Studija o terapeutskim efektima i mehanizmima monomera tradicionalne kineske medicine na modelu hipogonadizma kasnog početka kod pacova

 

Abstract

Cilj
Procijeniti terapijske efekte i mehanizme tri monomera tradicionalne kineske medicine (TCM)icariin, verbascoside, iginsenoside Rg1-onkasni hipogonadizam (LOH)u modelu štakora, te istražiti njihov potencijal kaoprirodne intervencije za smanjenje testosterona usljed starenjakod muškaraca srednjih godina.

Metode
Model kasnog početka hipogonadizma (LOH) uspostavljen je kod starijih muškaracaSprague-Dawley pacoviputem intraperitonealne injekcijeciklofosfamid, simulirajući nedostatak androgena. Tri TCM monomera-icariin, verbascoside, iginsenoside Rg1-primjenjivane oralno 60 dana.

Na kraju tretmana mjerena je tjelesna težina i težina reproduktivnih organa (testisi, epididimis, sjemene mjehuriće itd.).Histopatološke promjeneu tkivu testisa procijenjeni su pomoćubojenje hematoksilin-eozinom (H&E).. Nivoi u serumuFSH, LH, itestosterontestirani su putemELISA. Izrazandrogeni receptor (AR)proteina i mRNA procijenjeni su korištenjemWestern blotikvantitativni PCR u realnom vremenu (qRT-PCR).

 

 

 

Rezultati

Ginsenoside Rg1pokazao najznačajnije poboljšanje utjelesne težineitežina reproduktivnog organa(P < 0,01).

Icariinznačajno povećao težinutestisi, epididimis, isjemenih mjehurića(P < 0,01).

Verbascosideumjereno poboljšana težina sjemenih vezikula (P < 0,05).

Sva tri TCM monomera efikasnoobrnuta degeneracija testisakod LOH štakora, obnavljajući strukturu sjemenih tubula i povećavajući brojspermatogene ćelijeizrela sperma.

Sve grupe monomera pokazale su sposobnost daniži nivoi FSH i LH u serumudokpodizanje serumskog testosterona. Theicariin grouppokazala najznačajnija endokrina poboljšanja (P < 0,01).

Nivoi ekspresijeandrogeni receptor (AR)u proteinima i mRNA su značajno povećane u svim tretiranim grupama. Efekat odicariinbioizraženiji od testosteron propionata, što ukazuje na asnažan regulatorni efekat na AR signalizaciju.

 

Zaključak

Ova studija to sugeriraginsenoside Rg1je najefikasniji u poboljšanjutežina tijela i organakod LOH pacova, dokicariinpokazuje najjači efekat upojačavanje proizvodnje testosteronaipoboljšanje AR ekspresije. Sva tri monomera-icariin, verbascoside, iginsenoside Rg1-demonstriranozaštitni efekti protiv degeneracije testisaipodržavaju mušku reproduktivnu endokrinu funkciju, nudeći obećavajuće prirodne alternative za upravljanjehipogonadizam povezan sa godinama.

 

Ključne riječi

Hipogonadizam sa kasnim početkom (LOH); Icariin; Verbascoside; Ginsenoside Rg1; tradicionalna kineska medicina; Prirodni pojačivač testosterona; Sindrom starenja muškaraca; ekspresija androgenih receptora; Biljna terapija za muško zdravlje

Kliknite na sliku da saznate više o TCM biljci za seksualno zdravlje

 

 

Pozadina

Hipogonadizam sa kasnim početkom (LOH)kod sredovečnih i starijih muškaraca usko je povezan saopadanje nivoa androgena vezano za starost, posebno testosterona. Epidemiološka studija zasnovana na populaciji iz 2021. sprovedena u šest reprezentativnih provincija u Kini, uključujući6.296 muškaraca starosti 40–79 godina, otkrili su sljedeće stope prevalencije LOH:

3.2%kod muškaraca u 50-im godinama

11.2%u svojim 60-im godinama

24.0%u svojim 70-im [1]

LOH karakterišesmanjen testosteron u serumuzajedno sa sazvežđemsimptomi nedostatka androgenakao što su:

Nizak libido

Erektilna disfunkcija

Depresija i razdražljivost

Kognitivni pad i gubitak pamćenja

Ovi simptomi moguznačajno narušavaju fizičko i psihičko blagostanje, kao ikvaliteta života [2–3].

trenutno,nadomjesna terapija testosteronom (TRT)je glavni tretman za LOH i može privremeno ublažiti simptome. Međutim, zabrinutost okokardiovaskularni rizik, zdravlje prostate, idugoročna sigurnostostaju [4]. Stoga raste interesovanje za istraživanjeprirodne, sigurnije alternative, posebno izTradicionalna kineska medicina (TCM).

Ova studija ima za cilj da proceniterapijski efekti i mehanizmiod tri TCM monomera-icariin, verbascoside, iginsenoside Rg1-koristeći apacovski model LOH.

 

1. Materijali i metode

1.1 Eksperimentalne životinje

Šezdeset15-mjesečni mužjaci pacova Sprague-Dawley (SD).(700–800 g) dobijeni su u januaru 2022. godine od Eksperimentalnog centra za životinje Kineskog Univerziteta Three Gorges. Brojevi licenci:

Potvrda o životinjama: Ne. 42010200007997

Dozvola za proizvodnju: SCXK (E) 2022-0012

Pacovi su smešteni u kontrolisanom okruženju (temperatura: 19-23 stepena, relativna vlažnost: 55%-65%), sa prirodnim ciklusom svetlosti i mraka i slobodnim pristupom hrani i vodi. Poslije1 sedmica aklimatizacije, počeli su eksperimenti.

1.2 Reagensi i instrumenti

Ciklofosfamid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenoside Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR antitelo(Santa Kruz, SAD)

-aktinsko antitelo(Sigma, SAD)

H&E kompleti za bojenje(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA setovi za serumski FSH, LH, testosteron(Shanghai Meilian)

qRT-PCR reagensi (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrumenti: čitač termo mikroploče, optički mikroskop Olympus, sistem za snimanje LI-COR Odyssey, ABI qRT-PCR mašina

 

1.3 Grupiranje životinja i indukcija LOH modela

Pacovi su nasumično raspoređeni6 grupa (n=10 po grupi):

Kontrolna grupa:

Intraperitonealna (ip) injekcija 0,9% fiziološkog rastvora tokom 5 dana

Oralni fiziološki rastvor (1 mL/100 g) tokom 60 dana

Grupa modela:

ip ciklofosfamid 20 mg/kg/dan tokom 5 dana

Nakon toga oralna fiziološka otopina 60 dana

Testosteron propionat (pozitivna kontrola):

ip ciklofosfamid (isto kao gore)

Subkutana injekcija testosteron propionata 5 mg/kg/dan tokom 7 dana

Icariin group:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralni ikariin 200 mg/kg/dan tokom 60 dana

Verbascoside group:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralni verbaskozid 200 mg/kg/dan tokom 60 dana

Ginsenoside Rg1 grupa:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralni ginsenozid Rg1 200 mg/kg/dan tokom 60 dana

Svi tretmani su davani između8:00–11:30 AM. Izvršene su procjene24 sata nakon konačne doze.

 

1.4 Tjelesna težina i indeks reproduktivnih organa

Nakon vaganja, pacovi su eutanazirani dislokacijom grlića materice. Thetestisa, epididimisa i sjemenih mjehurićasu secirane i izvagane.

Jedantestisa svakog štakoraje fiksiran4% paraformaldehida72 sata, dehidrirano klasificiranim alkoholom, umotano u parafin, izrezano (5 μm) i obojenoHematoksilin-eozin (H&E). Morfološke promjene su uočene pod svjetlosnom mikroskopijom.

 

1.5. Testovi hormona u serumu

Pacovi su anestezirani sa3% pentobarbital natrijum, a krv je prikupljena putempunkcija srca. Serum je odvojencentrifugiranje na 3000 o/min 10 min na 4 stepena. ELISA setovi su korišteni za mjerenjeFSH, LH i testosteronnivoa prema protokolima proizvođača.

 

1.6 AR ekspresija proteina (Western blot)

Tkivo testisa je lizirano i izmjerena koncentracija proteina. Jednake količine proteina su razdvojene pomoću10% SDS-PAGE, prenesene na PVDF membrane i inkubirane s primarnim antitijelima protivARi-aktin (1:1000)preko noći. Sekundarna inkubacija antitijela je praćena hemiluminiscentnom detekcijom.ImageJje korišten za analizu.

 

1.7 AR ekspresija mRNA (qRT-PCR)

Ukupna RNK je ekstrahirana iz tkiva testisa. cDNA je sintetizirana putem reverzne transkripcije. qRT-PCR je izveden SYBR Green metodom.

AR prajmeri:

Napadač: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Revers: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTTT-3′

-aktinski prajmeri (interna kontrola):

Naprijed: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Revers: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Termički ciklus: 95 stepeni u trajanju od 15 minuta (preddenaturacija), nakon čega sledi 40 ciklusa od 95 stepeni u trajanju od 15 sekundi i 60 stepeni u trajanju od 1 min. Podaci su analizirani korištenjem2^-ΔΔCtmetoda.

 

1.8 Statistička analiza

Podaci su analizirani korišćenjemSPSS 26.0.

Rezultati su predstavljeni kaosrednja vrijednost ± standardna devijacija (x̄ ± s)

t-testje korišten za poređenje po dvije grupe

Jednosmjerna ANOVAje korišten za višestruka poređenja grupa

P < 0,05smatralo se statistički značajnom