Preliminarno istraživanje promotivnog efekta i mehanizma polisaharida iz Cistanche Deserticola na proliferaciju limfocita
Dec 04, 2025
Metode
MTT test je korišten za otkrivanje proliferacije limfocita slezene kod miševa. Ciklofosfamid (Cy) je korišten za repliciranje životinjskih modela imunokompromitiranih životinja, a mjereni su indeksi slezene i timusa normalnih i imunokompromitiranih životinja. Aktivnost interleukina-2 (IL-2) mjerena je testom proliferacije timocita. Rezultati: Polisaharid Cistanche deserticola značajno je promovirao proliferaciju limfocita aktiviranih mitogenom (ConA i LPS) i neaktiviranih normalnih ćelija, te promovirao lučenje IL-2 u limfocitima. Intraperitonealna primjena je pokazala da polisaharid Cistanche deserticola značajno povećava indeks slezene normalnih i imunokompromitovanih miševa, a također ima značajan antagonistički učinak na smanjenje indeksa timusa uzrokovano Cy. Zaključak: Polisaharid Cistanche deserticola može značajno promovirati proliferaciju limfocita slezene kod miševa, što može biti povezano sa njegovim promocijom lučenja IL-2.
Pustinjski živi cistanche
[Ključne riječi]Polisaharid Cistanche deserticola; Indeks slezine; Thymus index; Proliferacija limfocita; Interleukin-2
Biljni polisaharidi privukli su široku pažnju zbog svog široko rasprostranjenog imunomodulatornog djelovanja i relativno niske toksičnosti [1]. Cistanche deserticola ma, poznata kao "Desert Ginseng", je ljuskava, suha, mesnata stabljika Cistanche deserticola, biljke Orobaceae, koja ima opsežna farmakološka dejstva. Njegova vodena dekocija može značajno povećati procenat fagocita i fagocitni indeks makrofaga. Dalja istraživanja su pokazala da je njegova materijalna osnova ukupni polisaharid Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli i dr. [4] su otkrili da pojedinačna komponenta polisaharida Cistanche deserticola ima značajan proliferativni učinak na timusne limfocite miša in vitro. Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju limfocita uočen je in vivo i in vitro.
Molekularna formula Cistanche deserticola
1Materijal i metode
1.1 Lijekovi i reagensi
Polisaharid iz Cistanche deserticola obezbjeđuje Odsjek za biljke i kemiju Instituta za medicinu i sadnju Medicinskog fakulteta. Ekstrahira se iz praha ekstrakta Cistanche, a sadržaj polisaharida je 87%.
Cistanche ekstrakt u prahu
Prije upotrebe in vivo eksperimenata, otopite i razrijedite fiziološkom otopinom do potrebne koncentracije i prokuhajte za sterilizaciju. Prije upotrebe in vitro eksperimenata, medij za kulturu RPMI-1640 je otopljen i razrijeđen, te je izvršena sterilizacija pod visokim pritiskom. Lipopolisaharid (LPS), konkanavalin (ConA), deksametazon (DEX) i MTT su svi proizvodi Sigma Corporation. Ciklofosfamid, kinesko-američko zajedničko ulaganje Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., fetalni goveđi serum, RPMI1640 medij za kulturu i tripsin su svi Gibco proizvodi. Ostali reagensi su domaći analitički reagensi.
1.2 Životinje
BALB c mlade miševe (SPF nivo) obezbjeđuje Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Peking) 2002-2003]. Životinje SPF razreda se uzgajaju u prostoriji i slobodno se hrane i piju.
1.3 Aparati
Multikan Ascent enzyme marker, a product of Thermo Electron Company, USA. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 carbon dioxide incubator, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.
1.4 Method
1.4.1 Utjecaj na proliferaciju limfocita [5]:
Rutinska priprema limfocita slezene od BALB/c miševa, korištenjem RPMI-1640 za podešavanje koncentracije ćelija na 1 × 107 mL, inokuliranih na ploču za kulturu sa 96 jažica, sa 100 suspenzija ćelija dodanih u svaku jažicu μL-50. Uzgojno je sa različitim koncentracijama polisaharida Cistanche deserticola (konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola za proliferaciju neaktiviranih limfocita bila je 6,25, 12,5, 25, 50 i 100 mg/L po redu; konačna koncentracija Cistanche deserticola polisaharida za proliferaciju neaktiviranih limfocita bila je 6,25, 12,5, 25, 50 i 100 mg/L po redu; konačna koncentracija Cistanche deserticola proaktiviranog po- T limfociti su bili 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 i 62,5 mg/L po redu, a konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola za proliferaciju LPS aktiviranih B limfocita bila je 1,56, 3,13, 12,25 mg/L ili 6,25 mg; LPS, RPMI-1640 medij je korišten kao kontrola. Ukupna zapremina svake rupe je 200 μL. Kada se dodaju mitogen ConA i LPS (kontrola je RPMI-1640 koja sadrži odgovarajuće koncentracije ConA ili LPS), konačne koncentracije oba su 2,5 mg/L odnosno 10 mg/L. Napravljene su tri paralelne rupe za različite tretmane. Postavite ploču za kulturu u inkubator sa 37 stepeni i 5% CO2 sa zasićenom vlagom na 68 sati, dodajte MTT i nastavite sa uzgojem 4 sata. Izmjerite vrijednost A540 nm pomoću markera enzima koristeći MTT metodu za otkrivanje proliferacije. Kada upoređujete svaku grupu, pretvorite vrijednost A540nm u stopu proliferacije limfocita prema sljedećoj formuli:stopa proliferacije limfocita=AA uzorak A kontrola × 100 %.
Efekti Cistanchea-Poboljšaju imunitet
1.4.2 Utjecaj na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa [6,7]:
Mladi BALB c miševi (mužjaci, stari 4 sedmice, tjelesne težine 10-15 g) nasumično su podijeljeni u kontrolnu grupu (fiziološki rastvor) i različite grupe doziranja (125 mg (kg · t.m.) i 250 mg (kg · t.m.)), sa 11 pacova u svakoj grupi. Lijek je davan intraperitonealno jednom dnevno tokom 7 uzastopnih dana. Miševi su ubijeni nakon cervikalne dislokacije. Uzeti su slezena i timus, uklonjeno je masno tkivo i tkivo fascije, a površinska tečnost je osušena filter papirom. Nakon vaganja, indeks slezene=100 × težina slezene (mg) tjelesna težina (mg); Hthymusindex=100 × težina timusa (mg) Tjelesna težina (mg). Izračunajte indeks slezine i indeks timusa za svakih 100 mg tjelesne težine, respektivno.
1.4.3 Utjecaj na težinu imunološkog organa kod imunokompromitovanih miševa [7,8]:
Mladi BALB c pacovi (mužjaci, stari 6 sedmica, tjelesne težine 15-20 g) su nasumično podijeljeni u 12 grupa prema tjelesnoj težini. Osim normalne kontrolne grupe (intraperitonealna injekcija ekvivalentnog volumena fiziološke otopine), ostale grupe su dobile Cy 50 mg (kg · t.m.) dnevno intraperitonealno, a testna otopina lijeka je davana intraperitonealno [125 i 250 Mg (kg · t.m.)], normalnoj kontrolnoj grupi je dat 1. normalna kontrolna grupa. uzastopnih dana, jednom dnevno. Promjene u težini životinje uočene su tokom eksperimenta . 24 sati nakon posljednje primjene, mjereni su i izračunati indeksi slezine i timusa koristeći istu metodu kao u 1.4.2.
1.4.4 Uticaj na IL-2 aktivnost:
① Indukcija IL-2 [9]: Dodajte 50 u svaku jažicu u ćelijskoj ploči sa 96 jažica μ L Različite koncentracije polisaharida Cistanche deserticola (konačne koncentracije po redoslijedu: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 mg/L, 5 mg/L kontrolne jažice dodajte medij kulture) i 50 μL ConA (konačna koncentracija 5 mg/L), dodajte još 1 po jažici × 106 ćelija slezene. Inkubirajte u inkubatoru sa vlagom od 37 stepeni, 5% CO2 zasićenim 24 sata, centrifugirajte 20 minuta na 2500 r min, i uzmite ćelijski supernatant i pohranite ga na - 20 stepen za pripravnost. ② IL-2 detekcija aktivnosti [9,10]: Osnovna metoda je zasnovana na literaturi [9], a odgovarajuća prilagođavanja se vrše prema literaturi [10]. Konvencionalna priprema BALB c suspenzije timocita miša, ploče sa ćelijskom kulturom sa 96 jažica, 1 inokulacija po jažici × 106 timocita, uz dodavanje 50 ćelija po jažici µL ConA (konačna koncentracija 2,5 mg/L), a zatim dodati pripremljeni IL-2 supernatant 50 µL kontrolne otopine 50 µL (dodati 50 µl kontrolne otopine L kulture zajedno). 54 sata, dodajte MTT, nastavite s inkubacijom 4 sata, centrifugirajte 10 do 15 minuta na 1000 r min, bacite supernatant i dodajte DMSO 100 po jažici μL, protresite mikro oscilatorom 8 minuta i izmjerite vrijednost A540 nm markerom enzima.
1.5 Statistička analiza
Podaci su izraženi kao srednja vrijednost i standardna devijacija (x ± s). Za usporedbu podataka korišten je softver Microsoft Excel, a proveden je i t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.
2. Rezultati
2.1 Utjecaj na proliferaciju limfocita
Kao što se može vidjeti iz Tabele 1, dodavanje polisaharida Cistanche deserticola u medij za kulturu limfocita slezene miša kultiviranih in vitro u koncentraciji iznad 25 mg/L može značajno stimulirati proliferaciju limfocita, što ukazuje da sam polisaharid Cistanche deserticola ima mitotički učinak. u isto vrijeme,može se vidjeti iz Tabele 2 i 3 da CDPS ima značajan promotivni učinak na proliferaciju ConA-induciranih T limfocita ili LPS-induciranih B limfocita.
Tab.1 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju neaktiviranih limfocita (x ±s, n =3)
Ne: u poređenju sa kontrolnom grupom, ＊P<0.05.
Tab.2 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju T limfocita izazvanu ConA (x ±s, n =3)
Napomena: u poređenju sa ConA grupom, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
Tab.3 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju B limfocita izazvanu LPS (x ±s, n =3)
Napomena: u poređenju sa LPS grupom, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
2.2 Utjecaj na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa
Kao što se može videti iz tabele 4,Polisaharid Cistanche deserticola može značajno povećati indeks slezene normalnih BALB/cc mladih pacova, ali ne utiče na timusnu žlijezdu.
2.3 Utjecaj na težinu imunološkog organa kod imunokompromitovanih miševa
Iz tabele 5,vidi se da su indeksi organa slezene i timusa kod miševa u Cy imunosupresivnoj grupi niži od onih u kontrolnoj grupi, a polisaharid Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) može značajno poboljšati indekse slezene i timusa.
2.4 Utjecaj na IL-2 aktivnost
Kao što se može videti iz tabele 6,kada doza polisaharida Cistanche deserticola dostigne 7,82 mg/L, može značajno povećati oslobađanje IL-2 iz ćelija slezene miša.
Tab.4 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa (x ±s, n =11)
Napomena: u poređenju sa kontrolnom grupom, ＊＊P<0.01.
Tab.5 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na težinu imunoloških organa kod imunodepresivnih miševa (x ±s, n =12)
Napomena: u poređenju sa kontrolnom grupom, ## P < 0,01; u poređenju sa grupom modela, ＊＊P<0.01.
Tab.6 Uticaj polisaharida Cistanche deserticola na proizvodnju IL-2 limfocita slezene kod miševa ( x ±s, n =3)
Napomena: u poređenju sa kontrolnom grupom, ＊＊P<0.01.
3. Diskusija
ConA i LPS-indukovana proliferacija limfocita slezene kod miševa je in vitro eksperiment za otkrivanje funkcije T i B limfocita i važan je pokazatelj specifične imunološke sposobnosti. Istraživanja su pokazala da kada je konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola iznad 25 mg/L, može značajno potaknuti proliferaciju limfocita, što ukazuje da ima određeni mitotički učinak. U prisustvu mitogena (ConA ili LPS), manja doza polisaharida Cistanche deserticola može poboljšati ako tijelo pokazuje značajnu proliferativnu aktivnost. Znamo da ConA i LPS uglavnom indukuju proliferaciju T limfocita, odnosno B limfocita. Studije su pokazaleZdravstvene prednosti cistanche praha: Polisaharid Cistanche deserticola može potaknuti i proliferaciju T limfocita i proliferaciju B limfocita, ali njegov proliferativni učinak na B limfocite je znatno jači nego na T limfocite.
Cistanche prah za zdravlje - Improve imunitet
Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Improve Immunity
【Tražite više】 Email: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692
Timus i slezena su glavni imunološki organi kod životinja. Imunološke ćelije u slezeni su uglavnom zreli B limfociti, dok su timus uglavnom nezreli T limfociti. Indeksi timusa i slezene mogu odražavati razvoj imunoloških organa i funkcionalni status imunoloških stanica. Intraperitonealna injekcija polisaharida Cistanche deserticola može značajno povećati indeks slezene normalnih i imunosupresivnih miševa i ima značajan antagonistički učinak na atrofiju timusa izazvanu Cy kod miševa.
Polisaharid Cistanche deserticola nema značajan utjecaj na timusni indeks kod normalnih životinja, što je u skladu s rezultatima in vitro eksperimenata u kojima polisaharid Cistanche deserticola potiče proliferaciju B limfocita umjesto T limfocita.
Cistanche dodatak blizu mene-Improveimunitet
IL-2 je citokin koji proizvode T limfociti od G1 faze ćelijskog ciklusa do S faze. To je glavni faktor rasta T ćelija koji djeluje kao autokrini faktor rasta. Osim toga, IL-2 može promovirati proliferaciju B ćelija i sintezu antitijela [11,12]. Polisaharid Cistanche deserticola potiče oslobađanje IL-2 iz limfocita, što je očigledno povezano sa polisaharidom Cistanche deserticola koji potiče proliferaciju limfocita slezene.
Medicinska istraživanja pokazuju da Cistanche sadrži polisaharide, ehinakozide i akteozide, koji mogu aktivirati limfocite i poboljšati stanje organizma; funkcionalne komponente cistanche feniletanoidnih glikozida imaju značajan učinak na oporavak stanica nakon oštećenja 60 Co gama zrakama, a također mogu poboljšati imunološku funkciju protiv oštećenja zračenja. Svakodnevnim uzimanjem suplemenata Cistanche deserticola možete postići efekat poboljšanja imuniteta.
