/10.7150/jca.30596.
16. Kim, K., Kim, G., Kim, JY, Yun, HJ, Lim, SC, i Choi, HS (2014). Interleukin-22 promoviše transformaciju epitelnih ćelija i tumorigenezu dojke putem aktivacije MAP3K8. Carcinogenesis 35, 1352–1361. https:// doi.org/10.1093/carcin/bgu044.
17. Katara, GK, Kulshrestha, A., Schneiderman, S., Riehl, V., Ibrahim, S., i Beaman, KD (2020). Interleukin-22 potiče razvoj malignih lezija na mišjem modelu spontanog raka dojke. Mol. Oncol. 14, 211–224. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12598.
18. Huber, S., Gagliani, N., Zenewicz, LA, Huber, FJ, Bosurgi, L., Hu, B., Hedl, M., Zhang, W., O'Connor, W., Jr., Murphy, AJ, et al. (2012). IL-22BP reguliše inflamazom i modulira tumorigenezu u crijevima. Nature 491, 259–263. https://doi.org/10.1038/ nature11535.
19. Perez, LG, Kempski, J., McGee, HM, Pelzcar, P., Agalioti, T., Giannou, A., Konczalla, L., Brockmann, L., Wahib, R., Xu, H., et al. (2020). TGFbeta signalizacija u Th17 ćelijama potiče proizvodnju IL-22 i rak debelog crijeva povezan s kolitisom. Nat. Commun. 11, 2608. https://doi.org/10.1038/ s41467-020-16363-w.
20. Meyer, A., Stark, M., Karstens, JH, Christiansen, H., i Bruns, F. (2012). Histiocitoza Langerhansovih ćelija kranijalne baze: je li efikasna radioterapija niskim dozama? Slučaj Rep. Oncol. Med. 2012, 789640. https://doi.org/10.1155/2012/789640.
21. Zhuang, Y., Peng, LS, Zhao, YL, Shi, Y., Mao, XH, Guo, G., Chen, W., Liu, XF, Zhang, JY, Liu, T., et al. (2012). Povećani intratumoralni IL-22-koji proizvode CD4(+) T ćelije i Th22 ćelije koreliraju s progresijom karcinoma želuca i predviđaju loše preživljavanje pacijenata. Cancer Immunol. Immunother. 61, 1965–1975. https://doi.org/10.1007/s00262-012- 1241-5.
22. Chen, X., Wang, Y., Wang, J., Wen, J., Jia, X., Wang, X., i Zhang, H. (2018). Akumulacija T-helper 22 ćelija, interleukina-22 i supresorskih ćelija izvedenih iz mijeloida promoviše progresiju raka želuca kod starijih pacijenata. Oncol. Lett. 16, 253–261. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8612.
23. Doulabi, H., Rastin, M., Shabahangh, H., Maddah, G., Abdollahi, A., Nosratabadi, R., Esmaeili, SA, i Mahmoudi, M. (2018). Analiza Th22, Th17 i CD4(+) ćelija koje koproduciraju IL-17/IL-22 u različitim stadijumima humanog raka debelog crijeva. Biomed. Pharmacother. 103, 1101–1106. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.04.147.
24. Zeng, H., Liu, Z., Wang, Z., Zhou, Q., Qi, Y., Chen, Y., Chen, L., Zhang, P., Wang, J., Chang, Y ., et al. (2020). Intratumoralne ćelije koje proizvode IL22- definiraju imunoevazivni podtip mišićno-invazivnog karcinoma mokraćne bešike (2017). Zaštitna funkcija IL-22BP kod ishemije-reperfuzije i ozljede jetre izazvane acetaminofenom. J. Immunol. 199, 4078–4090. https://doi. org/10.4049/jimmunol.1700587.
25. Jiang, R., Wang, H., Deng, L., Hou, J., Shi, R., Yao, M., Gao, Y., Yao, A., Wang, X., Yu, L ., i Sun, B. (2013). IL-22 je povezan s razvojem raka debelog crijeva kod ljudi aktivacijom STAT3. BMC Cancer 13, 59. https://doi.org/10.1186/1471-2407-13-59.
26. Fukui, H., Zhang, X., Sun, C., Hara, K., Kikuchi, S., Yamasaki, T., Kondo, T., Tomita, T., Oshima, T., Watari, J ., et al. (2014). IL-22 proizveden od fibroblasta povezanih s rakom promovira invaziju ćelija raka želuca putem STAT3 i ERK signalizacije. Br. J. Cancer 111, 763–771. https://doi.org/ 10.1038/bjc.2014.336.
27. Liu, T., Peng, L., Yu, P., Zhao, Y., Shi, Y., Mao, X., Chen, W., Cheng, P., Wang, T., Chen, N ., et al. (2012). Povećana cirkulacija Th22 i Th17 ćelija povezana je s progresijom tumora i preživljavanjem pacijenata kod karcinoma želuca kod ljudi. J. Clin. Immunol. 32, 1332–1339. https://doi.org/10.1007/ s10875-012-9718-8.
28. Niccolai, E., Taddei, A., Ricci, F., Rolla, S., D'Elios, MM, Benagiano, M., Bechi, P., Bencini, L., Ringgressi, MN, Pini, A ., et al. (2016). Th22 ćelije koje proizvode intratumorske IFN-gama u korelaciji su s TNM stadijumom i najgorim ishodima kod raka gušterače. Clin. Sci. 130, 247–258. https:// doi.org/10.1042/CS20150437.
29. Xu, X., Tang, Y., Guo, S., Zhang, Y., Tian, Y., Ni, B., i Wang, H. (2014). Povećani nivoi intratumoralnog interleukina 22 i frekvencije T ćelija koje 22-proizvode CD4+ interleukina koreliraju sa progresijom karcinoma pankreasa. Pankreas 43, 470–477. https://doi.org/10.1097/MPA.{10}}.
30. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, i Pestka, S. (2001). Identifikacija funkcionalnog interleukina-22 (IL-22) receptorskog kompleksa: IL-10R2 lanac (IL-10Rbeta) je zajednički lanac oba IL{{7 }} i IL-22 (IL- 10-povezani T ćelijski inducibilni faktor, IL-TIF) receptorski kompleksi. J. Biol. Chem. 276, 2725–2732. https://doi.org/10.1074/jbc.M0078 37200.
31. Ouyang, W., i O'Garra, A. (2019). Citokini porodice IL-10 IL-10 i IL- 22: od osnovnih nauka do kliničkog prijevoda. Imunitet 50, 871–891. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.03.020.
32. Kempski, J., Giannou, AD, Riecken, K., Zhao, L., Steglich, B., L€ucke, J., Garcia-Perez, L., Karstens, KF, Wo¨ stemeier, A. , Nawrocki, M., et al. (2020). IL22BP posreduje u antitumorskim efektima limfotoksina protiv kolorektalnih tumora kod miševa i ljudi. Gastroenterology 159, 1417–1430.e3. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.033.
33. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, i Pestka, S. (2001). Identifikacija, kloniranje i karakterizacija novog rastvorljivog receptora koji vezuje IL-22 i neutrališe njegovu aktivnost. J. Immunol. 166, 7096–7103. https://doi. org/10.4049/jimmunol.166.12.7096.
34. Dudakov, JA, Hanash, AM, i van den Brink, MRM (2015). Interleukin-22: imunobiologija i patologija. Annu. Rev. Immunol. 33, 747–785. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-032414-112123.
35. Wolk, K., Kunz, S., Witte, E., Friedrich, M., Asadullah, K., i Sabat, R. (2004). IL-22 povećava urođeni imunitet tkiva. Imunitet 21, 241–254. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2004.07.007.
36. Sabat, R., Ouyang, W., i Wolk, K. (2014). Terapeutske mogućnosti IL-22-IL-22R1 sistema. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 21–38. https://doi. org/10.1038/nrd4176.
37. Zenewicz, LA, Yancopoulos, GD, Valenzuela, DM, Murphy, AJ, Stevens, S., i Flavell, RA (2008). Urođeni i adaptivni interleukin-22 štiti miševe od upalnih bolesti crijeva. Imunitet 29, 947–957. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2008.11.003.
38. Gronke, K., Herna´ ndez, PP, Zimmermann, J., Klose, CSN, Kofoed Branzk, M., Guendel, F., Witkowski, M., Tizian, C., Amann, L., Schumacher, F., et al. (2019). Interleukin-22 štiti crijevne matične ćelije od genotoksičnog stresa. Nature 566, 249–253. https://doi.org/10.1038/ s41586-019-0899-7.
39. Saxton, RA, Henneberg, LT, Calafiore, M., Su, L., Jude, KM, Hanash, AM, i Garcia, KC (2021). Funkcije za zaštitu tkiva interleukina-22 mogu se odvojiti od proinflamatornog djelovanja kroz dizajn zasnovan na strukturi. Imunitet 54, 660–672.e9. https://doi.org/10. 1016/j.immuni.2021.03.008.
40. Dumoutier, L., Louahed, J., i Renauld, JC (2000). Kloniranje i karakterizacija IL-10-srodnog inducibilnog faktora T ćelija (IL-TIF), novog citokina strukturno povezanog sa IL-10 i inducibilnog IL-9. J. Immunol. 164, 1814–1819. https://doi.org/10.4049/jimmunol.164. 4.1814.
41. Lejeune, D., Dumoutier, L., Constantinescu, S., Kruijer, W., Schuringa, JJ, i Renauld, JC (2002). Interleukin-22 (IL-22) aktivira puteve JAK/ STAT, ERK, JNK i p38 MAP kinaze u ćelijskoj liniji hepatoma štakora. Putevi koji su zajednički i različiti od IL-10. J. Biol. Chem. 277, 33676–33682. https://doi.org/10.1074/jbc.M204204200.
42. Nagalakshmi, ML, Rascle, A., Zurawski, S., Menon, S., i de Waal Malefyt, R. (2004). Interleukin-22 aktivira STAT3 i inducira IL-10 epitelnim ćelijama debelog crijeva. Int. Immunopharmacol. 4, 679–691. https://doi. org/10.1016/j.intimp.2004.01.008.
43. Mitra, A., Raychaudhuri, SK, i Raychaudhuri, SP (2012). IL-22-indukovana proliferacija ćelija je regulisana signalnom kaskadom PI3K/Akt/mTOR. Cytokine 60, 38–42. https://doi.org/10.1016/j.cyto.2012.06.316.
44. Bachmann, M., Ulziibat, S., H€ ardle, L., Pfeilschifter, J., i M€ uhl, H. (2013). IFNalpha pretvara IL-22 u citokin koji efikasno aktivira STAT1 i njegove nizvodne mete. Biochem. Pharmacol. 85, 396–403. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.11.004.
45. Zheng, Y., Valdez, PA, Danilenko, DM, Hu, Y., Sa, SM, Gong, Q., Abbas, AR, Modrusan, Z., Ghilardi, N., de Sauvage, FJ, i Ouyang , W. (2008). Interleukin-22 posreduje u ranoj odbrani domaćina protiv vezivanja i uklanjanja bakterijskih patogena. Nat. Med. 14, 282–289. https://doi. org/10.1038/nm1720.
46. Andoh, A., Zhang, Z., Inatomi, O., Fujino, S., Deguchi, Y., Araki, Y., Tsujikawa, T., Kitoh, K., Kim-Mitsuyama, S., Takayanagi , A., et al. (2005). Interleukin-22, član podfamilije IL-10, izaziva upalne odgovore u miofibroblastima subepitelnog crijeva. Gastroenterology 129, 969–984. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2005.06.071.
47. Tufman, A., Huber, RM, Vo¨ lk, S., Aigner, F., Edelmann, M., Gamarra, F., Kiefl, R., Kahnert, K., Tian, F., Boulesteix, AL, et al. (2016). Interleukin-22 je povišen u ispiranju pacijenata sa karcinomom pluća i drugim plućnim oboljenjima. BMC Cancer 16, 409. https://doi.org/10.1186/s12885-016- 2471-2.
48. Voigt, C., May, P., Gottschlich, A., Markota, A., Wenk, D., Gerlach, I., Voigt, S., Stathopoulos, GT, Arendt, KAM, Heise, C., et al. (2017). Ćelije raka induciraju proizvodnju interleukina-22 iz memorijskih CD4(+) T ćelija putem interleukina-1 kako bi promovirali rast tumora. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 114, 12994–12999. https://doi.org/10.1073/pnas.17051 65114.
49. Markota, A., Endres, S., i Kobold, S. (2018). Ciljanje interleukina-22 za terapiju raka. Hum. Vakcina. Immunother. 14, 2012–2015. https:// doi.org/10.1080/21645515.2018.1461300.
50. Ewens, A., Mihich, E., i Ehrke, MJ (2005). Udaljene metastaze iz subkutano izraslog E0771 medularnog adenokarcinoma dojke. Anticancer Res. 25, 3905–3915.
51. Sugiura, K., i Stock, CC (1952). Studije tumorskog spektra. I. Poređenje djelovanja metil bis (2-kloroetil)amina i 3-bis(2-kloroetil)aminometil-4-metoksimetil -5-hidroksi{{7} }metilpiridin na rast različitih tumora miševa i pacova. Cancer 5, 382–402. https://doi.org/10.1002/1097-0142(195203)5:2<382::aidcncr2820050229>3.0.co;2-3.
52. Renier, N., Wu, Z., Simon, DJ, Yang, J., Ariel, P., i Tessier-Lavigne, M. (2014). iDISCO: jednostavna, brza metoda za imunooznačavanje velikih uzoraka tkiva za snimanje volumena. Cell 159, 896–910. https://doi.org/10. 1016/j.cell.2014.10.010.
53. Kleinschmidt, D., Giannou, AD, McGee, HM, Kempski, J., Steglich, B., Huber, FJ, Ernst, TM, Shiri, AM, Wegscheid, C., Tasika, E., et al.
54. O'Donnell, JS, Madore, J., Li, XY, i Smyth, MJ (2020). Tumorske intrinzične i ekstrinzične imunološke funkcije CD1
55. Semin. Cancer Biol. 65, 189–196. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.11.013. 55. Molfetta, R., Zitti, B., Lecce, M., Milito, ND, Stabile, H., Fionda, C., Cippitelli, M., Gismondi, A., Santoni, A., i Paolini, R (2020). CD155: multifunkcionalni molekul u progresiji tumora. Int. J. Mol. Sci. 21, 922. https://doi.org/10.3390/ijms21030922.
56. Gao, J., Zheng, Q., Xin, N., Wang, W., i Zhao, C. (2017). CD155, onko-imunološki molekul u ljudskim tumorima. Cancer Sci. 108, 1934–1938. https://doi.org/10.1111/cas.13324.
57. Morimoto, K., Satoh-Yamaguchi, K., Hamaguchi, A., Inoue, Y., Takeuchi, M., Okada, M., Ikeda, W., Takai, Y., i Imai, T. ( 2008). Interakcija ćelija raka sa trombocitima posredovana Necl-5/poliovirusnim receptorom pojačava metastaze ćelija raka u plućima. Oncogene 27, 264–273. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1210645.
58. Chan, CJ, Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, MT, Town, L., Ritchie, DS, Colonna, M., Andrews, DM, i Smyth, MJ (2014). Receptori CD96 i CD226 se međusobno suprotstavljaju u regulaciji funkcija prirodnih ćelija ubica. Nat. Immunol. 15, 431–438. https://doi.org/10.1038/ni.2850.
59. Fuchs, A., Cella, M., Giurisato, E., Shaw, AS, i Colonna, M. (2004). Vrhunac: CD96 (taktilni) promoviše adheziju NK stanica-ciljne ćelije interakcijom sa receptorom poliovirusa (CD155). J. Immunol. 172, 3994–3998. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.7.3994.
60. Jarosch, S., Ko¨hlen, J., Wagner, S., D'Ippolito, E., i Busch, DH (2022). ChipCytometrija za multipleksirano otkrivanje proteina i mRNA markera na uzorcima ljudskog FFPE tkiva. STAR Protoc. 3, 101374. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101374.
61. Chauvin, JM, Ka, M., Pagliano, O., Menna, C., Ding, Q., DeBlasio, R., Sanders, C., Hou, J., Li, XY, Ferrone, S., et al. (2020). Stimulacija IL15 sa TIGIT blokadom preokreće CD155-posredovanu disfunkciju NK-ćelija u melanomu. Clin. Cancer Res. 26, 5520–5533. https://doi.org/10.1158/ 1078-0432.CCR-20-0575.
62. Weulersse, M., Asrir, A., Pichler, AC, Lemaitre, L., Braun, M., Carrie´, N., Joubert, MV, Le Moine, M., Do Souto, L., Gaud, G., et al. (2020). Gubitak koaktivirajućeg receptora CD226, ovisan o eomesu, ograničava antitumorske funkcije CD8(+) T ćelija i ograničava efikasnost imunoterapije protiv raka. Imunitet 53, 824–839.e10. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.006.
63. Braun, M., Aguilera, AR, Sundarrajan, A., Corvino, D., Stannard, K., Krumeich, S., Das, I., Lima, LG, Meza Guzman, LG, Li, K., et al. (2020). CD155 na tumorskim ćelijama pokreće rezistenciju na imunoterapiju indukujući degradaciju aktivirajućeg receptora CD226 u CD8(+) T ćelijama. Imunitet 53, 805–823.e15. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.010.
64. Leletier, A., Madore, J., O'Donnell, JS, Johnston, RL, Li, XY, McDonald, E., Ahern, E., Kuchel, A., Eastgate, M., Pearson, SA, et al. (2020). Ekspresija CD155 tumora povezana je sa otpornošću na antiPD1 imunoterapiju kod metastatskog melanoma. Clin. Cancer Res. 26, 3671–3681. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-19-3925.
65. Newman, AM, Steen, CB, Liu, CL, Gentles, AJ, Chaudhuri, AA, Scherer, F., Khodadoust, MS, Esfahani, MS, Luca, BA, Steiner, D., et al. (2019). Određivanje broja tipova ćelija i ekspresije iz masivnih tkiva digitalnom citometrijom. Nat. Biotechnol. 37, 773–782. https://doi.org/10.1038/s41587-019-0114-2.
66. Soriani, A., Zingoni, A., Cerboni, C., Iannitto, ML, Ricciardi, MR, Di Gialleonardo, V., Cippitelli, M., Fionda, C., Petrucci, MT, Guarini, A., et al. (2009). ATM-ATR-ovisna regulacija DNAM-1 i NKG2D liganda na stanicama multiplog mijeloma pomoću terapeutskih agenasa rezultira povećanom osjetljivošću NK-ćelija i povezana je sa fenotipom starenja. Blood 113, 3503–3511. https://doi.org/10.1182/blood- 2008-08-173914.
