Dio 2: Ekstrakti Cistanche Deserticola mogu antagonizirati imunosenescenciju i produžiti životni vijek kod miševa sklone starenju 8 (SAM-P8)

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

3.5. Ekstrakti dfCistanche deserticola(ECD) Promovirajte.

Apoptoza i inhibiranje nekroze limfocita kod SAM-P8 miševa. Nivoi nekroze i apoptoze u populaciji limfocita krvi analizirani su dvostrukim bojenjem Aneksinom V-FITC V/PI. Ovo je otkrilo da je udio nekrotičnih limfocita u SAM-P8mic bio značajno veći nego kod SAM-R1 kontrolnih životinja, dok je udio apoptotičkih limfocita bio manji (Slika 7). Dodatak ishrani miševa SAM-P8 sa tri različite doze ECD bio je u stanju da inhibira nivoe nekroze uočene u populacijama perifernih limfocita, dok su samo dva viša nivoa ECD suplementacije izazvala značajnu promenu u nivou apoptotičkih limfocita (Slika 7).

3.6. Ekstrakti odCistanche deserticola(ECD) Smanjenje proinflamatornog citokina IL-6 kod SAM-P8 miševa.

Kao daljnji pokazatelj sposobnosti ECD-a da utiče na starosne promjene u imunološkom sistemu, efekat dodataka ishrani ECD-a na nivo brojnih citokina (IFN-, TNF-, IL-2.IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF i IL-3) analizirani su citometrijskom analizom niza zrna (CBA) koja uključuje bojenje antitijelima označenim fluorescentnom bojom zajedno sa citometrijskim zrncima za hvatanje. Rezultati (Slika 8) su pokazali da inflamatorni citokin IL-6 nije povećan kod 8-mjesečnih SAM-P8 miševa u poređenju sa kontrolnim SAM-R1 miševima iste starosti, ali je značajno povećan kada u poređenju sa6-mjesečnim SAM-R1 miševima (rezultati nisu prikazani). Međutim, suplementacija sa visokim i srednjim dozama ECD-a mogla je proizvesti statistički značajno smanjenje nivoa IL-6 u plazmi (Slike 8(a) i 8(b),<>

(IFN-,TNF-,IL-2,IL-10, GM-CSF i IL-3) nisu pokazali značajne varijacije između grupa miševa tretiranih SAM-P8, SAM-R1 i ECD (podaci nije prikazano).

4. Diskusija

Imunološka odbrana protiv novoinvazivnih mikroorganizama ili endogenih tumorskih ćelija ovisi o raznolikosti repertoara T stanica, koji se zauzvrat oslanja na stvaranje i održavanje naivnih T-ćelija[19]. Tokom procesa starenja, pokazalo se da se raznolikost repertoara T-ćelija dramatično smanjuje zbog progresivnog iscrpljivanja naivnih T ćelija u perifernom rezervnom bazenu. Smatra se da je ovaj nedostatak naivnih T-ćelija odgovornih za osjetljivost starijih ljudi na infekcije, rak i loše ishode nakon vakcinacije [20]. Različite intervencije, uključujući ograničenje kalorija [7], vježbanje [21] i suplementaciju vitaminom E [8], korištene su za uspješno obnavljanje naivnih T ćelija i time produživanje životnog vijeka i smanjenje pojave infekcije i raka kod starijih osoba. U ovoj studiji smo pokazali da je ECD u stanju da poveća nivo naivnih T ćelija u perifernom bazenu i da je istovremeno došlo do produženja životnog veka i smanjenja učestalosti formiranja tumora kod miševa sa ubrzanim starenjem (ECDtherapeutic groupversusSAM-P8 ,0 naspram 1/6). Stoga se čini razumnim zaključiti da sposobnost ECD-a da preokrene starosno osiromašenje perifernih naivnih T-ćelija može doprinijeti njegovim poznatim efektima u smanjenju bolesti povezanih sa starenjem koja proizilazi iz dugoročnih kliničkih opservacija.

5. Materijali i metode

5.1. Materijali.

U normalnom imunološkom odgovoru, nakon zadržavanja i eliminacije stranog antigena, većina klonski proširenih T-ćelija prolazi kroz apoptozu, a samo mali dio se zadržava kao memorijske T-ćelije. Kao posljedica toga, kako imunološki kompetentan organizam stari, T ćelije periferne memorije se akumuliraju kao rezultat doživotnog izlaganja stranim antigenima pretvarajući naivne T-ćelije u memorijske ćelije[22,23]. Brojne studije sugeriraju da defekti apoptoze limfocita kod starijih životinja i ljudi također doprinose povećanju memorijskog odjeljka T-ćelija [24,25]. Osim toga, nedavna studija je pokazala da prevelika količina T-ćelija periferne memorije može inhibirati homeostatsku proliferaciju naivnih T-ćelija [26]. Ove nedavne studije su također sugerirale da memorijske T stanice mogu lučiti visoke razine proinflamatornih citokina koji mogu doprinijeti upornim upalama u različitim tkivima starijih osoba. Shodno tome, smanjenje nivoa memorijskih T-ćelija trebalo bi da bude korisno i za homeostatsku proliferaciju naivnih T ćelija i za ublažavanje viška upalnog stanja koje se vidi kod starijih organizama. U ovoj studiji, pokazalo se da dodatak ishrani sa ECD može smanjiti nivo perifernih memorijskih T ćelija i povećati nivoe naivnih T ćelija. Osim toga, dodatak ECD-u povećao je prostor za apoptozu za nove naivne limfocite. Inhibirana je i nekroza u perifernim limfocitima, koja je uglavnom uzrokovana oksidativnim stresom kod senilnih životinja.

Postoje opsežni dokazi koji ukazuju na to da starenje u organizmu nije karakterizirano samo imunološkim nedostatkom već i porastom kronične upale[27. Proinflamatorni status se najjasnije manifestuje u povećanju i IL-1 u cirkulaciji zajedno sa povećanom učestalošću hroničnih upalnih bolesti povezanih sa starenjem kao što su Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest i ateroskleroza. Jedna od najistaknutijih inflamatornih citokineza je IL-6 i njegova koncentracija u plazmi raste sa starenjem i bolestima povezanim sa starenjem [18,28,29], a epidemiološke studije sugeriraju da je IL-6 dobar biomarker dugovječnosti jer je usko povezan sa mortalitetom kod starijih pacijenata [30,31]. U skladu s tim, brojne terapijske intervencije koje smanjuju koncentraciju IL-6 mogu

Slika 6: Efekti dodataka ishrani ECD na antigen matičnih ćelija-1 (Sca-1) u limfocitima periferne krvi SAM-P8 miševa. Osmomjesečni mužjaci SAM-P8 i kontrolni SAM-RI miševi podijeljeni su u 5 grupa. 3 tretirane grupe životinja SAM-P8 hranjene su četiri sedmice dijetama sa niskim (100 mg/kg), srednjim 500 mg/kg) i visokim dozama od 250 mg/kg ECD, a dvije kontrolne grupe životinja su hranjene na ista dijeta bez suplemenata. Nakon 12 sati gladovanja, periferna krv je sakupljena od anesteziranih životinja i podvrgnuta FACS analizi, sve kao što je opisano u Odjeljku 5. (a) Reprezentativni FACS dijagrami različitih grupa miševa generirani uvođenjem antigena matičnih stanica-1 (Sca{{ 20}})pozitivne ćelije.(b) Histogram koji pokazuje procenat antigena matičnih ćelija-1 (Sca-1)pozitivnih ćelija u perifernoj krvi različitih grupa životinja. {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Slika 7: Efekti dodataka ishrani ECD na apoptozu i nekrozu limfocita kod starijih SAM-P8 miševa. Osmomjesečni mužjaci SAM-P8 i kontrolni SAM-RI miševi podijeljeni su u 5 grupa. 3 tretirane grupe životinja SAM-P8 hranjene su četiri sedmice ishranom dopunjenom niskim (100 mg/kg), srednjim (500 mg/kg) i visokim (2500 mg/kg) dozama ECD, a dvije kontrolne grupe životinja hranjene su ista dijeta bez dodataka. Nakon 12 sati gladovanja, periferna krv je sakupljena od anesteziranih životinja i podvrgnuta FACS analizi, sve kao što je opisano u odjeljku 5. (a) Reprezentativni FACS dijagrami različitih grupa miševa generirani gatiranjem na dvostruko obojenim krvnim limfocitima s aneksinom V-FITC /PI. (b) Histogram koji pokazuje postotak apoptotičkih limfocita (aneksin V-FITC pozitivne ćelije) u perifernoj krvi različitih grupa životinja. (c) Histogram koji pokazuje postotak nekrotičnih limfocita (PI-pozitivnih ćelija) u perifernoj krvi različitih grupa životinja. Šipke predstavljaju mear SD (u svakoj grupi,= 10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Slika 8: Efekti dodataka ishrani ECD na nivo proinflamatornog citokina L6 u serumu SAM-P8 miševa. Osmomjesečni mužjaci SAM-P8 i kontrolni SAM-RI miševi su podijeljeni u 5 grupa. 3 grupe koje su tretirale SAM-P8 životinje su hranjene četiri sedmice ishranom sa niskim (100 mg/kg), srednjim (500 mg/kg). kg) i visoke (2500 mg/kg) doze ECD-a, a dvije kontrolne grupe životinja hranjene su istom dijetom bez dodataka. Nakon 12 sati gladovanja, plazma je sakupljena i citokini plazme u različitim grupama životinja su određeni citometrijskim imunotestom niza kuglica, sve kako je opisano u odjeljku 5. (a) Reprezentativni EACS grafikoni različitih grupa miševa generirani pomoću gatingonIL-6 citometrijski niz zrna. (b) Histogram koji pokazuje koncentracije citokina IL6 u plazmi različitih grupa životinja. Trake predstavljaju srednju vrijednost±SD (u svakoj grupi,= 10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

ublažavaju bolesti povezane sa starenjem [18]. S obzirom na to, značajno je da je u ovoj studiji suplementacija ishrani sa ECD bila u stanju da smanji periferne koncentracije IL-6, sa implikacijom da ovaj efekat može doprineti osnovnim mehanizmima smanjenja učestalosti bolesti povezanih sa starenjem koje dobiveni su dugotrajnom primjenom ECD-a u kliničkoj praksi.

Uz promjene u adaptivnom imunološkom odgovoru koje se dešavaju s godinama, postoje i velike promjene u urođenom imunitetu sa starenjem organizma. Među njima, promjene u prirodnim stanicama ubojicama [18], prvoj liniji ćelijskih komponenti koje osiguravaju direktnu citotoksičnu lizu tumorskih stanica i ćelija inficiranih virusom, bile su opsežne jer stariji ljudi pokazuju povećanu osjetljivost i na razvoj tumora i na virusne infekcije [32]. ]. Ova studija je pokazala da su CD3 plus Ly49 plus NK ćelije bile prisutne na značajno nižim razinama kod senilnih SAM-P8 miševa u poređenju sa SAM-R1 kontrolnim životinjama, što može biti još jedan temeljni faktor koji objašnjava povećanu osjetljivost starijih miševa na rak i virusnu infekciju. Povećanje nivoa NK ćelija uočeno u ovoj studiji nakon dodataka ishrani sa ECD moglo bi stoga biti korisno za starije organizme u smislu povećane otpornosti na razvoj tumora i virusne infekcije. Međutim, potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnila uloga efekta ECD-a na NK ćelije u ostarjelim organizmima.

U zaključku, ova studija je pokazala da tretman podvrsta miša sklone starenju, SAM-P8, sa ECD-om može inducirati značajan preokret imunoloških promjena povezanih sa starenjem. Smanjeni su nedostaci u perifernoj i populaciji ćelija slezene naivnih T-ćelija i NK ćelija, dok su nivoi redundantnih memorijskih ćelija takođe smanjeni. Dodatno, suplementacija ishranom sa ECD je bila u stanju da potisne i nekroze u perifernim limfocitima i nivoe proinflamatornog citokina, IL-6. Konačno, osim što je dovelo do promjena u senilnom imunološkom sistemu, ECD dodatak ishrani značajno je produžio životni vijek senileSAM-P8 mikrofona.

Reference

[1] Y.Jiang i PF.Tu, "Analiza hemijskih sastojakaCistanchevrste, "Journal of Chromatography A, vol.1216, br. 11, str.{2}},2009.

[2] Q. Xiong K. Hase Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba i SKadota. „Hepatoprotektivna aktivnost feniletanoida izCistanche deserticola," PlartaMedica, vol. 64, br. 2, str.120-125, 1998.

[3]"Imunologija i starenje u Evropi. Zbornik radova sa 2. konferencije o osnovnoj biologiji i kliničkom uticaju imunosenescencije, mart 22-26, 2001, Cordoba, Španija, "Eksperimentalna gerontologija, vol.37, br.{5} }, str.{6}}, 2002.

[4] G.-D. Xuan i C.-Q. Liu, „Istraživanje oefekat feniletanoidnih glikozida (PEG) Cistanche deserticolaonprotiv starenjakod ostarjelih miševa izazvanih D-galaktozom, "Journal of Chinese Medicinal Materials, vol31, br. 9, str. 1385-1388, 2008.

[5] D.Aw, ABSilva i DBPalmer, "Izazovi u nastajanju imunosenescencije za populaciju koja stari," Immwmology, vol.120, br.4, str.{3}},2007.