Askorbinska kiselina reguliše imunitet, antioksidaciju i apoptozu u Abalone Haliotis Discus Hannai Ino, 2. dio

3.5. Ekspresije imuno-srodnih gena i proteina u usnoj probavnoj žlijezdi i škrgama

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i sposobnost uklanjanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Cistanche Reddit za Anti-Aging

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Nivoi mRNA ključnih gena u signalnom putu receptora nalik na toll-like (TLR) u probavnoj žlijezdi abalona prikazani su u tabelama 6 i 7. Nivoi ekspresije tlr2 i tlr4 u probavnoj žlijezdi su značajno smanjeni (p < { {5}}.05) i imali su najniže nivoe na AA1000 i AA500{{43 }} grupe, redom (Tabela 6). Nivo mRNA the-a je značajno povećan (p < 0.05), a na-b nisu uticali stepenovani nivoi AA u ishrani (p > 0.05 ). Ekspresije myd88, trip-related adapter molekula (tram), interleukin 1 receptor-povezane kinaze 4 (irak4) i faktora tumorske nekroze receptor-povezanog faktora 6 (traf6) su značajno smanjene nakon dijetetske suplementacije AA (p < 0,05). Na traf4 nije uticao nivo suplementacije AA (p > 0,05). Nivoi mRNA iκb kinaze (ikk) i nf-κb inhibitora (iκb) u probavnoj žlijezdi morskog ušica nisu bili pod utjecajem AA iz ishrane (p > 0,05) (Tabela 7). Međutim, ekspresija protein kinaze aktivirane p38 mitogenom (oznaka p38) i smeća je značajno smanjena sa povećanjem AA u ishrani (p < 0,05). Dijeta AA bi mogla značajno smanjiti nivoe ekspresije nf-κb, aktivator proteina 1 (ap-1) i faktora tumorske nekroze (tnf- ) (p < 0,05), a nivo interleukina 16 (il 16) nije bio podliježu dijetalnim AA (p > 0,05). Ekspresija proteina MyD88, JNK, zrelog IL-1 i nuklearnog NF-κB p65 prikazana je na slici 2. Nivoi proteina MyD88, zrelog IL-1 i nuklearnog NF-κB p65 u digestivnom traktu žlijezda morskog uši su značajno smanjene dijetalnim AA (p < 0,05). Nasuprot tome, nivo proteina JNK nije bio pod uticajem AA (p > 0,05).

Nivoi mRNA tlr2, tlr4 i the-b u škrgama morskih ušica nisu se značajno razlikovali (p > 0.05), a nivo tar-a je značajno smanjen nakon stepenastih nivoa dijetetskih AA (p < 0.05) (tabela 8). Nadalje, nivoi ekspresije myd88, irak4 i traf6 u škrgama morskog uši su značajno smanjeni s povećanjem nivoa AA u ishrani (p < 0.{{20}}}5). Umjesto toga, nisu uočene značajne razlike u izrazima tram i traf4 (p > {{30}}.05). AA u ishrani je značajno smanjila nivo mRNA ikk (p < 0,05), a ekspresije iκb, p38 oznake i smeća u škrgama nisu bile pod uticajem AA (p > 0,05) (Tabela 9). Jednosmjerna ANOVA otkrila je da su nivoi ekspresije nf-κb, ap-1 i tnf- značajno smanjeni dijetalnim AA (p < 0,05), a nije uočena značajna razlika u nivoima il 16 (p > 0,05). Nivoi proteina MyD88 i nuklearnog NF-κB p65 značajno su smanjeni stepenastim nivoima AA u ishrani (p < 0,05) (Slika 3). Međutim, na ekspresiju proteina JNK i zrelog IL-1 u škrgama morskih ušica nije uticao AA iz ishrane (p > 0,05).

Izrazi -defenzina, stvaranja mitova 6 i arginaze-I u probavnoj žlijezdi i škrgama morskog ušica dati su u tabeli 10. Nivoi -defenzina i arginaze-I u probavnoj žlijezdi su značajno povećani nakon dijetetskog AA (p < 0.05), dok na ekspresiju stvaranja mitova 6 nije utjecao dijetalni AA (p > 0,05). Nasuprot tome, nivoi mRNA -defenzina i arginaze-I u škrgama nisu se značajno razlikovali, a ekspresija stvaranja mitova 6 je značajno povećana dijetalnim AA (p < 0,05).

3.6. Ekspresije imunološki povezanih gena u probavnoj žlijezdi kao odgovor na Vibrio Parahaemolyticus

Nivoi ekspresije nekoliko kritičnih gena u TLR signalnom putu, koji sadrže tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1, i tnf- u probavnoj žlijezdi morskog uši nakon infekcije V. parahaemolyticus, prikazani su na slici 4. Ekspresije mRNA tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 i tnf- su značajno povećane nakon davanja V. parahaemolyticus (p < 0.05). Promjena puta tlr4 bila je najveća u AA0 grupi (10.24- puta) 24 h nakon infekcije, a nakon toga, najviši nivo je pao na 3.{{ 20}}u grupi AA5000 u 6 h. Nivo mRNA myd88 je značajno povećan 12-72 h u grupi AA0 (686- puta) i 6-12 h u grupi AA5000 (388- puta) nakon V. parahaemolyticus infekcija. Ekspresija trama u probavnoj žlijezdi abalona nakon infekcije V. parahaemolyticus značajno je povećana od 12 h do 72 h u grupi AA0 i od 12 h do 24 h u grupi AA5000. Promjena puta nf-κb dostigla je najviši nivo nakon 48 sati u grupi AA0 (10.55-puta), nakon čega slijedi smanjenje najvišeg nivoa na 12 sati u grupi AA5000 (3.{{48 }}promjena preklopa). Nivo ekspresije ap-1 je značajno povećan sa 6 h na 72 h u grupi AA0 i AA50 prije nego što se oporavio na normalan nivo 72 h nakon kontinuirane suplementacije AA. Promena TNF-a dostigla je svoj vrhunac 24 h nakon V parahaemolyticus infekcije u grupama AA0, AA50, AA100, AA200 i AA500, a najviši nivo je imala 12 h u grupama AA1000 i AA5000.

Rezultati nivoa -defenzina i stvaranja mitova 6 u probavnoj žlijezdi nakon infekcije V. parahaemolyticus prikazani su na slici 5. Nivoi ekspresije -defenzina i stvaranja mitova 6 u probavnoj žlijezdi morskog uši su značajno povećani nakon infekcije V. parahaemolyticus ( p < 0.05). Nivo mRNA -defenzina je značajno povećan u AA0, AA50, AA100 i AA200 grupama u 12 h i 24 h, a dostigao je svoj vrhunac u 12 h u AA200, AA500, AA1000 i AA5000 grupama sa 4 .51-presavijte, 4.74-preklopite, 5.20-preklopite i 5.{26}}preklopite, respektivno. Promjena puta stvaranja mitova 6 u probavnoj žlijezdi morskog ušica značajno je povećana sa 12 h na 24 h u grupama AA0, AA50, AA100, AA200 i AA500, te sa 6 h na 72 h u grupama AA1000 i AA5000. Najviši nivo ekspresije stvaranja mitova 6 uočen je u 12 h u grupi AA5000 sa 5.82- puta.

3.7. Ekspresije gena i proteina povezanih s antioksidacijom i apoptozom u probavnim žlijezdama i škrgama

Nivoi mRNA faktora povezanog s nf-e2-faktorom-2 (nrf2), gpx, cat i cuznsod u probavnoj žlijezdi abalona bili su značajno povišeni sa stepenastim nivoima AA u ishrani (p < {{4 }}.05) (Tabela 11). Nasuprot tome, nivoi mRNA i proteina Keap1 su značajno smanjeni nakon dijetetskog AA (p < 0.05), a glutation-s-transferaza (GST) nije bila pod utjecajem AA (Slika 6, Tabela 11) (p > 0.05). U škrgama, nivoi mRNA nrf2 i gpx su značajno povećani dijetalnim AA (p < 0,05) (Tabela 11). Međutim, ekspresije keap1, cat, GST i cuznsod u škrgama nisu podvrgnute stepenovanim nivoima AA u ishrani (p > 0,05). Nije uočen značajan uticaj dijetetskog AA na ekspresiju proteina Keap1 u škrgama morskog ušica (p > 0,05) (Slika 6).

Ono što se ističe u Tabeli 12 je da su nivoi ekspresije Baxa i kaspaze3 u probavnoj žlijezdi morskih ušica značajno smanjeni nakon stupnjevanih nivoa AA u ishrani (p < 0.05). U međuvremenu, nivo mRNA bcl-2 je značajno povećan (p < 0.05). Međutim, dijetalni AA nije utjecao na ekspresiju kaspaze7 (p > 0.{{20}}5). Protein cijepane kaspaze3 u probavnoj žlijezdi je značajno smanjen nakon dodavanja AA (p < 0,05) (Slika 6). U škrgama, nivoi mRNA kaspaze7 i bcl-2 su značajno smanjeni, odnosno povećani, nakon dijetetskog AA (p < 0,05) (Tabela 12). Ipak, ekspresije Baxa i kaspaze3 nisu se značajno razlikovale među svim tretmanima (p > 0,05). Osim toga, na ekspresiju proteina cijepane kaspaze3 u škrgama morskog ušica nisu uticali stepenovani nivoi AA u ishrani (p > 0,05) (Slika 6).

4. Diskusija

4.1. Sadržaj askorbinske kiseline u različitim tkivima

U ovoj studiji, sadržaj AA u mišićima, škrgama i probavnim žlijezdama povećavao se s povećanjem nivoa AA u ishrani. Sličan rezultat je također pronađen u Vundu (Heterobranchus logfiles), japanskoj jegulji i Chuovom rogozaru (boja Nibea) [27,56,57]. Sadržaj AA bio je najveći u škrgama, a zatim u probavnoj žlijezdi morskog ušica. Međutim, sadržaj AA u škrgama, probavnoj žlijezdi i mišićima morskog ušica nije dostigao svoju zasićenost nakon 4821,17 mg/kg dijetalne AA. Kod kineske odojke (Myxocyprinus asiaticus) sadržaj AA u jetri značajno je povećan unosom AA u hranu [58]. Povećani sadržaj AA u jetri kineske naivčice nakon dijetetske AA bio je u korelaciji sa zdravljem jetre. Kod amura, sadržaj AA u bubrezima glave, slezeni i koži značajno je povećan sa povećanjem dodatka AA u ishrani [35]. Glavni bubreg, slezena i koža su važni imunološki organi kod vodenih životinja [59–61]. Ovi rezultati pokazuju da je povećani sadržaj AA u probavnim žlijezdama i škrgama morskih ušica bio usko povezan sa zdravljem morskih ušica nakon dijetetskog AA i da akumulacija AA odražava nivoe izloženosti AA hranom.

4.2. Uloga askorbinske kiseline u regulaciji imuniteta abona

Hemociti, kao svestrane ćelijske komponente hemolimfe kod mekušaca, odgovorni su za mnoge aspekte života mekušaca, kao što su imuni odgovor, biomineralizacija, komunikacija stanica-ćelija i regeneracija [62,63]. Stoga, THC, RB i PA hemolimfe mogu direktno odražavati imunitet organizma. AA je bio blisko povezan sa THC, RB i PA hemocita, što je rezultiralo aktivacijom adaptivnog imunog sistema [64,65].

U ovoj studiji, THC, RB i PA u hemolimfi morskih uši su značajno povećani dijetalnim AA. Ukazano je da su stepenovani nivoi AA u ishrani uspeli da poboljšaju imunološku funkciju u abalonu. Slični rezultati uočeni su kod nilske tilapije i travnatog škampa (Penaeus monodon) [64,66]. RB u serumu crvenog močvarnog raka (Procambarus clarkii) i PA u serumu hibridnog sorubim soma (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) značajno su smanjeni nakon visokog nivoa dijetetskih suplemenata AA (321,38 mg/kg i 850 mg/kg). kg, respektivno) [67,68]. Međutim, nije uočen značajan pad THC-a, RB-a i PA u hemolimfi morskog ušica u tretmanu visokim nivoima dijetetskih suplemenata AA (4821,17 mg/kg).

Lizozim, C3 i C4 igraju ključnu ulogu u urođenom imunitetu i štite životinje od patološke infekcije [69–71]. U ovoj studiji, LZM u CFH morskih ušica je značajno povećan nakon stepenovanih nivoa dijetalnih AA. Ovo je bilo slično rezultatima prethodnih studija na kobiji (Rachycentron canadum), korejskoj kamenoj ribi (Sebastes schlegelii) i škarpini (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. Nedostatak AA je smanjio sadržaj C3 i C4 u amuru, a dijetalni AA bi mogao značajno poboljšati imunološke parametre kao što su C3 i C4 kod velikog brancina [35,74]. U ovoj studiji, međutim, sadržaj C4 u CFH morskih ušica nije bio pod uticajem nivoa AA u ishrani. Postojao je trend povećanja sadržaja C3 u CFH morskih ušica, iako sadržaj C3 nije značajno poboljšan dijetalnim AA. Ovi rezultati su otkrili da dodatak prehrani AA može poboljšati sposobnost eliminacije infekcije patogena LZM-om i C3, a ne C4, kako bi se poboljšale imunološke barijere morskih ušica.

Urođeni imunitet je od vitalnog značaja za morsko uši zbog odsustva adaptivnog imuniteta kod beskičmenjaka [43,49]. TLR igraju vitalnu ulogu u urođenom imunološkom sistemu protiv različitih mikroba [75]. PAMP-aktivirani TLR regrutuju specifične molekule adaptera da aktiviraju faktore transkripcije, kao što su NF-κB i AP-1, koji određuju ishod urođenog imunološkog odgovora [76]. TLR signalizacija je klasificirana u dva različita puta: MyD88- zavisan i MyD88-nezavisan, koji induciraju različite citokine kao što su TNF- i IL-1 kod sisara i drugih vodenih životinja [77,78 ]. U MyD88-zavisnom putu, MyD88 stupa u interakciju sa IRAK4, a zatim stupa u interakciju sa TRAF6 [79]. TRAF6 može aktivirati TGF- -aktiviranu kinazu 1 (TAK1) i TAK1-vezujuće proteine ​​(TAB) [80]. TAK1 aktivira IKK kompleks, koji može fosforilizovati IκB koji se vezuje za NF-κB podjedinice (koje se sastoje od p50 i p65) i fosforiliše MAPK i JNK, što promoviše translokaciju AP-1 u jezgro [81]. Uništavanje IκB olakšava nuklearnu translokaciju NF-κB [82]. Nuklearni NF-κB i AP-1 ciljaju na transkripciju citokina, kao što su TNF- i IL-1, koji su dobro poznati kao pro-upalni medijatori koji potiču upalu [76,77,83] . U MyD88-nezavisnom putu, TRAM je neophodan i zauzima ključnu ulogu u ovom putu [84]. Intracelularne komponente nizvodno od TLR signalnog puta su obično i visoko očuvane između kralježnjaka i beskičmenjaka [60,85]. Intrahepatična ekspresija TLR4 je smanjena kod miševa kojima je davana AA (Mus musculus) [86]. AA je pokazao korisnu hepatoprotekciju protiv imunološkog oštećenja jetre izazvane konkavalinom A kod miševa inhibicijom NF-κB signalnog puta [87,88]. Stoga bi se iz ovih rezultata moglo zaključiti da AA može utjecati na TLR signalni put. Međutim, ostaje nepoznato kako AA regulira TLR signalni put kod vodenih životinja, posebno kod mekušaca.

U ovoj studiji, nivoi mRNA tlr2 i tlr4 u probavnoj žlijezdi su značajno smanjeni stepenom razine AA u ishrani. Pretpostavlja se da je TLR signalni put pokrenut AA u probavnoj žlijezdi morskog ušica (slika 7). Termin-a i tlr-b imali su širi kapacitet prepoznavanja obrazaca i bili su uključeni u antibakterijski i antivirusni imunitet morskih ušica [89]; međutim, osnovni mehanizam the-a/b je još uvijek nepoznat. Međutim, nivo tlr-b nije bio pod uticajem dijetalnih AA, a tlr-a je značajno povećan AA u ovoj studiji. Potrebne su dalje istrage. Ekspresije myd88, irak4 i traf6, kao i ekspresija proteina MyD88, u probavnoj žlijezdi morskog uši su smanjene suplementacijom AA, a na nivo traf4 nije utjecao dijetetski AA. TRAF4 djeluje kao prigušivač u TLR-posredovanoj signalizaciji potiskivanjem TRAF6 [90]. Naznačeno je da inhibicija TLR puta putem AA u ishrani nije posredovana putem traf4 u probavnoj žlijezdi morskog ušica. Nivo mRNA iκb u probavnoj žlijezdi nije bio pod utjecajem AA. Međutim, NF-κB se može prenijeti u jezgro tek nakon razgradnje IκB fosfata [91]. Ekspresija mRNA nf-κb i ekspresija proteina nuklearnog NF-κB p65 u probavnoj žlijezdi značajno je smanjena dijetalnim AA. Ovi rezultati sugeriraju da AA može potisnuti fosforilaciju IκB proteina kako bi se smanjio nuklearni NF-κB. IKK može aktivirati NF-κB p65 da pokrene NF-κB kanonski put, a IKK može aktivirati NF-κB p52 da pokrene NF-κB nekanonski put [92]. Naznačeno je da dijetetski AA može aktivirati kanonski put NF-κB u probavnoj žlijezdi morskog ušica. Nadalje, ekspresije mRNA tram, p38 marke, junk, ap-1 i tnf- i nivo proteina zrelog IL-1 su značajno smanjeni dijetalnim AA. Ovi rezultati sugeriraju da dijetetski AA može inhibirati TLR signalni put kroz Myd88-zavisni put preko NF-κB, p38 mark/ap-1 i JNK/ap-1, i Myd{{ 43}}nezavisne puteve za ublažavanje upale u probavnoj žlijezdi morskog ušica. U škrgama, AA je također utjecala na TLR signalni put (slika 7). Međutim, nivoi mRNK tramvaja, p38 oznake, smeća i ekspresije proteina zrelog IL-1 nisu se značajno razlikovali. Ovi rezultati su pokazali da dijetetski AA može potisnuti TLR signalni put kroz Myd{47}}zavisni put, a ne MyD{48}}nezavisan. Inhibirani TLR put ublažio je upalu u škrgama morskih ušica putem NF-κB i p38 mark/ap-1 puta, a ne JNK/ap-1 puta. Dijetalna AA imala je jači učinak na TLR put u probavnoj žlijezdi nego u škrgama morskih ušica.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】