Funkcije čišćenja različitih ekstrakcijskih dijelova C. Deserticola protiv zatvora model štakora

SAŽETAK: CILJ Istražiti laksativno djelovanje različitih ekstrahiranih dijelova C. deserticola. METODE Imodium konstipacijski model pacova je uspostavljen za posmatranje defekacije i određivanje gastrointestinalnih hormona i neurotransmitera, itd. REZULTATI Različiti ekstrahovani dijelovi C. deserticola morali su promovirati efekte na izlučivanje konstipacije pacova. U poređenju sa modelnom grupom, SS, AchE, SP i MTL oligosaharidnog dijela su imali tendenciju porasta, 5-HT, VIP i NT oligosaharidnog dijela značajno su porasli (P<0. 05 or P<0. 01), AQP3 significantly reduced (P<0. 01), which suggested that the oligosaccharide part had obvious therapeutic effects. The remaining parts showed no significant difference. Oligosaccharide was an ef-the festive working part of C. deserticola. CONCLUSION The oligosaccharide of C. deserticola has good purging effects, and can effectively treat constipation, which provides the scientific basis for pharmaceutical development.

KLJUČNE RIJEČI:C. deserticola; purge; gastrointestinalni hormoni; neurotransmiteri; oligosaharidi

Cistanche deserticola je suha, ljuskava, mesnata stabljika biljke Orobaceae Cistanche deserticola ili cjevastog cvijeta Cistanche deserticola. Poznat je kao "pustinjski ginseng" i ima funkcije kao što su vlaženje crijeva, poticanje pražnjenja crijeva, toniziranje bubrega i jačanje janga. Cistanche deserticola djeluje umirujuće i laksativno i pogodna je za liječenje zatvora kod osoba slabog tijela. Trenutno postoji mnogo izvještaja o učinku defekacije Cistanche deserticola, ali postoji malo poređenja razlika u efektima defekacije različitih dijelova ekstrakcije. Naša istraživačka grupa je prethodno istraživala učinak cistanche deserticola na defekaciju na pacove sa opstipacijom i normalne pacove. Kako bi identifikovala njegove djelotvorne dijelove, naša istraživačka grupa je dalje istraživala razlike u efektu defekacije različitih ekstrakata Cistanche deserticola na pacove koji su opstipirani, pružajući naučnu osnovu za razvoj novih lijekova.

Pustinjski ginseng

Kliknite ovdje da pogledate Cistanche proizvode

【Zatražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Materijal

1.1 Probni lijek

Cistanche deserticola je kupljena od Inner Mongolia Wangyedi Co., Ltd., a identificirala ju je profesor Zhai Yanjun sa Univerziteta tradicionalne kineske medicine Liaoning kao suhu, ljuskavu, mesnatu stabljiku biljke Cistanche deserticola YCMa iz porodice kineske medicine; Loperamid hidrohlorid kapsule (trgovački naziv: Yimengting, broj serije: 150413966, Xi'an Janssen Pharmaceutical Co., Ltd.); Tongbianling kapsule (broj serije 12090202, Jinan Limeng Pharmaceutical Co., Ltd.); Aktivni ugljen (serijski broj 20040602, Liyang Zhuxi Activated Carbon Co., Ltd.); Komplet za supstancu P (SP) (serijski broj: BPE30328), somatostatin (SS) (serijski broj: BPE30378), komplet za motilin (MTL) (broj serije: BPE30376), komplet za acetilholinesterazu (AchE) (serijski broj: BPE30063), vazoaktivni komplet za testiranje crijevnih peptida (VIP) (serijski broj BPE31682), 5-hidroksitriptamin (5-HT) test kit (serijski broj BPE30326), komplet za testiranje akvaporina 3 (AQP3) (serijski broj BPE30361), neurotenzin ( NT) test kit (serijski broj BPE30823), sve je obezbedio Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd; Preostali reagensi su analitički čisti.

Superman herbs cistanche

1.2 Instrument 

Instrument za označavanje enzima (Thermo Fisher Scientific, SAD); TGL-16C stolna centrifuga (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Elektronska vaga (Shanghai Yousheng Weighing Instrument Co., Ltd.); Vrtložni mikser (Šangaj Qingpu Huxi tvornica instrumenata); Kutija s konstantnom temperaturom i vlagom (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.).

1.3 Životinja

SD pacovi, tjelesne težine od 180-220g, SPF ocjena, obezbjeđen od Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., broj licence SCXK (Liao) 2015-0001.

2 Metode

2.1 Priprema različitih ekstrahovanih delova Cistanche deserticola

Cistanche deserticola kriška

Uzmite odgovarajuću količinu odvarnih komada Cistanche deserticola, dodajte 8 puta veću količinu vode, zagrijte i refluksirajte da biste ekstrahirali 3 puta, svaki put po 1 sat. Kombinujte filtrat, smanjite pritisak i koncentrujte do relativne gustine od 1,15 (mereno na 50 stepeni), dodajte 95 procenata etanola u 60 procenata sadržaja alkohola, taložite na niskoj temperaturi 12 sati, filtrirajte i precipitirajte do mesta ekstrakcije ukupnog polisaharida ; Uzeti tečnost dobijenu vakuumskom koncentracijom, prečistiti je makroporoznom smolom, isprati je vodom, sakupiti rastvor za pranje vodom i ispariti do suva da bi se dobila ukupna frakcija oligosaharida; Zatim eluirati sa 40 posto etanola, sakupiti eluent od 40 posto etanola, koncentrirati pod sniženim pritiskom i osušiti kako bi se dobili ukupni glikozidi. Svaki izvađeni dio otopite u vodi i ostavite sa strane.

Eksperiment s cistanche deserticola

2.2 Grupisanje

Nakon jedne sedmice adaptivnog hranjenja, SD štakori su nasumično podijeljeni u 6 grupa sa po 8 pacova u svakoj grupi, uključujući normalnu kontrolnu grupu, modelsku grupu, pozitivnu kontrolnu grupu, grupu ukupnih polisaharida, grupu ukupnih oligosaharida i grupu sa ukupnim saponinom. Uzeti su normalni pacovi. Osim normalne kontrolne grupe, svaka grupa pacova je dobila 3.0mg · kg-1 kapsule loperamid hidrohlorida (trgovački naziv: Yimengting) putem sonde tokom tri uzastopna dana kako bi se ponovio model opstipacije. Nakon uspješnog modeliranja, osim normalne kontrolne grupe i grupe modela, štakori u svim ostalim grupama su kontinuirano davani u dozi od 1mL/100g tokom 9 dana sa koncentracijom od 2,74g · kg-1 koja odgovara uzorku za testiranje . Normalnoj kontrolnoj grupi i modelnoj grupi davana je ista količina fiziološkog rastvora.

Cistanche deserticola kriška

2.3 Indikatori posmatranja

2.3.1 Status defekacije pacova

Nakon posljednje primjene, pacovi su postili 12 sati i nisu mogli a da ne vode. Svakoj grupi je dato 20 posto aktivnog uglja putem sonde u količini od 25 mL · kg-1. Štakori su stavljeni u metabolički kavez i posmatrani su broj čestica i težina crne stolice izlučene u roku od 6 sati.

2.3.2 Nivoi ekspresije različitih indikatora u serumu, plazmi i tkivu debelog crijeva pacova

Nakon završetka posmatranja, svi pacovi su nastavili da poste 6 sati i nisu mogli a da ne vode. Iz cijele trbušne aorte uzeto je oko 5 mL krvi i stavljeno u dvije EP epruvete, od kojih je u jednu dodat heparin 50 unaprijed μL. Za sakupljanje plazme, a drugu za prikupljanje seruma. Nakon stajanja od 30 minuta, centrifugirajte na 2500r · min{5}} 5 minuta, odvojeno sakupite serum i plazmu, uzmite supernatant za testiranje i čuvajte na -70 stepeni na niskoj temperaturi. Secirano je tkivo debelog crijeva 2 cm nakon uklanjanja slijepe valvule. Sadržaj je ispran fiziološkim rastvorom i osušen filter papirom i dodana je odgovarajuća količina PBS (pH 7,4). Centrifugirajte na 4 stepena 3500r · min-1 15 minuta i supernatant je uzet za testiranje. Supernatant je pohranjen na -70 stepeni na niskoj temperaturi. Uzmite serum, plazmu i supernatant tkiva debelog crijeva prema uputama iz kompleta i operite SS, AchE, SP, MTL, 5-HT, VIP, NT i AQP3.

2.4 Obrada podataka

SPSS 17.0 statistički softver je korišten za analizu varijanse, a svi podaci su izraženi u 珚 x ± s. t-test je proveden za međugrupne razlike, a P<0.05 was considered significant and statistically significant.

3 rezultata

3.1. Utjecaj na defekaciju kod pacova sa zatvorom

U poređenju sa normalnom kontrolnom grupom, fekalne čestice i težina pacova modelne grupe pokazali su opadajući trend. U poređenju sa modelnom grupom, grupe Cistanche deserticola pokazale su trend povećanja broja fekalnih čestica i fekalne težine kod pacova. Grupa ukupnih oligosaharida Cistanche deserticola pokazala je veći trend u odnosu na druge tretirane grupe, ali nije bilo statističke značajnosti, što ukazuje da je grupa ukupnih oligosaharida imala značajan terapeutski efekat i bila je efikasno mjesto djelovanja. Rezultati su prikazani u tabeli 1.

Tab 1 Efekti test uzoraka na broj otpadnih zrna i masu izmeta pacova sa zatvorom (士s,n=8)

3.2 Učinci na nivoe SS, NT i AchE u serumu kod pacova modela opstipacije

Iz rezultata u Tabeli 2, može se vidjeti da su u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom, SS i NT štakora modelne grupe značajno smanjeni (P<0.01), and AchE showed a downward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the NT of rats in each treatment group was significantly increased (P<0.05), while SS and AchE showed an increasing trend. Among them, the total oligosaccharide group showed a significant increase, indicating that the total oligosaccharide had a significant therapeutic effect and was an effective site of action for Cistanche deserticola.

3.3 Efekti na nivoe SP i MTL u plazmi kod pacova modela konstipacije

Iz rezultata u Tabeli 3, može se vidjeti da su u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom, SP i MTL štakora modelne grupe značajno smanjeni (P<0.05 or P<0.01), indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the SP and MTL of rats in each treatment group showed an increasing trend. Among them, the SP of rats in the total oligosaccharide group was significantly increased compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and the MTL showed an increasing trend, but there was no statistical difference, indicating that the total oligosaccharide group had a significant therapeutic effect and was an effective part of Cistanche deserticola.

Tab 2 Učinak test uzoraka na SS, NT i AchE u serumu pacova konstipacije (士s,n=8)

Napomena: U poređenju sa normalnom kontrolnom grupom, aP<0.05, bP<0.01; Compared with the model group, cP<0.05, dP<0.01; Compared with the total oligosaccharide group, eP<0.05, fP<0.01 (the same in the following table)

3.4 Utjecaj na AQP3, 5-HT, VIP sadržaj u tkivu debelog crijeva kod pacova modela opstipacije

U poređenju sa normalnom kontrolnom grupom, 5-HT i VIP štakora modelske grupe su značajno smanjeni (P<0.05 or P<0.01), and AQP3 showed an upward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the 5-HT, and VIP of the total oligosaccharide group rats were significantly increased (P<0.05 or P<0.01), while AQP3 was significantly reduced (P<0.01). The AQP3 and 5-HT of the total oligosaccharide group rats showed significant differences compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and VIP showed an upward trend, but there was no statistical difference, It indicates that the total oligosaccharide group has significant therapeutic effects and is the effective site of action for Cistanche deserticola (Table 4).

Tab 3 Učinak test uzoraka na SP i MTL u plazmi pacova konstipacije (士s,n=8)

4 Diskusija

Konstipacija je uobičajena klinička bolest usko povezana s gastrointestinalnim motilitetom. MTL i SP su ekscitatorni peptidi s regulatornim funkcijama u gastrointestinalnom motilitetu, koji mogu promovirati gastrointestinalni motilitet. NT se nalazi u nervnom tkivu, distalnom ileumu i jejunumu i ima funkciju poboljšanja motiliteta debelog crijeva. SS postoji u intestinalnom nervnom pleksusu i D ćelijama pankreasa i želuca, koji mogu inhibirati gastrointestinalnu peristaltiku, produžiti vrijeme tranzita debelog i tankog crijeva [6] i inhibirati lučenje VIP i drugih gastrointestinalnih hormona. 5-HT je važan neurotransmiter u enteričkom nervnom sistemu, koji može potaknuti sekreciju i peristaltiku crijeva. AQP3 se nalazi u epitelnim ćelijama probavnog trakta i igra važnu ulogu u apsorpciji vode. Ovaj eksperiment ima terapeutski učinak na zatvor regulacijom ovih gastrointestinalnih hormona i intestinalnih neurotransmitera.

Mjesto ekstrakcije ima promotivni učinak na izlučivanje pacova sa opstipacijom. U poređenju sa modelnom grupom, ukupna grupa oligosaharida pokazala je trend rasta u SS, AchE, SP i MTL, uz značajno povećanje 5-HT, VIP i NT (P<0.05 or P<0.01), and a significant decrease in AQP3 (P<0.01), indicating that the total oligosaccharide group has a significant therapeutic effect, There was no significant difference between the other groups, and total oligosaccharides were the effective active sites of Cistanche deserticola. The total oligosaccharides of Cistanche deserticola have good moisturizing and defecating effects, which can effectively treat constipation. It is hoped that this result will provide a scientific basis for the development of new drugs.

Tab 4 Efekat AQP3, 5-HT i VIP u tkivima debelog creva pacova (士s,n=8)

referenca:

[1] Kineska farmakopeja. Dio 1 [S]. 2010:126

[2] Zhong Ping. Pustinjski ginseng i cistanche [J]. Šuma i čovjek, 2004, 24 (11): 25

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai, et al. Istraživanje Cistanche deserticola i njenog industrijskog razvoja [J]. Kineski časopis za farmaciju, 2011, 46 (12): 882-886

[4] Wu Feng, Zhao Xi, Xue Hua, et al. Učinak aloe vere Lingzhi kapsula na vlaženje crijeva i ublažavanje zatvora [J]. Journal of Transportation Medicine, 2008, 22 (4): 338

[5] Foxx OA, Camilleri M, Ste PD, et al. Učinak analoga somatostatin-kalaja na motoričke i senzorne funkcije želuca kod zdravih ljudi[J]. Gut, 2003, 52: 1555-1561.

[6] Park JH, Rhee PL, Kim G, et al. Broj enteroendokrinih ćelija korelira s visceralnom preosjetljivošću kod pacijenata sa sindromom iritabilnog crijeva koji dominira dijarejom[J]. Neurogastro-enterol Motil, 2006, 18(7): 539-546.

[7] Brancati SB, Zadori ZS, Nemeth J, et al. Supstanca P izaziva zaštitu želučane sluznice na supraspinalnom nivou povećanjem nivoa endomorfina-2 kod pacova[J]. Brain Res Bull, 2013,91(2):38-45.

[8] Fukuda A, Goto T, Kuroishi KN, et al. Hemokinin-1kompetitivno inhibira supstancom P-indukovanu stimulaciju formiranja i funkcije os-teoklasta[J]. Neuropeptidi, 2013, 47 (4):251-259.

[9] Layer PK, Laczinski J, Salfelder A, et al. Kolinesteraze u razvoju: AChEasa zaštitni zid za inhibiciju proliferacije ćelija i podršku diferencijaciji[J]. Chem Biol Interact, 2013, 203(1):227-269.