Spontana granulocitna leukemija kod A NOD/Shi-scid IL-2R null miša

sažetak:Ovdje izvještavamo o slučaju spontane granulocitne leukemije kod 51-nedjelje starog mužjaka NOD/Shi-scidIL{0}}R null (NOG) miš. Miš je pokazaoprogresivna anemijaigrubi respiratorni pokreti. Makroskopski, slezina je promjenjena i uvećana. Histološki, koštana sržgrudne kostia femur je bio vrlo ćelijski i gotovo isključivo ispunjenneoplastične ćelije. Jedra neoplastičnih ćelija su bila velika, ovalnog do blago nepravilnog oblika, a mali broj ćelija je imaobubreg- ili prstenasta jezgra.Neoplastične ćelijeekstenzivno infiltrirao organe, a slezina i jetra su bile izrazito zahvaćene. Imunohistohemijski, velika populacija neoplastičnih ćelija u crvenoj pulpi slezene i sinusoidi jetre bila je pozitivna namijeloperoksidaza. Na osnovu histoloških karakteristika ovaj slučaj je dijagnosticirangranulocitna leukemija. Ova nova informacija ospontani tumorimože biti od pomoći za odgovarajuću upotrebu ovog soja miša u daljnjim istraživanjima. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ključne riječi: granulocitna leukemija, NOG miš, spontani tumor

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE SA 25% EHINAKOZIDA I 9% AKTEOZIDA ZA FUNKCIJU BUBREGA

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kupite za više detalja o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontana granulocitna leukemijase rijetko javlja kod nekoliko sojeva miševa, iako hemijski agensi i jonizujuće zračenje mogu povećati incidencu kod nekih sojeva miševa1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) miševi su ozbiljnoživotinje sa oslabljenim imunitetom, i predstavljaju defekte u T-, B- i prirodnim ćelijama ubicama, te loše funkcionirajućim makrofagama i dendritskim ćelijama nokautom lanca IL-2 receptora (IL2R c) u NOD-scid soj3. Ovaj soj miševa se koristi za neklinička ispitivanja, kao što je test tumorigenosti, za procjenu kvaliteta i sigurnosti bioloških proizvoda za regenerativnu medicinu korištenjem ćelija/tkiva ljudskog porijekla, zbog značajno boljeg presađivanja ksenogenih ćelija4–6. Iako su stanje imunodeficijencije i njegove implikacije na ksenotransplantate dobro proučene, malo je informacija dostupno o spontanim tumorima koji se javljaju u ovom soju miša, kao što je limfom timusa,dojkežlezda adenom/adenokarcinom, bronhioloalveolarni karcinom, rabdomiosarkomi teratom7. Ovdje izvještavamo o slučaju granulocitne leukemije kod 51-nedjelja starog mužjaka NOG miša.

Životinja je dobijena od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japan) u dobi od 6 sedmica i držana je neliječena. Životinja je bila pojedinačno smještena u plastični kavez sa individualno ventiliranim kaveznim sistemom (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japan) u prostoriji sa sustavom barijera kontroliranom okolišem, koja je održavana na temperaturi od 22 ± 2 stepena sa vlažnost od 50 ± 20% i ciklus svjetlosti/mraka 12-h. Miš je hranjen autoklaviranom peletiranom hranom (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japan) sa autoklaviranom vodom iz slavine i libitumom. Sa životinjom je postupano u skladu s protokolom koji je odobrio Institucionalni komitet za negu i upotrebu životinja CMIC Pharma Science Co., Ltd., koji je akreditovan od strane AAALAC International.

Ovaj miš je pokazao kliničke znakove slabljenja, kao što su anemija, grubi respiratorni pokreti i smanjenje tjelesne težine između 49. i 51. sedmice starosti. Životinja je eutanazirana u dobi od 51 sedmice. Prilikom obdukcije, slezina je promjenjena i uvećana. U drugim organima nisu primijećeni očigledni abnormalni nalazi. Timus i limfni čvor bili su atrofični, slični onima kod normalnih NOG miševa.

Svi uzorci organa i tkiva su rutinski sakupljeni, fiksirani u 10% neutralnom puferiranom formalinu, stavljeni u parafin i isječeni na približno 3 μm. Za njegov patološki pregled, rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom (HE). Presjeci slezene i jetre su imunohistohemijski obojeni na poliklonsko antitijelo zeca protiv humane mijeloperoksidaze (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japan) kao marker mijeloidnih stanica, zečje anti-humano monoklonsko antitijelo na CD3 (Nichirei Biosciences Japan Inc., Tokyo). ) kao marker T ćelija, i zečje anti-humano Pax-5 monoklonsko antitijelo (Abcam Inc., Cambridge, UK) kao B ćelijski marker8. Sekcije su inkubirane sa antitelima na sobnoj temperaturi 1 h, a imunodetekcija je sprovedena korišćenjem Histofine® MOUSESTAIN KIT-a (Nichirei Biosciences Inc.) sa 3,3′-diaminobenzidin/H2O2 kao hromogenom. Tada su bili imuno obojeni rezoviobojen hematoksilinom.

Histopatološki, koštana srž sternuma i femura bila je vrlo ćelijska i gotovo isključivo ispunjena neoplastičnim stanicama (slika 1A). Masno tkivo je potpuno pomjereno. U srži su se povremeno javljala ćelijska žarišta koja se sastoje od eritroidnih i megakariocitnih elemenata, za koje se smatralo da su ostacinormalna hematopoeza. Većina neoplastičnih stanica pokazala je blastični izgled, karakteriziran velikim, ovalnim do blago nepravilnog oblika jezgri, i s retikularnim hromatinom koji sadrži jednu ili više istaknutih jezgara. Postojao je mali broj ćelija sa jezgrima u obliku bubrega ili prstena, a takođe je bilo prisutno nekoliko ćelija sa jezgrima u obliku režnjeva (slika 1B). Granule u citoplazmi neoplastičnih ćelija nisu bile očigledne na presecima obojenim HE. U srži su pronađene brojne mitotičke figure, a uočena su i povremena apoptotička tijela. Neoplastične ćelije su značajno napale periosteum i okolni skeletni mišić. Došlo je do ekstenzivne infiltracije neoplastičnih ćelija u druge organe i tkiva, a slezina i jetra su bile izrazito zahvaćene. U slezeni su uočene neoplastične ćelije kroz crvenu pulpu (slika 2). Uočljiva je kapsularna infiltracija neoplastičnih stanica. Uočeno je nekoliko eritroidnih serija i megakariocita u razvoju. Povremeno su primećeni megakariociti koji sadrže jednu ili nekoliko mijeloidnih ćelija u citoplazmi, što ukazuje na emperipolezu. U jetri su neoplastične ćelije difuzno infiltrirane u Glissonovu kapsulu i jetrene sinusoide (slika 3). Neoplastične ćelije sa jezgrima u obliku bubrega ili prstena također su evidentne u nekim krvnim sudovima. Neki hepatociti u periportalnom području, sa izraženom infiltracijom neoplastičnih ćelija, pokazali su degeneraciju ili nekrozu, dok je normalna struktura jetrenog lobula ostala netaknuta. Neoplastična ćelijska infiltracija pronađena je i u drugim organima, uključujući alveolarni zid i perivaskularnu regiju pluća, interstadium u bubrezima, sinusoid u nadbubrežnim žlijezdama, te mukozu i submukozu u gastričnom traktu (želudac i crijeva). Imunohistohemijski, velika populacija neoplastičnih ćelija u crvenoj pulpi slezene (slika 4) i sinusoidi jetre bila je pozitivna na MPO. CD3 i Pax{9}} pozitivne ćelije nisu otkrivene. Rezultati imunobojenja CD3 i Pax{11}} bili su slični rezultatima slezene normalnih NOG miševa, koji su bili histološki hipoplastični i nisu pokazali CD3 ili Pax{13}} pozitivne ćelije.

Imunohistohemijsko istraživanje je otkrilo da neoplastične ćelije potiču iz mijeloidnih staničnih linija. U nekim zahvaćenim područjima, posebno slezeni i jetri, mali broj ćelija imao je oblik bubrega, prstena ili režnja koji ukazuje na razlikovanje mijeloidnih serija. Ovi nalazi sugeriraju da su neoplastične stanice izvedene iz nezrelih granulocita. Slučaj teške mijelopoeze može biti evidentan prisustvom svih vrsta mijeloidnih serija u razvoju, za razliku od dominacije nezrelih ćelija kod leukemije. Osim toga, progresivna anemija je čest klinički znak granulocitne leukemije, a povećanje eritroidnih i megakariocitnih stanica je slabo1. Manja populacija granulocita sa režastim jezgrima u zahvaćenom području bez očigledne upale ukazuje na to da su nalazi ovog slučaja neoplastične, a ne reaktivne mijelopoeze.

Kod granulocitne leukemije, koštana srž može biti zamijenjena nezrelim i zrelim mijeloidnim stanicama. U prethodnom izvještaju o drugim sojevima miševa, ove neoplastične stanice su se potpuno infiltrirale u jetru, slezenu, limfne čvorove, itd.2, a ove stanice u slezeni i jetri uglavnom su se nalazile u crvenoj pulpi i oko Glissonove kapsule1. Dakle, distribucija leukemijskih ćelija u ovom slučaju bila je identična onoj u prethodnom slučaju. Na osnovu morfologije ćelija, granulocitna leukemija kod miševa je klasifikovana u dva tipa: juvenilni tip, koji je uporediv sa humanom akutnom mijelogenom leukemijom, i zreli tip sa humanom hroničnom mijelogenom leukemijom1. U juvenilnom slučaju, neoplastičnim ćelijama u koštanoj srži, slezeni i jetri dominirale su slabo diferencirane ćelije, dok se mijeloidni elementi koji predstavljaju različite stepene sazrevanja mogu videti i procenat mijeloblasta je bio nizak u nekim zrelim slučajevima2, 9. U ovom slučaju, ćelijama leukemije dominira nezrela forma sa velikim, ovalnim do blago nepravilnog oblika jezgra. Uz to, s obzirom na kliničke nalaze da se opšte pogoršanje zdravlja, uključujući progresivnu anemiju i grube respiratorne pokrete, akutno razvilo; stoga se pretpostavlja da je ovaj predmet maloljetničkog tipa.

Slika 1. Histološke slike koštane srži femura. O: Neoplastične ćelije difuzno proliferiraju, čime zamjenjuju koštanu srž. B: Jezgra su velika, ovalnog do blago nepravilnog oblika. Mali broj ćelija ima jezgra u obliku bubrega (žuta strelica), prstenasta (zelena strelica) ili režnja (beli vrh strelice). Mitotička figura je označena bijelom strelicom. HE mrlje. Crna traka=50 μm (A), 10 μm (B).

U prethodnoj publikaciji o NOG miševima, neoplastične lezije su općenito bile rijetke; međutim, limfom timusa je prijavljen na 0.82% u starosnoj grupi u rasponu od 16 do 40 sedmica7, 10. Koliko je nama poznato, spontana granulocitna leukemija nije ranije prijavljena kod NOG miševa. Kod nekoliko sojeva miševa, uključujući B6C3F1 i BALB/c, granulocitna leukemija se rijetko javljala2, 11 i nije prijavljena u slučaju ovih miševa u dobi od 12 mjeseci ili mlađoj. Ovaj slučaj je razvio granulocitnu leukemiju u dobi od 51 sedmice, što je bila relativno mlada dob. Ove nove informacije o spontanim tumorima mogu biti od pomoći za odgovarajuću upotrebu ovog soja miševa u daljim istraživanjima.