Receptor aktiviran proteazom 1 doprinosi neuspjehu mikrocirkulacije i oštećenju tubula kod bubrežne ishemije-reperfuzijske ozljede kod miševa

Yu Guan,¹Daisuke Nakano,²Lei Li,³Haofeng Zheng,³Akira Nishiyama,²Ye Tian ,¹i Lei Zhang¹

da ublaži stvarni kvar sacistanche herb

1. Uvod

Thebubregne može izbjeći ishemijsko-reperfuzijsku (IR) ozljedu tokom parcijalne nefrektomije ibubregtransplantacije [1], za koju je poznato da rezultira zadržavanjem metaboličkih otpadnih proizvoda i dovodi do akutnogbubregpovreda (AKI) iAKI-hroničnibubregbolest (AKI-CKD) [2]. Do danas nije klinički dostupna specifična terapija lijekovima za AKI i AKI-CKD [3]. Nekoliko uobičajenih patoloških promjena javlja se kod AKI, kao što je zatajenje mikrocirkulacije [4], uključujući kongestiju i krvarenje, te akutnu tubulnu nekrozu [5]. Stoga su se studije fokusirale na ciljanje ovih patoloških promjena kao potencijalnih terapeutskih kandidata. Prethodno smo pokazali da održavanje peritubularnih kapilara nakonbubrežniIR ozljeda je smanjila kapilarnu kongestiju i poboljšala prijelaz AKI u CKD [6]. Akutna tubularna nekroza može biti teška za liječenje; stoga, regeneracija tubula kroz proliferaciju tubularne ćelije može biti važan pristup za prevenciju daljeg gubitka bubrežne funkcije [7].

Receptor aktiviran proteazom-1 (PAR-1) pripada porodici receptora aktiviranih proteazom (PAR) i poznato je da ga trombin stimulira da indukuje koagulaciju trombocita. Nedavno smo pokazali da je PAR-1 doprinio razvoju akutno indukovane glomerularne povrede [8]. Dodatno, prijavljeno je da trombin/PAR-1 igra ulogu u proliferaciji epitelnih ćelija i apoptozi. Na osnovu ovih karakteristika, pretpostavili smo da PAR-1 ubrzava ozbiljnost AKI regulacijom ili peritubularne kapilarne koagulacije krvi ili tubularne regeneracije. U ovoj studiji smo ispitali ulogu PAR-1 koristeći Q-94, PAR-1-selektivni negativni alosterični modulator, kod mišabubrežniModel IR ozljede i kultivirane ljudske tubularne stanice stimulirane trombinom.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

2. Materijali i metode

2.1. Akutni bubrežni IR model miša.

Svi eksperimenti na životinjama izvedeni su u skladu s eksperimentalnim smjernicama Odbora za brigu o životinjama i korištenjem institucionalnog medicinskog univerziteta Capital. ThebubregIR model miša je uspostavljen kao što je prethodno opisano [8]. Ukratko, 8-sedmično stari C57/BL6 mužjaci miševa anestezirani su injekcijom pentobarbital natrijuma (50 mg/kg; ip) i nasumično podijeljeni u sljedeće grupe: lažni, I/R plus nosač i I/R (nosač: fiziološki rastvor 10 mg/kg iv) plus Q94 (PAR-1 antagonist od 10 mg/kg iv) grupe (n=7-8 u svakoj grupi). Za protokol renalne toplotne IR ozljede, miševi su podvrgnuti uninefrektomiji kako bi se procijenilo oštećenje bubrežne funkcije; nakon jedne sedmice, bubrežna pedikula je stegnuta vaskularnim klipovima bez oštećenja na 30 min. Nakon reperfuzije od 48 h, miševi su žrtvovani; njihovi uzorci bubrežnog tkiva su sakupljeni i fiksirani u 4-postotnom rastvoru paraformaldehida za pripremu parafinskih blokova. Dobivena je plazma za mjerenje azota ureje u krvi (BUN) i kreatinina.

2.2. Materijali.

Q94 je kupljen od Tocris Bioscience (Bristol, UK). Ostale hemikalije su dobijene od Sigma Aldrich (St. Louis, MO, SAD) osim ako nije drugačije navedeno.

2.3. Test za kreatinin i BUN.

Za mjerenje kreatinina korišteni su komercijalni setovi za analizu (Creatinine Assay Kit ab65340; Abcam, Cambridge, UK). Kompleti za analizu BUN kupljeni su od ABSBio™ (urea NITROGEN Kit, CNHAO BIO, Peking, Kina).

2.4. Histologija.

Prije ugradnje u parafin, tkivo bubrega je fiksirano sa 4 posto paraformaldehida. Parafinski blokovi bubrega su isječeni na 2 μm sekcije i postavljeni na stakalce preko noći na 25 stepeni C. Nakon deparafinizacije, rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom (H&E). Slike su dobijene mikroskopom (BX-51/DP-72; Olympus, Tokio, Japan). Kao što je prethodno opisano [9], oštećenje bubrežnih tubula je dijagnosticirano na osnovu nekoliko histopatoloških promjena, kao što su tubularna dilatacija, kongestija/hemoragija, gubitak ivice četkice, formiranje tubulnog odljevka i liza stanica sa izlijepljenim ostacima u tubularnom lumenu. Oštećenje tubula je ocijenjeno prema postotku oštećenih tubula: 0, bez oštećenja; 1,<25%; 2,="" 25–50%;="" 3,="" 51–75%;="" and="" 4,="">75 posto. Bodovanje je obavljeno na slijepi način.

2.5. Imunofluorescencija i imunohistohemija.

Sekcije su pripremljene kako je opisano za histološki (H&E) test, a zatim inkubirane sa 0.3 posto vodonik peroksida 30 minuta kako bi se blokirale endogene peroksidaze nakon deparafinizacije ksilenom. Za pronalaženje antigena, sekcije su inkubirane sa proteinazom K (DAKO Cytomation, Glostrup, Danska) 10 min. Nakon blokiranja sa 10 posto kozjeg seruma, sekcije su inkubirane sa primarnim antitelima preko noći na 4 stepena C (anti-Kim 1 antitelo, ab47635, Abcam; anti Ki67 antitelo, ab15580, Abcam; anti-PAR{12}} antitelo, ab32611 , Abcam). Nakon inkubacije sa primarnim antitelom, sekcije su inkubirane sa sekundarnim antitelom na 25 stepeni C tokom 1 h. DAB supstrat (DAKO) je korišten za vizualizaciju rezultata imunohistohemijskog (IHC) bojenja. Signali fluorescencije su detektovani pomoću Alexa Fluor 594-obilježenog sekundarnog antitijela. Slike su snimljene pomoću FL fluorescentnog mikroskopa (BX51; Olympus) sa odgovarajućim filterom. Za analizu pozitivnih područja korišten je softver ImageJ (NIH, Bethesda, MD, USA).

2.6. PCR u realnom vremenu.

Da bi se procijenila regulacija ekspresije mRNA u ovim uvjetima, mRNA je izolirana iz tkiva bubrega. PCR sistem (7300 Fast Real-Time; Applied Biosystems, Foster City, Kalifornija, SAD) i Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR Green I kit (Applied Biosystems) korišteni su za detekciju nivoa 18S i PAR-1 mRNA. Prajmer sekvence su bile sljedeće: 18S —5′ -GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′, 5′-CCATCCAATCG GTAGTAGCG-3′; PAR-1—5′-GTTGATCGTTTCCACG GTCT-3′, 5′-GCTGCCTCTGTACCAGGACT-3′. Relativni nivoi mRNA određivani su metodom 2−ΔΔCq. Vrijednost ΔΔCq je izračunata korištenjem podataka iz kontrolne grupe.

2.7. Postavke hirurške procedure i in vivo multifotonske slike.

Miševi su anestezirani sa 2 posto izofurana (Mylan, Osaka, Japan). Nakon traheotomije, jugularna vena je kanulirana za injekciju fluorescentne boje i infuziju tekućine za održavanje, koja se sastojala od 1.0 μL/min 2 posto albumina u fiziološkom rastvoru puferiranom fosfatom. Lijevi bubreg svakog miša je eksterioriziran kroz mali rez na boku i pričvršćen za pokrovno staklo. Mikroskopski stub i životinje su zagrejani pomoću grejne podloge tokom svih eksperimentalnih procedura. Intravitalna multifotonska mikroskopija je izvedena korištenjem Olympus FV1000MPE multifotonskog konfokalnog fluorescentnog sistema za snimanje koji pokreće Chameleon Ultra-II MP laser na 860 nm (Coherent, Inc., Santa Clara, CA, SAD). Objektiv mikroskopa bio je 25x vodeno sočivo sa numeričkim otvorom od 1,05. Postavke slike za mikroskop (pojačanje i pomak za sva tri kanala; plavi, zeleni i crveni) su fiksirani tokom eksperimenta. Nakon perioda oporavka od 30 minuta, rodamin B- 70kD dekstran je ubrizgan intravenozno, a 3-D z-stack slike su snimljene na dubinama od 5-50 μm (2 μm) od površine bubrega.

2.8. Cell Culture.

Ćelije ljudskog bubrega 2 (HK2) su dobijene iz Banke ćelija Akademije nauka (Šangaj, Kina) i kultivisane kao što je prethodno opisano [10]. Ćelije su uzgajane u Dulbecco-ovom modificiranom mediju Eagle sa dodatkom 10 posto fetalnog goveđeg seruma i 1 posto penicilin-streptomicina u vlažnoj atmosferi od 95 posto zraka i 5 posto CO2 na 37 stepeni.

2.9. WST-1 testovi za procjenu proliferacije ćelija.

HK2 ćelije su posađene u ploče sa 6-jažicom pri gustini od 1×104 ćelija/-jažici. Nakon stimulacije HK2 ćelija trombinom, WST- 1 testovi su izvedeni prema protokolu proizvođača (katalog #C0035; Beyotime, Šangaj, Kina) kako bi se odredila proliferativna sposobnost ćelija. Nakon 2 sata inkubacije sa 100 μL WST-1 reagensa u svakoj jažici, mjerena je apsorbancija uzoraka pomoću čitača mikroploče na talasnoj dužini od 450 nm.

2.10. Kaspaza{2}} analiza.

Aktivnost kaspaze-3 mjerena je korištenjem komercijalno dostupnog kompleta aktivnosti kaspaze-3 (katalog #C1116; Beyotime, Šangaj, Kina) [11]. Nakon inkubacije sa reagensom za aktivnost kaspaze-3, apsorbancija uzoraka je detektirana pomoću čitača mikroploča (Spectra-Max M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) na 405 nm prema uputama proizvođača.

2.11. Podaci i statistička analiza.

Jednosmjerna analiza varijanse korištena je za poređenje više grupa, nakon čega je uslijedio Tukeyjev test višestrukog poređenja. Za poređenje dvije pojedinačne grupe koristili smo Studentov t-test. Smatra se da p < 0:05="" ukazuje="" na="" statistički="" značajne="">

Cistanche tubulosasprečava bolest bubrega

3. Rezultati

3.1. PAR-1 Ekspresija u IR bubregu.

Prvo smo potvrdili ekspresiju PAR-1 i efekte IR-a na nivo njegove ekspresije ububreg. Uočili smo skoro 2-putostruko povećanje nivoa ekspresije PAR-1 mRNA u poređenju sa onim kod lažnih hirurških miševa nakon 48 h (Slika 1(a)). Također smo mjerili ekspresiju PAR-1 imunofluorescencijom 48 h nakon IR. PAR-1 je izražen u tubularnoj ćelijskoj graničnoj membrani. Nivo PAR-1 FL fluorescencije je povećan u poređenju sa miševima lažne grupe (Slike 1(b) i 1(c)). Ovi podaci sugeriraju da su i lokalizacija PAR-1 u tubularnim ćelijama i nivo njegove ekspresije povećani nakon IR u bubregu.

3.2. Bubrežna funkcija i histopatološke promjene. Procijenili smobubregfunkcija otkrivanjem nivoa BUN-a i kreatinina u plazmi. I/R je izazvao povećanje nivoa BUN-a i kreatinina u poređenju sa miševima koji su bili podvrgnuti lažnoj operaciji. Štaviše, IR-indukovano povećanje nivoa BUN značajno je smanjeno kod miševa tretiranih Q94- (Slika 2(a)). Nivo kreatinina u serumu bio je inhibiran kod miševa tretiranih Q94- u poređenju sa miševima koji su bili podvrgnuti samo IR operaciji (Slika 2(b)). Ovi podaci sugeriraju da administracija Q94 može zaštititibubregfunkcija nakon IR ozljede.

Također smo procijenili renalne histopatološke promjene izvođenjem H&E bojenja. Renal IR značajno je povećao formiranje gipsa, dilataciju tubula i gubitak ruba četkice i zagušenje/krvarenje kod miševa tretiranih nosačem u poređenju sa lažnim miševima. Tretman Q94 je značajno potisnuo ove promjene izazvane IR (Slike 2(c) i 3(a)). Analiza rezultata H&E bojenja između grupa otkrila je skor kongestije/hemoragije i skor oštećenja tubula za svaku grupu. Miševi grupe Q94 pokazali su mnogo niži rezultat (Slike 2(e) i 3(c)). Također smo obojili Kim{7}} kao abubregmarker oštećenja bubrežnih tubularnih ćelija IHC [12]. Kim{1}}pozitivna područja su povećana u bubrežnom tubularnom području kod miševa sa IR insultom, koje su značajno potisnute Q94 (Slike 2(d) i 2(f)). Ovi podaci sugeriraju da Q94 može potisnutibubregoštećenje tubula uzrokovano IR ozljedom.

3.3. Abnormalni protok krvnih stanica u in vivo snimanju.

PAR-1 i njegov ligand trombin igraju važnu ulogu u kongestiji; Q94 je značajno poboljšao zagušenje. Zbog toga smo radili intravitalno snimanje multifotonskom mikroskopijom. Ovo omogućava posmatranje krvnih ćelija u peritubularnoj kapilari u realnom vremenu kod živih miševa (Slika 3(c)). Plazmu je vizualizirao dekstran od 70 kDa konjugiran sa rodaminom B (slika 3(d)). Krvne ćelije koje ne stvaraju FL fluorescenciju kao odgovor na laser korištene su za pobuđivanje rodamina B i prikazane kao sjene. Kao što je prikazano na slici 3(e), bubrežna IR je poremetila redovno praćenje krvnih zrnaca i izazvala zatajenje mikrocirkulacije. Q94 poboljšao peritubularne kapilarne krvne ćelije.

3.4. Proliferacija tubularne ćelije nakon IR ozljede.

Prijavljeno je da proliferativna regeneracija tubularnih stanica igra važnu ulogu u obnavljanju tubularne strukture i bubrežne funkcije nakon IR ozljede. Poznato je da PAR-1 modificira proliferaciju epitelnih ćelija kada se aktivira trombinom. Stoga smo otkrili proliferaciju bubrežnih tubularnih ćelija u Ki-67 IHC testu. 48 h nakon IR-a, povećan je broj proliferirajućih Ki-67- pozitivnih tubularnih ćelija. Q94 je dodatno povećao povećani broj Ki-67- pozitivnih tubularnih ćelija nakon IR u poređenju sa onim samo kod miševa tretiranih IR (Slike 4(a) i 4(b)). Osim toga, provjerili smo da li je na sposobnost proliferacije ćelija utjecala inhibicija PAR-1 in vitro eksperimentima koristeći HK2 ćelije inkubirane sa trombinom, agonistom PAR-1. Proliferativna aktivnost HK2 ćelija je mjerena WST-1 testom. Kao što je prikazano na slici 4(c), proliferacija HK2 ćelija je bila dramatično potisnuta nakon tretmana trombinom. Međutim, ova trombinom indukovana inhibicija je skoro ukinuta Q94. Ovi podaci ukazuju da je PAR-1 negativno regulisao proliferaciju bubrežnih tubularnih ćelija, što je skoro ukinuto antagonistom Q94 PAR{20}}.

za ublažavanje hronične bolesti bubrega sacistanche

3.5. Apoptoza bubrežnih tubularnih ćelija.

Dalje smo ispitali apoptozu bubrežnih ćelija pomoću kaspaze-3, koja je najvažnija egzekutorska kaspaza i aktivira se i unutrašnjim i ekstrinzičnim putevima tokom apoptoze [13]. Koristeći kultivisane HK2 ćelije inkubirane u trombinu, otkrili smo da trombin povećava aktivnost kaspaze-3. Štaviše, primjena Q94 potisnula je aktivnost kaspaze-3 (Slika 4(d)). Ovi podaci ukazuju na to da je trombinom indukovana apoptoza HK2 ćelija inhibirana od strane Q94 PAR{11}} antagonista.

4. Diskusija

BubregIR ozljedu karakterizira kongestija/hemoragija, akutna tubularna nekroza, upala i taloženje gipsa [5]. Ovdje smo pokazali da je inhibicija PAR-1 poboljšala i promjene povezane s krvlju i tubulointersticijske promjene. Dobro je poznato da PAR-1 i njegov ligand, trombin, igraju važnu ulogu u koagulaciji trombocita, a interferencija ovog sistema, poput trombomodulina [14, 15], može spriječiti AKI. Pokazali smo da inhibicija PAR- 1 potiskuje kongestiju i poboljšava protok krvi u peritubularnim kapilarama kod miševa sa bubrežnom IR ozljedom, sugerirajući da je PAR-1 sistem pogoršao mikrocirkulaciju. Pored toga, nivo ekspresije PAR-1 je povećan u tubulima nakon renalne IR ozljede, što ukazuje da PAR{10}}zavisni sistem u tubulima također preuveličava bubrežnu IR ozljedu. Dobro je poznato da je regeneracija tubularnih ćelija važan proces u obnovi tubularne strukture i oporavku bubrežne funkcije nakon IR ozljede [16, 17]. Ovisno o stupnju ozljede, ovaj kapacitet popravke nije neograničen [18]. Stoga su hitno potrebne opcije liječenja za ublažavanje oštećenja tubularnih stanica ili ubrzavanje njihove proliferacije. Naša in vitro studija je pokazala da PAR- 1/trombin negativno reguliše proliferaciju tubularnih ćelija, što je zauzvrat ubrzano nakon inhibicije PAR-1. Nadalje, pokazalo se da IR ozljeda kod miševa povećava tubularnu proliferaciju nakon 48 sati, uz daljnje povećanje nakon inhibicije PAR-1. Otkrili smo da je PAR-1 povećan u membrani četkice proksimalnih tubula. Kako je prijavljeno da je funkcija barijere glomerularne filtracije smanjena tokom renalne IR ozljede [19], filtrirani trombin iz glomerula može aktivirati povećani PAR- 1, čime poremeti regeneraciju tubula.

Naši rezultati sugeriraju da je sistem PAR-1/trombin potisnuo proliferaciju tubularnih ćelija i povećao apoptozu. Međutim, druga studija je pokazala suprotne efekte PAR-1 kada se aktivira proteinom C [20, 21]. Ova očigledna konfliktna uloga PAR-1 može ovisiti o načinu njegove aktivacije. U našoj studiji, moguće objašnjenje za njegovu pripisanu ulogu bilo je da je PAR-1 aktiviran filtriranim trombinom. Veličina proteina C je preko 60 kDa, što je slično albuminu [22, 23] i mnogo veće od trombina (36 kDa). Nadalje, njegova koncentracija u plazmi (<100 nm)="" is="" less="" than="" 10%="" of="" thrombin="" (="">1 μM), što ukazuje da protein C podliježe manje filtracije i proizvodi slabiji signal u odnosu na trombin.

Trombotske epizode su faktor rizika za pacijente sa završnom bubrežnom insuficijencijom [24]. Studija je pokazala da nedostatak PAR-1 štiti od dijabetičke CKD [25]. U našoj studiji, uočili smo efekat inhibicije PAR-1 na funkciju bubrega u ranoj fazi nakon IR. U daljnjim studijama namjeravamo razviti kroničnu bolestbubregModel bolesti izazvane IR [2] za procjenu potencijalne veze između PAR-1 i CKD.

U zaključku, pokazali smo da PAR-1 pogoršava mikrocirkulaciju i negativno reguliše proliferaciju tubularnih ćelija. Nasuprot tome, inhibicija PAR-1 je doprinijela poboljšanju mikrocirkulacije i proliferaciji tubularnih ćelija i nakon IR, služeći kao istaknuti mehanizam oporavka bubrega, te bi se trebala smatrati novom strategijom u liječenju AKI.

Cistanche tubulosa sprječava bolest bubrega, kliknite ovdje da biste dobili uzorak

1Odjel za urologiju, Pekinška bolnica prijateljstva, Glavni medicinski univerzitet, Peking, Kina

2Odsjek za farmakologiju, Univerzitet Kagawa, Kagawa, Japan

3Odjel za transplantaciju bubrega, Odsjek za hirurgiju, Treća pridružena bolnica Univerziteta Sun Yat-sen,

Guangzhou, Kina

Prepisku treba uputiti na Ye Tian; kidney@ccmu.edu.cn i Lei Zhang; leizhangkidney@gmail.com Primljeno 1. januara 2021.; Revidirano 25. januara 2021.; Prihvaćeno 8. februara 2021.; Objavljeno 23. februara 2021

Akademski urednik: Junyan Liu

Autorska prava © 2021 Yu Guan et al. Ovo je članak otvorenog pristupa distribuiran podCreative Commons Attribution License, koji dozvoljava neograničenu upotrebu, distribuciju i reprodukciju u bilo kom mediju, pod uslovom da je originalno delo pravilno citirano.

Ozljedu bubrega izazvanu ishemijom-reperfuzijom (IR-) teško je izbjeći tijekom transplantacije bubrega i djelomične nefrektomije uz pomoć robota. Oštećenje bubrežnog IR-a karakterizira oštećenje tubula, zatajenje mikrocirkulacije i upala, koji koordinirano povećavaju oštećenje bubrega; međutim, ne postoji poseban tretman za ova stanja. Receptor aktiviran proteazom-1 (PAR-1) i njegov ligand, trombin, uključeni su u koagulaciju i pokazalo se da su povezani sa ozljedom epitelnih ćelija. Ovdje smo pretpostavili da PAR-1 preuveličava oštećenje tubularnih ćelija izazvano IR-om bubrega i zatajenje mikrocirkulacije i da farmakološka inhibicija PAR-1 od strane Q94 može spriječiti ove povrede. Topla IR bubrega povećala je ekspresiju PAR-1 u bubrežnim tubulima. Q94 je oslabio bubrežne IR-inducirane promjene i histopatološka oštećenja. Neuspjeh mikrocirkulacije analiziran je kongestijom u histopatologiji, a protok krvnih stanica ispitan intravitalnom multifotonskom mikroskopijom je potisnut tretmanom Q94. Q94 je također dramatično povećao proliferaciju tubularne ćelije uprkos manjem oštećenju bubrega. Trombin je potisnuo proliferaciju stanica i inducirao apoptozu u tubulima; ovi efekti su spriječeni tretmanom Q94. Uzeto zajedno, PAR-1 je bio povezan sa renalnom IR ozljedom. Inhibicija PAR-1 je ublažila ozljedu, moguće poboljšanjem mikrocirkulacije bubrega i preživljavanja/proliferacije tubularnih ćelija.

Data Availability

Autori potvrđuju da su podaci koji podržavaju nalaze ove studije dostupni u članku.

Conflicts of Interest

Svi autori su izjavili da nemaju suprotstavljene interese.

Authors' Contributions

Yu Guan i Daisuke Nakano napisali su rukopis i izveli eksperimente na životinjama. Lei Li je izvodio in vitro eksperimente. Haofeng Zheng je izvršio statističku analizu. Akira Nishiyama je revidirao rukopis. Lei Zhang i Ye Tian dizajnirali su ovu studiju.

Acknowledgments

Ovu studiju podržali su Nacionalna fondacija za prirodne nauke Kine (br. 82000712) i Kineska postdoktorska naučna fondacija (br. 2020M670385).

Reference

[1] MN Simmons, MJ Schreiber i IS Gill, "Hirurška renalna ishemija: savremeni pregled", The Journal of Urology., vol. 180, br. 1, str. 19–30, 2008.

[2] Y. Guan, D. Nakano, Y. Zhang, L. Li, Y. Tian i A. Nishiyama, "Mišji model renalne fibroze za prevazilaženje tehničke varijabilnosti u ishemijskim/reperfuzijskim ozljedama među operaterima", Scientific Izvještaji, vol. 9, br. 1, str. 10435, 2019. 7 BioMed Research International

[3] M. Joannidis i PGH Metnitz, "Epidemiologija i prirodna istorija akutne bubrežne insuficijencije na intenzivnoj intenzivnoj nezi", Klinike za kritičnu negu, vol. 21, br. 2, str. 239–249, 2005.

[4] D. Nakano, K. Doi, H. Kitamura, et al., "Smanjenje brzine tubularnog protoka kao mehanizam oligurije u ranoj fazi endotoksemije otkriven intravitalnim snimanjem," Journal of the Ameri can Society of Nephrology , vol. 26, br. 12, str. 3035–3044, 2015.

[5] D. Nakano i A. Nishiyama, "Multifotonsko snimanje patofiziologije bubrega", Journal of Pharmacological Sciences, vol. 132, br. 1, str. 1–5, 2016.

[6] Y. Zhang, D. Nakano, Y. Guan, et al., "Inhibitor kotransportera natrij-glukoze 2 ublažava ozljedu bubrežnih kapilara i fibrozu putem puta ovisnog o faktoru rasta vaskularnog endotela nakon povrede bubrega kod miševa," Bubreg International, vol. 94, br. 3, str. 524–535, 2018.

[7] S. Nishioka, D. Nakano, K. Kitada, et al., "Inhibitor kinaze zavisan od ciklina p21 je neophodan za korisne efekte bubrežne ishemijske predkondicioniranja na bubrežnu ishemiju/reperfuzijsku ozljedu kod miševa", Kidney International, vol. 85, br. 4, str. 871–879, 2014.

[8] Y. Guan, D. Nakano, Y. Zhang, et al., "Antagonist receptora-1 aktiviranog proteazom štiti od povrede podocita u mišjem modelu nefropatije," Journal of Pharmacological Sciences, vol. 135, br. 2, str. 81–88, 2017.

[9] M. Jiang, Q. Wei, G. Dong, M. Komatsu, Y. Su i Z. Dong, "Autofagija u proksimalnim tubulima štiti od akutne ozljede bubrega", Kidney International, vol. 82, br. 12, str. 1271–1283, 2012.

[10] X. Hu, M. Su, J. Lin, et al., "Corin je smanjen u renalnoj ishemiji/reperfuziji i povezan je sa odloženom funkcijom transplantata nakon transplantacije bubrega," Disease Markers, vol. 2019, ID članka 9429323, 8 strana, 2019.

[11] P. Wang, H. Wang, Q. Huang, et al., "Egzozomi iz M1- polariziranih makrofaga povećavaju antitumorsko djelovanje paklitaksela aktiviranjem upale posredovane makrofagima," Theranostics., vol. 9, br. 6, str. 1714–1727, 2019.

[12] L. Yang, CR Brooks, S. Xiao, et al., "KIM-1-posredovana fagocitoza smanjuje akutnu povredu bubrega," The Journal of Clinical Investigation, vol. 125, br. 4, str. 1620–1636, 2015.

[13] L. Xu, X. Li, F. Zhang, L. Wu, Z. Dong i D. Zhang, "EGFR pokreće progresiju AKI do CKD preko prekomjerne ekspresije HIPK2," Theranostics., vol. 9, br. 9, str. 2712–2726, 2019.

[14] T. Hifumi, D. Nakano, J. Chiba, et al., "Kombinirana terapija sa antitoksinom gasne gangrene i rekombinantnim humanim rastvorljivim trombomodulinom za sepsu _Clostridium perfringens{2}} na modelu štakora, "Toksikon, vol. 141, str. 112–117, 2018.

[15] N. Hayase, K. Doi, T. Hiruma, et al., "Rekombinantni trombomodulin sprečava akutnu povredu pluća izazvanu renalnom ishemijom-reperfuzionom povredom", Scientific Reports, vol. 10, br. 1, str. 289, 2020.

[16] E. Lazzeri, ML Angelotti, A. Paired et al., "Hipertrofija tubularnih ćelija povezana sa endociklom i proliferacija progenitora obnavljaju funkciju bubrega nakon akutne povrede bubrega", Nature Communications, vol. 9, br. 1, str. 1344, 2018.

[17] K. Takaori, J. Nakamura, S. Yamamoto, et al., "Ozbiljnost i učestalost ozljede proksimalnog tubula određuje prognozu bubrega," Journal of the American Society of Nephrology: JASN, vol. 27, br. 8, str. 2393–2406, 2016.

[18] BD Humphreys, MT Valerius, A. Kobayashi, et al., "Intrinzične epitelne ćelije popravljaju bubreg nakon povrede", Cell Stem Cell, vol. 2, br. 3, str. 284–291, 2008.

[19] R. Wakasaki, K. Matsushita, K. Golgotiu, et al., "Proteini glomerularnog filtrata u akutnom kardiorenalnom sindromu", JCI Insight, vol. 4, br. 4, 2019.

[20] M. Riewald, RJ Petrovan, A. Donner, BM Mueller, i W. Ruf, "Aktivacija receptora 1 aktiviranog proteazom endotelnih ćelija putem proteina C", Science, vol. 296, br. 5574, str. 1880–1882, 2002.

[21] MJ Ludeman, H. Kataoka, Y. Srinivasan, NL Esmon, CT Esmon i SR Coughlin, "PAR1 cepanje i signalizacija kao odgovor na aktivirani protein C i trombin∗", The Journal of Biological Chemistry, vol. 280, br. 13, str. 13122–13128,

2005.

[22] JH Griffin, BV Zloković i LO Mosnier, "Aktivirani protein C: predrasuda za prevođenje," Blood, vol. 125, br. 19, str. 2898–2907, 2015.

[23] R. Essalmani, D. Susan-Resiga, J. Guillemot, et al., "Aktivacija trombina proteina C zahtijeva prethodnu obradu jetrenom proprotein konvertazom," The Journal of Biological Chemistry, vol. 292, br. 25, str. 10564–10573, 2017.

[24] S. Van Laecke i W. Van Biesen, "Teška hipertenzija sa bubrežnom trombotičnom mikroangiopatijom: šta se dogodilo uobičajenom osumnjičenom?", Kidney International, vol. 91, br. 6, str. 1271–1274, 2017.

[25] M. Waasdorp, J. Duitman, S. Florquin i CA Spek, "Nedostatak receptora aktiviranog proteazom-1 štiti od dijabetičke nefropatije izazvane streptozotocinom kod miševa," Scientific Reports, vol. 6, br. 1, str. 33030, 2016.