Sinergistička efekt pigmentacije protiv kože cistanche feniletanoidni glikozide i glabridina
Jan 14, 2025
Sažetak za istraživanje sinergijskogefekat cistankeFenil etanol strana (PhG) i Glabridin (GLA) protiv pigmentacije kože, masovni omjer PhGS i GLA prikazani su u eksperimentu inhibicije tirosinaze, 1, 1- difenilofenilhidrazin (DPPH) i 2, 2- diazo-bis (3- etil-benzotiazole -6- Slobodna eksperimenta za uklanjanje hipoksikmentacije u VVB-u i inženjeriranje proizvodnja hipopigmentacije UVB-a, a investicija je indeksa inženjeri.
Theupalnimodel of HaCaT cells induced by lipopolysaccharide (LPS) was established, and the anti-inflammatory effect of the drug was evaluated by inhibiting the release of interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor- (TNF- ). Oksidativni napredak HACAT ćelija izazvanih azodiisobuamidin hidrokloridom (AAPH) bio je dodatno uspostavljen, a pojačana aktivnost superoksida (Sodu) i kataloga (CAT) korištena je kao indeksi za procjenu antioksidativnog učinka lijeka. Optimalni omjer mase PhG-a i GLA određen je gornjim tri ćelijskog modela. Rezultati su pokazali da vodena rješenja PhGS / GLA (1:1), PhGS / GLA (5:1), i PhGS / GLA (10:1) pripremljeni sa M (PhG) :m (GLA) {11}} :1, 5:1, 10:1 izložili su dobre inhibicijske i sinergijske efekte na aktivnosti tiroskosinaza i aktivnosti antioksidacije. Stope inhibicije PhGS / GLA (1:1),
Phgs / GLA (5:1) i PhG / GLA (1 {4}} :1) Vodena rješenja sa masovnom koncentracijom od 0,4 g / l bili su 94,37%, odnosno 88,06%. Staklene stope radio-radikala DPPH-a iznosile su 89,44%, 88,72,% i 88,10%, respektivno.
Šagane stope abjekata + slobodnih radikala bile su 1 0 0,13%, 100.0,1%, a 99,87%, respektivno. Kada je masovna koncentracija PhGS / GLA bila 25 ugljika, PhGs / GLA (1:1), PhGS / GLA (5:1), i PhGS / GLA (10:1) Vodena rješenja nisu pokazala citotoksičnost u B16F10 i HACAT ćelije. Inhibicija aktivnosti tirosinaze u PhGS / GLA (1: 1) vodena otopina bila je jača (aktivnost tiroskosinaza 23,80%), a sadržaj melanina (30,90%) značajno je smanjen. Phgs / GLA (1:1) vodena otopina pokazala je najbolji efekat inhibicije na Il -6 i na izdanju i sposobnost poboljšanja aktivnosti Sode i Cat-a. Kombinacija PhGS-a i GLA pokazala je dobre sinergističke performanse, superiorne a jednokrevetne lijekove i višu od PhGS / GLA (5:1) i PhGS / GLA (10:1) vodeni otopini. Kombinacija PhGS-a i GLA odigrala je sinergijsku ulogu u poboljšanju pigmentacije kože inhibiraju proizvodnju melanina i protuupalnih i antioksidativnih efekata.
Ključne riječi cistanche feniletanoidni glikozidi; Glabridin; sinergistički efekti; Pigmentacija protiv kože; Anti-oksidacija; antiinfalmatorni; Lijekovi
Cistanche fenil etanol strana za izbjeljivanje
Potporna služba Wecistance-najvećeg izvoznika cistance u Kini:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp / tel: +86 15292862950
Za više informacija o potencijalnim popustima, molimo ne ustručavajte se obratiti se našem timu za korisnike. Rado će vam pomoći!
Pigmentacija kože je kožna bolest uzrokovana faktorima kao što su ozljede, upale kože i ultraljubičastog zračenja [1-2]. Ovi faktori mogu dovesti do nenormalnog povećanja melanina, koji zauzvrat uzrokuje probleme poput chloasma, pecka i post-upalne hiperpigmentacije (PIH) [3-4], koji utiču na mentalno stanje i kvalitetu života. Trenutno je tretman pigmentacije kože uglavnom fokusiran na inhibiranje tirozinaze, ključnog enzima u formiranju melanina [5-6].
Najnovije istraživanje [7-8] pokazuje da pigmentacija kože ovisi o uskoj vezi između keratinocita i melanocita u epidermu. Jednom kada su slobodni radikali i upalni faktori koje su objavili keratinocitima, dolaze u kontakt sa melanocitima, oni će izazvati povećanje aktivnosti tiroskosinaze, što dovodi do povećanja sadržaja melanina. Oni će takođe ubrzati transport melanina i uzrokovati da se melanin deponent na površini kože. Stoga se liječenje pigmentacije kože zahtijeva različite mjere poput inhibiranja proizvodnje melanina, protuupalnog i protiv oksidacije.
Trenutno, iako tradicionalni preparati za lijekove, poput hidrokinona i hidrokinona, imaju određene efekte u liječenju pigmentacije kože, njihovi načini djelovanja su relativno samohrani i mogu proizvesti neželjene reakcije [9-10]. U poređenju, prirodni lijekovi su prirodni i blagi na snazi i potrošači su sve prepoznati i hvale ih [11-12]. Kombinacija višestrukih biljnih ekstrakata [{13-14] ne može samo inhibirati proizvodnju melanina, već ima i višestruki efekti kao što su protuupalni i antioksidativni efekti, pružajući nove ideje i metode za liječenje pigmentacije kože.
Cistanche Deserticola MA ima jedinstvenu ljekovitu vrijednost i poznata je kao "pustinjski ginseng". Studije su otkrile da karakteristični sastojak feniletanoidni glikozid sadržan u Cistanche ima dobru antioksidantu [15] i protuupalne efekte [16], a također ima određeni efekt tirozinaze [17]. Glicyrrhizin je flavonoidna komponenta u Glycyrrhiza Glabra L., koja ima snažan efekat izbjeljivanja i poznat je kao "izbjeljivanje zlato" [18]. Tradicionalna kineska medicina Liječenje pigmentacije kože obično započinje fbysstramenzing slezena i bubrega, čišćenja topline i detoksikacije i nadopunjavajući QI i krv [19].
Feniletanolični glikozidi Cistanche Deserticola mogu napuniti bubreg Yang i korist suštinu i krv, dok glicyrrhiza Glabra može napuniti slezene i QI, čišćenje toplote i detoksikaciju. Dvojica mogu zajedno raditi na opiru pigmentaciji. Kombinacija likozila cistanke CISTENHENOIDC-a i Glabridina mogu se oduprijeti pigmentacijom kože iz više dimenzija i ciljeva, sinergistički inhibiraju proizvodnju tiroskosinaze i mogu smanjiti slobodne radikale i upalne faktore, smanjiti upalu kože i oksidativni stres i regulirati proizvodnju i transport u melaninu. Međutim, malo je izvještaja u literaturi o sinergijskoj inhibiciji pigmentacije kože feniletanoidnim glikozidima cistanche deserticola i glabridina.
Ovaj rad namjerava istražiti postoji li sinergistički učinak između pšenheniletanoidglikosida CISTENCHE-a i Glabridina (GLA) kroz in vitro biohemijske eksperimente i uspostavljanje 3 modela ćelija, a optimalni omjer složene mase za sinergistički učinak. Očekuje se da će osigurati teorijsku podršku i praktične smjernice za razvoj proizvoda za njegu prirodnih biljnih kože i za pomoć u promociji njege kože da se razvija u prirodnijim, zdravijim i efikasnim smjerom.
Gdje: reakcija je apsorbancija uzorkovanja, L-tirozin rješenja, PBS i tirosinaza; Reakcijska kontrola je apsorbancija uzorkovanja rješenja, L-tirozin rješenja, n i PBS rješenje; Prazan je apsorbancija L-tirozinskog otopina, PBS rješenje i tirosinaza; Prazna kontrola je apsorbancija L-tirozina i PBS rješenja.
'
1.3.2 Određivanje dpph-a slobodne radikalne zaštitne sposobnosti
Prvo, tačno teći {{0}} 0 197 g ({9}} 5 mmol) DPPH-a i rastopio ga u 25} 0 ml bezvodnog etanola da pripremi dpph radno rešenje sa koncentracijom 0. 2 mmol / l. Tada su Phgs i Gla pripremljeni rješenje Etanol i GLA etanol rješenje s masovnim koncentracijama {{15} 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 0,0 mg / ml, na isti način korištenje 50% etanola, a na isti način pripremljen je 50% etanola. Zatim su se rastvor na etanolu i rešenje GLA etanol mešaju ravnomjerno u M (PhGS rješenje): m (GLA rješenje) {{24}, 5:1, 1:1, 1:5, 1:20, 1:40 da bi se dobila 9 vrsta fgenskih rešenja sa različitim masovnim omjerima, koji su snimljeni kao Phgs / Gla (40,11) ~ Phgs / GLA (1:40) Etanolska rešenja. Konačno, dodajte 100 μl različitih uzorka rješenja i 100 μl DPPH radnog rešenja na 96- dobro, izmiješajte se dobro i držite podalje od svetlosti na sobnoj temperaturi 30 min. Izmjerite apsorpciju na 517 Nm sa enzimskim markerom. VC je korišten kao pozitivna kontrola, a svaki eksperiment je ponovljen 3 puta. Izračunajte DPPH besplatnu radikalnu brzinu raskrsnice (%) prema formuli (2).
DPPH Besplatna brzina radikalne širenja /%=(1-11-𝐴3𝐴2) × 100 (2) Gdje: A1 je apsorbancija uzorkovanja i radne otopine DPPH-a; A2 je apsorbancija od 50% etanola po volumenom + DPPH radnom resuluciju; A3 je apsorbancija uzorka rješenja + 50% etanol po volumen.
1.3.3 Određivanje znanosti + slobodne radikalne staklene sposobnosti
Prvo, teži 1 g (1,82 mmol) i rastopio ga u deioniziranoj vodi za pripremu radnog rešenja ABT-a s konačnom koncentracijom 7,4 mmol / l; vaganje 0. 5 g kalijuma je persulfat i rastopio ga u deioniziranoj vodi za pripremu radnog rešenja kalijuma sa završnom koncentracijom 2,6 mmol / l; Pomiješajte radnu otopinu ABT IS i kalijum perspektivno radno rješenje u jednakim količinama i reagirajte na 12 h u mraku za pripremu ABTS + radno rješenje. Zatim, prema metodi u odjeljku 1.3.2.
Konačno, dodajte 40 μl različitih uzorka i radno rješenje + radno rješenje na 96- bušotina, dobro pomiješati, reagirajte na sobnoj temperaturi u tami za 6 min, a izmjerite apsorbanciju otopine na 734 nm pomoću elisa čitača. Izračunajte znakove + besplatne radikalne brzine začuvanosti (%) prema formuli (3).
Gde: A1 je apsorbancija uzorkovanja rešenje + ABTS + radno rešenje; A2 je apsorbancija deionizirane vode + abets + radno rješenje; A3 je apsorbancija uzorka rešenja + deionizirana voda.
1.4 ćelijski eksperiment
1.4.1 Kultura ćelije
Nakon što se oživljavaju i HACAT ćelije, oni se inokuliraju u DMEM visoko glukozu (koji sadrže 10% fetalnog goveđeg seruma i 1% penicilin-streptomicin masovnim frakcijom) i kultivirani u inkubatoru u 37 stepeni, 5% zapremina zapremina CO2 i 70% vlage za 24 sata. Status rasta ćelije se primećuje pod mikroskopom, a medij se zamjenjuje ili subkultura u skladu sa statusom rasta ćelije.
1.4.2 Eksperimentalno grupiranje
B16F10 i Hacat ćelije u logaritamskoj fazi rasta inokuliraju se u 96- dobro ploče s odgovarajućim brojevima ćelija i uzgajaju se za 24 sata kako bi se ćelije omogućile pridržavanje zida. Uzorak rješenja različitih masovnih koncentracija pripremaju se pomoću DMEM kulture. Normal Group, Grupa modela, Grupa niske doze (125 ug / ml), Srednje doze PhGS (250 ug / ml), Grupa visoke doze (500 ug / ml), Grupa niske doze (6,25 ug / ml), Grupa srednje doze, Grupa sa srednje doze, Grupa visoke doze (25 UG / ML) Grupa i PhGS / GLA) (1:1) Grupa, PhGS / GLA (5:1) Grupa i PhGS / GLA (10:1) Postavljena je srednja grupa za kulturu.
U modelu pigmentacije uVB-u izazvani B16F10 dodani su ćelije grupnih grupa sa 30 μl PBS-a (pH =7. 4) i postavljene 3 cm neposredno ispod Iradijatora UVB za 110 S; Eksperimentalna skupina unaprijed je bila sa 100 μl uzorkovanja uzoraka različitih koncentracija masovnih koncentracija za 1 h, a zatim dodana sa 30 μl PBS-a i postavljena 3 cm neposredno ispod Iradijatora UVB-a za 110 S; Normalna grupa uvijek koristi visoko-glukozu DMEM kulturu; Prazna grupa nije bila inokulirana ćelijama, već sa jednakom količinom srednjeg kulture.
U modelu upale na inkluzaciju HACAT-a, grupne model je kultiviran sa PBS rješenje LPS-a na koncentraciji od 20 ugljenih ML za 24 sata; Eksperimentalna grupa unaprijed je bila sa 100 μL uzorkovanja uzoraka različitih masovnih koncentracija za 24 sata, a zatim dodana sa 20 UG / ML LPS rješenja za 24 sata; Normalna grupa uvijek koristi visoko glukozu DMEM medij; Prazna grupa nije inocilirana ćelijama, ali sa jednakom količinom kulture.
U modelu hacat ćelijskog oksidacijskog stresnog stresa, grupu modela bio je kultiviran sa 100 ml AAPH (2,5 mmol) otopine na koncentraciji od 25 mmol / l za 24 sata; Eksperimentalna grupa unaprijed je bila sa 100 μl uzorkovanja uzoraka različitih masovnih koncentracija za 24 sata, a zatim dodana s affim rješenjem na koncentraciji od 25 mmol / l za 24 sata; Normalna grupa uvijek koristi visoko glukozu DMEM medij; Prazna grupa nije inocilirana ćelijama, ali sa jednakom količinom kulture.
Svaka grupa postavljena je sa 3 replicirana bunara i kultivirana u inkubatoru u 37 stepeni, 5% zapremine zapremine CO2 i 70% vlažnosti.
1.4.3 Testa za citotoksičnost
Metoda CCK8 korištena je za određivanje citotoksičnosti. B16F1 0 i HACAT ćelije u fazi logaritamskog rasta probavljene su sa tripsinom od 0,25% za 3 min. Nakon što je probava prekinuta, kulturni medij više puta se puhao kako bi se stalno suspenzija gustoći od 1 × 104 ćelija / ml. Stanice su ravnomjerno inokulirane u pletu {96- dobro, 100 μL po dobroj, a PBS je dodan u bušotine oko ćelija. Nakon što su se stanice pridržavale u zidu dodane različite masovne koncentracije uzorkovanja, 3 replicirana bušotina po grupi i kultivirana u inkubatoru u 37 stepeni, 5% zapremine CO2, a 70% vlaga za 24, 48 i 72 h, a zatim je odbačena rješenje. Sve su grupe dodane sa 100 μl kompletnog srednjeg kulture koji sadrže 10% CCK8 zapremine i inkubirane 60 min. Apsorbancija otopine na 450 nm mjeri se pomoću čitača Elisa. Odbiva za ćeliju (%) izračunata je prema formuli (4).
Gdje: eksperimentalna grupa je apsorbancija bunara koji sadrže ćelije i otopinu uzoraka pod ozračivanjem UVB-a; Normalna grupa je apsorbancija bunara koji sadrže ćelije i otopinu uzoraka bez UVB zračenja; Prazna grupa je apsorbancija bunara koji sadrže srednje kulture, ali nema ćelija.
1.4.5 Određivanje sadržaja melanina
Sadržaj melanina određen je metodom na NaOH liza. Nakon liječenja ćelija za 72 h prema metodi u odjeljku 1.4.2, supernatant je odbačen i isprao se dva puta sa PBS-om, a 100 μl naohove vodene otopine koji sadrži 10% DMSO po volumenu (koncentracija 1 mol / l / l). Nakon postavljanja u rernu od 90 stepeni za 1 h, apsorbancija otopine na 490 NM utvrđena je enzimskom markerom. Eksperiment je ponovljen 3 puta. Sadržaj melanina (%) izračunat je prema formuli (5).
1.5 Određivanje upalnog faktorskog sadržaja i oksidativnog indeksa stresa
Nakon liječenja ćelija za 48 h prema metodi u odjeljku 1.4.2, HACAT ćelije u svakoj grupi sakupljene su sa cifrom ćelije, centrifugiranim, a supernatant je prikupljen. Sadržaj Il {{-6 i TNF-a određen je prema uputama ELISA kompleta.
Nakon tretiranja ćelija za 48 h prema metodi u odjeljku 1.4.2, HACAT ćelije u svakoj grupi sakupljene su se sa ćelijama, a ćelije su probijene ponovljenim zamrzavanjem i otapanjem. Stanice su bile centrifugirane na 12000 R / min u 4 stepena 10 min, a supernatant je prikupljen. Sode aktivnosti i sadržaj mačaka određeni su prema uputama ELISA kompleta.
1.6 Određivanje kombiniranog indeksa
Kombinirani metod indeksa (CI) [20] korišten je za utvrđivanje da li su se nevci i GLA u različitim masovnim omjerima imali sinergistički učinak u inhibiranju aktivnosti tirozinaze i antioksidacije. Kombinovani indeks izračunat je prema formuli (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 označava antagonistički efekat, CI =1 označava aditivni efekat i CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Analiza podataka
Svi su podaci izraženi kao "aritmetička srednja vrijednost ± standardno odstupanje (𝑥̅ ± 𝑠)". Grafikon Prizma 9.5. 0 Softver je korišten za statističku analizu. Jednosmjerna analiza varijance korištena je za usporedbu među više grupa. Str<0.05 was considered statistically significant.
