1. DIO Vodeni ekstrakti Herba Cistanche pospješuju pokretljivost crijeva kod pacova izazvanih opstipacijom loperamidom poboljšavajući intersticijske ćelije Cajal-a

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 i Hai-hua Qian3

1 Suzhou bolnicatradicionalna kineska medicina,Sudžou, Jiangsu 215009, Kina

2 Univerzitet u NanjinguTradicionalna kineska medicina, Nanjing, Jiangsu 210023, Kina

3Odjel za anorektalnu hirurgiju, Jiangsu Provincial Hospital ofTradicionalna kineska medicina, Nanjing, Jiangsu 210029, Kina

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Primljeno 24. maja 2017.; Revidirano 5. oktobra 2017.; Prihvaćeno 25. oktobra 2017.; Objavljeno 28. decembra 2017

Akademski urednik: Samra Bashir

Autorsko pravo © 2017 Shuai Yan et al. Ovo je članak otvorenog pristupa koji se distribuira pod licencom Creative Commons Attribution License, koja dozvoljava neograničenu upotrebu, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je originalno djelo pravilno citirano.

Tradicionalna kineska medicinaje prijavljeno da ima dobre efekte u liječenju funkcionalne opstipacije. Ovaj rad je pokušao da dokaže efekte vodenih ekstrakata Herba Cistanche (AEHC) na tretman STC i da odredi moguće mehanizme pomoću modela sporog tranzitnog zatvora (STC) izazvanog loperamidom. HPLC je urađen za identifikaciju i potvrdu bioaktivnih komponenti u AEHC. Utvrđeno je da je AEHC oslabio STC odgovore na osnovu povećane fekalne količine, sadržaja vlage i brzine intestinalnog tranzita, kao i serumskih nivoa GAS, MTL, SS i CGRP. Nivoi proteina i mRNA u c-kit-u, označavanju intersticijskih ćelija Cajal (ICC), također su se povećali. U međuvremenu se povećao samo nivo proteina SCF-a, liganda iz c-kita. Analiza naših podataka sugerira da bi AEHC očigledno mogao poboljšati funkciju ICC putem signalnog puta koji uključuje PI3K, SCF i c-kit i poboljšati indekse motiliteta debelog crijeva kao što su GAS, MTL, SS i CGRP. Zanimljivo je primijetiti da je AEHC djelotvoran kod opstipacije, tako da su potrebni daljnji eksperimenti kako bi se razjasnili tačni mehanizmi koji su uključeni.

Za više informacija kontaktirajte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola ima mnogo efekata, kliknite ovde da saznate više

1. Uvod

Konstipacija je uobičajena funkcionalna gastrointestinalna bolest i javnozdravstveni problem, koju karakterizira kontinuirano otežano, rijetko ili nepotpuno pražnjenje [1]. Prevalencija opstipacije varira od 0,7 posto do 81 posto širom svijeta, posebno kod starijih [2, 3]. Sporo tranzitno zatvor (STC) je česta gastrointestinalna tegoba među 13-37 posto pacijenata s kroničnim zatvorom otpornim na liječenje [4, 5]. Epidemiološki podaci ukazuju na veću incidencijuSTCkod mladih ženki nego kod muškaraca [6].STCuzrokuje teško rješiv zatvor, pokazujući slab odgovor na konzervativno liječenje i sklonost neurodegenerativnom poremećaju. Nije tako jednostavno kao funkcionalna bolest, zahtijeva invazivno i agresivno liječenje [7].

Brojni aktualni kemijski lijekovi kao što su osmotski ili sekretorni laksativi i sredstva za povećanje volumena univerzalno se koriste za

liječe zatvor [8], iako je njihova primjena ograničena zbog velikih troškova i abdominalnih nuspojava kao što su bol, grčevi i nadimanje [9]. Trenutno je regulacija gastrointestinalnog trakta primarni fokus terapije opstipacije. Cisaprid je prvo generiran kao sredstvo za promociju za liječenje želučanih bolesti, ali je kasnije povučen zbog rizika od srčanih aritmija [10].

Tegaserod je selektivni 5-antagonist receptora hidroksitriptamina koji može stimulirati crijevnu peristaltiku i sekreciju [11, 12]. Prukaloprid je novi derivat dihidrobenzofuran karboksamida i agonist 5-HT receptora sa visokom selektivnošću i specifičnošću, koji može poboljšati motilitet želuca, tankog crijeva i debelog crijeva i djeluje brže u dinamici [13–15]. Kao derivat prostaglandina E1, lubiproston može selektivno aktivirati CIC kanal kako bi promovirao gastrointestinalnu sekreciju i povećao efekte intestinalnog prijenosa [16].

Cistancheima efekat toniranjabubrega može i izliječitizatvor

Pokretljivost kod zatvora je široko rasprostranjen problem, ali njegova etiologija još nije jasna. Ipak, uvjerljivi dokazi su pokazali doprinos Cajalovih intersticijskih ćelija (ICC) patogenezi opstipacije [17]. ICC se nalazi između nervnih završetaka i glatkih mišićnih ćelija u gastrointestinalnom traktu. ICC je općenito priznat kao stanice pejsmejkera za gastrointestinalnu aktivnost i kao medijator neuro-mišićnog prijenosa [18]. Studije su pokazale da je gustina ICC-a u debelom crijevu pacijenata sa sporim tranzitnim zatvorom značajno niža u poređenju s onima kod normalnih pacijenata [19]. Shodno tome, opadajući broj ICC-a može dovesti do manjka sporotalasne aktivnosti, što utiče na kontraktilni odgovor i izaziva odloženi tranzit kod pacijenata sa konstipacijom u sporom tranzitu. Za ovu tačku, poboljšanje ICC-a korištenjem lijekova može biti ključno za izlječenje spore tranzitne konstipacije.

Različiti biljni lijekovi i tradicionalna kineska formula nedavno su privukli pažnju kao novodobni terapeutici za liječenje kronične konstipacije kao rezultat poboljšane proizvodnje stolice [20, 21]. Herba Cistanche je tradicionalni biljni lijek koji se koristi u liječenju hronične bubrežne bolesti, ženske neplodnosti, obilne menoragije i impotencije [22, 23]. Herba Cistanche sprečava apoptozu neurona mozga ekspresijom faktora povezanih sa apoptozom i neurotrofnih faktora u ćelijama MES23.5 [24]. Herba Cistanche je također pokazala farmaceutski potencijal u liječenju Yang-Qi sindroma nedostatka bubrega-Yang. Nedavna studija je pokazala da Herba Cistanche povećava respiraciju mitohondrija i antioksidativni status glutationa u H9c2 kardiomiocitima [25].

TCM vjeruje da zatvor ima blisku vezu s bubrezima. Otvarajući se na vanjskim genitalijama i anusu, bubreg upravlja mokrenjem i defekacijom. Transport otpada se oslanja na promociju qija bubrega i ishranu jina bubrega. Ako je jang bubrega manjkav ili se vatra životne kapije ugasi, hladno začepljenje debelog crijeva će rezultirati stagnacijom otpada. Zatvor je također uzrokovan suvim pražnjenjem crijeva jer nedostatak bubrežne esencije ne stvara dovoljno tekućine [26].

HerbaCistancheje uobičajena ujedinjujuća biljka, slatkastog i slanog okusa i tople prirode. Pripisuje se debelom crijevu i meridijanima bubrega, može tonizirati jang bubrega i vlažiti crijeva kako bi ublažio zatvor. Ova jedina biljka i njenaKineskifarmaceutski preparati su naširoko korišćeni za lečenje zatvora sa izuzetnom efikasnošću [27].

U Kini, efekti HerbeCistanchekorijeni opstipacije zabilježeni su [28, 29] i navedeni u Shen Nongovoj kineskoj Materia Medica kao "osušene sočne stabljike vrste Cistanche" [30]; međutim, naučni dokaz o djelovanju korijena Herba Cistanche na zatvor do sada nije postojao, klinički efikasna doza je 20 g dnevno uKineska farmakopeja, a klinički učinak se ne povećava dalje s dozom.

Budući da je Herba Cistanche tako oskudna [31], standardiziranje njene kliničke doze za liječenjeSTCeksperimentalnim istraživanjem ne samo da sprečava neuspješno liječenje zbog neadekvatne doze, već i drži pacijente podalje od ekonomskog gubitka, pa čak i nesreće s lijekovima prekomjernom upotrebom. Nadamo se

rezultati bi mogli postaviti naučnu osnovu za nove lijekove protiv zatvora. Stoga je važno istražiti funkciju vodene Herba Cistanche za promociju crijeva i njeno djelovanje na ICC u ovoj studiji.

Cistanchemože izliječitizatvor

2. Materijali i metode

2.1. Priprema vodenog ekstrakta Herba Cistanche.

Sve Herba Cistanche kupljene su od Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Kina), koje su ubrane, sakupljene i obrađene prema standardnim etnobotaničkim praksama sa plantaža u oblasti Sinkiang u Kini. Identitet biljke morfološki je utvrdio profesor Tu Lin Lu sa Univerziteta kineske medicine u Nanjingu, Nanjing, Kina. Uzorak vaučera (NUCCHS-2015628) deponovan je na Koledžu zdravstvenih nauka Univerziteta kineske medicine u Nanjingu, Nanjing, Kina.

Kriške Herba Cistanche, težine 500 g, usitnjene su električnim blenderom i ekstrahovane u 5000 ml destilovane vode, nakon čega je vodeni ekstrakt prečišćen na 100 C 2 h pomoću opreme za cirkulaciju.

membranske pore (Millipore, Billerica, MA, SAD), a ostatak dobijen iz ekstrakata rastvoren je u 4000 ml vode. Nakon refluks ekstrakcije, ekstrakti su sakupljeni i upareni da bi se dobio konačni proizvod uzorka. Vodeni ekstrakti su koncentrirani do suhih peleta (1 g/ml) korištenjem a

za kasniju upotrebu. Čvrsti uzorci su rekonstituisani u destilovanoj vodi da bi se dobile potrebne doze od 10, 20 i 40 mg/kg telesne težine za eksperiment.

2.2. Životinje.

Eksperimentalni protokol korišten u ovoj studiji pregledan je i odobren na osnovu etičkih procedura i naučne brige od strane bolnice Suzhou uTradicionalna kineska medicina-Institucionalni komitet za njegu i korištenje životinja, Suzhou, Kina (SHTCM-IACUC; broj odobrenja: PNU- 2016-0003). Svi mužjaci pacova (soj Sprague Dawley) sa ag su kupljeni od Šangajskog laboratorijskog centra za istraživanje životinja u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje. Životinje su imale slobodan pristup standardnoj ishrani (AIN-93 M) i vodi iz slavine ad libitum i bile su smještene pojedinačno u postotnoj relativnoj vlažnosti od nehrđajućeg čelika i bile izložene 12 h prirodnom svjetlu i 12 h mraku dnevno.

2.3 Eksperimentalni dizajn.

Loperamid je korišćen za izazivanje zatvora kod pacova u skladu sa prethodnim studijama [32, 33]. Ukupno 60 pacova nasumično je podijeljeno u 5 grupa (po grupi): A: normalna grupa (NG), B: model grupa (grupa tretirana Lop plus vehikulumom), C: grupa pacova s ​​konstipacijom tretiranih niskim vodenim ekstraktom Herba Cistanche (Lop plus LAEHC-tretirana grupa), D: grupa pacova sa zatvorom tretiranih sa srednjim vodenim ekstraktom Herba Cistanche (Lop plus MAEHC-tretirana grupa), i E: grupa pacova sa opstipacijom tretiranih visokim vodenim ekstraktom Herbe Cistanche (Lop plus HAEHC-tretirana grupa). Grupa A je tretirana normalnim fiziološkim rastvorom (10 ml/kg); Grupa B je liječena loperamidom

(4 mg/kg); Grupa C je tretirana loperamidom (4 mg/kg) i niskim vodenim ekstraktom Herba Cistanche (1 g/kg); Grupa D je tretirana loperamidom (4 mg/kg) i srednjim vodenim ekstraktom Herba Cistanche (2 g/kg), a Grupa E tretirana je loperamidom (4 mg/kg) i visokim vodenim ekstraktom Herba Cistanche (4 g/ kg). Svim pacovima iz normalne grupe je ubrizgan 0,9 posto natrijum hlorida, dok je ostalima injiciran loperamid u količini 0,9 posto natrijum hlorida dva puta dnevno tokom 3 uzastopna dana da bi se izazvala zatvor. Vodeni ekstrakt Herba Cistanche je suspendiran u vodi i oralno davan jednom dnevno od 4. do 18. dana u Grupi C, Grupi D i Grupi E, dok su Grupe A i B primale konzistentan volumen vode putem sonde.

2.4. Kromatografsko stanje.

HPLC profiliranje je izvedeno u Shimadzu tečnom kromatografskom sistemu (Tokio, Japan), koji se sastoji od LC-20AT pumpe i

su praćeni na 330 nm na 30 C. Izokratska mobilna faza se sastojala od metanola 0,1 posto mravlje kiseline (80 : 20, v/v) i radila je pri brzini protoka od 1,0 ml/min . Kromatografsko odvajanje je bilo

veličina čestica 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Kina).

2.5. Analiza vježbanja, unosa hrane, unosa vode, tijela

Gumi arable (vodena suspenzija od 20 posto drvenog uglja i 10 posto guma oranica) je davana oralno u količini od 25 ml/kg svake životinje. Nakon 30 minuta, životinje su humano žrtvovane cervikalnom dislokacijom i secirane. Pređena su tanka crijeva od pilorusa do cekuma i izmjerena je razdaljina koju je prešao ugljeni obrok i ukupna dužina tankog crijeva. Za pojedinačnog štakora, postotak crijevnog tranzita izračunat je kao postotak udaljenosti koju je prešao obrok s drvenim ugljenom u odnosu na ukupnu dužinu tankog crijeva. Sljedeća jednačina izračunava brzinu crijevnog tranzita (procenti): udaljenost koju je prešao drveni ugalj/razdaljina od pilorusa do cekuma 100 posto.

2.6. Uzimanje uzoraka krvi i tkiva. Na kraju eksperimentalnog perioda, pacovi su podvrgnuti 12-satnom gladovanju, ali im je omogućen slobodan pristup vodi. Svi pacovi su zatim anestezirani 30 minuta kasnije intraperitonealnom injekcijom natrijum pentobarbitala (50 mg/kg) i stavljeni na sto sa regulisanom temperaturom. Uzorci krvi su sakupljeni i centrifugirani na 3500 rpm tokom 15 minuta da bi se dobio serum. Debelo crevo je odmah podeljeno i isprano normalnim fiziološkim rastvorom na 4 C, a zatim podeljeno na dva dela. Jedan fragment je fiksiran u 10 posto formalina i obrađen u split parafinu za naknadnu imunohistohemijsku (IHC) analizu, dok je drugi bio Težina i kosa. Promjene u vježbanju, unosu hrane, vode

čuvani na 80 C dok nisu analizirani. unos, tjelesna težina i kosa su posmatrani i bilježeni svakodnevno tokom eksperimentalnog perioda. Uočili smo "promjene u vježbanju" slijedeći specifične korake: kutija koju je sama izradila (visoka 60 cm, duga 50 cm i široka 80 cm sa tamnim perifernim zidom) koristi se za testiranje na otvorenom terenu; bijelo tlo je bilo podijeljeno na dijamante (12 cm) crnom linijom u mračnoj i tihoj prostoriji; sijalica od 100 W visi 1 m iznad sredine kutije; pacovi su postavljeni u centar kutije 4., 6., 12. i 18. dana modeliranja. Broj kvadrata kroz koje su pacovi prošli u roku od 5 minuta korišten je kao rezultat horizontalnog kretanja, a vrijeme uspravnog položaja pacova u roku od 5 minuta korišteno je kao rezultat vertikalnog kretanja. Horizontalni rezultati i rezultati pokreta plus rezultati vertikalnih pokreta ukazuju na količinu vježbanja štakora. Svaki štakor je mjeren jednom [34, 35].

Cistanchemože olakšatizatvor

2.7. Merenje fekalnih parametara.

Posljednjeg dana oralne primjene, svježe pelete stolice od svakog SD štakora su sakupljene u epruvete sa zapušenim okruglim dnom tokom 6 h, a ukupna težina svake grupe je zabilježena. Da bismo odredili sadržaj fekalne vlage, koristili smo električnu vagu za sušenje peleta stolice dok se ne postigne konstantna težina i izmjerili suvu težinu. Sadržaj vlage

2.8. Procjena GAS-a, MTL-a, SS-a i CGRP-a.

Koncentracije gastrina (GAS), motilina (MTL), somatostatina (SS) i peptida povezanog sa genom kalcitonina (CGRP) u serumu procijenjene su ELISA pomoću komercijalno dostupnih kompleta.

2.9. Histološka analiza.

Poprečne kolone sakupljene od SD štakora su fiksirane sa 10 posto formalina tokom 12 h, ugrađene

m debelih kriški koje su obojene hematoksilinom i eozinom (H&E, Sigma-Aldrich, MO, SAD). Morfološke karakteristike ovih preseka su uočene pod svetlosnom mikroskopijom, nakon čega su merene dužina resica, debljina kripte i debljina mišića korišćenjem Leica Application Suite (Leica Microsystems, Švajcarska).

2.10. Imunohistohemijska analiza.

Pratili smo metode Zhu et al. (2016) [36]; bili su nefarbani dijelovi od 5 m

obojen zečjim anti-c-kitom (1:100) na 4°C preko noći. Metoda sekundarnog antitijela i kompleksa avidin-biotin-peroksidaza korištena je prema uputama proizvođača. Imunoglobulin-negativna kontrola je korištena da se eliminira nespecifično vezivanje. Nivoi ekspresije c-kita

2.11. Analiza brzine intestinalnog tranzita.

Odnos crijevnog tranzita rađen je prema ranije prijavljenim protokolima [36]; ukratko, nakon 14 dana tretmana, svi SD pacovi su bili podvrgnuti 12-satnom gladovanju, ali im je bio dozvoljen slobodan pristup vodi.

Lančana reakcija polimeraze u realnom vremenu. Nivoi ekspresije gena c-kit, SCF i PI3K mRNA u debelom crijevu određeni su korištenjem kompleta za ekstrakciju ukupne RNK (TIANGEN Biotech,

Peking, Kina) prema protokolima proizvođača. PCR u realnom vremenu je izveden sa ABI StepOnePlus Real-Time PCR sistemom (ABI). SYBR Green I PCR Master Mix u realnom vremenu (QPK201, Toyobo, Japan) korišten je za detekciju PCR proizvoda. Reakcije su izvedene u tri primjerka. Nakon toga, svježe tkivo debelog crijeva štakora težine 0,5 g je homologirano.

l) ekstrahiran prema uputama proizvođača pomoću TRIzol reagensa (Invitrogen, SAD). Komplet za reverznu transkripciju-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) je korišten za sintezu prvog lanca cDNK u skladu sa protokolom proizvođača. Svi ciljani parametri prikazani su u tabeli 1. Protokol ciklusa je bio pod sljedećim uslovima: 95 C u trajanju od 5 minuta (denaturacija DNK), nakon čega je slijedilo 40 ciklusa od 95 C u trajanju od 15 s, 60 C tokom 20 s i 72 C za 40 s. Analiza krive topljenja je izvršena na kraju ciklusa amplifikacije.

2.12. Western blot analiza.

Sadržaj proteina c-kit-a i SCF-a u homogenatima uzoraka debelog crijeva procijenjen je Western blot-om. Ukratko, ukupni proteini homogenata određivani su upotrebom bicinhoninske kiseline (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Natrijum dodecil sulfat-poliakrilamid gel (SDS-PAGE) korišćen je za odvajanje proteina u BioRad sistemu elektroforeze (BioRad Laboratories, Hercules, Kalifornija, SAD). Proteini su zatim prebačeni na membrane od poliviniliden difluorida (PVDF). Nakon 2 sata tretmana puferom za blokiranje u TBS-u koji sadrži 5 posto nemasnog mlijeka na sobnoj temperaturi, PVDF membrane su inkubirane preko noći sa 1 : 1000 razrijeđenim anti-c-kitom (Santa Cruz, Kalifornija, SAD), 1 : 500 razrijeđenim anti-c-kitom. SCF (Sigma, MO,

SAD) i 1:8000 razblaženih anti-aktinskih (Kangchen, Šangaj, Kina) antitela, respektivno. Vezivanje primarnog antitela je detektovano korišćenjem odgovarajućeg HRP-konjugovanog sekundarnog antitela (Beyotime, Jiangsu, Kina). Za detekciju hemiluminiscencije korišteni su poboljšani komplet za hemiluminiscenciju (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, SAD) i Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong). Prolaktin za održavanje je korišten kao kontrola opterećenja. Količina ekspresije proteina prikazana je u odnosu na nivoe aktina.

2.13. Statistička analiza.

Podaci mjerenja su prikazani kao srednja standardna greška srednje vrijednosti (SEM) i analizirani SPSS

16.0 softver (SPSS, Chicago, IL, USA). Jednosmjerna analiza varijanse (ANOVA) praćena Duncanovim testovima višestrukih opsega korištena je za utvrđivanje značajnih razlika u svim parametrima. Vrijednosti su se smatrale statistički značajnim na

Cistanchedekocija je dobar lek za lečenjezatvor

3. Rezultati

3.1. Sastav i funkcionalne komponente Herba Cistanche.

Kao što je prikazano na slici 1, korijen Herba Cistanche sadrži visoke koncentracije nekoliko bioaktivnih komponenti povezanih s laksativnim djelovanjem. Koncentracije ukupnog ehinakozida i ukupnog verbaskozida bile su 0,64 mg/g i 0,16 mg/g, respektivno. Dva pika koji ukazuju na visoke nivoe ehinakozida i verbaskozida su detektovani u LP u odgovarajućem vremenu zadržavanja tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC).

3.2. Opća zapažanja.

SP pacovi nisu uginuli tokom eksperimenta, što ukazuje na bolju sigurnost i operativnost životinjskog modela. U poređenju sa grupom A, pacovi u grupi modela pokazali su pahuljasto krzno, malaksalost, suvu stolicu i

pogoršala produljenjem vremena modeliranja.

3.3. Utjecaj AEHC na broj stolice i sadržaj vlage kod pacova izazvanih opstipacijom loperamidom.

U poređenju sa normalnim izmetom, izmet u grupama B, C, D i E bio je suv, malen i tvrd i nije bio pečen pre tretmana.

na kraju krajeva, pacovima je ubrizgan loperamid (liječeni lijekovima su ublažili simptome kao tijelo i 3(b)).

težina se nije značajno razlikovala među svim eksperimentalnim grupama, iako je grupa E pokazala nešto manju tjelesnu težinu od ostalih grupa (slika 2(a)). Osim toga, SD pacovi sa konstipacijom jeli su značajno manje hrane od grupe A ( ), dok razlike između grupa B, C, D i E (Slika 2(b)) nisu bile značajne. Potrošnja vode se također nije promijenila između Grupe A i Grupe B. Osim toga, nije zabilježen značajan porast potrošnje vode

da tretman sa AEHC nije izazvao nikakve promjene. Iako je stopa crijevnog tranzita u grupama C, D i također bila značajno višaGrupe C, D i E imale su značajno niže omjere od grupe A.

3.4. Utjecaj AEHC na brzinu prolaska tankog crijeva kod pacova izazvanih opstipacijom loperamidom.

Kao što se vidi sa slike 4, nisu otkrivene razlike u osnovnom vremenu prolaska kroz tanko crijevo između pet grupa. Grupa B ima značajno niži omjer pokretanja praha drvenog uglja u poređenju sa Grupom A (𝑃 < 0.01).="" iako="" je="" stopa="" crijevnog="" tranzita="" u="" grupama="" c,="" d="" i="" e="" također="" bila="" značajno="" viša="" od="" one="" u="" grupi="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" grupe="" c,="" d="" i="" e="" imale="" su="" značajno="" niže="" omjere="" od="" grupe="">

3.5. Intervencija s AEHC djelomično poboljšava funkciju indeksa motiliteta debelog crijeva.

Nivoi GAS-a i MTL-a u serumu dobijeni od pacova Grupe B značajno su smanjeni u poređenju sa onima iz Grupe A (𝑃 < {{0}}.01,="" odnosno).="" s="" druge="" strane,="" grupe="" c,="" d="" i="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" odnosno)="" imaju="" efektivno="" više="" nivoe="" gas-a="" i="" mtl-a="" od="" primjene="" ekstrakata="" herba="" cistanche="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" b="" ss="" vrijednosti="" u="" pacovima="" grupe="" b="" bile="" su="" veće="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" grupe="" c,="" d="" i="" e="" imaju="" oslabljene="" nivoe="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (slika="" 5).="" u="" poređenju="" sa="" pacovima="" sa="" konstipacijom,="" nivoi="" cgrp="" u="" normalnim="" štakorima="" grupe="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" i="" u="" grupama="" c,="" d="" i="" e="" kojima="" je="" davana="" herba="" cistanche="" bili="" su="" konstantni="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Histološka promjena debelog crijeva.

Da bi se istražilo može li liječenje AEHC-om izazvati strukturnu promjenu tkiva debelog crijeva, izmjerena je dužina resica, debljina sloja kripte i debljina mišića u poprečnim kolonima štakora u pet grupa nakon H&E bojenja. Poređenjem patologije debelog crijeva štakora u svakoj grupi, sluznica debelog crijeva je glatka i sadrži male arterije i male vene u submukozi i veliki broj masnih stanica. Osim toga, mišićni sloj se sastojao od glatkih mišićnih ćelija, a subseroza je bila kompletna. Prosječna dužina resica bila je značajno kraća u grupi B nego u grupi A (𝑃 < {{0}}.01).="" međutim,="" prosječna="" dužina="" resica="" u="" grupi="" c="" se="" značajno="" povećala="" za="" više="" od="" 30="" posto="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" b="" (slike="" 6="" i="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" u="" međuvremenu,="" prosječna="" dužina="" resica="" se="" značajno="" povećava="" u="" grupama="" d="" i="" e="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" b="" (slike="" 6(a)="" i="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" nadalje,="" promjena="" debljine="" mišića="" bila="" je="" vrlo="" slična="" dužini="" resica.="" u="" grupi="" b,="" debljina="">

bio je dramatično tanji u poređenju sa Grupom A. Međutim, nivoi debljine mišića u Grupama C, D i E povećali su se za 30-35 procenata u odnosu na grupu B (Slike 6 i 7). Sve u svemu, ovi nalazi ukazuju da AEHC može povećati dužinu resica i debljinu mišića u debelom crijevu pacova s ​​konstipacijom.

3.7. Primjena AHEC tretmana povećala je ekspresiju proteina c-Kit-a i SCF-a.

Imunoreaktivnost je otkrivena u debelom crijevu jer su ćelije u svim grupama bile pozitivne na c-kit. Kao što je prikazano na slici 8, nivo ekspresije c-kita u grupi B bio je niži od onog u grupi A (𝑃 < 0.05).="" nivo="" ekspresije="" c-kit-a="" u="" grupi="" c="" bio="" je="" viši="" od="" onog="" u="" grupi="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}}5),="" dok="" je="" više="" c-kita="" bilo="" prisutno="" u="" grupama="" d="" i="" e="" nego="" u="" grupi="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" nakon="" tretmana="" različitim="" koncentracijama="" vodenog="" ekstrakta="" herba="" cistanche="" tokom="" 2="" sedmice,="" nivoi="" ekspresije="" proteina="" c-kit="" i="" scf="" detektovani="" su="" western="" blot="" analizom.="" western="" blot="" analiza="" je="" pokazala="" da="" su="" nivoi="" ekspresije="" c-kit-a="" i="" scf-a="" bili="" značajno="" niži="" nakon="" tretmana="" loperamidom="" u="" debelom="" crijevu="" pacova="" (slika="" 9).="" slika="" 8(e)="" pokazuje="" da="" se="" smanjeni="" c-kit="" kod="" pacova="" s="" ​​konstipacijom="" značajno="" povećao="" za="" 31,2="" posto="" nakon="" tretiranja="" štakora="" sa="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" pored="" toga,="" tretman="" sa="" 100="" i="" 200="" g/ml="" aehc="" je="" povećao="" nivoe="" ekspresije="" proteina="" c-kit.="" ekspresija="" scf="" proteina="" značajno="" se="" povećala="" za="" 20,1,="" 24,7="" i="" 8,4="" posto="" pri="" tretmanu="" sa="" 100,="" 200="" i="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" respektivno="" (slika="" 9).="" 3.8.="" učinak="" aehc="" na="" ekspresiju="" mrna="" c-kit,="" scf="" i="" pi3k.="" da="" bi="" se="" istražilo="" može="" li="" liječenje="" aehc-om="" utjecati="" na="" regulaciju="" mrna="" u="" vezi="" sa="" mišićnom="" kontrakcijom,="" uočene="" su="" promjene="" u="" nivoima="" ekspresije="" c-kit,="" scf="" i="" pi3k="" u="" debelom="" crijevu="" pacova="" s="" ​​konstipacijom="" koristeći="" specifične="" prajmere.="" rezultati="" su="" pokazali="" da="" su="" nivoi="" mrna="" c-kit="" u="" grupi="" b="" bili="" značajno="" niži="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" dok="" su="" nivoi="" mrna="" u="" grupama="" c,="" d="" i="" e="" viši="" nego="" u="" grupi="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (slika="" 10).="" takođe="" smo="" ispitali="">

ekspresija SCF, liganda kita. Ekspresija mRNA SCF kod pacova Grupe B bila je značajno niža nego u Grupi A, dok je tretman sa AEHC u Grupama C, D i E povećao ekspresiju SCF mRNA (Slika 10). Pored toga, ispitali smo efekat AEHC na ekspresiju PI3K gena. 14. dana, nivo ekspresije gena PI3K bio je značajno viši u grupama C, D i E nego u grupi B (𝑃 <>