Dio 1: Efluks magnezija iz ćelija Drosophila Kenyon je kritičan za normalno i dugotrajno pamćenje poboljšano ishranom

za više informacija:Ali.ma@wecistanche.com

Molimo kliknite ovdje do 2. dijela

Yanying Wu1, Yosuke Funato2, Eleonora Meschi1, Kristijan D Jovanoski1, Hiroaki Miki2, Scott Waddell1*

1Centar za neuronske krugove i ponašanje, Univerzitet u Oksfordu, Tinsley Building, Oxford, Ujedinjeno Kraljevstvo; 2Odjel za ćelijsku regulaciju, Istraživački institut za mikrobne bolesti, Univerzitet Osaka, Suita, Japan

Sažetak Dodatak magnezija (Mg2 plus) u ishrani može poboljšatimemorijakod mladih i starijih pacova.Memorija-pojačavanje kapaciteta se uglavnom pripisuje povećanju sinaptičke gustine hipokampusa i povišenoj ekspresiji NR2B podjedinice glutamatnog receptora NMDA tipa. Ovdje pokazujemo da Mg2 plus hranjenje također poboljšava dugoročnomemorijaDrosophila. Normal i Mg2 plus - poboljšana muhamemorijaizgleda nezavisno od NMDA receptora u telu pečurke i umesto toga zahteva ekspresiju konzerviranog CNNM tipa Mg2 plus -efluks transportera kodiranog neproširenim (uex) genom. UEX sadrži navodnu cikličku homološku domenu koja se vezuje za nukleotide i njegova mutacija odvaja vitalnu ulogu za uex od funkcije umemorija. Štaviše, lokalizacija UEX-a u Kenyon ćelijama (KC) tijela gljive je promijenjenamemorija-defektne mušice koje sadrže mutacije u genima vezanim za cAMP. Funkcionalno snimanje sugerira da je efluks ovisan o UEX-u potreban za sporo ritmično održavanje KC Mg2 plus. Predlažemo da je regulirani neuronski Mg2 plus efluks kritičan za normalan i Mg2 plus -poboljšanmemorija.

Kliknite zaCistanche vitamin shop i Cistanche za pamćenje

Uvod

Magnezijum (Mg2 plus) igra ključnu ulogu u ćelijskom metabolizmu i smatra se esencijalnim kofaktorom za više od 350 enzima (Romani i Scarpa, 2000; Vink i Nechifor, 2011). Kao rezultat toga, promjene Mg2 plus homeostaze su povezane sa širokim spektrom kliničkih stanja, uključujući ona koja utiču na nervni sistem, kao što su glaukom (DeToma et al., 2014), Parkinsonova bolest (Hermosura et al., 2005; Hermosura i Garruto, 2007; Lin et al., 2014; Shindo et al., 2016), Alchajmerova bolest (Andra´si et al., 2000; Andra´si et al., 2005; Cilliler et al., 2007; Durlach et al. ., 1997; Glick, 1990; Lemke, 1995; Chui i sur., 2011; Vural i sur., 2010), anksioznost (Sartori et al., 2012), depresija (Whittle et al., 2011; Murck, 2002; Murck, 2013; Rasmussen et al., 1990; Ghafari et al., 2015) i intelektualni invaliditet (Arjona et al., 2014).

Možda iznenađujuće, povećanje Mg2 plus u mozgu kroz ishranu može povećati plastičnost neurona imemorijaperformanse mladih i starijih glodara, mjerene u različitim zadacima ponašanja (Slutsky et al., 2010; Landfield i Morgan, 1984; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013). Osim toga, povišeni Mg2 plus su smanjili kognitivne deficite u mišjem modelu Alchajmerove bolesti (Li et al., 2013) i poboljšali izumiranje sjećanja na strah (Abumaria et al., 2011). Ovi naizgled korisni učinci doveli su do prijedloga da dijetetski Mg2 plus može imati terapeutsku vrijednost za pacijente s različitimmemorija-problemi u vezi (Billard, 2011).

Unatoč velikom broju potencijalnih mjesta djelovanja Mg2 plus u mozgu,memorija-svojstvo poboljšanja kod glodara se uglavnom pripisuje povećanju sinaptičke gustine hipokampusa i aktivnosti N-metil-D-aspartat glutamatnih receptora (NMDAR). Ekstracelularni Mg2 plus blokira kanalne pore NMDAR-a i na taj način inhibira prolaz drugih jona (Mayer et al., 1984; digest Poslovična izreka 'ti si ono što jedeš' savršeno sažima koncept da naša prehrana može utjecati i na naše mentalne i fizičko zdravlje. Znamo da je hrana koja je dobra za srce, poput orašastih plodova, masne ribe i bobičastog voća, dobra i za mozak. Znamo i da su vitamini i minerali neophodni za sveukupno dobro zdravlje. Ali postoje li dokazi da bi povećanje unosa određenih vitamina ili minerala moglo pomoći u jačanju vašeg mozga?

Iako bi to moglo zvučati gotovo predobro da bi bilo istinito, postoje dokazi da je to slučaj sa barem jednim mineralom, magnezijem. Studije na glodavcima su pokazale da dodavanje dodataka magnezija hrani poboljšava koliko dobro životinje obavljaju zadatke pamćenja. I mlade i stare životinje imaju koristi od dodatnog magnezijuma. Čak i stariji glodari sa stanjem sličnim Alchajmerovoj bolesti pokazuju manjememorijagubitak kada se daju suplementi magnezijuma. Ali šta je sa drugim vrstama?

Wu et al. sada pokazuju da suplementi magnezijuma takođe povećavaju performanse pamćenja kod voćnih mušica. Jedna grupa muva je nekoliko dana hranjena standardnim kukuruznim brašnom, dok je druga grupa dobijala kukuruzno brašno obogaćeno magnezijumom. Obje grupe su zatim obučene da povezuju miris s nagradom za hranu. Muhe koje su primile dodatni magnezijum pokazale su se boljememorijana miris kada se testira 24 sata nakon treninga.

Wu et al. pokazuju da magnezijum poboljšavamemorijau muvama putem različitog mehanizma od onog koji je ranije bio prijavljen za glodare. Kod glodara, magnezijum je povećao nivoe receptorskog proteina za hemikaliju u mozgu koja se zove glutamat. Nasuprot tome, kod voćnih mušicamemorijapojačanje je zavisilo od proteina koji prenosi magnezijum iz neurona. Mute mutanti kojima je nedostajao ovaj transporter pokazivale su oštećenje pamćenja. Za razliku od normalnih muva, one bez transportera nisu pokazale poboljšanje pamćenja nakon što su jele hranu obogaćenu magnezijumom. Rezultati sugeriraju da transporter može pomoći u prilagođavanju nivoa magnezija u moždanim stanicama kao odgovor na neuralnu aktivnost.

Ljudi proizvode četiri varijante ovog transportera magnezijuma, od kojih je svaka kodirana različitim genom. Jedan od ovih transportera je već bio uključen u razvoj mozga. Nalazi Wu et al. sugeriraju da transporteri također mogu djelovati u mozgu odrasle osobe kako bi utjecali na spoznaju. Potrebne su daljnje studije kako bi se testiralo da li ciljanje na transporter magnezija može biti obećavajuće za liječenjememorijaoštećenja.

Bekkers i Stevens, 1993; Jahr i Stevens, 1990; Nowak et al., 1984). Važno je da je prethodna neuronska depolarizacija, potaknuta drugim transmiterskim receptorima, potrebna da bi se oslobodio Mg2 plus blok na NMDAR-u i omogućio priliv Ca2 plus glutamatom. NMDAR, stoga, igra važnu ulogu u neuronskoj plastičnosti kao potencijalni detektor Hebbian koincidencija. Akutno povišenje ekstracelularne koncentracije Mg2 plus ([Mg2 plus ]e) unutar fiziološkog raspona (0,8-1,2 mM) može antagonizirati indukciju dugotrajne potenciranosti zavisne od NMDAR (Dunwiddie i Lynch, 1979; Malenka et al., 1992; Malenka i Nicoll, 1993; Slutsky et al., 2004). Nasuprot tome, povećanje [Mg2 plus ]e nekoliko sati u neuronskim kulturama dovodi do pojačanja NMDAR posredovanih struja i olakšavanja ekspresije LTP (Slutsky et al., 2004). Pojačavajući efekti povećanog [Mg2 plus ]e također su uočeni in vivo u mozgu pacova hranjenih Mg2 plus -L-treonatom (Slutsky et al., 2010). Hipokampalni neuronski krugovi podliježu homeostatskoj plastičnosti (Turrigiano, 2008) kako bi se prilagodili povećanom [Mg2 plus ]e povećanjem ekspresije NMDAR-a koji sadrže NR2B podjedinicu (Slutsky et al., 2004; Slutsky et al., 2010). Vjeruje se da veća gustina hipokampalnih sinapsi s NR2B koji sadrže NMDAR kompenzira kronično povećanje [Mg2 plus ]e pojačavanjem NMDAR struje tokom rafalnog pucanja. U prilog ovom modelu, miševi koji su genetski modifikovani da prekomerno eksprimiraju NR2B pokazuju pojačan LTP hipokampusa i ponašanjememorija(Tang et al., 1999).

Olfactorymemorijakod Drosophila uključuje heterosinaptički mehanizam vođen jačanjem dopaminergičkih neurona, što rezultira presinaptičkom depresijom kolinergičkih veza između Kenyon ćelija (KCs) tijela gljive (MB) i izlaznih neurona tijela gljive (MBON) (Schwaerzel et al., 200 200). ; Aso et al., 2010; Aso et al., 2012; Claridge-Chang et al., 2009; Burke et al., 2012; Liu et al., 2012; Plac¸ais et al., 2013; Owald et al. ., 2015; Hige et al., 2015; Barnstedt i sur., 2016; Parisse i sur., 2016; Aso i sur., 2014; Oswald i Waddell, 2015). Osim toga, olfaktorne informacije se prenose do KC holinergičkim prijenosom iz neurona olfaktorne projekcije (Yasuyama et al., 2002; Leiss et al., 2009). Iako je moguće da se glutamat isporučuje u MB mrežu putem koji još nije identificiran, trenutno ne postoji očigledna lokacija za plastičnost zavisnu od NMDAR u poznatoj arhitekturi holinergičkih ulaznih ili izlaznih slojeva (Barnstedt et al., 2016. ). Muva, stoga, pruža potencijalni model za istraživanje drugih mehanizama putem kojih bi se Mg2 plus iz ishrane mogao poboljšatimemorija.

Pojačavajući efekti dopamina zavise od dopaminskog receptora tipa Dop1R D1- (Kim et al., 2007; Qin et al., 2012; Handler et al., 2019), koji je pozitivno povezan sa proizvodnjom cAMP (Tomchik i Davis, 2009; Boto et al., 2014). Štaviše, rane studije na Drosophili identifikovale su cAMP fosfodiesterazu kodiranu dunce i rutabagu i adenilat ciklazu stimulisanu tipom I Ca2 plus, da su bitne za miris.memorija(Dudai et al., 1976; Byers et al., 1981; Dudai i Zvi, 1984; Chen et al., 1986; Livingstone et al., 1984; Levin et al., 1992). Studije na ćelijama sisara su pokazale da hormoni ili agensi koji povećavaju ćelijski cAMP često izazivaju značajnu ekstruziju Mg2 plus zavisnu od Na plus u ekstracelularni prostor (Romani i Scarpa, 1990b; Romani i Scarpa, 1990a; Romani i Scarpa, 2000; Vink i Nechifor, 2011; Vormann i Gu¨nther, 1987). Međutim, nejasno je da li ekstruzija Mg2 plus igra bilo kakvu ulogu u obradi u memoriji.

Ovdje pokazujemo da je Drosophila dugoročnamemorija(LTM) može se poboljšati uz dodatak dijetetskog Mg2 plus. Otkrili smo da je neprošireni (uex) (Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) gen, koji kodira funkcionalni ortolog muhe proteina Cyclin M2 Mg2 plus -efluks transportera (CNNM) sisara, kritičan zamemorija-poboljšavanje svojstva Mg2 plus. UEX funkcija u MB KC-ovima je potrebna za LTM, a funkcionalna restauracija uex-a otkriva da je MB ključno mjesto poboljšanja memorije ovisno o Mg2 plus. Kronično mijenjanje cAMP metabolizma uvođenjem mutacija u dnc ili rut genima mijenja ćelijsku lokalizaciju UEX-a. Štaviše, mutiranje domene očuvane ciklične nukleotidne-vezujuće homologije (CNBH) u UEX odvaja bitnu ulogu uex-a od njegove funkcije u memoriji. UEX vođen Mg2 plus efluks je neophodan za sporo ritmičko održavanje nivoa KC Mg2 plus što sugeriše potencijalnu ulogu za obradu Mg2 plus toka u memoriji.

Rezultati

Mg2 plus hranjenje poboljšava LTM muva divljeg tipa

Prethodne studije su objavile da je hranjenje pacova hranom koja sadrži visoku koncentraciju Mg2 plus - poboljšalo njihovu sposobnost učenja i pamćenja (Slutsky et al., 2010; Landfield i Morgan, 1984; Abumaria et al., 2011; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013.). Stoga smo testirali postoje li slični efekti kod muha tako što smo ih prije treninga hranili hranom koja sadrži visoku koncentraciju Mg2 plus. Iznenađujuće, muhe divljeg tipa koje su hranjene 4 dana prije treninga hranom sa dodatkom magnezijum hlorida (MgCl2) pokazale su značajno poboljšane performanse pamćenja 24 sata. Poboljšanje pamćenja ovisi o koncentraciji i bilo je maksimalno kada je hrana dodata 80 mM MgCl2 (slika 1A). Neposredne performanse memorije nisu očigledno poboljšane (slika 1B). Pojačavajući efekat MgCl2 je takođe primećen kod muva hranjenih magnezijum sulfatom (MgSO4), ali ne i kalcijum hloridom (CaCl2) (slika 1C). Osim toga, hranjenje muha 4 dana hranom koja sadrži između 5 i 80 mM stroncijum hlorida (SrCl2) rezultiralo je visokim nivoom smrtnosti, a muhe koje su preživjele hranjenje 5 mM SrCl2 nisu pokazale poboljšanu neposrednu ili 24-satnu memoriju (podaci nisu prikazani) . Efekti poboljšanja pamćenja se stoga mogu posebno pripisati suplementaciji dvovalentnog Mg2 plus.

Mg2 plus -pojačana memorija je nezavisna od NMDAR-a u tijelima gljiva

Budući da je poboljšano pamćenje magnezijum-L-treonata kod pacova bilo u korelaciji sa povećanjem regulacije hipokampalne NR2B podjedinice NMDAR-a (Slutsky et al., 2010), testirali smo promjene u ekspresiji glutamatnog receptora kod muva hranjenih MgCl2. RT-qPCR analize nisu otkrile značajnu razliku u obilju mRNA za navodne receptore NMDA (Nmdar1, Nmdar2), AMPA (GluRIA) ili kainatnog tipa (GluRIIA) u glavama uzetim od muva hranjenih 4 dana sa 80 mM MgCl2 naspram onih koji su hranjeni sa 1 mM MgCl2 (slika 1D).

Zatim smo direktno testirali da li je za poboljšanje memorije Mg2 plus potrebna funkcija NMDAR, tako što smo srušili ekspresiju Nmdar1 ili Nmdar2 gena koristeći transgene UAS vođene RNA interferencije

Slika 1. Mg2 plus dodatak ishrani poboljšava dugoročnu memoriju Drosophile. (A) Muhe divljeg tipa su obučene i testirane na 24-satnu pamćenje apetita nakon 1-5 dana ad libitum hranjenja hranom sa dodatkom Mg2 plus. Pamćenje je značajno poboljšano kod muva koje su hranjene 4 dana sa 80 mM MgCl2, u poređenju sa onima koje su hranjene sa 1 mM. 80 mM MgCl2 proizvodi neznatno veće performanse od 50 mM ili 100 mM i stoga se smatra optimalnim (zvjezdice označavaju p<0.05, t-test="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" groups="" for="" each="" time="" point,="" n="6–8)." (b)="" 4="" days="" of="" 80="" mm="" mgcl2="" food="" did="" not="" enhance="" immediate="" memory.="" (c)="" appetitive="" 24="" hr="" memory="" was="" enhanced="" by="" feeding="" wild-type="" flies="" for="" 4="" days="" with="" mgcl2="" and="" mgso4,="" but="" not="" cacl2.="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05, anova,="" n="6)" between="" mg2+="" fed="" and="" plain="" groups.="" (d)="" rt-qpcr="" showed="" no="" significant="" differences="" in="" glutamate="" receptor="" mrna="" expression="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" fed="" flies="" (t-test,="" n="5)." (e)="" c739-gal4;="" uas-magfret-1="" flies="" were="" fed="" for="" 4="" days="" on="" food="" supplemented="" with="" mg2+.="" brains="" were="" dissected="" and="" fixed="" and="" a="" fluorescence="" emission="" ratio="" measurement="" (citrine/cerulean)="" was="" taken="" as="" an="" indicator="" of="" [mg2+]i.="" the="" magfret="" signal="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" ab="" lobes="" of="" flies="" fed="" with="" 80="" mm="" mgcl2="" than="" those="" fed="" with="" 1="" mm="" mgcl2=""><0.05, t-test,="" n="52–60)." unless="" otherwise="" noted,="" all="" data="" are="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" the="" mean="" (sem).="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05), individual="" data="" points="" displayed="" as="" open="">

Internetska verzija ovog članka uključuje sljedeće dodatke za sliku 1:

Dodatak za sliku 1. Obaranje N-metil-D-aspartat glutamatnog receptora (NMDAR) u tijelima gljiva ne narušava Mg2 plus poboljšano pamćenje.

(RNAi) konstrukti (Dietzl et al., 2007; Perkins et al., 2015). Od dvije nezavisne UAS-Nmdar1R-NAi i četiri UAS-Nmdar2RNAi linije koje smo testirali, samo jedna linija Nmdar1RNAi (BDSC 25941), kada je pokretana u svim neuronima neuronskim Synaptobrevin (nSyb)-GAL4, pokazala je značajno smanjene performanse 24 sata memorije, kao u poređenju sa heterozigotnim kontrolnim mušicama (slika 1—dodatak slike 1A). Nasuprot tome, selektivnija ekspresija ovog UAS-Nmdar1RNAi u ab KC-ovima relevantnim za LTM koristeći c739-GAL4 nije značajno umanjila performanse 24 sata memorije (Slika 1—dodatak slike 1B). Štaviše, muhe koje eksprimiraju Nmdar1RNAi u ab neuronima zadržale su robusnu Mg2 plus poboljšanu memoriju (slika 1—dodatak slike 1C). Ovi rezultati sugeriraju da Mg2 plus pamćenje ne mijenja ekspresiju glutamatnih receptora, niti zahtijeva funkciju NMDAR u ab KC.

Koncentracija Mg2 plus u ab neuronima je povišena kod muha hranjenih visokim Mg2 plus Koristili smo MagFRET, prvi genetski kodirani fluorescentni Mg2 plus senzor (Lindenburg et al., 2013.), kako bismo testirali da li hranjenje Mg2 plus mijenja intracelularnu koncentraciju Mg2 plus ([Mg2 plus ]i). Konstruisali smo muhe koje sadrže UAS-MagFRET-1 transgen i kombinovali ga sa c739-GAL4 da bismo izrazili MagFRET- 1 u ab KC. Uporedili smo FRET signale u fiksnim mozgovima iz c739; UAS-MagFRET-1 mušice hranjene hranom od 1 mM ili 80 mM MgCl2 tokom 4 dana. MagFRET signal je bio značajno veći u a i b kolateralama ab KC muva hranjenih sa 80 mM, nego kod onih hranjenih sa 1 mM (Slika 1E). Ovaj rezultat ukazuje da hranjenje Mg podiže neuronski [Mg2 plus ]i. S obzirom na afinitet MagFRET-1 (Kd=148 mM) i porast od ~50 posto u FRET signalu nakon vezivanja Mg2 plus (Lindenburg et al., 2013.), procjenjujemo da je povećanje od ~8 posto MagFRET signal izmjeren kod muva hranjenih 80 mM MgCl2 odgovara približno 50 mM povećanju ab KC [Mg2 plus ]i u prosjeku.

Neprošireni kodirani transporter Mg2 plus tipa CNNM ima ulogu u memoriji

Identifikovali smo neprošireni (uex; Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) kao apetitivni LTM koji mijenja gen, pojačan nagradom saharoze. Muhe sa uexMI01943 MiMIC insercijom (Venken et al., 2011) pokazale su jak defekt u 24-satnom pamćenju, ali njihov učinak odmah nakon treninga nije se razlikovao od onih kontrola divljeg tipa. Detaljnija analiza muva uexMI01943 otkrila je postojano raspadanje pamćenja koje je prvo postalo značajno drugačije od onog kod muva divljeg tipa 12 sati nakon treninga (slika 2A). Kod heterozigotnih uexMI01943/ plus muva nije uočen defekt pamćenja, što pokazuje da je ovaj navodni polni alel recesivan.

uex je privukao našu pažnju jer je to jedan ortolog muhe od četiri ljudska CNNM gena koji kodiraju Mg2 plus transportere (Ishii et al., 2016), a također sadrži navodni CNBH domen koji je strukturno povezan s onima u cikličkim nukleotidima kanali (Zagotta et al., 2003; Flynn et al., 2007; Kesters et al., 2015). Poravnavanje UEX sekvence od 834 aminokiselina sa CNNM1-4 otkriva posebno visoku konzervaciju sekvence sa CNNM2 i CNNM4 u DUF21, CBS paru i CNBH domenima (Slika 2—dodatak slike 1A–C). Stoga smo pretpostavili da UEX ima potencijal da poveže efekte poboljšanja pamćenja Mg2 plus u ishrani sa cAMP-ovisnom neuronskom plastičnošću.

Although uexMI01943 is assigned to the uex gene, the MiMIC element is annotated to lie 17 kb downstream of the uex coding region (Venken et al., 2011; Figure 2B). RYa (Yoon et al., 2016) is the next nearest gene to uexMI01943 but is >230 kb dalje. Prvo smo potvrdili MiMIC lokaciju inverznim PCR-om (Attrill et al., 2016). Važno je da kod ovih muha nije otkriveno dodatno umetanje MiMIC-a. Zatim smo testirali da li je uexMI01943 odgovoran za defekt memorije preciznim uklanjanjem MiMIC elementa ekscizijom posredovanom Minos transpozazom (Arca` et al., 1997; Slika 2— dodatak slike 2A i B). Uklanjanje MiMIC-a u uexMI01943.ex1 i uexMI01943.ex2 mušicama je vratilo normalne performanse memorije od 24 sata, pokazujući da je umetanje MiMIC-a potrebno za uexMI01943memorijadefekt (slika 2C).

I qRT-PCR mRNA i Western blot analiza proteinskih ekstrakata iz glava muva nisu otkrili značajnu razliku u ekspresiji uex/UEX kod uexMI01943 muva. Stoga smo koristili CRISPR da uvedemo stop kodon u peti kodirajući egzon uex lokusa (slika 2B i slika 2—dodatak slike 2C). Muhe homozigotne za rezultirajuću uexD mutaciju nisu bile održive kao odrasle osobe, uginule su u fazi larve. Za razliku od toga, heterozigotne muhe uexMI01943/uexD bile su održive, ali su njihove 24-satne muhe bile privlačne.memorijabio značajno oštećen (slika 2D). Ovi podaci pokazuju da je uex esencijalni gen i da je uexMI01943 održiv hipomorfni alel uex.

Testirali smo i averzivmemorijaperformanse uexMI01943 mutantnih muva. Homozigotne uexMI01943 muhe su odmah pokazanememorijakoji se nije razlikovao od heterozigotnih i divljih kontrola (Slika 2E). Međutim, njihovo 24-satno pamćenje, formirano nakon pet pokušaja averzivnog treninga u razmaku (Tully et al., 1994; Jacob i Waddell, 2020), ili jednog pokušaja treninga uz pomoć posta (Hirano et al., 2013), bilo je značajno narušeno. (Slika 2E). Ovi eksperimenti sugeriraju da su uexMI01943 muhe općenito ugrožene u svojoj sposobnosti da formiraju LTM. Osim ako nije drugačije naznačeno, sve naknadne analize odmemorijau ovoj studiji koristite apetitno kondicioniranje nagrađeno šećerom.

Slika 2. uexMI01943 mutantne mušice imaju dugotrajne kvarovememorija(LTM). (A) Apetitivno zadržavanje pamćenja testirano je u različitim vremenima nakon treninga. Muhe homozigotne za uexMI01943 pokazale su značajan defekt u pamćenju od 12 sati nakon treninga, u poređenju sa performansama heterozigotnih uexMI01943/ plus i kontrolne muhe divljeg tipa (p<0.05, anova,="" n="6–10)." (b)="" the="" uex="" locus="" lies="" on="" chromosome="" 2r="" between="" 3,900,285="" and="" 3,949,425="" (light="" blue="" bar).="" the="" four="" alternate="" uex="" transcripts,="" uex-re,="" uex-rg,="" uex-rh,="" and="" uex-rf,="" all="" encode="" the="" same="" protein.="" the="" uexmi01943="" mimic="" (blue="" triangle)="" resides="" ~17="" kb="" downstream="" of="" the="" uex="" coding="" region.="" the="" crispr/cas9="" edited="" uexd="" allele="" replaces="" a="" 3047="" bp="" fragment,="" including="" exon="" 7="" of="" uex="" with="" a="" stop="" signal="" (termination="" codon="" in="" all="" three="" reading="" frames)="" and="" a="" gfp="" cassette,="" truncating="" the="" uex="" reading="" frame="" (dark="" blue="" bar).="" (c)="" precise="" excision="" of="" the="" uexmi01943="" mimic="" restores="" normal="" 24="" hr="" memory="" to="" uexmi01943.ex1="" and="" uexmi01943.ex2="" flies=""><0.05, anova,="" n="8–11)." (d)="" uexd="" fails="" to="" complement="" the="" 24="" hr="">memorijadefekt uexMI01943 (str<0.05, anova,="" n="6–8)." (e)="" flies="" homozygous="" for="" uexmi01943="" showed="" a="" significant="" defect="" in="" aversive="" ltm,="" as="" figure="" 2="" continued="" on="">

Slika 2 je nastavak

u poređenju sa performansama heterozigotnih uexMI01943/ plus i kontrolne muhe divljeg tipa (p<0.05, anova,="" n="8–12)." an="" ltm="" defect="" was="" also="" observed="" following="" five="" cycles="" of="" aversive="" spaced="" training="" and="" a="" 16="" hr="" fasting="" facilitated="" one-cycle="" training="" protocol.="" immediate="" aversive="">memorijanije bio pogođen u uexMI01943 homozigotnih mutantnih muva.

Internetska verzija ovog članka uključuje sljedeće izvorne podatke i dodatke za sliku 2:

Izvorni podaci 1. Tabela kontrole oštrine šećera i olfaktornog senzora za sve eksperimente ponašanja u ovom rukopisu.

Dodatak slike 1. Konzervacija UEX-a sa njegovim ortolozima.

Dodatak slike 2. Konstrukcijske šeme za uex Minoovu eksciziju i stvaranje uexD alela.