Dio Ⅱ Poboljšanje azota ureje u krvi i kreatinina u serumu korištenjem novog uzgoja Cordyceps Militaris

Rezultati

Kontrolni miševi i miševi s nefrektomije tretirani su sa i bez micelije C. militaris, jednom dnevno oralnom gavažom tokom 30 dana. Broj uzoraka u svakom tretmanu bio je 4-6 miševa po grupi. .e postotak povećanja tjelesne težine i vrijednosti azota uree u krvi (BUN), kreatinina u serumu, ukupnog proteina i mokraćne kiseline 30. dana sumirani su na slici 1. Na kraju eksperimenata, postotak povećanja tjelesne težine je bio niže kod uremičnih miševa koji su podvrgnuti parcijalnoj nefrektomiji (Nx, 0,66 ± 2,58 posto) nego kod kontrolnih miševa (Sham, 6,41 ± 2,92 posto), otkrivajući da su uremični miševi doživjeli usporavanje rasta tokom eksperimentalnog perioda. Tjelesne težine uremičnih miševa sa i bez tretmana C. militaries prikazane su na slikama 1(a) i 2. .e rezultati pokazuju da je tjelesna težina u HKS, HKS plus A ili CM plus A grupi smanjena u odnosu na Nx grupa 30. dana (Slika 1(a)). Međutim, nijedna od grupa tretiranih C. militaris nije pokazala očigledne razlike u tjelesnoj težini u poređenju sa uremijskim kontrolnim miševima tokom eksperimentalnog perioda. Ovi podaci na slici 2 sugeriraju da tretman micelije C. militaris nije značajno utjecao na težinu uremičnih miševa.

Biohemijske vrijednosti u plazmi su predstavljene na slikama 1(b), 1(c) i 3. Kao što se očekivalo, BUN i kreatinin u serumu su bili značajno viši (2.83-put i 1.63-put, respektivno) kod uremičnih miševa nego kod Nx kontrolnih miševa, pokazujući da ovaj uremični mišji model precizno odražava progresivni CKD (Slike 1(b) i 1(c)). Nivoi BUN-a imali su obrazac smanjenja 10. dana kod uremičnih miševa hranjenih micelijom C. militaris kultiviranom u HKS (41 posto), HKS plus A (41 posto) i CM plus A (34 posto) mediju u usporedbi sa uremični kontrolni miševi (Nx) (Slika 3(a)). Nivo serumskog kreatinina je smanjen 10. dana u grupi HKS plus A (35 posto) i 30. dana u grupama HKS (14 posto) i CM plus A (13 posto) (Slika 3(b)). Nivo serumskog kreatinina porastao je u grupama HKS (93 procenta) i CM (41–53 procenta) 10. dana (Slika 3(b)). Razlike u tjelesnoj težini, ukupnom proteinu i mokraćnoj kiselini nisu otkrivene između lažnih i Nx miševa (podaci nisu prikazani). Osim toga, ukupni nivoi proteina su bili slični u različitim grupama, što ukazuje da tretman C. militaris iz različitih uzgoja može spriječiti napredovanje CKD (Slika 1(d)). .e mokraćna kiselina je takođe imala slične nivoe, osim u CM grupi, koja je imala više nivoe mokraćne kiseline (Slika 1(e)).

Da bi se uporedili efekti različitih grupa tretiranih micelijom C. Military na bubreg, i ispitani su histološki podaci zdravih i uremičnih miševa. Slika 4 prikazuje površine poprečnog presjeka bubrežnih glomerula kod lažnih i uremičnih miševa sa ili bez tretmana C. militaris mycelia. .e srednja površina poprečnog preseka glomerula dobijena je izračunavanjem srednje površine od približno 8 do 15 pojedinačnih glomerula pomoću programa Image J. .nema statističkih značajnosti između uremičnih grupa. U lažnoj kontrolnoj grupi, isječci bubrežnog tkiva su pokazali normalnu morfologiju (Slika 5(a)), dok su dijelovi bubrežnog tkiva uremičnih miševa pokazali uvećane glomerule i proširene bubrežne tubule okružene ravnim epitelnim stanicama (Slike 5(b)-5( f )). Površina poprečnog presjeka glomerula bila je značajno veća kod uremičnih miševa (174-put) nego kod zdravih (lažnih) miševa. U oštećenom bubregu prisutan je i nepravilan raspored tubula i koloidnih izljeva u lumenu tubula. Povećanje zaostalih glomerula pokazuje da ostatak bubrega u ovom modelu uremičkih miševa može biti rezultat dugotrajnog visokog hemodinamskog pritiska i preopterećenja metaboličkim otpadom.

Diskusija

U posljednje vrijeme, umjetne kulture micelije C. militaris su popularna tema istraživanja [22–27]. Na primjer, istraživači su istraživali različite podloge za umjetnu kultivaciju micelije C. militaris, kao što su kukuljica svilene bube, čvrsta podloga od riže, proklijala podloga od soje i sojina juha [34–39]. Mnoge studije su istraživale različite koncentracije ugljika i dušika u medijima kako bi se istražili najbolji uslovi za rast micelije C. militaris [40–45]. Prethodne studije su pokazale da micelija C. militaris sadrži specifične farmakološki aktivne komponente, kao što su kordicepin, polisaharidi, ergosterol i manitol, te da se mogu efikasno koristiti u različite medicinske svrhe ili kao funkcionalna hrana [46–48]. Također su istražene razlike u strukturnim karakteristikama, imunomodulaciji polisaharida i antioksidativnom djelovanju micelije C. militaris uzgojenih na različitim podlogama [49]. Trenutna studija se fokusirala na renoprotektivna svojstva micelije C. militaris in vivo i upoređivala je efekte micelije C. militaris inkubirane u novim medijima. Rezultati su pokazali da su miševi s oštećenjem bubrega tretirani micelijom C. militaris uzgojenom na HKS ili CM plus A mediju imali znakove poboljšanja funkcije bubrega. .e HKS medij sadrži ekstrakt kvasca i dvostruko više peptona nego CM medij; štaviše, ima očigledan nedostatak glukoze. .e HKS medij je medij s visokim sadržajem dušika, dok je CM medij medij s visokim udjelom ugljika. Mi smo pionirski istraživači u korištenju HKS i CM medija za umjetnu kultivaciju micelije C. militaris kako bismo razumjeli različite efekte koje medij s visokim sadržajem dušika (HKS) i medij s visokim udjelom ugljika (CM) imaju na biosintetske promjene micelije C. militaris.

Vitamin A je grupa organskih supstanci rastvorljivih u mastima koje uključuju retinol, retinal, retinoičnu kiselinu, nekoliko karotenoida provitamina A i beta-karoten [50]. Karotenoidi, koji su prekursori vitamina A, su izoprenoidne molekule koje sintetiziraju fotosintetske biljke, gljive i alge i odgovorni su za narandžastu, žutu i (neke) crvene boje različitog voća i povrća. Pokazalo se da vitamin A i njegovi srodni derivati ​​inhibiraju nekoliko bioloških funkcija, uključujući rast tumora, angiogenezu, metastaze i proliferaciju stanica, kao i induciraju staničnu apoptozu i diferencijaciju [51, 52]. Prisustvo vitamina A u medijumu je stimulisalo biosintezu -karotena u Phycomyces blakesleeanus [53], što sugeriše da je vitamin A snažan aktivator karotenogeneze u Phycomyces. Kao što je prikazano na slici 3(b), 30. dana u CM plus A grupi, micelija C. militaris je počela da vrši inhibitorni efekat na kreatinin u serumu. Nasuprot tome, tretman micelijom C. militaris u CM grupi (bez vitamina A) nije imao inhibitorni efekat na nivoe kreatinina u serumu. Pored toga, inhibitorni efekat nije primećen kod micelije C. militaris kada je vitamin A dodat u KHS medijum. Zbog toga je funkcija vitamina A u gljivama nejasna. Pretpostavljamo da vitamin A može osigurati materijal za miceliju C. militaris za sintetizaciju sekundarnih metabolita i na taj način utjecati na apoptozu stanica. Treba dalje proučavati ulogu vitamina u medijima kako bi se podržala industrijska proizvodnja micelije C. militaris [54].

Kliknite ovdje za kupovinuCistanche proizvodi

Dong et al. pokazao efekat micelije C. militaris na BUN i nivoe kreatinina u serumu kod dijabetičkih štakora izazvanih streptozotocinom [55]. Učinci inhibicije na BUN, kreatinin, mokraćnu kiselinu i proteine ​​otkrili su zaštitu ekstrakta C. militaris od dijabetičke nefropatije. .ey su pretpostavili da ekstrakt C. militaris ima veliki potencijal za liječenje dijabetesa. Yu et al. istraživali su efekat na smanjenje oštećenja bubrega tretmana Cordyceps militaris kod miševa sa dijabetičkom nefropatijom tipa 2 [56]. .ey je izvijestio da su glukoza u krvi, markeri bubrežne disfunkcije (npr. kreatinin u serumu i omjer težine bubrega i tjelesne težine) i patološke promjene u bubrežnim tkivima značajno ublažene i poboljšane nakon tretmana. Ovdje smo pokazali da su nivoi BUN-a kod uremičnih miševa inhibirani od strane micelije C. militaris kultivirane u mediju HKS, HKS plus A ili CM plus A nakon 10 dana, te u mediju HKS ili CM plus A nakon 30 dana ( Slika 3(a)). Pored toga, pokazali smo da su nivoi serumskog kreatinina inhibirani od strane micelije C. militaris kultivisane u medijumu HKS plus A nakon 10 dana, i u medijumu HKS ili CM plus A nakon 30 dana (Slika 3(b)). Otkrili smo da praškovi micelije C. militaris sakupljeni iz medija HKS i CM plus A imaju jači efekat na smanjenje nivoa BUN-a i kreatinina u serumu kako bi se popravilo oštećenje bubrega kod CKD miševa. Micelija C. militaris sakupljena iz različitih medija može ispoljiti različita jedinjenja koja imaju različite zaštitne efekte na CKD. Uzeto zajedno, tretman sa micelijom C. militaris može poboljšati biohemijski indeks CKD, ali ne može popraviti oštećenja u ovom modelu uremičnih miševa.

Khan et al. eksploatisani emulgel sa aspirinom za lokalnu primenu [57]; ovaj koncept bi se mogao dalje primijeniti u našoj studiji. Predlažemo da se micelija C. militaris može ubaciti u mikro/nano kuglice za primjenu kontroliranog oslobađanja lijeka. Pored toga, Fattepur et al. i Zharif et al. koristiti etanolni ekstrakt biljaka za proučavanje toksikološke, farmakološke aktivnosti ili sinergističkog učinka antibiotika [58, 59]. Ekstrakcija bioaktivnih jedinjenja bila je dobra ideja za naše dalje istraživanje. Stoga predlažemo da se etanolna ekstrakcija micelije C. militaris koristi i proučava u budućnosti.

Predlažemo da buduća istraživanja budu fokusirana na detaljan molekularni mehanizam imunomodulacijske aktivnosti, histopatološke promjene u tkivima bubrega i novu formulaciju micelije C. militaris.

Cistancheovi efekti

Zaključak

Uspješno smo uočili renoprotektivne efekte micelije C. militaris u novim medijima na miševima sa CKD. Operacija bubrega izvedena je na mladim miševima (otprilike 30 g) kako bi se izazvala uremija. .is je prvi izvještaj koji koristi četiri nova medija (HKS, HKS plus A, CM i CM plus A medij) za miceliju C. militaris. Svaki medij micelijskih C. militara na CKD ispoljava specifičan efekat na BUN, serumski kreatinin, tjelesnu težinu, ukupni protein i mokraćnu kiselinu. Rezultati su otkrili da HKS medij micelija C. militaris ima najjači učinak na smanjenje nivoa BUN-a i kreatinina u serumu za otklanjanje ozljede bubrega kod CKD miševa. .e HKS plus medijum micelija C. militaris bio je efikasan 10. dana, ali nije pogodan za dugotrajnu upotrebu (npr. 30 dana). CM medijum micelija C. militaris nije bio stručnjak za inhibiciju efekata na BUN ili kreatinin u serumu. .e CM plus Podloga micelija C. militaris ima prihvatljiv efekat na uremične miševe. Pretpostavljamo da micelija C. militaris uzgajana u mediju HKS ili CM plus A ima potencijal da bude nova funkcionalna hrana za CKD.

Učinkovitost Cistanchea na hroničnu bubrežnu bolest

Hronična bolest bubrega (CKD) je veliki javnozdravstveni problem širom svijeta, koji pogađa milione ljudi širom svijeta. CKD se karakterizira postupnim opadanjem funkcije bubrega, što često dovodi do završnog stadijuma bubrežne bolesti (ESRD). Uprkos napretku konvencionalne medicine, trenutno ne postoji efikasan tretman za prevenciju ili odlaganje progresije ESRD-a. Kao takav, interes je stavljen na alternativne terapije poput tradicionalne kineske medicine (TCM).

Cistanche je ljekovita biljka sa dugom istorijom upotrebe u TKM. Vjekovima se koristi za toniziranje bubrega, poboljšanje muške seksualne funkcije i produženje vijeka trajanja. Nedavna istraživanja pokazuju da ekstrakt Cistanchea može obećati kao alternativna terapija za CKD.

Istraživanja sugeriraju da ekstrakt Cistanchea ima moćna antioksidativna i protuupalna svojstva, koja mogu pomoći u zaštiti od oksidativnog stresa i upale u bubrezima. Studije su pokazale da Cistanche može poboljšati brzinu glomerularne filtracije (GFR), smanjiti proteinuriju i hematuriju i spriječiti fibrozu bubrega. Smatra se da su ovi efekti posljedica različitih bioaktivnih spojeva prisutnih u Cistancheu, uključujući feniletanoidne glikozide, iridoide, lignane i polisaharide.

Standardized Cistanche

U studijama na životinjama pokazalo se da ekstrakt Cistanche odgađa napredovanje CKD i poboljšava funkciju bubrega. Na primjer, jedna studija je otkrila da je tretman s ekstraktom Cistanche značajno smanjio nivoe proteina u urinu i oslabio strukturno oštećenje bubrega kod životinja s induciranim CKD. Druga studija na životinjama otkrila je da ekstrakt Cistanchea poboljšava GFR, smanjuje proteinuriju i apoptozu bubrežnih tubularnih epitelnih stanica i smanjuje fibrozu bubrega kod pacova s ​​CKD.

Klinička ispitivanja također pružaju dokaze koji podržavaju potencijalnu efikasnost Cistanchea u poboljšanju funkcije bubrega kod pacijenata sa CKD. U kliničkom ispitivanju sprovedenom na 62 učesnika sa stadijumom 3 CKD, oni koji su davali kapsule ekstrakta Cistanchea pokazali su značajno poboljšanje funkcije bubrega u poređenju sa onima koji su primali placebo. Primjena ekstrakta Cistanche povećava brzinu glomerularne filtracije, smanjuje proteinuriju i poboljšava funkciju bubrega.

Međutim, ostaju neka pitanja u vezi s idealnim režimom doziranja ekstrakta Cistanchea i njegovim dugoročnim sigurnosnim profilom. Dalja istraživanja su neophodna kako bi se odredile optimalne doze i tačni mehanizmi djelovanja uključeni u terapijske efekte Cistanchea na CKD.

Uprkos obećavajućim rezultatima, još uvijek postoje ograničenja koja se moraju uzeti u obzir kada se ekstrakt Cistanchea razmatra kao alternativna terapija za hroničnu bubuljicu. Prvo, većina do sada provedenih studija bile su pretkliničke ili kliničke pilot studije s malim veličinama uzoraka i promjenjivim dizajnom studija. Osim toga, mnoge od ovih studija prvenstveno su provedene na životinjskim modelima, a ne na ljudskim ispitivanjima. Potrebna su opsežnija, visokokvalitetna istraživanja kako bi se utvrdila sigurnost i djelotvornost Cistanchea kao tretmana za CKD. Štaviše, postoji i potreba za standardizovanom pripremom Cistanchea kako bi se osigurao ujednačen kvalitet i efikasnost.

Zaključno, pokazalo se da ekstrakt Cistanchea ima blagotvoran učinak na funkciju bubrega i može ponuditi obećavajuću alternativnu terapiju za pacijente koji pate od CKD. Iako su potrebna daljnja klinička ispitivanja velikih razmjera prije nego što se daju definitivne preporuke o terapeutskom potencijalu ekstrakta Cistanchea, rani podaci obećavaju i sugeriraju da bi se ova tradicionalna kineska medicina mogla koristiti kao dio holističkog pristupa liječenju CKD. Kao i uvijek, pacijenti se moraju posavjetovati sa svojim zdravstvenim radnicima u vezi sa bilo kojom alternativnom terapijom koju razmatraju kako bi izbjegli neželjene efekte i osigurali sigurnost.

Ekstrakt Cistanche

Reference

[36] Y. Ji, A. Su, G. Ma et al., "Poređenje bioaktivnih sastojaka i efekata na mikrobiotu crijeva in vitro fermentacijom između Ophicordyceps sinensis i Cordyceps militaris," Journal of Functional Foods, vol. 68, ID članka 103901, 2020.

[37] P. Aramwit, N. Bang, J. Ratanavaraporn, T. Nakpheng i T. Srichana, "Cordycepin protiv raka koji proizvodi Cordyceps militaris koji raste na mrtvoj larvi Bomby more svilene bube," Journal of Agricultural Science, vol. 6, str. 41–53, 2014.

[38] X. Li, Q. Liu, W. Li et al., "Proboj u umjetnom uzgoju kineskog kordicepsa u velikim razmjerima i njegov utjecaj na nauku, ekonomiju i industriju," Critical Reviews in Biotechnology , vol. 39, br. 2, str. 181–191, 2019.

[39] F. Wu, H. Yan, X. Ma et al., "Poređenje strukturne karakterizacije i biološke aktivnosti kiselih polisaharida iz Cordyceps militaris uzgojenih u različitim medijima," World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol. 28, br. 5, str. 2029–2038, 2012.

[40] Y. Ohta, J.-B. Lee, K. Hayashi, A. Fujita, DK Park i T. Hayashi, "In vivo anti-influenza virusna aktivnost imunomodulatornog kiselog polisaharida izolovanog iz kordicepsa koji se uzgaja na proklijalom sojinom zrnu," ​​Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 55, br. 25, str. 10194–10199, 2007.

[41] SK Das, M. Masuda, M. Hatashita, A. Sakurai i M. Sakakibara, "Optimizacija medijuma kulture za proizvodnju kordicepina korišćenjem mutanta Cordyceps militaris dobijenog zračenjem jonskim snopom", Process Biochemistry, vol. 45, br. 1, str. 129–132, 2010.

[42] Y.-X. Gu, Z.-S. Wang, S.-X. Li i Q.-S. Yuan, "Uticaj više faktora na akumulaciju nukleozida i baza u Cordyceps militaris", Food Chemistry, vol. 102, br. 4, str. 1304–1309, 2007.

[43] X.-B. Mao, T. Eksriwong, S. Chauvatcharin i J.-J. Zhong, "Optimizacija izvora ugljika i omjera ugljik/azot za proizvodnju kordicepina potopljenim uzgojem ljekovite gljive Cordyceps militaris," Process Biochemistry, vol. 40, br. 5, str. 1667–1672, 2005.

[44] B. Chen, Y. Sun, F. Luo i C. Wang, "Bioaktivni metaboliti i potencijalni mikotoksini koje proizvode kordiceps gljive: pregled sigurnosti", Toxins, vol. 12, br. 6, str. 410, 2020.

[45] V. Kaushik, A. Singh, A. Arya, SC Sindhu, A. Sindhu i A. Singh, "Poboljšana proizvodnja kordicepina u Ophiocordyceps sinensis korištenjem dodataka za rast u potopljenim uslovima," Biotechnology Reports, vol. 28, ID članka e00557, 2020.

[46] A. Suparmin, T. Kato, H. Takemoto i EY Park, "Metaboličko poređenje zračnog i potopljenog micelija formiranog u tečnoj površinskoj kulturi Cordyceps militaris", Microbiology open, vol. 8, br. 9, ID članka e00836, 2019.

[47] H.-W. Lou, Y. Zhao, H.-B. Tang, et al., "Transkriptomska analiza Cordyceps militaris otkriva gene povezane sa sintezom karotenoida i identifikacijom funkcije Cmtns gena," Frontiers in Microbiology, vol. 10, str. 2105, 2019.

[48] ​​L. Wu, H. Sun, Y. Hao et al., "Hemijska struktura i inhibicija -glukozidaze polisaharida iz Cordyceps militaris sa različitim razvojnim fazama," International Journal of Biological Macromolecules, vol. 148, str. 722–736, 2020.

[49] PH Leung, S. Zhao, KP Ho, i JY Wu, "Hemijska svojstva i antioksidativna aktivnost egzopolisaharida iz kulture micelija Cordyceps sinensis gljive Cs-HK1," Food Chemistry, vol. 114, br. 4, str. 1251–1256, 2009.

[50] AS Hombali, JA Solon, BT Venkatesh, NS Nair i JP Peña-Rosas, "Obogaćivanje osnovnih namirnica vitaminom A za nedostatak vitamina A", Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 5, ID članka CD010068, 2019.

[51] F. Alizadeh, A. Bolhassani, A. Khavari, SZ Bathaie, T. Naji, i SA Bidgoli, "Retinoidi i njihovi biološki efekti protiv raka," International Immunopharmacology, vol. 18, br. 1, str. 43–49, 2014.

[52] N. Bushue i Y.-JY Wan, "Retinoid pathway and cancer therapeutics," Advanced Drug Delivery Reviews, vol. 62, br. 13, str. 1285–1298, 2010.

[53] MJ Ruiz-Hidalgo, EP Benito, G. Sandmann i AP Eslava, ".e gen fitoen dehidrogenaze Phycomyces: regulacija njegove ekspresije plavom svjetlošću i vitaminom A", Molekularna i opšta genetika MGG, vol. 253, br. 6, str. 734–744, 1997.

[54] N. Chitsaz, L. Dehghani, M. Rezvani, V. Shaygannejad, F. Khorvash i N. Esmalian-Afyouni, ".uporedna procjena dodatka vitamina D o glikemijskim indeksima kod autoimunih bolesti," Biointerface Research in Primijenjena hemija, vol. 6, str. 1627–1630, 2016.

[55] Y. Dong, T. Jing, Q. Meng, et al., "Studije o antidijabetičkim aktivnostima ekstrakta Cordyceps militaris kod dijabetičkih Sprague-Dawley pacova izazvanih streptozotocinom," BioMed Research International, vol. 2014, ID članka 160980, 11 strana, 2014.

[56] S.-H. Yu, NK Dubey, W.-S. Li et al., "Tretman Cordyceps militaris čuva funkciju bubrega kod miševa sa dijabetičkom nefropatijom tipa 2", PLoS One, vol. 11, br. 11, ID članka e0166342, 2016.

[57] J. Khan, S. Norfarhani, RK Sahu, et al., "Razvoj i evaluacija topikalnog emulgela aspirina koristeći različite polimerne baze", Research Journal of Pharmacy and Technology, vol. 13, br. 12, str. 6300–6304, 2020.

[58] S. Fattepur, KC Nilugal, TT Darshan, et al., "Toksikološka i farmakološka aktivnost etanolnih ekstrakata Catharanthus roseus kod eksperimentalnih životinja," Međunarodni časopis za medicinsku toksikologiju i pravnu medicinu, vol. 21, br. 3- 4, str. 141–144, 2018.

[59] N. Sharif, F. Santosh, CN Kiran, A. Fadli, A. Ibrahim i G. Nizam, "Sinergistički efekat etanolnog ekstrakta listova melastoma malabataricum i antibiotika," Međunarodni časopis za medicinsku toksikologiju i pravnu medicinu, vol. 21, br. 3-4, str. 167–170, 2018.

Chih-Hui Yang, 1,2,3Wen-Shuo Kuo,4 Jun-ShengWang,2Yi-Ping Hsiang,3,5Yu-Mei Lin,1,6 Yi-Ting Wang, 1,6 Fan-Hsuan Tsai,6 Chun- Ting Lee,6,7 Jiun-Hua Chou,1 Huei-Ya Chang,1 Lung-Shuo Wang, 6,8 Shu-Chi Wang, 6,9 i Keng-Shiang Huang 6

1 Odsjek za biološke nauke i tehnologiju, Univerzitet I-Shou, Kaohsiung, Tajvan

2 Tajvanski institut za istraživanje instrumenata, Nacionalne laboratorije za primijenjena istraživanja, Hsinchu, Tajvan

3 Farmaceutski odjel bolnice E-Da, Kaohsiung, Tajvan

4 Škola hemije i nauke o materijalima, Univerzitet informacionih nauka i tehnologije u Nanjingu, Nanjing, Kina

5 Odsjek za biotehnologiju i hemijsko inženjerstvo, Univerzitet I-Shou, Kaohsiung, Tajvan

6 Fakultet kineske medicine za postdiplomski studij, Univerzitet I-Shou, Kaohsiung, Tajvan

7 Klinika kineske medicine Amulette, Tajpej, Tajvan

8 Odjel za kinesku medicinu, bolnica Sin-Lau, Tainan, Tajvan

9 Medicinski fakultet za međunarodne studente, Univerzitet I-Shou, Kaohsiung, Tajvan