Prednosti akteozida - liječenje glioblastoma

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN‑HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA‑JIN KIM

1. Uvod

Glioblastomje najčešći tip malignog primarnog tumora mozga i najinvazivniji i najrazorniji primarni tumor mozga (1,2), sa srednjom stopom preživljavanja od ~18 mjeseci uz agresivnu multimodalnu terapiju. Trenutne odluke o liječenju su ograničene i uključuju zračenje, kemoterapiju i operaciju u kombinaciji s alkilirajućim agensom temozolomidom (TMZ) (3,4). Uprkos dostupnosti agresivnih terapija, pacijenti saglioblastomgeneralno imaju lošu prognozu (5). TMZ je glavni kemoterapeutski lijek koji se koristi u kliničkom liječenju malignih bolestiglioblastom(6‑8); kao alkilirajući agens u seriji, sposoban je da prodre kroz krvno-moždanu barijeru (9-11). Tokom progresije malignog glioblastoma i ekstenzivne invazije kroz mozak, stalno rastuća rezistencija na lijekove na TMZ smanjuje njegovu terapijsku efikasnost (12,13). U skladu s tim, novi terapeutski lijekovi za suprotstavljanjeglioblastomhitno se traže.

Prethodne studije su objavile da ćelije glioma prolaze kroz ćelijsku smrt autofagijom, ili programiranom smrću ćelija tipa II, kao odgovor na TMZ (14,15). Autofagiju može inhibirati 3-metiladenin (3-MA) ​​kroz konverziju lakog lanca 3 (LC3)-I povezanog s mikrotubulama 3 (LC3)-I u LC3-II, čime se smanjujeglioblastomćelijska smrt (16,17); međutim, uloga autofagije zavisi od ćelijskog konteksta. Uz izuzetak citotoksične uloge tokom djelovanja TMZ-a, indukcija autofagije ćelijskim stresom je citoprotektivni proces koji eliminira stresom izazvane citoplazmatske agregate, organele i makromolekule u stanicama sisara kroz lizozomalni sistem. Zauzvrat, ćelije uključene u održavanje homeostaze primaju energiju kroz ove kataboličke procese (18,19). Kompleksne uloge autofagije sugeriraju da aktivator autofagije može imati antikancerogene efekte u kombinaciji s liječenjem TMZ indukcijomglioblastomautofagija ćelija bez štetnih efekata ili pružanja koristi za normalna tkiva. Treba napomenuti da je TMZ pokazao sinergističke terapeutske efekte u kombinaciji s vitaminom D, uključujući potisnutu vitalnost stanica i pojačanu autofagiju uglioblastomćelije. Nadalje, pokazalo se da kombinacija TMZ-a i vitamina D djeluje protiv raka in vivo, uključujući smanjenu veličinu tumora i produženu stopu preživljavanja. Ove studije sugeriraju da kombinovano liječenje može imati sinergističke učinke protiv raka putem autofagijskih mehanizama u TMZ-baziranimglioblastomterapija (15).

Acteosideje feniletanoidni glikozid koji je široko rasprostranjen u nekoliko tonizirajućih tradicionalnih kineskih biljnih lijekova (20,21). Brojna farmakološka dejstva, uključujući antioksidativna, antikancerogena, antiinflamatorna, antinefritska i antimetastatska dejstva, povezana su saacteoside(22‑24). Prethodne studije su to pokazaleacteosideima zaštitne efekte protiv oštećenja jetre uzrokovanih tetrakloridom i D-galaktozaminom. Mehanizmi koji leže u osnovi zaštitnih efekata akteozida su verovatno povezani sa njegovim kapacitetom da inhibira bioaktivaciju posredovanu P450 i efekte uklanjanja slobodnih radikala izazvanih izlaganjem tetrahloridu ugljenika (25,26).

Dakle, dokazi sugeriraju da obojeacteosidei TMZ indukuju antikancerogene efekte kroz ćelijsku smrt. Međutim, njihova povezanost i antikancerogeno djelovanje u kontekstuglioblastomostaje da se razjasni. Stoga je cilj ove studije bio provjeriti sinergističke antikancerogene učinkeacteosideu kombinaciji sa TMZ inglioblastomterapija. Proveden je test vitalnosti ćelija da bi se analizirali antikancerogeni efekti kombinovanog tretmana u C6glioblastomćelije (pacovglioblastomćelijska linija), a rezultati su upoređeni s onima nakon tretmana samo TMZ-om. Da se dalje ispita mehanizam ćelijske smrti uzrokovane zajedničkim tretmanom saacteosidei TMZ, geni povezani sa apoptozom i autofagijom u C6 ćelijama su ispitani.

akteozidni antitumor

2. Materijali i metode

ćelijska kultura:

C6 pacovglioblastomćelijska linija je kupljena od American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA). Ćelije su kultivisane u sterilnim uslovima na 37˚C u vlažnom okruženju sa 5 procenata CO2 u Dulbeccovom modifikovanom orlovom medijumu (DMEM) sa dodatkom 10 procenata fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 1 procenat antibiotika i antimikotika (sve Welgene, Daegu). , Koreja).

Biljni materijal:

Abeliophyllum distichum Nakai [vaučer br. Park1001(ANH)] je sakupljen u tematskom parku Misun-hyang, Seongbul-Mountain Recreation Forest, Koreja.

Indukcija kalusa:

Da bi se izazvalo stvaranje kalusa (27), iz svježih biljaka izolirani su eksplanti listova veličine 1‑cm2. Eksplant je kultivisan na medijumu Murachige i Skoog (4 procenta saharoze, 0.9 procenata agara sa dodatkom 1 mg/l naftalen octene kiseline i 1 mg/l 2,4‑dihloro fenoksi sirćetne kiseline, pH 5,7) na 25˚C. Kalus je nastao 20 dana kasnije. Dovoljna količinaacteosideje dobijen subkulturom za odvajanje i pročišćavanjeacteosideiz kalusa (slika 1). Različite serije prečišćenogacteosidekorišteni su u svakom eksperimentu. Svaki eksperiment je izveden tri puta koristeći drugu seriju.

Izolacija i pročišćavanje:

Etil acetatne frakcije su koncentrisane u vakuumu i korištene kao uzorak za prečišćavanje akteozida.Acteosideje izolovan i prečišćen sistemom Accelerated Chromatographic Isolation (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, Švedska) korišćenjem SNAP KPHOSPHO-SIL i SNAP Ultra kertridža (Biotage). Theacteosidepročišćen iz kalusa je kvantitativno analiziran korištenjem standardnog akteozida pomoću HPLC-PDA analize. Konačno, akteozid čistoće veće ili jednake 95 posto je dobijen iz kalusa i korišten kao uzorak za kemoterapiju na bazi temozolomida.glioblastom.

3‑(4,5‑dimetiltiazol‑2‑l)‑,5‑difeniltetrazolijum bromid (MTT):

Da bi se identificirala polumaksimalna inhibitorna koncentracija TMZ (IC50 vrijednost) protiv C6 ćelija, 1x104 ćelije u jednoćelijskim suspenzijama zasijane su u pojedinačne jažice ploča sa 96 jažica i inkubirane 24 h na 37°C prije tretmana TMZ na naznačenom koncentracije (1, 5, 10 i 20 mM) na 37˚C tokom 24 h. Nakon određivanja vrijednosti TMZ IC50 od 5 mm, ćelije su tretirane 24 h sa 5 mM TMZ, 50 µMacteoside, ili kombinacija ova dva (5 mM TMZ i 50 µMacteoside). MTT rastvor (5 mg/ml) je dodat u svaku jažicu (10 µl) i kultivisan na 37˚C tokom 2 h. Nakon toga, medijum je uklonjen i DMSO je dodan u zapremini od 200 µl svaki i reagovao na sobnoj temperaturi 30 min. Apsorbancija na 595 nm je izmjerena da bi se odredila vitalnost ćelija.

Test zacjeljivanja rana:

Suspenzija C6 ćelija u 1 ml kultivisana je u ploči sa 12 jažica i uzgajana do konfluencije. Ćelije su tretirane TMZ,acteoside, ili TMZ plusacteosidea zatim izgreban sterilnim vrhom pipete od 10‑µl kako bi se stvorila vještačka rana. U 0 i 24 h nakon ranjavanja, digitalne slike procesa zacjeljivanja rane snimljene su pomoću invertovanog mikroskopa. Migracija ćelija je kvantificirana mjerenjem veličine ožiljka u 0 i 24 h pomoću softvera za analizu slike, ImageJ 1.43u/Java1.6.0_22 softvera (NIH, Bethesda, Maryland, SAD). Svaki eksperiment je izveden tri puta, a mjerenja su obavljena u tri primjerka.

imunoblotiranje:

C6 ćelije su tretirane TMZ,acteoside, ili TMZ plusacteosideza 24 h. Ćelije su lizirane na ledu pomoću RIPA (25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 posto Nonidet P-40, 1 posto natrijum deoksiholata, 0,1 posto SDS) pufera za lizu dopunjen koktelom inhibitora proteaze i fosfataze (Roche, Basel, Švicarska) 30 min. Nakon centrifugiranja na 18,341 xg tokom 15 minuta na 4˚C, dobijen je supernatant. Koncentracija proteina je određena korištenjem Bradford Protein Assays (Bio‑rad, Hercules, CA, USA). Jednake količine ukupnih proteina (30 µg) su stavljene u pojedinačne jažice i frakcionisane putem elektroforeze putem 10-15 posto SDS-PAGE. Proteini su elektrotransferirani na poliviniliden difluoridne membrane (EMD Millipore, Bedford, MA, SAD). Nakon inkubacije u otopini za blokiranje koja sadrži 5 posto nemasnog mlijeka u fiziološkom rastvoru Tween/Tris-pufera 30 minuta na sobnoj temperaturi. Mrlje su ispitane sa 1:1,000-razrijeđenim primarnim antitijelima (kat. br. 9662, kaspaza 3; Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, SAD), B0-ćelijski limfom 2 (sc‑ 7382, Bcl‑2), Bcl‑2‑povezan X protein (kat. br. 2772, Bax), fosforilirani (p‑)p53 (sc‑101762), total‑p53 (sc‑6243), ‑aktin (cat. broj 4970; sve; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, SAD), LC‑3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Njemačka), Rab7 (kat. br. 9367, Cell Signaling Technology, Inc. ), p62 (kat. br. 114), p-p38 (kat. br. 9211), total-p38 (kat. br. 9212), p-c-Jun N-terminalna kinaza (kat. br. 9251, p -JNK), total-JNK (kat. br. 9252), p-ekstracelularna signalno regulirana kinaza (kat. br. 9101, p-ERK), total-ERK (kat. br. 9102; sve Cell Signaling Technology, Inc. .) preko noći na 4˚C. Nakon toga uslijedila je inkubacija sa sekundarnim antitijelima konjugiranim s peroksidazom hrena (1:2,000; LF‑SA8001A, kozji anti-mišji IgG‑HRP) ili LF‑SA8002A (kozji anti-zečji IgG‑HRP), Frontier, Seul, Koreja.) 2 h na sobnoj temperaturi. Proteini su zatim vizualizirani izlaganjem Chemi‑Doc-u (Bio‑Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, SAD).

Imunofluorescentno bojenje:

Lizozomski povezani membranski protein 1 (LAMP1) i LC3 su markeri za lizozome i autofagiju. Ćelije (1x105 ćelija/bunarić) pripremljene su na sterilizovanim staklenim pokrovnim stakalcima (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, SAD) u tri primerka. Nakon tretmana TMZ,acteoside, ili TMZ plusacteosidetokom 24 h, ćelije su fiksirane u 4% paraformaldehida 30 min, blokirane sa 5% normalnog pilećeg seruma (S‑3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, Kalifornija, SAD), 0,1% Triton X -100, a zatim inkubirano 1 h radi permeabilizacije i blokiranja nespecifičnih interakcija protein-protein. Ćelije su zatim inkubirane sa anti‑LAMP1 (1:200; sc‑19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) i anti‑LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, USA) preko noći na 4˚ C. Ćelije su zatim dva puta isprane PBS-om i inkubirane dodatna 2 h u mraku sa mješavinom Alexa Fluor 488 i 594 sekundarnih antitijela (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) i 594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, SAD) i ponovo ispran PBS-om. Jezgra su obojena 4,6-diamidino-2-fenilindolom (Sigma; Merck KGaA), a zatim dva puta isprana PBS-om. Zatim su dijapozitivi postavljeni i slike su snimljene pod LSM-700 laserskim konfokalnim mikroskopom.

Slika 1. Hemijska struktura akteozida.

Protočna citometrija.

Ćelije su analizirane na Mitotracker Green i MitoSOX protočnom citometrijom koristeći FACSCanto II protočni citometar, kako je naveo proizvođač (BD Biosciences). Nakon dva ispiranja sa PBS-om, ćelije su fiksirane u 4 posto paraformaldehida 30 min na sobnoj temperaturi i permeabilizirane sa 0,25 posto Triton X-100 u PBS-u 20 minuta. Ćelije su obojene primarnim antitelima preko noći na 4˚C (1:200), a zatim sekundarnim antitelima 1 h na ledu. Nakon dva ispiranja sa PBS, ćelije su fiksirane u 4 posto paraformaldehida i odmah analizirane. Podaci protočne citometrije prikupljeni su korištenjem 10,000 ćelija i analizirani pomoću softvera FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, SAD).

Statistička analiza:

Svi podaci su analizirani pomoću GraphPad Prism 5.0 i predstavljeni su kao srednja vrijednost ± standardna greška srednje vrijednosti. Podaci su analizirani jednosmjernom analizom varijanse s Tukeyjevim post hoc testom višestrukih poređenja za poređenje srednjih vrijednosti među više grupa. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: Anti-apoptosis

3. Rezultati

3.1 Tretman TMZ-om i akteozid supresiraglioblastomproliferaciju i migraciju ćelija.

Kombinirani tretman sa TMZ iacteosideinhibirao vitalnost C6 ćelija. TMZ je smanjio vitalnost ćelija na način ovisan o dozi (slika 2A), dok sam akteozid nije imao značajan efekat ni na jednom nivou lečenja (slika 2B). Nakon inkubacije u mediju kulture koji sadrži TMZ sa ili bez akteozida tokom 24 h, izvršen je MTT test da se uporede citotoksičnosti različitih nivoa tretmana. TMZ je značajno potisnuo vitalnost ćelija, dok akteozid nije značajno potisnuo rast ćelija. Kombinovani tretman sa TMZ i akteozidom značajno je smanjio vitalnost ćelija (slika 2C). Tretman TMZ ili akteozidom koji se primjenjuje sam smanjio je sposobnost zacjeljivanja rana (slika 3A). Udaljenost rane ( posto ) je izmjerena korištenjem rezultata prikazanih na slici 3A sa softverom ImageJ. Udaljenost rane se značajno povećala nakon kombinovanog tretmana (slika 3B), u poređenju sa bilo kojim pojedinačnim tretmanom. Ovi rezultati ukazuju da je istovremeni tretman sa TMZ i akteozidom bio efikasan inhibitorglioblastomproliferaciju i migraciju ćelija.

3.2 Akteozid i TMZ utiču na apoptozu sinergistički u C6 ćelijama.

Rezultati Western blot analize su otkrili da su nivoi cijepane kaspaze-3, Baxa i fosforiliranog p53 viši, a nivoi Bcl-2 niži nakon kombiniranog tretmana s TMZ iacteosidenego nakon tretmana samo TMZ (slika 4A).ActeosidePosredovana mitohondrijska funkcija i stvaranje reaktivnih vrsta kiseonika (ROS), koji su ključni posrednici apoptotske signalizacije, zatim su uočeni u C6 ćelijama tretiranim TMZ. Da bi se potvrdila mitohondrijalna masa, izvršena je analiza sortiranja ćelija aktivirana fluorescencijom pomoću MitoTracker Green. Tretman TMZ iacteosiderezultiralo je većom masom mitohondrija od tretmana samo TMZ (slika 4B). Generacija ROS je bila značajno veća nakon tretmana sa TMZ i akteozidom u odnosu na tretman samo TMZ (slika 4C). Ovi rezultati sugeriraju da su generiranje ROS-a i mitohondrijska funkcija važni u apoptozi induciranoj tretmanom s TMZ plus akteozidom. Tretman TMZ-om i akteozidom izaziva autofagiju u C6 stanicama. Prijavljeno je da TMZ izaziva autofagiju (28,29); stoga je ova studija ispitivala stepen do kojeg je autofagija izazvana tretmanom TMZ plus akteozidima. C6 ćelije su tretirane TMZ sa ili bez akteozida; nakon 24 h, a ćelije su obojene na imunofluorescenciju da bi se otkrili LAMP1 i LC3 kao markeri autofagije. Viši nivoi ekspresije LAMP1 i LC3 primećeni su nakon kombinovanog tretmana (slika 5A). Ekspresija proteina povezana s autofagijom je također ispitana i otkriveno je da TMZ inducira konverziju LC3-I u LC3-II, što je potpis stvaranja autofagosoma. Viša stopa konverzije LC3‑I u LC3‑II uočena je nakon tretmana sa TMZ i akteozidom u odnosu na liječenje samo TMZ. Nivoi ekspresije Rab7 i p62 ukazuju na indukciju autofagije u ćelijama tretiranim TMZ (slika 5B). Ovi nalazi sugeriraju da je zajednički tretman s TMZ-om i akteozidom pojačao autofagični proces uglioblastomćelije.

3.3 Acteoside inducira ekspresiju gena puta MAPK u tretmanu zasnovanom na TMZ.

Prethodne studije su pokazale da TMZ reguliše MAPK put, uključujući p38, JNK i ERK (30). Stoga je ova studija istraživala da liacteosideutiče na ekspresiju MAPK gena vezanu za TMZ. C6 ćelije su tretirane TMZ sa ili bezacteoside. Nakon 24 sata, tretman TMZ-om je rezultirao višim nivoima ekspresije p-p38, p-JNK i p-ERK. Ekspresija TMZ-regulisanih gena bila je značajno veća nakon tretmana TMZ plus akteozidom u odnosu na tretman samo TMZ (slika 6). Ova zapažanja ukazuju na toacteosideutiče na terapijske mehanizme zasnovane na TMZ putem MAPK puta.

Acteoside anti-glioblastom

Diskusija

Rezultati ove studije pokazuju da je kombinovano lečenje TMZ saacteosidenudi terapeutski potencijal zaglioblastomtretman, i pružiti dokaze da hemosenzibilizacija na kombinaciju TMZ iacteosidemože nastati kroz pojačavanje autofagije. Kao mutacijaglioblastomćelije mogu dovesti do inaktivacije apoptotičkog puta, indukcije autofagije pomoću TMZ plusacteosidekotretman može predstavljati alternativnu metodu zaglioblastomterapija. Međutim, da li je autofagija jedini mehanizam zaglioblastomterapija TMZ plusacteosidekotretman ostaje da se razjasni.

Autofagija je esencijalni ćelijski mehanizam za razgradnju proteina i citoplazmatskih organela. Katabolička prednost indukovane autofagije može biti važna u stresnim uslovima; stoga, indukcija autofagije može biti adaptivni mehanizam za prevenciju ćelijske smrti (31-33). Prethodne studije su izvijestile da je smanjena autofagija povezana s rakom (34-36). Osim toga, nekoliko proteina i signalnih puteva povezanih s autofagijom je deregulirano tijekom maligne transformacije, što rezultira smanjenjem autofagne aktivnosti. Visoki nivoi ekspresije LC3 takođe su povezani sa povećanom stopom preživljavanja kod pacijenata saglioblastomsa lošim rezultatima (37,38). Slično tome, rezultati ove studije pokazuju da obnavljanje normalne autofagije može biti latentna strategija zaglioblastomterapije, i može poslužiti kao mehanizam za ograničavanje abnormalnog rasta tumorskih stanica.

U normalnoj autofagiji, određene citoplazmatske komponente se izoluju unutar autofagozoma koji se zatim spajaju sa lizozomom da bi se razgradili i reciklirali (39,40). Kada je autofagija pojačana, stope formiranja autofagosoma premašuju stope lizozomske degradacije; ovo stanje se naziva autofagijski stres. Ako se stres ili abnormalna autofagija nastave, ćelijska smrt može nastupiti zbog iscrpljivanja energije ili promjena u ravnoteži beclin‑1/Bcl‑2. Apoptoza također može biti izazvana hiperaktivnošću autofagosoma, zahvatanjem citoplazmatskih organela uključujući mitohondrije ili endoplazmatski retikulum (41). Pretpostavlja se da opća autofagija može inducirati ćelijsku smrt tijekom normalnog citoplazmatskog i organela prometa u zdravim stanicama. U ovom procesu, ćelija se 'kanibalizira' iznutra, što je ključna karakteristika programirane ćelijske smrti tipa II. Iako su mehanizmi pomoću kojihacteosidepojačava terapeutski učinak na bazi TMZglioblastomterapija ostaje da bude u potpunosti razjašnjena, antikancerogeni efekti prikazani kombinovanim tretmanom koji je ispitan u ovoj studiji mogu biti povezani sa ovim autofagičnim mehanizmima.

Acteosideje feniletanoidni glikozid koji se dobija iz biljaka (22,26). Prethodne studije su izvještavale o različitim biološkim aktivnostima akteozida. Promjene u nivoima ekspresije cijepane kaspaze-3 i LC3 u ovoj studiji pokazuju da liječenje kombinacijom TMZ iacteosideindukovana apoptoza i autofagija u C6 ćelijama (slike 4 i 5). Pokazalo se da kombinovani tretman ima sinergistički učinak naglioblastomćelije. Iako ostali mogući mehanizmi ovih sinergističkih efekata tek treba da budu razjašnjeni, ova studija je identifikovala indukciju autofagije kao ključni tumoricidni mehanizamacteosidehemosenzibilizacija tokom TMZ-baziranogglioblastomterapija.

Acteoside liječi glioblastom

Reference

1. Friedman HS, Kerby T i Calvert H: Temozolomid i liječenje malignog glioma. Clin Cancer Res 6: 2585-2597, 2000.

2. Mrugala MM i Chamberlain MC: Mehanizmi bolesti: Temozolomid iglioblastom-pogledajte u budućnost. Nat Clin Pract Oncol 5: 476‑486, 2008.

3. Agarwala SS i Kirkwood JM: Temozolomid, novo sredstvo za alkilaciju s aktivnošću u centralnom nervnom sistemu, može poboljšati liječenje uznapredovalog metastatskog melanoma. Oncologist 5: 144-151, 2000.

4. Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E i Newton cG: Antitumorski imidazotetrazini. 1. Sinteza i hemija 8-karbamoil-3-(2-kloroetil)imidazo[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrazin-4(3 H)-ona, novog antitumora širokog spektra agent. J Med Chem 27: 196-201, 1984.

5. Fulda S: Tretman baziran na ćelijskoj smrtiglioblastom. Smrt ćelije od 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ i Chen KC: CHAC1-inhibirani put Notch3 uključen je u citotoksičnost glioma izazvanu temozolomidom. Neuropharmacology 116: 300‑314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T i Inoue T: Efikasnost tretmana temozolomidom kod pacijenata sa gliomom visokog stepena. Anticancer Res 29: 911-917, 2009.

8. Van den Bent MJ: Adjuvantni tretman glioma visokog stepena. Ann Oncol 17 (Suppl 10): x186‑x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA i Zheng JS: Mehanizam antitumorskih efekata izazvanih temozolomidom na ćelije glioma. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10. Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S i Naskręt-Barciszewska MZ: Novi epigenetski mehanizam djelovanja temozolomida u ćelijama glioma. PLoS One 10: e0136669, 2015.