Već postojeći imunitet T-ćelija na SARS-CoV-2 u neeksponiranim zdravim kontrolama u Ekvadoru, kao što je otkriveno sa COVID-19 testom oslobađanja interferona-gama

SAŽETAK

Pozadina: Studije imunoloških odgovora T-ćelija na SARS-CoV-2 važne su za razumijevanje imunološkog statusa pojedinaca ili populacija. Ovdje koristimo jednostavan, jeftin i brz test stimulacije pune krvi - test oslobađanja interferona-gama (IGRA) - za proučavanje imuniteta T-ćelija na SARS-CoV-2 kod rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19 i neeksponirani zdravi kontakti iz Kita, Ekvador. Metode: Izmjerena je proizvodnja interferona-gama (INF-g) u hepariniziranoj krvi rekonvalescentnih i neeksponiranih subjekata nakon stimulacije u trajanju od 24 sata SARS-CoV-2 Spike S1 proteinom, proteinom domene vezivanja receptora (RBD) ili nukleokapsid (NP) protein, respektivno. Prisustvo IgG-RBD proteinskih antitela u obe studijske grupe utvrđeno je "in-house" ELISA testom. Rezultati: mjereno proizvodnjom INF-g, 80 posto rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19, svi IgG-RBD seropozitivni, imalo je snažan odgovor T-ćelija.

Međutim, neočekivano, 44 ​​posto neizloženih zdravih kontrola, svi IgG-RBD seronegativni, imalo je jak odgovor T-ćelija specifičan za virus na COVID-19 IGRA, vjerovatno zbog prethodnog izlaganja virusima koji izazivaju prehladu ili drugim virusnih ili mikrobnih antigena. Zaključak i diskusija: Visok procenat neizloženih zdravih subjekata sa već postojećim imunitetom sugeriše da će dio populacije Ekvadora vjerovatno imati SARS-CoV-2 reaktivne T-ćelije. S obzirom da je IGRA tehnika jednostavna i da se može lako proširiti za istrage gdje je potreban veliki broj pacijenata, ova COVID{10}} IGRA može poslužiti da se utvrdi da li odgovor samo T-ćelija predstavlja zaštitni imunitet na SARS-CoV -2 infekcija u populacijskoj studiji. © 2021 Autori. Objavio Elsevier Ltd u ime Međunarodnog društva za infektivne bolesti.

Istovremeno, kada je naš imunitet nizak, postoji mnogo načina za poboljšanje imuniteta, unos namirnica koje mogu ojačati imunitet, kao što su cistanche, polisaharidi, proteini, aminokiseline i druge supstance sadržane u cistanche često mogu regulisati tjelesnuiimunološki sistem.

Click cistanche tubulosa ekstrakt u prahu proizvod

Uvod

Imunološki odgovor na infekciju SARS-CoV-2 uključuje ne samo proizvodnju antitijela, već infekcija također pokreće odgovor T-ćelija kod pacijenata (Lipsitch et al., 2020., Ni et al., 2020.). Općenito, određivanje prisustva i veličine specifičnog odgovora T-ćelija pamćenja na ovu infekciju koronavirusom izvodi se ELISPOT testom utvrđivanjem broja limfocita koji proizvode IFN-g nakon stimulacije antigenima ili peptidima specifičnim za bolest (Ni et al., 2020., Pai et al., 2014., Abate et al., 2013., Braun et al., 2020., Grifono et al., 2020., LeBert et al., 2020., Sekine et al., 2020.).

Za ovu tehniku, mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) se izoluju iz sveže heparinizovane krvi centrifugiranjem sa gradijentom gustine; lučenje citokina pojedinačnih T-ćelija se kvantificira mikroskopom ili posebnim aparatom – ELISPOT čitačem ploča. ELISPOT test je tehnika "samo za istraživačke laboratorije" koja je veoma naporna, tehnički zahtjevna, relativno skupa i ne može se lako koristiti u kliničkoj laboratoriji ili primijeniti u studijama zasnovanim na populaciji. Zbog troškova, infrastrukture i laboratorijskih zahtjeva potrebnih za izvođenje testa, njegova upotreba u okruženjima s ograničenim resursima kao što je Ekvador može biti minimalna.

Ćelijski imuni odgovori se također mogu odrediti jednostavnijim testom: ispitivanjem oslobađanja interferona-gama (IGRA). Ovaj test, in vitro test krvi, kvantificira citokine koje luče T-ćelije (tj. gama interferon (IFN-g); međutim, drugi citokini kao što su TNF ili IL-2 također se mogu kvantificirati) nakon stimulacije cijele krvi (ne samo izolovani limfociti) sa specifičnim antigenima (Pai et al., 2014, Abate et al., 2013). Izlučeni citokin IFN-g se mjeri ELISA testom, lako dostupnom tehnikom u većini laboratorija, a rezultati se očitavaju pomoću ELISA čitača ploča. IGRA su našli primjenu u kliničkoj laboratoriji i koriste se za određivanje latentne infekcije s Mycobacterium tuberculosis (MTB), kao i za mjerenje citomegalovirusnog (CMV) specifičnog imuniteta posredovanog stanicama i predviđanje CMV infekcije kod primatelja transplantata (Pai et al. , 2014, Abate et al., 2013). Ovi IGRA testovi su opsežno procenjeni i, u poređenju sa ELISPOT testom, pokazalo se da pokazuju slične mogućnosti za predviđanje MTB ili CMV infekcije. Štaviše, dostupno je nekoliko komercijalnih testova i testova sa oznakom FDA ili CE za otkrivanje imuniteta protiv tuberkuloze ili CMV i koji se široko provode.

U ovoj studiji istražujemo upotrebu COVID-19 IGRA i procjenjujemo veličinu oslobađanja IFN-g kod rekonvalescentnih COVID-19 pacijenata i zdravih naivnih kontrola COVID-19 kao odgovor na specifične antigeni SARS-CoV-2 virusa: RBD protein; S1 dio Spike proteina; ili nukleokapsid (N) protein. Osim toga, utvrđujemo prisustvo SARS-CoV-2 specifičnih IgG antitijela kod tih učesnika pomoću "in-house" ELISA (Amanat et al., 2020., Guevara et al., 2021.). Pokazali smo da značajan postotak neizloženih donora posjeduje SARS-CoV-2 reaktivne T-ćelije i raspravljamo o ovim rezultatima.

Materijal i metode

Rekonvalescentni pacijenti sa COVID-19, zdrave kontrole i okruženje

Ova studija je sprovedena u Kitu, Ekvador, u septembru 2020. Nisu korištene statističke metode za prethodno određivanje veličine uzorka. Tabela 1 prikazuje karakteristike 32 pacijenta u ovoj studiji: trinaest rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19, svi sa neteškim simptomima/znacima COVID-19 i pozitivnom RT-PCR dijagnozom u junu 2020.; i 17 neeksponiranih zdravih kontrola. Ove zdrave kontrole bile su izuzetno oprezne tokom pandemije, izbjegavajući kontakt s drugim ljudima i nisu sami prijavili nijedan od tipičnih znakova i simptoma COVID-19 za vrijeme trajanja pandemije, kao što su groznica, uporni kašalj, ili gubitak mirisa ili ukusa. Također, u ovu studiju su uključena dva asimptomatska nosioca SARS-CoV-2. Ova dva subjekta nikada nisu pokazala nikakve simptome ili znakove bolesti COVID{13}}; međutim, RT-PCR tehnika im je urađena kao uslov za radnu dozvolu u junu 2020. i rezultirala je pozitivnim dijagnozama.

Serologija

Serologija i IGRA za sve pacijente i kontrole su obavljene u posljednje dvije sedmice septembra 2020. godine, tri mjeseca nakon RT-PCR dijagnoze rekonvalescentnih pacijenata. Da bi se utvrdilo prisustvo IgG antitijela specifičnih za koronavirus u našoj studijskoj grupi, korištena je "interna" SARS-CoV-2 ELISA IgG domena (RBD) za vezivanje receptora (9, 10).

Ispitivanje otpuštanja gama interferona (IGRA)

Za IGRA, uzet je uzorak heparinizirane krvi (4 mL) i podijeljen u alikvote od 250 mL i stimuliran sa 2 mg/mL RBD proteina (procedura izolacije iz reference 9) ili 2 mg/mL komercijalno dostupnog Nucleocapsida (N) protein ili Spike (S1) protein (ViroGen, kataloški brojevi: 00,221-V i 00,226-V respektivno). Za određivanje optimalne koncentracije antigena za stimulaciju u IGRA korištena je krivulja doza koncentracija-odgovor s krvlju IGRA-pozitivnih i IGRA-negativnih pacijenata. Pri 2 ug/mL, maksimalni IFN-g odgovor u krvi kod COVID-19 subjekata je pronađen bez stimulacije u neinficiranim kontrolama. Za svakog učesnika uključena je nestimulisana kontrola (NIL), a mi smo testirali uzorak krvi od 250 mL sa mitogenom fitohemaglutininom (PHA), pozitivnom kontrolom za procjenu stope odgovora citokina u uzorku krvi. Stimulacija je realizovana u 96- ELISA ploči ravnog dna na 37 C tokom 24 h. Plazma je sakupljena, a proizvodnja IFN-g je određena pomoću humanog IFN-g ELISA (MaxTM Standard Set Biolegend kat. br. 430,101).

Rezultati

RBD IgG ELISA je pokazala da su svi pacijenti sa simptomima COVID{{{0}} (RT-PCR pozitivni) bili pozitivni na IgG antitijela protiv RBD proteina tri mjeseca nakon RT-PCR dijagnoze. Dva asimptomatska RT-PCR pozitivna pacijenta i svi zdravi neizloženi kontrolni pacijenti bili su seronegativni sa ovom ELISA testom (vidi tabelu 1). Rezultati stimulacije pune krvi u testu COVID-19 IGRA prikazani su na slici 1. Snažna indukcija proizvodnje IFN-g pronađena je kod 80 posto simptoma COVID-19 pacijenata sa sva tri antigena, ali N protein i S protein su bili najsnažniji stimulatori IFN-g odgovora (Slika 1 A, B, C). Dva asimptomatska, ali RT-PCR pozitivna pacijenta (pacijenti 14 i 15), oba bez specifičnih SAR-CoV-2 antitijela, također su pokazala snažan inducibilan imunološki odgovor T-ćelija. Od COVID-19 pacijenata koji nisu bili naivni, 45 posto je pokazalo inducibilni T-ćelijski imunitet. Odgovor kod ovih zdravih neeksponiranih kontrola s odgovorom T-ćelija statistički se nije značajno razlikovao po veličini od rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19 za bilo koji od stimulirajućih antigena (p-vrijednost=0.271, 0,437, i 0,719 za RBD, N i S1 proteine, respektivno).

Slika 1. Proizvodnja IFN-g nakon stimulacije pune krvi rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19 i zdravih neeksponiranih kontrola s RBD, N ili S1 proteinom.

Rezultati stimulacije rekonvalescentnih pacijenata i kontrola sa proteinom RBD, N ili S1 prikazani su na slikama 1A, B i C. Na slici 1D, INF-g odgovori svakog pacijenta i tri antigeni su grupisani. Pacijenti s potvrđenom infekcijom COVID-19 označeni su brojem 1-15, od kojih su pacijenti 14 i 15 bili asimptomatski. Subjekti 16-33 su pacijenti koji nisu bili naivni sa COVID-19.

Nakon 24 h stimulacije, koncentracije IFN-g u plazmi su određene korištenjem komercijalno dostupnog kompleta zasnovanog na imunosorbentnom testu za humani IFN-g enzim (Biolegend kat. br. 430,101). Veličina stimulacije izražena je kao optička gustina na 450 nm (OD450) za krv stimulisanu antigenom minus OD450 za krv bez stimulacije antigenom. OD od 1,0 odgovara približno 400 pg/mL IFN-g. Fitohemaglutinin (PHA) je korišten kao mitogen u konačnoj koncentraciji od 5 mg/mL u IGRA za procjenu kvaliteta i kapaciteta odgovora krvi. Svi pacijenti i kontrole su pokazali maksimalnu proizvodnju citokina sa ovim mitogenom sa srednjom optičkom gustinom (OD450) od 2,54 (SD=0.13), što predstavlja približno 1000 pg/mL IFN-g. Nije bilo razlike u srednjem nivou IFN-g u nestimuliranoj krvi rekonvalescentnih pacijenata i zdravih kontrola (OD450=0.38, SD=0.14 naspram OD450=0.32. SD=0.16). Ovi rezultati nisu prikazani. Na svakom grafikonu je nacrtana vodoravna linija koja predstavlja graničnu vrijednost za stimulaciju. Ova vrijednost je određena izračunavanjem srednje vrijednosti plus dvije standardne devijacije odgovora devet ispitanika (pacijenata 16, 18, 19, 22, 27–31) kontrolne grupe s najnižom produkcijom INF–g nakon stimulacije.

Diskusija i zaključci

Koristeći jednostavan za izvođenje test pune krvi koji procjenjuje odgovore T-stanica, otkrili smo da većina pacijenata koji se rekonvalescenti i značajan dio zdravih neeksponiranih osoba imaju specifičan i jak T-ćelijski odgovor određen proizvodnjom INF-g nakon stimulacije. sa SARS-CoV-2 specifičnim antigenima (Slika 1). Nekoliko studija, koje su sve koristile ELISPOT test, izvijestilo je o prisutnosti T-ćelijskog odgovora kod većine ili svih rekonvalescentnih pacijenata sa COVID-19 (Braun et al., 2020., Grifono et al., 2020., LeBert et al. , 2020., Sekine et al., 2020., Moderbacher et al., 2020., Mateus i sur., 2020., Peng et al., 2020.).

Međutim, što se tiče odgovora T-ćelija kod zdravih neeksponiranih kontrola, prijavljene su stope odgovora između 28 i 50 posto (Doshi, 2020, de Vries, 2020, Lipsitch et al., 2020, Sagar et al., 2020) i nekoliko studije pokazuju da nema odgovora T-ćelija kod pacijenata sa COVID-19 kontrolom (de Vries, 2020, Moderbacher et al., 2020, Schwarzkopf et al., 2021). Većina ovih studija izvedena je ELISPOT testom, ali u Italiji i SAD-u, IGRA je također korišten za otkrivanje SARS-CoV-2 T-ćelijskog odgovora (Petrone et al., 2020, Murugesan et al. ., 2020.). U obje studije, specifičan T-ćelijski odgovor je otkriven kod pacijenata koji su se oporavili; međutim, IGRA nije otkrio INF-g odgovor kod zdravih neeksponiranih subjekata.

Prethodno postojeći imunitet T-ćelija na SARS-CoV-2 kod naivnih subjekata COVID-19 pregledan je u nekoliko publikacija (Altmann i Boyton, 2020, Dosho et al., 2020, de Vries, 2020, Sette i Crotty, 2020.). Razlog zašto bi se specifičan odgovor T-ćelija COVID-19 mogao otkriti kod zdravog neizloženog subjekta ostaje nejasan i predmet je spekulacija. Većina ELISPOT studija sa ispitanicima koji nisu bili na COVID-19 koristili su uzorke ljudske krvi dobijene prije nego što je virus SARS-CoV-2 otkriven 2019. godine, dakle prije bilo kakve šanse za izlaganje. Iz tog razloga, ove ELISPOT studije su zaključile da odgovor T-ćelija kod neeksponiranih zdravih subjekata vjerovatno dolazi od prethodnog kontakta s cirkulirajućim virusima prehlade (Grifoni et al., 2020., Matheus et al., 2020.) ili prethodne izloženosti gripi i/ili CMV viruse (Mahajan et al., 2020) ili druge virusne ili mikrobne antigene (Tan et al., 2020). U našoj studiji korištena je krv uzeta tokom pandemije od dobrovoljaca koji su sami prijavili nulti kontakt, bili su seronegativni na COVID-19 antigen RBD i nikada nisu pokazali znakove ili simptome COVID-19.

Stoga ne možemo isključiti da odgovor T-ćelija u nekim od naših COVID-19 "naivnih" zdravih kontrola dolazi od asimptomatskih infekcija virusom SARS-CoV-2. Pacijenti 14 i 15 naše studije su primjer ovoga. Ove osobe su klasifikovane kao pacijenti sa COVID-19 zbog pozitivnog RT-PCR-a; međutim, oni su bili asimptomatski i nisu razvili odgovor antitijela na RBD protein, ali su oba pokazala jak odgovor T-ćelija.

Moguće je da je, nakon SARS-CoV-2 kolonizacije nazofarinksa, imunološki sistem ova dva asimptomatska pacijenta ostavio odgovor samo na T-ćelije pamćenja, a nije bilo SARS-CoV-2 specifičnih antitijela inducirano. Drugo objašnjenje je da odgovor T-ćelija dolazi od prethodne infekcije nalik koroni, a već postojeći imuni odgovor T-ćelija zaštitio je ova dva pacijenta od razvoja invazivnijeg obrasca bolesti. Već postojeće unakrsno reaktivne T-ćelije mogle bi biti značajne u objašnjavanju nekih razlika u stopama infekcije ili patologiji (Le Bert et al., 2020., Sagar et al., 2020.). Što se tiče kohorte naivnih kontrola, isključili smo da ova grupa sadrži značajan broj osoba zaraženih SARSCoV-2 sa neotkrivenom asimptomatskom infekcijom, uglavnom zato što su svi integrandi kontrolne grupe IgG seronegativni za RBD antigen.

Drugi razlog je što je prevalencija infekcije u Ekvadoru relativno niska. U vrijeme ove studije, u septembru 2020., Ekvador je prijavio oko 200,000 potvrđenih slučajeva COVID-19 (oko 1,1 posto populacije). Naravno, stvarna prevalencija infekcije mogla je biti nekoliko puta veća, ali čak i tako, malo je vjerovatno da se 45 posto ove kontrolne grupe zarazilo, pa stoga gledamo odgovor T-ćelija specifičan za SARS-CoV{ {9}} infekcija.

Zaključno, nalaz visokog procenta neeksponiranih zdravih subjekata sa već postojećim imunitetom u Kitu, Ekvador, podiže očekivanje da će značajan dio naše populacije vjerovatno imati SARS-CoV-2 reaktivne T-ćelije jer prethodnog izlaganja gripi, CMV virusima ili koronavirusima koji izazivaju prehladu. Buduće istrage trebale bi imati za cilj utvrđivanje da li je postojeći imunološki odgovor protektivan i/ili može prevladati težu COVID-19 bolest ili doprinosi bržem oporavku.

Značaj i ograničenja ove studije

Naša studija je pokazala da je COVID-19 IGRA koristan i osjetljiv novi alat koji može procijeniti izloženost koronavirusima ili unakrsnu reaktivnost na slične viruse određivanjem oslobađanja IFN-g nakon stimulacije antigenima specifičnim za virus. Tehnika je jednostavna, relativno jeftina i može se koristiti u kliničkoj laboratoriji. To svakako nije slučaj sa ELISPOT testom. Štaviše, IGRA test se može lako proširiti za populacione studije i istraživanja gde je potreban veliki broj pacijenata. Zajedno sa serologijom, IGRA se može koristiti za skrining i antitijela i T-ćelija odgovora pojedinačnih pacijenata kako bi se bolje razumio imunitet na nivou populacije i odredio postojeći imunitet kod seronegativnih osoba.

Važno ograničenje naše studije je da uzorak studije nije reprezentativan za populaciju. Za određivanje veličine uzorka nisu korištene statističke metode. Nadalje, naš test nije napravio razliku između proizvodnje IFN-g CD4 plus ili CD8 plus ćelija, ali se može uzeti u obzir stimulacija sa definiranim CD8( plus ) i CD4( plus ) peptidima (Grifoni et al., 2020, Peng et al. , 2020.) i korišten je u IGRA-ima opisanim u Petrone et al., 2020. i Murugesan et al., 2020.). Također, indukcija drugih citokina može se mjeriti pomoću ove IGRA (Petrone et al., 2020). Isto tako, IGRA se može koristiti za praćenje vakcinacije kako bi se odredio razvoj T-ćelijskog odgovora kod vakcinisanih osoba ili se može koristiti za određivanje da li je prisustvo unakrsnih reaktivnih memorijskih T-ćelija povezano sa zaštitnim imunitetom i može li umanjuju manifestacije bolesti izazvane SARS-CoV-2 infekcijom (Sagar et al., 2020.).

Etičko odobrenje i saglasnost za učešće

Krv je uzeta nakon informiranog pismenog pristanka. Etički komitet Ministarstva zdravlja Ekvadora odobrio je protokol studije 004–2020.

Sukob interesa

Autori izjavljuju da nemaju suprotstavljene interese.

Doprinosi autora

Dizajn studija; JHW i GE; Prikupljanje podataka i laboratorijski eksperimenti: GE, AG, JC, AMR i MMV; Analiza podataka; JHW, GE i ET; Piše: JHW, GE i ET.

Priznanja

Izražavamo zahvalnost svim donatorima i zdravstvenom osoblju uključenom u ovaj posao, posebno Sandri Vivero i Sandri Fonseca, na pomoći u prikupljanju uzoraka. Ovu studiju je podržao istraživački fond sa Universidad de las Américas. Institut za održive nauke, San Francisko, Kalifornija, SAD, i fondacija "Por Todos" u Ekvadoru obezbedili su RBD protein i "in-house" ELISA test. Hvala Howardu E. Takiffu i Floru Pujolu (IVIC, Venecuela), Paulini E. Andrade (USFQ, Ekvador) i Lilly Verhagen (UMC, Holandija) na njihovim plodonosnim diskusijama.

Reference

Abate D, Saldan A, Mengoli C, Fiscon M, Silvestre C, Fallico L, et al. Poređenje citomegalovirusnog (CMV) enzimskog imunosorbentnog spota i CMV kvantifikatora otpuštanja gama interferona u procjeni rizika od CMV infekcije kod primalaca transplantiranog bubrega. J Clin Microbiol 2013;51(8):2501–7.

Altmann DM, Boyton RJ. SARS-CoV-2 Imunitet T ćelija: specifičnost, funkcija, trajnost i uloga u zaštiti. Sci Immunol 2020;5(49)eabd6160.

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S, Nguyen THO, Chromikova V, McMahon M, et al. Serološki test za otkrivanje serokonverzije SARS-CoV-2 kod ljudi. Nat Med 2020;26:1033–6.

Braun J, Loyal L, Frentsch M, Wendisch D, Georg P, Kurth F, et al. SARS-CoV-2- reaktivne T ćelije kod zdravih donora i pacijenata sa COVID-19. Nature 2020;587:270–4.

de Vries RD. SARS-CoV-2-specifične T-ćelije kod neeksponiranih ljudi: prisustvo unakrsnih memorijskih ćelija nije jednako zaštitnom imunitetu. Sig Transduct Target Ther 2020;5:224.

Doshi P. Covid-19: da li mnogi ljudi imaju već postojeći imunitet? BMJ 2020;370: m3563.

Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, Mateus J, Dan JM, Moderbacher CR, et al. Ciljevi Tcell odgovora na SARS-CoV-2 koronavirus kod ljudi sa bolešću COVID-19 i neeksponiranih pojedinaca. Cell 2020;181(7)1489–501.

Guevara A, Vivero S, Nipaz V, Guaraca V, Coloma J. Jeftini SARS-CoV-2 rRBD ELISA za otkrivanje serostatusa u ekvadorskoj populaciji sa COVID-19. Am J Trop Med Hyg [39_TD$DIFF]2021.

Le Bert N, Tan AT, Kunasegaran K, Tham CYL, Hafezi M, Chia A, et al. SARS-CoV-2- specifičan Tcell imunitet u slučajevima COVID-19 i SARS-a i neinficirane kontrole. Nature 2020;584(7821):457–62.

Lipsitch M, Grad YH, Sette A, Crotty S. Unakrsna reaktivna memorija T ćelije i imunitet stada na SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol 2020.

Mahajan S, Kode V, Bhojak K, Magdalene CM, Lee K, Manoharan M, et al. Imunodominantni epitopi T-ćelija iz SARS-CoV-2 šiljastog antigena otkrivaju robustan već postojeći imunitet T-ćelija kod neeksponiranih osoba. bioRxiv 2020.

Mateus J, Grifoni A, Tarke A, Sidney J, Ramirez SI, Dan JM, et al. Selektivni i unakrsno reaktivni SARS-CoV-2 epitopi T ćelija kod neeksponiranih ljudi. Nauka 2020;370 (6512):89–94.

Moderbacher RC, Ramirez SI, Dan JM, Grifoni A, Hastie KM, Weiskopf D, et al. Antigen-specifičan adaptivni imunitet na SARS-CoV-2 kod akutnog COVID-a-19 i povezanost s godinama i težinom bolesti. Cell 2020; S{5}(20):31235–6.

Murugesan K, Jagannathan P, Pham TD, Pandey S, Bonilla HF, Jacobson K, et al. Test oslobađanja interferona-gama za precizno otkrivanje SARS-CoV-2 odgovora T ćelija. Clin Infect Dis 2020;ciaa1537.

Ni L, Ye F, Cheng ML, Feng Y, Deng YQ, Zhao H, et al. Detekcija humoralnog i ćelijskog imuniteta specifičnog za SARS-CoV-2- kod osoba koje se oporavljaju od COVID-19. Imunitet 2020;52(6)971–7.

Pai M, Denkinger CM, Kik SV, Rangaka MX, Zwerling A, Oxlade O, et al. Testovi oslobađanja gama interferona za otkrivanje infekcije Mycobacterium tuberculosis. Clin Microbiol Rev 2014;27(1):3–20.

Peng Y, Mentzer AJ, Liu G, Yao X, Yin Z, Dong D, et al. Široka i jaka memorija CD4 plus i CD8 plus T ćelije inducirane SARS-CoV-2 kod rekonvalescenta u Ujedinjenom Kraljevstvu nakon COVID-19. NatImmunol 2020.

Petrone L, Petruccioli E, Vanini V, Cuzzi G, Fard SN, Alonzi T, et al. Test pune krvi za mjerenje SARS-CoV-2-specifičnog odgovora kod pacijenata sa virusom COVID{2}}. Clin Microbiol Infect 2020.

Sagar M, Reifler K, Rossi M, Miller NS, Sinha P, White L, et al. Nedavna endemska infekcija koronavirusom povezana je s manje teškim oblikom bolesti COVID-19. J Clin Invest 2020.

Schwarzkopf S, Krawczyk A, Knop D, Klump H, Heinold A, Heinemann FM, et al. Ćelijski imunitet kod rekonvalescenata COVID-19 sa infekcijom potvrđenom PCR-om, ali sa neotkrivenim SARS-CoV-2-specifičnim IgG. Emerg Infect Dis. 2021;27(1).

Sekine T, Perez-Potti A, Rivera-Ballesteros O, Strålin K, Gorin JB, Olsson A, et al. Robusni imunitet T ćelija kod rekonvalescenta sa asimptomatskim ili blagim COVID-19. Cell 2020;183(1)158–68.

Sette A, Crotty S. Prethodno postojeći imunitet na SARS-CoV-2: poznato i nepoznato. Nat Rev Immunol. 2020;20(8)457–8.

Tan CCS, Owen CJ, Tham CYL, Bertoletti A, van Dorp L, Balloux F. Već postojeća unakrsna reaktivnost posredovana T ćelijama na SARS-CoV-2 ne može se objasniti samo prethodnim izlaganjem endemskim ljudskim koronavirusima. bioRxiv 2020;2020.

For more information:1950477648nn@gmail.com