Studija o estrogenskim efektima ehinakozida i akteozida iz Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Univerzitet tradicionalne kineske medicine Tianjin, Tianjin 300193, Kina
Abstract: U ovoj studiji, estrogenski efektiechinacosideiacteosideHerba Cistanche su istraživani. Za otkrivanje estrogenih efekata korišćen je zakon o plazmidu reportera o lucif eraseechinacosideiacteoside. Eksperimenti vezanja za konkurenciju estrogenskih receptora korišćeni su da bi se otkrio njihov kompetitivni efekat sa estrogenom. Rezultati su to pokazaliechinacosideiacteosidemože povećati aktivnost ERE. Kadaechinacosideiliacteosidese dodaje u djelovanje estrogena, aktivnost reporterskog gena vođena ERE može se stimulirati kao agonist estrogena. Dakle, zaključeno je daechinacosideiacteosideimao je aktivnost fitoestrogena kroz stimulaciju ERE-povećanja aktivnosti reporterskih gena.Echinacosideiacteosidebili potencijalni SERM-ovi.
Ključne riječi: ehinakozid; acteoside; fitoestrogeni;
Herba Cistanche je biljka iz roda Cistanche (Oroban- chaceae) iz roda Cistanche (Cistanche). To je suva mesnata stabljika sa ljuskavim listovima. Ima funkciju hranjenja janga bubrega, hranjive esencije i krvi, te vlaženja crijeva. Koristi se za nedostatak janga bubrega, nedostatak esencije i krvi, impotenciju i neplodnost, bolove u struku i koljenima, slabost mišića i kostiju, suva crijeva i zatvor ¨. 2J. Trenutno, glavne hemijske komponente izolovane i identifikovane iz Cistanchea su fenil glikozidi, iridoidi, lignani, flavonoidi, polisaharidi, oligosaharidi, galaktitol, isparljive komponente, alkaloidi, itd. Među njima, glikozidi fenetil alkohola su glavni aktivni sastojci u Cistancheu. i takođe su glavni indikatori detekcije za kontrolu kvaliteta Cistanchea, a predstavljeni su saehinakozid i verbaskozid. Moderne farmakološke studije su pokazale da Cistanche ima funkcije imunološke regulacije, antioksidacije, protiv starenja, protiv umora, neuroprotekcije i zaštite jetre. Neke farmakološke studije također pokazuju da Cistanche može promovirati regeneraciju kostiju-l"J, inhibirati stvaranje osteoporoze i fitoestrogena kod žena u postmenopauzi". U ovom eksperimentu odabrali smo ehinakozid i verbaskozid, koji su glavni indikatori kontrole kvaliteta u Cistancheu, i testirali estrogenskiefekti ehinakozidai verbaskozid metodom reporter plazmida luciferaze i eksperimentom kompetitivnog vezivanja receptora estrogena. Istražite mehanizam ehinakozida i verbaskozida estrogena
1 Materijal i metode
1.1 Materijal Hela ćelije (ćelije raka grlića materice kod ljudi), kupljene od Šangajskog instituta za ćelijsku biologiju;echinacosideje odvojen i prečišćen od Cistanche deserticola u našoj laboratoriji i testiran pomoću HPLC-ELSD. TheechinacosideKao kontrola korištena je referentna supstanca (Kineski nacionalni institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, serijski broj: 111670), a izmjerena čistoća iznosila je 95,1 posto. Theacteosideje odvojen i prečišćen iz pustinje Cistanche u našoj laboratoriji i dobijen je HPLC-om. ELSD test, sa referentnom supstancom Verbascum glikozida (Kineski institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, broj serije: 111530) kao kontrola, izmjerena čistoća je bila 96,4 posto; plazmidi ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (ekstrahovani u našoj laboratoriji); Estradiol (E), kompanija Sigma; Fetalni goveđi serum (FBS), PAA Company; Fetalni goveđi serum tretiran aktivnim ugljem (CS-FBS), PAA Company; Fenol Red-Free DMEM, Sigma Company; Dimethyl Sulfoxide (DMSO) ), Amresco Company; LB medium, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X Buffer, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Komplet za ekstrakciju plazmida, TIANGEN Company; Komplet za detekciju reporterskih gena Luciferaze je proizvod kompanije Promega.
1.2 Ćelijska kultura Hela ćelije su uzgajane u medijumu za kulturu DMEM koji je sadržavao 10 posto fetalnog goveđeg seruma. Najmanje jedna generacija prije eksperimenta zamijenjena je medijumom za kulturu DMEM koji je sadržavao 1 posto fetalnog goveđeg seruma tretiranog s aktivnim ugljem.
1.3 Transfekcija i određivanje aktivnosti luciferaze Hella ćelije su posađene u 24-ploču sa gustinom od 70 posto do 80 posto. Nakon što se ćelije zalijepe za zid i gustina stanica dosegne 90 posto, slijedite upute u lipo. Feetamine2000 upute za transfekcijski reagens transficiraju ERa, ER[3 ekspresijske plazmide i ERE, Renila reporter plazmide, promijenite podlogu nakon 8 sati i dodajte test lijekove različitih koncentracija. Nakon inkubacije preko noći, koristite multifunkcionalni čitač ploča da otkrijete odgovor estrogena. Aktivnost luciferaze komponente ERE, izračunajte relativni uticaj lijekova na aktivnost luciferaze.
1.4 Obrada podataka i statistička analiza
Koristeći SPSS18.0 statistički softver, podaci su izraženi kao srednja vrijednost±standardna devijacija (x±S). Jednosmjerna analiza varijanse (ANOVA) i Dunnettov t-test višestrukog poređenja korišteni su za analizu podataka između grupa. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Acteoside
2 Eksperimentalni rezultati
2.1 Utjecaj verbaskozida na aktivnost elementa estrogenskog odgovora ERE luciferaze Rezultati pokazuju da u poređenju sa kontrolnom grupom kada je posredovan ERa i ER[3, E (10 nmol) može značajno povećati nivo estrogenskog odgovora ERE luciferaze. Aktivnost verbaskozida može regulišu aktivnost elementa estrogenskog odgovora ERE luciferaze na 10, 100, 1, 10 i 50 txmol. Kada koncentracija dostigne 50 Imol, pojačana regulacija aktivnosti luciferaze ERE je ekvivalentna onoj kod estradiola. Zavisna je od doze, ali selektivnost za estrogenske receptore ERa i EP~ nije očigledna (slika 2).
2 Efekti različitih koncentracijaacteosidena aktivnost luciferaze ERE
Napomena: U poređenju sa kontrolnom grupom, P
2.2 Efekat odechinacosidena aktivnost elementa estrogenskog odgovora ERE luciferaze Rezultati pokazuju da u poređenju sa kontrolnom grupom kada je posredovan ERa i ER[3, E(10 nmol) može značajno povećati nivo estrogenskog odgovora elementa ERE fluorescencije ehinakozid može pojačati regulaciju estrogenskog odgovora aktivnost elementa ERE luciferaze na 10, 100, 1, 10 i 50 Ixmol. Kada koncentracija dostigne 50 Ixmol, pojačana regulacija aktivnosti luciferaze ERE je nešto niža od estrogena. Diol je također zavisan od mjerača, ali ima malu razliku u selektivnosti za estrogenske receptore ERa i E (slika 3).
2.3 Kompetitivni efekat vezivanja Verbascum glikozida i estradiola na receptore estrogena Rezultati pokazuju da se Verbascum glikozidi mogu kompetitivno vezati za estrogenske receptore sa estradiolom i antagonizirati aktivnost estradiola na elementu odgovora na estrogen ERE luciferazu. Efekat up-regulacije. U poređenju sa E (10nmo1) grupom, verbaskozidi mogu smanjiti aktivnost luciferaze estradiola na element odgovora na estrogen ERE u različitim stepenima na 1, 10 i 50p, mol, a verbaskozidi pokazuju zavisnost od doze. , Kada koncentracija dostigne 50 Ixmol, antagonistički efekat na estradiol je najočigledniji (Slika 4).
2.4 Konkurentski obavezujući efekat odechinacosidei estradiola na estrogenskim receptorima. Rezultati to pokazujuechinacosidetakođer se može kompetitivno vezati za estrogenske receptore sa estradiolom i antagonizirati odgovor estradiola na estrogen. Up-regulacija aktivnosti luciferaze ERE. U poređenju sa grupom E (10 nmol), verbaskozid može smanjiti aktivnost luciferaze estradiola na element odgovora na estrogen ERE u različitim stepenima na 1, 10 i 50 mola, iechinacosidepokazuje lijenu dozu. Seks, kada koncentracija dostigne 50lxmol, antagonistički učinak na estradiol je najočigledniji (slika 5)
3 Diskusija
Ovaj eksperiment je po prvi put pokazao da jasni podaci to pokazujuechinacosidei verbaskozid, glavni aktivni sastojci u Cistancheu, mogu se vezati za receptore estrogena ERa i EP~, pojačati regulaciju luciferazne aktivnosti ERE i ispoljiti estrogene efekte, pokazujući aktivnost SERM-a. Analiza gornjih eksperimentalnih podataka pokazuje da je u ERa sistemu povećanje verbaskozida na aktivnost luciferaze ERE luciferaze elementa estrogenskog odgovora na 50 lxmol ekvivalentno 0.977 puta većoj od E2 (1 0nmol), što je ekvivalentno onom u ERI3 sistemu. 0.970 puta; Slično, u ERa sistemu, efekat regulacije ehinakozida na aktivnost luciferaze ERE luciferaze elementa estrogenskog odgovora pri 50 lxmol je ekvivalentan onom kod E (10 nmol), što je ekvivalentno 0 u sistemu ERI3. 937 puta, regulacija verbaskozida na aktivnost elementa estrogenskog odgovora ERE luciferaze je nešto veća nego kodechinacoside, a selektivnost za estrogenske receptore ERa i ER[3 nije očigledna, dok glikozidi ehinacee imaju slabe razlike u selektivnosti za estrogenske receptore ERa i ERI3. Ove razlike mogu biti povezane sa različitim grupama koje su povezane sa R4 položajem verbaskozida i ehinakozida. Estrogen uglavnom djeluje preko estrogenskog receptora. Postoje dva glavna podtipa estrogenskih receptora, ERa i ER [3, estrogen i supstance koje djeluju na estrogen kombinuju se s receptorom estrogena kako bi formirale dimer, a zatim se dimeriziraju. Tijelo se kombinuje sa elementom estrogenskog odgovora ERE, a zatim ispoljava estrogenski efekat [2l,. Fitoestrogeni i estrogen imaju slične strukture i funkcije. Istraživanja su pokazala da fitoestrogeni mogu regulirati metabolizam kostiju i igrati izuzetno važnu ulogu u održavanju ravnoteže resorpcije i formiranja kostiju. Efikasan je za osteoporozu kod pacijenata sa senilnom hipofunkcijom. Ima određeni klinički učinak prevencije i liječenja¨. Stoga se spekuliše da je učinak Cistanchea u poticanju regeneracije kostiju i inhibiciji stvaranja osteoporoze kod žena u postmenopauzi kroz njegove fitoestrogene. Ovaj eksperiment također pokazuje da se ehinakozid i verbaskozid mogu kompetitivno vezati za estrogenske receptore sa estradiolom i antagonizirati regulaciju estradiola na aktivnost luciferaze ERE. Mehanizam ovog djelovanja poznat je resveratrolu. Efekat fitoestrogena je sličan J. Dalje je objašnjeno da ehinakozid i verbaskozid ispoljavaju estrogene efekte vezivanjem za estrogenske receptore ERa i ER3. Gore navedene studije o fitoestrogenskoj aktivnosti Cistanchea i mehanizmu njegovog estrogenskog djelovanja ukazuju na to da Cistanche može odgoditi nastanak postmenopauzalne osteoporoze kod žena poboljšanjem nivoa estrogena u tijelu, ili liječenjem tretmana uzrokovanog padom nivoa estrogena u telu. Osteoporoza predstavlja mogućnost i pruža teorijsku osnovu za proširenje obima kliničke medicinske upotrebe Cistanchea.
Referenca
1 Kineska farmakopejska komisija (国家药典委员）). Farmakopeja Narodne Republike Kine. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Vol 1:126.
2 Li SZ (李时珍）). Kompendijum Materia Medica. Peking: People * s Medical Publishing House (人民卫生出版社), 1977.727.
3 Zeng LQ (曾群力), Zheng YF (郑一凡）, Lv ZL (吕志良). Imunobiološka aktivnost i njen mehanizam djelovanja cistanh polisaharida. J Zhejiang Univ,Med Ed （浙江大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
