Studija histopatologije bubrega i fizioloških funkcija

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ahmad Fauzi, et al

Abstract.

The purpose of this study was to analyze abnormal changes in kidney histology and physiology in acute kidney injury animal models with multiple doses of gentamicin. Induction of experimental animals was carried out on 20 rats (Rattus norvegicus) Wistar strain which was divided into 4 groups, group I was a negative control group, groups II, III, and IV are gentamicin-induced groups at doses of 30 mg/kg, 40 mg/kg, and 50 mg/kg, respectively. Kidney histopathology was stained with Hematoxylin Eosin (HE), while analysis of serum BUN and creatinine by spectrophotometric method. Data analysis for kidney histopathology was descriptive while BUN and Creatinine were statistically tested with one-way ANOVA. The results of this study showed there was kidney damage in all gentamicin-induced groups, which is necrosis in the contortions tubule and the Bowman's capsule compared to the negative control group. The group of rats with the higher doses of gentamicin showed a more severe level of histopathological changes, however, BUN and creatinine levels were not significantly different (p>0.05). Ova studija zaključuje da indukcija gentamicinom može uzrokovati histopatološke promjene bubrega, ali ne i fiziologiju bubrega.

Ključne riječi:životinjski model, antibiotik, BUN, kreatinin, nefrotoksičnost.

cistanche na hindskommože poboljšati funkciju bubrega

1. Uvod

Akutna ozljeda bubrega je bolest zatajenja bubrega ili oštećenja bubrega koja se javlja brzo u roku od nekoliko sati ili nekoliko dana. Simptomi koji se javljaju u incidenciji akutnogbubregpovredekao što su bol u trbuhu, poliurija, oligurija i drugi(1). Ova bolest se najčešće dijagnostikuje mjerenjem nivoa biomarkera; kao što su azot ureje u krvi (BUN) i kreatinin. Međutim, ove promjene biomarkera često ne opisuju stvarno stanje bubrega. Stanja akutne povrede bubrega mogu se jasno uočiti makroskopskim i mikroskopskim posmatranjem bubrega.Oštećenbubrezimože se okarakterizirati oticanjem korteksa bubrega i također nekrozom ćelije(2). Dok se povećani nivoi biomarkera BUN i kreatinina u krvi javljaju kada su bubrezi oštećeni za oko 30 posto - 59 posto, praćeno anemijom i letargijom(3). Poznato je da se bubreg može regenerirati, ali sa stopom oštećenja stanica do 50 posto, bit će teško normalno vratiti svoje fiziološke funkcije. To je navelo mnoge istraživače da istraže različite supstance koje imaju potencijalni učinak da izazovu nefrotoksičnost kako bi se smanjila učestalost ove bolesti.

Osim toga, također je važno proučavati mehanizam akutne ozljede bubrega korištenjem životinjskih modela. Životinjski modeli akutne povrede bubrega javljaju se zbog oštećenja nefrona u bubrezima. U nefronu koji se sastoji od glomerula, Bowmanove kapsule, tubularnog kontortusa ili Henleovog luka, doći će do nekroze stanica. Prema Halimu, (2014) stvaranje životinjskog modela akutne ozljede bubrega traje oko mjesec dana(4). Materijali koji se mogu koristiti za izazivanje ozljede bubrega su različiti, poput lijekova. Jedan od lijekova koji mogu uzrokovati oštećenje bubrega su antibiotici(2). Antibiotici koji se često koriste za stvaranje životinjskih modela s oštećenjem bubrega su antibiotici gentamicina. Indukcijske doze antibiotika za stimulaciju oštećenja bubrega uvelike variraju. Različite studije o nefrotoksičnom gentamicinu su široko prijavljene, kao što su niske doze od 10 mg/kg TM u periodu od nekoliko mjeseci(4), visoke doze od 60 mg/kg TM u roku od 10 dana(5, 6), doze od 100 mg/kg TM u roku od 8 dana (7).

U današnje vrijeme primjena injekcije gentamicina kod životinja i dalje se često koristi, dok se kod ljudi počela napuštati. Sigurna doza koja se često koristi kod ljudi je 5-7 mg/kg TM(8), a u narednoj godini pada na 3-5 mg/kg TM(9). Poznato je da doza gentamicina koja je 10 puta veća od sigurne doze uzrokuje toksičnost kod pacova. Ova sigurna promjena doze može omogućiti i promjenu toksičnih doza, stoga ova studija ima za cilj analizirati histološke i fiziološke promjene štakora kao životinjskih modela akutne ozljede bubrega zbog injekcije gentamicina u višerazinskim dozama od 30 mg/kg tjelesne težine do 50 mg/ kg telesne težine.

2. Materijal i metode

2.1. Animal Model

Dvadeset mužjaka pacova Wistar sojeva, dobijenih od de Wistar Bandunga, podijeljeno je u 4 grupe, Grupa I je bila kontrolirana grupa sa placebo injekcijom, Grupa II je inducirana dozom gentamicina od 30 mg/kg TM, Grupa III je inducirana dozom gentamicina za 40 mg/kg TM, a Grupa IV je indukovana dozom gentamicina od 50 mg/kg TM. Životinje su eutanazirane 10. dana. Urađen je histopatološki pregled bubrežnog tkiva pacova nakon eutanazije. Cijela životinja je u skladu sa smjernicama koje je proglasila institucionalna komisija za njegu i korištenje životinja sa registracijskim brojem 954-KEP.

2.2. Injekcija gentamicina

Svaki štakor je primao dnevnu intramuskularnu injekciju (između semimembranozne i semitendinozne) gentamicin sulfata (Genta-100®) tokom 10 dana u različitim dozama prema njihovoj grupi.

2.3. Ispitivanje bubrežnih histoloških preparata

Organi bubrega su ubačeni u 10 posto puferovanog formalina za pripremu za histopatologiju. Bubreg je pretvoren u histološki preparat transferom tkiva u 70 posto alkohola kao zaustavnom tačkom. Zatim je tkivo dehidrirano višestepenim alkoholom koncentracije 70 posto 24 sata, 80 posto etanolom 2 sata, 90 posto etanolom, 95 posto i apsolutnim etanolom 20 minuta. Zatim su organi natopljeni ksilolom I 20 minuta i ksilolom II 30 minuta tako da su organi čisti. Zatim se filtrira tkivo i ugradi parafinski blok 56-58 C. Bubrežni organ se reže na debljinu od 5 mikrona pomoću rotacionog mikrotoma. Svakim ponavljanjem napravljeno je 4 reza u intervalima od 10 rezova i stavljeno na staklo predmeta koji je natopljen 70-postotnim rastvorom alkohola i zatim obojen hematoksilin-eozinom (HE) bojenjem (10).

2.4. Sakupljanje krvi kod eksperimentalnih životinja

Sakupljanje krvi na životinjskim modelima kroz infraorbitalni sinus korištenjem mikrohematokrita, zatim umetnuto u vacutainer. Formirani serum je ubačen u nekoagulantnu mikroepruvetu da se analizira na serumski BUN i kreatinin.

2.5. Mjerenje nivoa BUN i kreatinina

Nivoi BUN-a i kreatinina su ispitivani spektrofotometrijom (ABX Pentra). Fiziologija bubrega je procijenjena kolorimetrijskom Jaffe metodom (Kreatinin i Urea kompleti DiaSys diagnostic systems GmbH Njemačka) za izračunavanje serumskih nivoa azota ureje u krvi (BUN) i kreatinina.

2.6. Statistička analiza

Opažanja histopatologije bubrega pomoću elektronskog mikroskopa su zatim deskriptivno analizirana. Podaci o BUN-u i kreatininu su kvantitativno analizirani koristeći Statistički paket za program društvenih nauka (SPSS, v20). Jednosmjerni ANOVA test je proveden kako bi se uočile značajne razlike između grupa (<0.05) and="" continued="" with="" the="" tukey="">

3. Rezultati i diskusija

3.1. Makroskopske promjene u bubrezima uzrokovanim gentamicinom

Štakori izazvani gentamicinom pokazali su kliničke simptome letargije, neaktivnosti, a makroskopija urina je pokazala blago crvenkastu boju, ali izmet je bio normalan, konzumiranje hrane i pića je i dalje bilo normalno. Makroskopski, veličina bubrega kontrolnih i tretiranih pacova nije bila razlika, ali razlike se javljaju izvan boje bubrežne sluzokože u kontrolnoj grupi (slika 1a) i grupi sa indukcijom gentamicina (slika 1b).

Slika 1. Bubrezi kod pacova negativne kontrole su u obliku pasulja i crvenkaste boje kao normalni bubrezi (a), dok bubrezi u grupi za indukciju gentamicina izgledaju bljeđi (b)

3.2. Promjena u histologiji bubrega na životinjskim modelima s indukcijom gentamicina.

Mikroskopsko posmatranje uz uvećanje od 100 i 400 puta pokazalo je histopatološke promjene u grupi koja je primala gentamicin. Dok kontrolna grupa koja nije bila indukovana gentamicinom nije pokazala mikroskopske promene (slika 2). Kuglasti glomerul se sastoji od kapilara simpleksnih endotelnih ćelija, Bowmanove kapsule su okruglog oblika sa pojednostavljenim pločastim ćelijama, proksimalnih kontortusnih tubula sa kockastim simpleksnim ćelijskim sa mikroresicama, i distalnih kontortusnih tubula sa zaobljenom kockastom ćelijom i sa medičnim kockastim ćelijama. Henleove petlje sa zaobljenom jednostavnom skvamoznom ćelijom (11),

Slika 2. Histopatologija bubrega u negativnoj kontrolnoj grupi (bojenje hematoksilin-eozinom, uvećanje od 100x i 400x). Glomerul (strelica) je normalan okruglog oblika i čvrste strukture, proksimalnih tubula (vrh strelice) sa kockasto-obličastim ćelijama i vilama.

Mikroskopske slike bubrega pacova sa injekcijom gentamicina 30 mg/kg tjelesne težine (grupa I) su uočene histopatološke promjene u poređenju sa negativnom kontrolnom grupom (Slika 3). glomerularne endotelne ćelije erodiraju, Bowmanova kapsula dolazi do nekroze i Bowmanov prostor postaje sve slabiji. Stanje proksimalnih tubularnih ćelija bila je nekroza, što se pokazuje deskvamacijom epitelnih ćelija kuboidnog simpleksa sa citoplazmom i ćelijskim jezgrom koje nestaje. Upalne stanice u proksimalnom tubulu nalaze se oko epitelnih stanica tubula koje karakteriziraju velike crno-ljubičaste okrugle stanice.

Slika 3. Histopatologija bubrega bubrega u liječenoj grupi I sa indukcijom TM od 30 mg/kg (bojenje hematoksilin-eozinom, povećanje od 100x i 400x). (strelica) Glomerulus je pokazao eroziju endotelnih ćelija, (vrh strelice) Bowmanove kapsule su pokazale nekrozu i istezanje, * Kontortus tubulusa pokazao je nekrozu i dosta ćelija upale.

Histopatološke slike pacova kojima je ubrizgana doza od 40 mg/kg tjelesne težine u grupi II pokazuju teži stepen oštećenja u odnosu na kontrolnu i tretiranu grupu I (Slika 4). glomeruli su bili nekroza i erozija endotelnih ćelija, Bowmanov prostor postaje slabiji, a jezgro epitelne ćelije u Bowmanovoj kapsuli je lizirano. Kuboidne epitelne ćelije u proksimalnim kontortusnim tubulima vide nekrozu i deskvamacija epitelnih ćelija se javlja i u citoplazmi i u jezgru. Upalne ćelije se često vide oko oštećenih nefrona.

Slika 4. Histopatologija bubrega u terapijskoj grupi II Indukcija 40 mg/kg TM (bojenje hematoksilin-eozinom, uvećanje od 100x i 400x). Glomerul (strelica) je pokazao deskvamaciju endotelnih ćelija, Bowmanova kapsula (vrh strelice) je otkrivena do nekroze i Bowmanov prostor postaje rastegnut, tubularni kontortus (*) je bio nekroza i praćen upalnim ćelijama (krug).

Kako su indukcijske doze gentamicina povećavale, oštećenje bubrega je bilo teže kao što je ilustrovano na mikroskopskim slikama štakora kojima je u grupi III ubrizgan gentamicin u dozi od 50 mg/kg tjelesne težine (Slika 5). Oštećenja su nastala u svim dijelovima nefrona tj. glomerulu, Bowmanovoj kapsuli, proksimalnom tubulu i distalnom tubulu. U glomerulu, nekroza u endotelnim ćelijama uzrokuje veći jaz u prostoru Bowmanovog prostora, Bowmanove kapsule su uočene nekroze u strukturi zida skvamoznih ćelija simpleksa, proksimalni kontortusni tubul i distalni kontortusni tubuli su viđeni nekroza ili označena akutnom nekrozom (AT ), struktura zida skvamoznih ćelija simpleksa je bila nekroza i izgleda deskvamirana u svojoj histološkoj strukturi. U tubularnim sekcijama uočeno je mnogo mononuklearnih inflamatornih ćelija u ćelijama koje su podvrgnute nekrozi.

Slika 5. Histopatologija bubrega u grupi III Indukcija gentamicina sa 50 mg/kg TM (bojenje hematoksilin-eozinom, uvećanje od 100x i 400x). Deskvamacija endotelnih ćelija Glomerul (strelica), Bowmanova kapsula (vrh strelice) pokazala je nekrozu, a Bowmanovi prostori postaju različiti. Nekroza se javlja na tubularnom kontortusu (*).

Davanje visokih doza injekcije gentamicina može uzrokovati oštećenje strukture nefrona koje karakterizira nekroza i deskvamacija epitelnih stanica u glomerulu, Bowmanovoj kapsuli i tubulu, što će utjecati na oštećenu funkciju bubrega glomerularne filtracije i reapsorpcije i sekrecije u bubrežnim tubulama. Glavni aspekt nefrotoksičnosti gentamicina je tubularna citotoksičnost. Terapija na životinjama gentamicinom može biti povezana s apoptozom(12) kao i nekrozom tubularnih epitelnih stanica(13). Gentamicin uzrokuje citotoksičnost u stanicama gdje se može akumulirati. U bubrezima su to obično proksimalne tubularne epitelne ćelije(14), dok su distalne tubularne ćelije i sabirni kanali značajno manje pogođeni citotoksičnim efektima(15). Lijek se zatim transportuje do lizozoma, Goldzi uređaja i endoplazmatskog retikuluma(16). Gentamicin se vezuje za fosfolipidnu membranu, menjajući njenu funkciju i izazivajući stanje poznato kao fosfolipidoza kod ljudi(17) i eksperimentalnih životinja(18). Lizosomalna fosfolipidoza je uzrokovana poremećajima signalnog puta fosfatidilinozitola(19), smanjenjem prometa fosfolipida i njihovom akumulacijom u plazma membrani.

Fosfolipidoza je direktno povezana sa toksičnošću gentamicina (20). Međutim, slične promjene su otkrivene i kod drugih tipova ćelija izloženih gentamicinu, ali bez značajnih oštećenja i smrti ćelije. Kada koncentracije gentamicina u endosomima dostignu određeni nivo, membrana se poremeti i njen sadržaj uključujući gentamicin se oslobađa u citoplazmu(21). U citoplazmi, gentamicin djeluje na mitohondrije i direktno i indirektno(22) i aktivira intrinzični apoptotički put, prekida respiratorni lanac, smanjuje sintezu ATP-a i uzrokuje oksidativni stres stvaranjem superoksidnih aniona i hidroksilnih radikala(23) što dovodi do smrti stanice. Kada je prisutan u velikom broju, katepsin izaziva masivnu proteolizu koja rezultira nekrozom, posebno nedostatkom ATP-a. U endoplazmatskom retikulumu gentamicin inhibira sintezu proteina, ometajući tačnost translacije i modifikaciju posttranslacionih proteina(24). Ovo dovodi do stresa endoplazmatskog retikuluma i apoptotske aktivacije kaspazom 12 i kalpainom(25).

Rezultati ove studije slični su rezultatima istraživanja koje je proveo Lintong (2012). Primjena gentamicina za laboratorijske pacove u dozi od 10-20 mg/kg tjelesne težine izazvala je karakteristične i izražene promjene na lizozomima proksimalnih tubularnih epitelnih ćelija(6). Ove promjene su tubularna disfunkcija; odvajanje ruba četkice i oslobađanje lizosomalnih enzima; smanjiti reapsorpciju proteina, kalcija, magnezija, kalija i glukoze; fos folipidurija i izlučivanje gipsa. Primjena gentamicina u dozama iznad 40 mg/kg tjelesne težine brzo izaziva nekrozu u korteksu bubrega praćenu oštećenom bubrežnom disfunkcijom.

3.3. Nema značajnih promjena u BUN-u i kreatininu u grupi gentamicina

One-way ANOVA results showed no significant difference between treatments (p>0.05). Stoga Tukey test nije nastavljen. Prosječni nivoi BUN-a i kreatinina u krvnom serumu mogu se vidjeti u tabeli 1.1.

Prema Johnsonu (2014), nivoi BUN kod pacova kreću se od 10-21 mg/dL(26). Dok akutna povreda bubrega proizvodi BUN nivoe 10 puta više od normalnih (27). U normalnim okolnostima, BUN je rezultat metabolizma proteina koji se javlja u jetri. Ova supstanca će biti kanalisana kroz krvne sudove i ispuštena kroz sistem za mokrenje u bubrezima tako da će se nivoi BUN-a u krvnim sudovima naći u maloj količini. Iz dobijene srednje vrijednosti svake grupe, čini se da nema značajne razlike unutar grupa, ali postoji tendencija povećanja u skladu sa povećanjem doze gentamicina.

One-way ANOVA test results on creatinine samples showed no difference between treatments (p>{{0}}.05). Prosječna vrijednost kontrolne grupe i tretirane grupe I je još uvijek bila unutar normalnog raspona nivoa kreatinina bijelih pacova, što je 0.2 - 0.8(26). Trenutni standardni testovi za određivanje statusa bubrežne funkcije bili su mjerenje serumskog kreatinina i proizvodnje urina. Međutim, početno mjerenje kreatinina u serumu možda neće odražavati stepen ozljede jer akumulacija kreatinina uvijek zaostaje za događajima povrede (28). Povećanje serumskog kreatinina može ukazivati ​​na oštećenje bubrega, ali ima ograničenu sposobnost utvrđivanja oštećenja u ranim fazama (29). Prema Nguyen & Devarajan (2008), nivo kreatinina počinje da raste nakon što oštećenje bubrega dostigne 50 procenata (30), pa se može zaključiti da je uočeno oštećenje bubrega još uvek ispod 50 procenata.

4. Zaključak

Na osnovu rezultata ove studije može se zaključiti da su se bubrežne histopatološke promjene uslijed injekcije gentamicina u trajanju od 10 dana javile u svim grupama gentamicina, ali se ova abnormalnost nije pojavila na BUN-u i kreatininskom serumu. Zbog biomarkera kašnjenja u ovoj studiji, predložili smo dodavanje druge varijable za promatranje akutnog oštećenja bubrega.

5. Priznanje

Zahvalnost dugujemo Ministarstvu za istraživanje, tehnologiju i visoko obrazovanje za podršku finansiranju kroz PUPT program za 2017. godinu i za saradnju u sprovođenju ovog istraživanja.

Reference

1. Alfonso AA, Mongan AE, Memah MF. Gambaran kadar kreatinin serum u pasien penyakit ginjal kronik stadion 5 bez dijalize. Žurnal e-Biomedik. 2016;4(1).

2. Chasani S. Antibiotik Nefrotoksik: Penggunaan na Gangguan Fungsi Ginjal. J Laporan Penelitian. 2008.

3. K KZ. Hronična bolest bubrega. Los Angeles: Henry Ford Health System; 2011.

4. Halim H, Achadiyani A, Tjahjodjati T. Nigella sativa Infuzija kao antioksidans protiv gentamicinom izazvanog oštećenja bubrega kod miševa. Althea Medical Journal. 2014;1(2):90-3.

5. Padmini MP, Kumar JV. Histopatološka studija o nefrotoksičnosti izazvanoj gentamicinom kod eksperimentalnih albino štakora. IOSR J Dent Med Sci. 2012;1(1):14-7.

6. Lintong PM, Kairupan CF, Sondakh PL. Gambaran Mikroskopik Ginjal Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Setelah Diinduksi Dengan Gentamisin. Journal Biomedik. 2012;4(3).

7. ATAMAN N, Mert H, Yildirim S, Mert NJAÜVFD. Učinak fukoidana na promjene nekih biohemijskih parametara nefrotoksičnosti izazvane gentamicinom kod pacova. 2018;65(1):9-14.

8. Freeman CD, Nicolau D, Belliveau P, Nightingale C. Doziranje aminoglikozida jednom dnevno: pregled i preporuke za kliničku praksu. Časopis za antimikrobnu kemoterapiju. 1997;39(6):677-86.

9. Gentamicin [Internet]. Datasheet Publications. 2005.

10. Wulandari S. Ekstraksi tumor nekroze Fakcor (TNF-) i Gambaran Histopatologi Ginjal Pada Tikus (Rattus Norvegicus) Renal Fibrosis Pasca Induksi Streptokinase. Malang: Univerzitet Brawijaya; 2012.

11. Handani AR, Salim MN, Harris A, Budiman H. PENGARUH PEMBERIAN KACANG PANJANG (Vigna unguiculatTERHADAP STRUKTUR MIKROSKOPIS GINJAL MENCIT (Mus musculus) YANG DIINDUKSI ALOKSAN. Žurnal Medika2115).

12. Li J, Li Qx, Xie Xf, Ao Y, Tie Cr, Song Rj. Diferencijalne uloge dihidropiridin kalcijevog antagonista nifedipina, nitrendipina i amlodipina na bubrežnu tubularnu toksičnost izazvanu gentamicinom kod pacova. Evropski farmakološki časopis. 2009;620(1-3):97-104.

13. Edwards JR, Diamantakos EA, Peuler JD, Lamar PC, Prozialeck WC. Nova metoda za procjenu epitelne nekroze proksimalnih tubula u intaktnom bubregu štakora korištenjem etidijum homodimera. J BMC fiziologija. 2007;7(1):1.

14. Verpooten GA, Giuliano RA, Verbist L, Eestermans G, De Broe ME. Doziranje jednom dnevno smanjuje bubrežnu akumulaciju gentamicina i netilmicina. J Clinical Pharmacology Therapeutics. 1989;45(1):22-7.

15. Fujiwara K, Shin M, Matsunaga H, Saita T, Larsson LI. Svjetlosno-mikroskopska imunocitohemija za gentamicin i njegova upotreba za proučavanje unosa lijeka u bubrezima. J Hemoterapija s antimikrobnim agensima. 2009;53(8):3302-7.

16. Silverblatt F. Patogeneza nefrotoksičnosti cefalosporina i aminoglikozida: pregled aktuelnih koncepata. J Pregledi zaraznih bolesti. 1982;4(Dodatak_2):S360-S5.

17. De Broe ME, Paulus GJ, Verpooten GA, Roels F, Buyssens N, Wedeen R, et al. Rani efekti gentamicina, tobramicina i amikacina na ljudski bubreg. J Kidney international. 1984;25(4):643-52.

18. Nonclercq D, Wrona S, Toubeau G, Zanen J, Heuson-Stiennon JA, Schaudies RP, et al. Tubularna ozljeda i regeneracija u bubrezima pacova nakon akutnog izlaganja gentamicinu: studija vremenskog toka. J Renalna insuficijencija. 1992;14(4):507-21.

19. Ramsammy LS, Josepovitz C, Kaloyanides GJ. Gentamicin inhibira agonističku stimulaciju kaskade fosfatidilinozitola u primarnim kulturama proksimalnih tubularnih ćelija kunića i u bubrežnom korteksu pacova. J Journal of Pharmacology Experimental Therapeutics. 1988;247(3):989-96.

20. Kaloyanides G. Interakcije lijekova i fosfolipida: uloga u nefrotoksičnosti aminoglikozida. J Renalna insuficijencija. 1992;14(3):351-7.

21. Regec AL, Trump BF, Trifilis AL. Utjecaj gentamicina na lizozomalni sistem kultiviranih ljudskih proksimalnih tubularnih ćelija: endocitotska aktivnost, lizozomalni pH i krhkost membrane. J Biochemical Pharmacology. 1989;38(15):2527-34.

22. Morales AI, Detaille D, Prieto M, Puente A, Briones E, Arévalo M, et al. Metformin sprečava eksperimentalnu nefropatiju izazvanu gentamicinom putem mitohondrijski zavisnog. J Kidney international. 2010;77(10):861-9.

23. Cuzzocrea S, Mazzon E, Dugo L, Serraino I, Di Paola R, Britti D, et al. Uloga superoksida u nefropatiji posredovanoj gentamicinom kod pacova. European Journal of Pharmacology. 2002;450(1):67- 76.

24. Horibe T, Matsui H, Tanaka M, Nagai H, Yamaguchi Y, Kato K, et al. Gentamicin se veže za lektinsko mjesto kalretikulina i inhibira njegovu aktivnost šaperona. J Biochemical Biophysical Research Communications. 2004;323(1):281-7.

25. Peyrou M, Hanna PE, Cribb AE. Cisplatin, gentamicin i p-aminofenol indukuju markere stresa endoplazmatskog retikuluma u bubrezima pacova. J Toxicological Sciences. 2007;99(1):346-53.

26. Johnson D. Normalne laboratorijske vrijednosti 2014.

27. Fauzi A, Salasia SIO, Titisari N. Lipokalin povezan sa neutrofilnom želatinazom (NGAL) kao potencijalni biomarker za rano otkrivanje akutnog zatajenja bubrega. J Comparative Clinical Pathology. 2016;25(2):387-92.

28. Lameire N, Hoste EJCoicc. Razmišljanja o definiciji, klasifikaciji i dijagnostičkoj evaluaciji akutnog zatajenja bubrega. 2004;10(6):468-75.

29. Devarajan P. Emerging biomarkers of acute bubrežne ozljede. Akutna povreda bubrega. 156: Karger Publishers; 2007. str. 203-12.

30. Nguyen MT, Devarajan PJPn. Biomarkeri za rano otkrivanje akutne povrede bubrega. 2008;23(12):2151.