Farmakodinamička studija Cistanche fenil etanol glikozida na akutnu ozljedu bubrega izazvanu gentamicinom kod pacova

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Abstract

Cilj Proučiti zaštitni učinakfeniletanoidni glikozidi(phGs) na gentamicin induciranakutna povreda bubregakod pacova. Metode Ukupno 54 mužjaka SD štakora nasumično je podijeljeno u kontrolnu grupu (10 d, 15 d, normalna fiziološka otopina 10 mL/kg), modelsku grupu (10 d, 15 d, normalna fiziološka otopina 10 mL/kg), phGs500 mg/ kg grupa (10 d, 15 d), phGs 250 mg/kg grupa (10 d, 15 d), i simulirana klinička grupa (21 d, normalni fiziološki rastvor 10 mL/kg), svaka grupa je imala šest pacova. Model akutnog oštećenja bubrega kod pacova ustanovljen je intraperitonealnom injekcijom gentamicina u dozi od 75 mg/kg tokom 10 dana. Na kraju eksperimenta uzet je 24h urin štakora, krv štakora iz trbušne aorte, obostrani bubrezi štakora i izračunat bubrežni indeks. Kreatinin u serumu (Scr), azot uree u krvi (BUN) mjereni su autoanalizatorom. Otkriveni su nivoi superoksid dismutaze (SOD), glutation peroksidaze (GSH-Px), katalaze (CAT) i malonaldehida (MDA) u bubrežnom tkivu. Rezultati U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, Scr, BUN, 24 h volumen urina i ekspresija MDA nivo u bubrežnom tkivu je povećan u grupi modela 10 i 15 dana, a aktivnosti SOD, CAT i GSH-PX u bubrežnom tkivu su značajno smanjene (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">akutna povreda bubregakod pacova.

Ključne riječi:Cistanche Herba; feniletanoid glikozids; gentamicin;akutna povreda bubrega

Cistanche Herba

Akutna povreda bubrega (AKI)je klinički sindrom naglog i brzog opadanja ili gubitka bubrežne funkcije filtriranja uzrokovanog različitim razlozima [1]. Trenutno, incidencija AKI raste iz godine u godinu. Njegovi uzroci su raznoliki i mogu dovesti do raznih komplikacija, a metode intervencije za kliničko liječenje su vrlo ograničene [2·3]. Studije su otkrile da je kontinuirano liječenje aminoglikozidnim antibioticima neovisni faktor rizika za AKI [4], a njegov mehanizam indukcije povezan je s lijekovima posredovanom proizvodnjom slobodnih radikala, taloženjem fosfolipida, smanjenim protokom krvi u bubrezima i lokalnom upalom [5]. Klinički, tehnike terapijskog praćenja lijekova često se koriste za liječenje akutne povrede funkcije bubrega uzrokovane aminoglikozidnim antibioticima, ali ne mogu poboljšati ili preokrenuti rizik od oštećenja bubrega uzrokovanih takvim antibioticima od osnovnog uzroka [6]. Rana intervencija nefrotoksičnosti aminoglikozidnih antibiotika je žarište u istraživanju racionalne primjene aminoglikozidnih antibiotika. Tradicionalna kineska medicinaCistanchesHerba je suha mesnata stabljika sa ljuskavim listovimaCistanchesbiljka koja pripada porodici OrobanchaceaeCistanches. Ima funkciju hranjenja janga bubrega i hranjive esencije i krvi [7]. Tople je prirode, slatkog ukusa i vraća se u meridijan bubrega.feniletanoidni glikozidisu glavne hemijske komponente uCistanche, koji može povećati aktivnost serumske superoksid dismutaze, inhibirati ekspresiju malondialdehida, poboljšati sposobnost tijela da hvata slobodne radikale kisika, smanjiti nakupljanje slobodnih radikala u tijelu i zaštititi tijelo od pretjeranog stresa. Oksidativno oštećenje [8]. U ovoj studiji, gentamicin je korišten za konstruiranje pacovskog modela akutne ozljede bubrega kako bi se istražili preventivni i terapijski efekti citronele.feniletanoidni glikozidina akutnu ozljedu bubrega uzrokovanu gentamicinom. Izvještaj je sljedeći.

1 Materijal i metode

1.1 Eksperimentalne životinje

54 SD štakora, mužjaci, tjelesne težine (200 ± 20) g, kupljeno od Eksperimentalnog centra za životinje Medicinskog univerziteta Xinjiang, broj dozvole za proizvodnju životinja: SCXK (novo) 2016-0003, sve životinje su uzgajane na Medicinskom univerzitetu Xinjiang SPF barijerno okruženje Animal Experiment Center, broj licence: SYXK (nova) 2016-0002, temperatura okoline 24-26 stepen, konstantna temperatura i vlažnost, relativna vlažnost 40 posto -70 posto, pacovi slobodno jedu i piju .

1.2 Testirani lijek

Cistanche fenetil ukupni glikozidi (ova istraživačka grupa je obogaćena i pročišćena od Cistanche tubulosa, ukupni sadržaj glikozida fenetil alkohola je 89,5 posto, sadržaj ehinakozida je veći od 40 posto, a sadržaj verbaskozida je veći od 16,0 posto) ; Injekcija gentamicina (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., serijski broj 16122411), komplet za detekciju malondialdehida (MDA) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., serijski broj VAAAK6S286), superoksidna disproporcija Elite (SODW) Enzyme detekcija Elite (SODW) Biotechnology Co., Ltd., serijski broj WSH27SS9GB), komplet za detekciju katalaze (CAT) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., serijski broj FGS3J66D2K), komplet za detekciju Valley glutation peroksidaze (GSH-PX) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., serijski broj DK8A622XZP), komplet za kvantifikaciju BCA proteina (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., serijski broj 20190622).

1.3 Eksperimentalni instrument

TD50002A elektronska vaga (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), Multiskan čitač mikroploča pune talasne dužine (US Thermo Fisher Company), BS-320 automatski biohemijski analizator (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo stolna rashladna centrifuga (Thermo Fisher Company, SAD).

1.4 Modeliranje, grupisanje i metode administracije

Nakon 1 sedmice adaptivnog hranjenja, 54 mužjaka SD štakora nasumično su podijeljena u 10d, 15d slijepu kontrolnu grupu, 10d, 15d modelsku grupu, 10d, 15d Cistanche cistanche fenetil alkohola grupu visoke doze, 10d, 15d Cistanche fenil etanol grupu sa niskim dozama Grupa za dozu i 21d simulirano kliničko liječenje grupa, svaka grupa ima 6 životinja. Osim kontrolne grupe 10d i 15d slijepe probe, pacovima u svakoj grupi intraperitonealno je injiciran gentamicin (75 mg/kg tjelesne težine) tokom 10 uzastopnih dana kako bi se uspostavio model akutne povrede bubrega. Metoda primjene: (1) 10d i 15d slijepih kontrolnih pacova date su intraperitonealnu injekciju normalnog fiziološkog rastvora (10mL/kg tjelesne težine) i sondu 10d odnosno 15d; (2) Pacovi modela 10d i 15d su modelirali istovremeno Pacovima u grupama sa visokim dozama od 10d i 15d dat je normalan fiziološki rastvor (10 mL/kg tjelesne mase) gavažom do 10d i 15d; Želudac do 10d i 15d; (4) 10d i 15d grupe pacova sa niskim dozama su modelirani dnevno i davani su Cistanche fenelythanol ukupni glikozidi (250mg/kg tjelesne težine) putem sonde za 10d i 15d; (5) 21d simulirana klinička grupa U isto vrijeme, pacovima je davan normalni fiziološki rastvor (10mL/kg tjelesne težine) putem sonde tokom 21 dana. Pacovi se vagaju sedmično, a doza lijeka se prilagođava prema tjelesnoj težini.

1.5 Prikupljanje uzoraka

Pacovima u svakoj grupi uzet je 24h urin 1{16}}, 15. i 21. dana (životinja je stavljena u metabolički kavez dan ranije, a po jedna životinja u svaki metabolički kavez, izvađena nakon 24h), centrifugirano na 3000 r/min 20 min na 4 stepena, sakupiti supernatant i zamrznuti na -20 stepen za kasniju upotrebu. Nakon eksperimenta, štakori u svakoj grupi su bili natašteni bez hrane i anestezirani sa 10 posto hloral hidrata u trbušnoj šupljini. Krv je uzeta iz abdominalne aorte i ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi 1 h na 4 stepena, centrifugirana na 3500 r/min 15 minuta, a gornji sloj svijetložute bistre tečnosti je alikvotan. Čuvajte smrznutu na 20 stepeni za kasniju upotrebu. Štakori u svakoj grupi su anestezirani, trbušna šupljina je potpuno otkrivena, arterije i vene distalnih i proksimalnih krajeva bubrežnog tkiva su fiksirane hemostatskim pincetama, bubrežne vene su prerezane, a izotonični normalni fiziološki rastvor 4 stepena je ubrizgan kroz abdominalna aorta, a boja bubrega je perfuzirana. Nakon što poblede, brzo izvadite oba bubrega i stavite ih na filter papir da upiju vodu i izvažite ih da biste izračunali indeks organa. Uzmite 0,4 g svježeg korteksa desnog bubrega pacova, dodajte prethodno ohlađeni normalni fiziološki rastvor u omjeru 1:9, napravite homogenu smjesu 10 posto bubrežnog tkiva u okruženju niske temperature, zamrznite i sačuvajte za kasniju upotrebu. Formula za izračunavanje indeksa organa je sljedeća: Indeks bubrega=bilateralna masa bubrega × 103/tjelesna masa pacova.

1.6 Detekcija nivoa serumskog kreatinina i azota ureje kod pacova

Uzmite uzorke seruma za testiranje i stavite ih u automatski biohemijski analizator na određivanje. Odredite sadržaj kreatinina i azota uree u serumu štakora prema uputama iz kompleta.

1.7 Detekcija SOD, CAT, GSH-PX i MDA u tkivima bubrega pacova

Uzmite homogenat bubrega pacova da se odmrzne na sobnoj temperaturi, centrifugirajte na 3000r/min 20 minuta na 4 stepena, sakupite supernatant i koristite BCA komplet za testiranje bubrega pacova u svakoj grupi koncentracije proteina u tkivu. Slijedite upute u kompletu kako biste odredili aktivnost superoksid dismutaze (SOD), katalaze (CAT), glutation peroksidaze (GSH-Px) i malondialdehida (MDA) u tkivu bubrega. 1.8 Statistička analiza Za statističku analizu korišten je statistički softver SPSS21.0. Podaci mjerenja izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (-x ± s). Poređenje između dvije grupe izvršeno je t-testom, sa nivoom testa =0.05.

ekstrakt cistanche

2 Results

2.1. Utjecaj ukupnih glikozida cistanche fenetil alkohola na tjelesnu masu, bubrežni indeks i izlučivanje 24h urina pacova u svakoj grupi

There was no significant difference in the body mass of rats in each group before modeling (P>0.05). Nakon modeliranja, u poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, tjelesna masa svake modelske grupe se smanjila, a bubrežni indeks i 24h izlučenog urina porasli, razlika je bila statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 Utjecaj feniletanoidnih glikozida Cistanche na sadržaj kreatinina u serumu štakora u svakoj grupi

U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, sadržaj kreatinina u serumu štakora u svakoj modelnoj grupi se povećao, a razlika je bila statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 Utjecaj feniletanoidnih glikozida Cistanche na sadržaj azota uree u serumu pacova u svakoj grupi

U poređenju sa slepom kontrolnom grupom, sadržaj azota uree u serumu štakora u svakoj model grupi se povećao, a razlika je bila statistički značajna (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">blizu {{0}} kreveta. 0 grupa 5)

2.4. Utjecaj feniletanoidnih glikozida Cistanche na aktivnost SOD u bubrežnom tkivu svake grupe pacova

U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, aktivnost SOD u tkivu bubrega svake grupe modela je smanjena, a razlika je statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5. Utjecaj cistanche feniletanoidnih glikozida na aktivnost CAT u bubrežnom tkivu svake grupe štakora

U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, aktivnost CAT u bubrežnom tkivu svake modelne grupe je smanjena, a razlika je statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05)

2.6 Efekti feniletanoidnih glikozida Cistanche na aktivnost GSH-PX u bubrežnim tkivima pacova u svakoj grupi

U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, aktivnost GSH-PX u bubrežnom tkivu svake grupe modela je smanjena, a razlika je statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05).

2.7 Učinci feniletanoidnih glikozida Cistanche na sadržaj MDA u bubrežnim tkivima pacova u svakoj grupi

U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, sadržaj MDA u bubrežnom tkivu svake modelske grupe je povećan, a razlika je statistički značajna (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cistanche štite funkciju bubrega

3 Diskusija

Česta ozbiljna neželjena reakcija aminoglikozidnih antibiotika je nefrotoksičnost [9]. Ova vrsta lijeka se lako filtrira kroz glomerul kao prototip lijeka, a neki lijekovi se izlučuju u urinu, a većina lijekova se selektivno akumulira u bubrežnom korteksu, čineći koncentraciju na ovom mjestu nekoliko puta većom od koncentracije lijeka u serumu (10) ], akumulacija ove vrste lijeka neizbježno uzrokuje oštećenje stanica i smanjenu funkciju bubrega. Dugo vremena kliničko liječenje AKI uzrokovanog aminoglikozidnim lijekovima uvijek je slijedilo princip simptomatskog i suportivnog liječenja ukidanja lijeka i rutinske rehidracije. oštećenja. Stoga je ova studija uspostavila 21-dnevnu simuliranu kliničku terapiju za simulaciju rutinskog kliničkog liječenja i rehabilitacije tijela što je više moguće, kako bi se dalje objektivno istražio terapijski učinak Cistanche feniletanoidnih glikozida. U kliničkom liječenju, Scr i BUN se često koriste kao indikatori za procjenu funkcije bubrega. Što je viši nivo Scr i BUN, to se ozbiljnije odražava oštećenje bubrežne funkcije [11]. U ovoj studiji, model AKI je uspostavljen intraperitonealnom injekcijom gentamicina 75 mg/kg pacovima tokom 10 uzastopnih dana. U poređenju sa slijepom kontrolnom grupom, nivoi Scr i BUN u grupi modela su se povećali, što ukazuje da je model bio uspješan. Nakon intervencije Cistanche feniletanoidnih glikozida tokom 10 i 15 dana, Scr i BUN pacova u svakoj tretiranoj grupi su se smanjili, što ukazuje da su cistanche feniletanoidni glikozidi imali dobar učinak na poboljšanje AKI uzrokovanog gentamicinom.

Istraživanja su pokazala da povećanje reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) igra važnu ulogu u patološkom procesu oštećenja bubrežnih tubulara uzrokovanih gentamicinom [12]. MDA je jedna od glavnih supstanci koje odražavaju nivo ROS u tijelu [13-14]. Odbrambeni sistem antioksidansa (antioksidansa) u tijelu protiv ROS uključuje SOD, CAT, GSH-PX i tako dalje. Kao glavna efikasna komponenta Cistanche deserticola, ukupni feniletanoidni glikozidi mogu ispoljiti značajnu antioksidativnu aktivnost kod životinja [15]. Nakon intervencije ukupnih glikozida fenetil alkohola Cistanche, sadržaj MDA u bubrežnom tkivu štakora u grupi za primjenu je značajno smanjen, a aktivnosti SOD, CAT i GSH-PX su značajno povećane, što sugerira da su ukupni glikozidi Cistanche fenetil alkohola može poboljšati oštećenje bubrega oksidativnim stresom i ublažiti oštećenje bubrega.

Ukratko, ukupni glikozidi cistanche fenetil alkohola imaju zaštitni učinak na akutnu ozljedu bubrega uzrokovanu gentamicinom. Ispoljava antioksidativno djelovanje tako što inhibira proizvodnju slobodnih radikala i aktivira enzime za uklanjanje slobodnih radikala, poboljšava stanje oksidativnog stresa u tijelu i pojačava antioksidativni učinak tijela. Oksidirajuća sposobnost, smanjuje oštećenje bubrega.

cistanche štite funkciju bubrega