Studija o utjecaju imuniteta kod miševa

Za više informacija molimo kontaktirajtedavid.wan@wecistanche.com

Dva od trideset muškaracaDBA/2NCrl(D2N)miševi korišteni kao kontrolni soj u analizi pozadinskih podatakaDBA/2N-MDXmiševa, sa abnormalnim nalazima koji ukazuju na infekciju. Slučaj 1: 4-sedmično star mužjak D2N miša pokazao je leziju bijelog plaka u lijevom bubregu (bez kliničkih simptoma) i urađen je patološki pregled bubrega. U tubulima i intersticijumu lijevog bubrega uočena je inflamatorna ćelijska infiltracija, uglavnom neutrofila, a iz lijevog segmenta bubrega otkriven je Staphylococcus aureus (S.aureus). Stoga je ova lezija na lijevom bubregu dijagnosticirana kao gnojnatubulointersticijskinefritis uzrokovan infekcijom S. aureusom. Slučaj 2: Lijevi tortikolis sa gubitkom težine otkriven je kod 9-sedmično starog, mužjaka D2N miša. Histološkom procjenom utvrđena je eksudativna upala oko ždrijelnog otvora eustahijeve cijevi, te gnojna upala srednjeg uha i lijevog unutrašnjeg uha s formiranjem apscesa i nakupina u obliku gram-pozitivnih mikrokolonija. S. aureus je identifikovan iz briseva kultura oba spoljašnja ušna kanala. Kao rezultat toga, ovaj slučaj tortikolisa je uzrokovan S. aureus-suppurativnim otitisom srednjeg uha i internetom. S. aureus je dobro poznat kao oportunistički patogen s potencijalom da često uzrokuje gnojne bolesti kod imunokompetentnih laboratorijskih životinja. Međutim, prema našim saznanjima, ovaj slučaj infekcije S. aureusom sa tortikolisom kod D2N miša nije prijavljen.

Kliknite ovdje da saznate više o Cistancheu

Izolati Staphylococcus aureus (MRSA) otporni na meticilin pojavili su se u laboratorijskom mišu u Centru za nauku o laboratorijskim životinjama Medicinskog fakulteta nacionalne odbrane 2018.MRSAizolati su nakon toga pronađeni od miševa iu drugim sobama za miševe. Na ovim MRSA izolatima izvršena je molekularna tipizacija kao što je tipizacija multi-lokus sekvence (MLST), tipizacija proteina A(spa) Staphylococcus aureus, tipizacija SCCmec i tipizacija koagulaze za određivanje njihovih genotipova. Svi izolati su otkrili identične genotipove (ST1, spa t1784, SCCmec tip IV i koagulaza tip VII), što sugerira da su izolati bili identični klonovi. Prije pojave MRSA 2018. godine u ovom objektu nije izolovan nijedan izolat sa ovakvim genotipovima, pretpostavljalo se da je MRSA klon doveden u objekat preko ljudi ili laboratorijskih životinja. STl1 je prva MRSA stečena u zajednici koja je oporavljena od djece u Sjedinjenim Državama, međutim, ST1 se trenutno nalazi kod ljudi i životinja širom svijeta. U Japanu, ST1 i SCCmec tip IV sojevi su izolirani od ljudi i mačaka, što sugerira da se ST1 prenosi između ljudi i životinja. MRSA soj sa ovim genotipovima, ali i sa spa tl784, pronađen je kod ljudi. Trenutno, razlika između MRSA stečene u bolnici, MRSA stečene u zajednici i MRSA povezane sa stokom je nejasnija. Ovi rezultati sugeriraju da miševi mogu djelovati kao rezervoari MRSA.

U nedavnoj imunoterapiji raka, aktivnost molekula kao što je PD-1 je inhibirana kako bi se povećala aktivnost imunih ćelija protiv raka. Uprkos visokom terapijskom učinku, postoje slučajevi u kojima se u imunoterapiji raka razvija autoimuna bolest. Ovdje smo uspostavili sistem koji može razgraditi PD-1 na vremenski specifičan način u kultivisanim ćelijama i miševima koristećiSMASh degron sistem. PD-1-Fuzioni protein SMASh u Jurkat ćelijama i CD3 plus splenocitima smanjen je za 1 dan nakon primjene Asunaprevira(ASV) ili Grazoprevira(GRV) koji su inhibitori NS3/4A proteaze. Rast MC-38 ćelija adenokarcinoma inokuliranih kod PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) miševa sa ASV je potisnut u poređenju sa divljim tipom (WT) i netretiranim KI miševima. Štaviše, WT miševi presađeni sa KI ćelijama koštane srži nakon zračenja smrtonosnim zračenjem mogli su odbiti MC-38 ćelije sa GRV. KI miševi su izgledali zdravi i nisu pokazivali znakove autoimune bolesti. Predlažemo da se očekuje da će upotreba degron sistema u živim organizmima unaprijediti ne samo razne biološke studije već i liječenje bolesti.

Progesteron (P4) se luči iz placente za održavanje trudnoće i funkcionira kao imunološki regulator. Glukokortikoid je drugiimunoregulatornosteroid za regulaciju upale. U ovoj studiji, mononuklearne ćelije ljudske periferne krvi (PBMC) su transplantirane u NOG miševe kako bi se izazvala bolest transplantata protiv domaćina (GVHD) i korištene za poređenje između efekata P4 i kortizola (COR). PBMC su stimulirani u prisustvu različitih koncentracija P4 ili COR, a ćelije su analizirane protočnom citometrijom (FCM). Alikvoti odPBMCstransplantirane u NOG miševe, a P4 ili COR je ubrizgan miševima dva puta sedmično. Nakon 28 dana urađene su FCM i imunohistohemijske analize. Kao rezultat toga, visoka koncentracija P4 inhibirala je aktivaciju T stanica in vitro, dok se inhibicija nije nastavila nakon uklanjanja. Supresija aktivacije T ćelija bila je manja u tretmanu COR u poređenju sa P4, a iscrpljenost T ćelija je bila izraženija. P{4}}injektirani miševi su nosili više splenocita, posebno CD8 T ćelija, u poređenju sa kontrolnim miševima. Međutim, niža ekspresija CD25, manja infiltracija ljudskih T ćelija u pluća i jetra, i manjeGVHDuočeni su simptomi. S druge strane, broj splenocita, posebno T ćelija, kod miševa kojima je ubrizgan COR bio je značajno manji, a aktiviranih/iscrpljenih ćelija bilo je u izobilju. Ovi rezultati sugeriraju da P4 preferira održavanje T ćelija u odnosu na COR in vitro.

Helicobacter hepaticus i Helicobacter bills poznati su kao patogeni koji uzrokuju hepatitis i kolitis kod miševa. Postojanje nekoliko pozitivnih slučajeva još uvijek se godišnje potvrđuje u objektima za eksperimentalne životinje u Japanu. Najbolje je koristiti cekalni sadržaj ili svježi izmet kao uzorak za PCR testiranje na H. hepaticus i H. bilis.

Nedavno su različiti proizvođači proizvodili reagense za transport i skladištenje DNK i RNK. Očekuje se da će ovi reagensi biti riješeni problemi u transportu uzoraka koji se koriste za PCR testove. Stoga je u ovoj studiji korisnost reagensa za skladištenje nukleinske kiseline ispitana izvođenjem PCR testa Helicobacter koristeći sadržaj cekuma koji je konzerviran uz pomoć reagensa za očuvanje nukleinske kiseline. Kao rezultat toga, uzorci pohranjeni 7 dana korištenjem otopine za konzerviranje mogli su otkriti Helicobacter na istom nivou kao i svježi uzorak. Iz gore navedenog, sugerirano je da je u PCR testu Helicobacter, čak i ako transport traje danima, moguće je provesti test sa visokom preciznošću transportom uzorka uronjenog u reagens za skladištenje nukleinske kiseline hlađenim letom.

Prethodno smo razvili mutantne sojeve E.coli sa značajno poboljšanim prianjanjem na in vitro čvrste površine modifikacijom gena koji reaguju na gladovanje nutrijentima. Da bismo procijenili interakciju između ovih sojeva E. coli (AEE) i in vivo crijevnog okoliša, procijenili smo njihovu sposobnost kolonizacije u crijevnom traktu inokulacijom miševa.

Prije eksperimenta evaluacije, transformirali smo AEE plazmidom koji eksprimira luciferazu za in vivo vizualizaciju. kao što su oralno inokulirani miševima natašte i sakupljeni izmet svakih nekoliko dana. Broj uživoAEEsprocijenjen je mjerenjem CFU iz sakupljenog fecesa.

Kao rezultat toga, u poređenju sa kontrolnom vrstom, AEE su bili u većoj količini u izmetu duže od jedne sedmice, što ukazuje na pojačanu kolonizaciju u crijevnom traktu. Posmatranjem lokalizacije luminescencije luciferaze neinvazivnim snimanjem pomoću IVIS-a, također je otkriveno da AEE imaju tendenciju kolonizacije u cekumu i debelom crijevu.

[Cilj] Trenutno, [Pasteurella]pneumotropicaje reklasifikovan u novi rod Rodentibacter. Od njih, R.pneumotropicus i R. Healy su glavne mete za mikrobiološko praćenje glodara. Izolirali smo određeni broj Rodentibacter sp. koje se ne mogu identificirati kao vrste glodara. U ovoj studiji istražujemo karakteristike Rodentibacter sp. izolirati, fokusirajući se na virulenciju bakterija. [Metode] Rodentibacter sp. koji je izolovan iz traheje štakora korišteni su za istraživanje. Nacrt sekvenciranja genoma je izveden na sekvenceru sljedeće generacije, a zatim su predviđeni geni povezani s virulencijom. U eksperimentima na životinjama, Rag2 miševi su korišteni za Rodentibacter sp. infekcije.|Rezultati| Nacrtom sekvenciranja genoma, jedinstveni gen koji kodira RTX toksin je identificiran u Rodentibacter sp. Proteinski slijed RTX toksina bio je homologniji onima koje proizvode Enterobacteriaceae nego Pasteurellaceae. U eksperimentu na životinjama, gotovo svim zaraženim miševima Rag 2 potvrđena je smrtonosna upala pluća ili septikemija. Iako se izolat nije mogao identificirati kao R. pneumotropicus i R. heylii, ova blisko srodna vrsta može biti smrtonosna za imunokompromitovane životinje u prisustvu faktora virulencije kao što je RTX toksin.

U NBRP Basic Technology Development Programu (2018-2019), sekvencirali smo genome mišjih oportunističkih patogenih bakterija i izvršiliRNAseqprotozoa kod miševa, kako bi se razvili PCR testovi za ove organizme. Ove rezultate smo koristili za analizu Rodentibacter spp. i protozoa kod pacova u saradnji sa Univerzitetom Kjoto (NBRP Rat). Ovdje izvještavamo o rezultatima testova na uzorcima pacova. [Metode] Sekvence gena 16S rRNA od oko 1,5 kbp očitane su PCR-om za šest izolata pacova Rodentibacter spp., a nacrt genomske sekvence jednog izolata (#25) je određen korištenjem Illumina HiSeq 2500. PCR sadržaja cekalnog crijeva štakora je izvedeno na osnovu RNAseq rezultata mišjih protozoa. [Rezultati] Sekvencije gena 16S rRNA svih izolata bile su identične i identifikovane su kao Rodentibacter Ratti OTU analizom. Ponovno sekvenciranje izolata #25 također je otkrilo da je ovaj soj R. Ratti. PCR za mišje protozoe dao je pozitivne rezultate za pacovsku amebu. Nisu dobijeni pozitivni rezultati za TrichomonasPCRna uzorcima pacova. [Diskusija] Izolati pacova Rodentibacter spp. Svi ispitani u ovom izvještaju su R. Ratti. Važno je biti svjestan prisustva R. Ratti-ja prilikom izvođenja testova na rodentibacter kod pacova. Neki uzorci fekalija pacova su bili pozitivni na PCR mišje amebe. Ovo je prvi korak u razvoju PCR za detekciju protozoa kod pacova.

Rodentibacter organizmi 'Pasteurella pneumotropica' su oportunistička patogena bakterija koja uzrokuje respiratorne bolesti kod miševa i pacova. Ranije su bili klasifikovani u rod Pasteurella, a nekoliko sojeva je uslovno predloženo kao biotipovi. 2017. godine kolektivno su reorganizirani u rod Rodentibacter. Sojevi MaM i MaR izolovani su od miševa, odnosno pacova, oko 1980-ih. U ovoj studiji odredili smo sekvence genoma oba soja i uporedili ih sa onima iz roda Rodentibacter, materijali i metodeIMaM i MaR sojevi su dobijeni od Nacionalnog instituta za infektivne bolesti (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Oba soja su uzgajana tečnom kulturom da bi se izdvojila genomska DNK, a genomske sekvence su određene korištenjem Illumina Hiseq 2500 i PacBio Sequel.[Rezultati]Na osnovu sekvence gena 16S rRNA, soj MaM je identificiran kao R.pneumotropicus i soj MaR soj MaR. kao R. Ratti. Nadalje, određena je kompletna sekvenca genoma (2,213,961 bp) soja MaR (broj rRNA operona je bio 6, a broj gena je procijenjen na 2063). [Diskusija] Sojevi MaM i MaR korišteni su kao standardi za identifikaciju 'Pasteurella pneumotropica' u Japanu. Iz ove analize odredili smo vrstu oba soja na sljedeći način: MaM soj je R.pneumotropicus i MaR soj R.ratti. Zanimljivo je da ovi rezultati pokazuju da R. Ratti može biti izolovan od pacova u Japanu.

Clostridium pili for me (CP) je osjetljiv na infektivnost kod raznih laboratorijskih životinja uključujući pacove i miševe i pokazuje asimptomatsku infekciju osim kod imunokompromitovanih životinja. Smatra se glavnom diferencijalnom dijagnozom održavanja objekata za životinje i dobro je poznato da utiče na eksperimentalne podatke iz studija na životinjama. Serodijagnostika (ELISA, IFA) i PCR se obično koriste za dijagnozu CP jer je izolacija u vještačkom hranljivom mediju teška za CP. Međutim, postojanje nespecifičnog antitijela koje ukazuje na unakrsnu reaktivnost sa CP pomoću serodijagnoze je prijavljeno i često se prepoznaje u sličnom slučaju u našim ustanovama. Štaviše, PCR metoda ima ograničenja kao pouzdana dijagnostička metoda uz periodično praćenje, jer se CP ne može detektirati u fecesu nakon povećanja titra antitijela. Nedavno smo ispitali drugačiji pristup, čuvanje izmeta životinja svakog mjeseca. Usvojili smo PCR test za CP bez uticaja antitela kao pouzdaniju dijagnostiku korišćenjem kontinuirano očuvanog fecesa. U ovom izvještaju prikazujemo nedavni primjer. (nespecifično antitelo) da dovede do inspekcije toka koji se razvija u našoj kompaniji.