Part 1:An Inhibitor Of NF-kB And An Agonist Of AMPK: Network Prediction And Multi-Omics Integration To Derive Signaling Pathways For Acteoside Against Alzheimer's Disease

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Ying-Qi Li1†, Yi Chen1†, Si-Qi Jiang1, Yuan-Yuan Shi2, Xiao-Li Jiang1, Shan-Shan Wu1,Ping Zhou1, Hui-Ying Wang1, Ping Li1*i Fei Li1,2*

¹ Stanje Ključ Laboratoriji od Prirodan Lijekovi, Kina Farmaceutski Univerzitet Nanjing, Kina ² Koledž od ApotekaMedicinski univerzitet Xinjiang, Urumqi, Kina

UVOĐENJE

Sa starenjem i brzim rastom stanovništva, broj slučajeva demencije u svijetu pokazao je uzlačni trend.Alchajmerova bolest(AD) je česta neurodegenerativna bolest popraćena kognitivnim umanjenjem i diskinezijom (Perea et al., 2020), koja je najčešća vrsta demencija. Karakteriše ga težak neuronski gubitak, senilan plak, i neurofibrilarni zapleti (Shiao et al., 2017). Patogeneza AD(Alchajmerova bolest)je višedimenzionalna i veze sa neuroinflamacijama. Neuroinflamacija je podstaknuta aktivacijom glijnih ćelija, što je u bliskoj vezi sa pojavom i razvojem AD(Alchajmerova bolest)(Hanslik i Ulland, 2020; Linnerbauer and Rothhammer, 2020). Tokom napredovanja i egzacerbacije neuroinflamacije, mikroglija se smatra ključnim faktorom.

Mikroglia su primarne imunske ćelije u centralnom nervnom sistemu, koje su usko povezane sa kaskadom procesa kao što su razvoj mozga, održavanje nervnog okruženja, kao i odgovori na povrede i popravke (Perea et al., 2020). Štoviše, mikroglija se može stimulirati na M1 fenotip i povećati izraz pro-upalnih citokina kada neuroinflamacije povezane bolesti kao što je AD(Alchajmerova bolest)javlja (Tsukahara et al., 2020). Studije također pokazuju da polarizaciju na M1 fenotip često prate metabolički poremećaji (Li L. et al., 2020), što dovodi do neravnoteže energetskog metabolizma i mitohondrijske disfunkcije (Agrawal i Jha, 2020). Ove nepovratne promjene su izvedene do neurodegeneracije, čak i AD(Alchajmerova bolest).

Acteoside(ACT), fenilethanoid glikoside, prvenstveno je izveden izCistanche tubulosa. Sve veći dokazi ukazuju da ACT posjeduje brojne farmakološke aktivnosti, uključujući neuroprotektivne (Wei et al., 2019), anti-upalne (Lai et al., 2019), i antioksidant (Ji et al., 2019) efekte. Posebno je dokazano da ACT može poboljšati učenje i pamćenje kao i upregulate energetski metabolizam kod štakora izazvanih streptozotocinom (Chen J. et al., 2020). Osim toga, može inhibirati i smrt neurona apoptotičnih ćelija i mitohondrijsko oštećenje u eksperimentalnim autoimunim encefalomijelitis mišem (Li W. et al., 2020). Međutim, rijetko se javlja učinak ACT na polarizaciju mikroglije M1/M2 i njegov mehanizam. Do sada, mehanizmi kao što su popravak mitohondrije i regulacija metabolizma ćelija su nejasni i potrebna su daljnja naučna istraživanja kako bi se razjasnio tačan mehanizam.

Svrha ovog izvještaja je istražiti terapijsko ucinjenost ACT-a kao i podložnog molekularnog mehanizma ACT na AD(Alchajmerova bolest). Ovdje se sistematski u siliko metodu identifikacije meta droge uspostavlja na osnovu konsolidovanih baza podataka. Dalje istražujemo moguće mehanizme ACT-a na molekularnom biološkom nivou integrišući RNK-sekvenciranje (RNK-seq) metodom metabolomije i molekularnom biologijom. Kombinacija in siliko, in vivo, i in vitro sistematske strategije skriinga pruža novi protokol za objektivno otkrivanje višeciljnih spoja tradicionalne kineske medicine.

Cistanche tubulosa može liječitiAlchajmerova bolest

MATERIJALI I METODE

Modeliranje mreže

Četiri online platforme su objedinjene kako bi se predvidjele i otkrile mete ACT-a, i to GeneCards1 , pristup sličnosti (SEA2 ), SwissTargetPrediction3 , i PharmMapper4 . Sve genske asocijacije AD-a(Alchajmerova bolest)su samostalno prikupljeni od DisGeNET5 i GeneCards. Nakon analize interakcije cilj-cilj, koju je provela String baza podataka6, mreža je dodatno integrisana od strane Cytoscape (Verzija 3.8.2) softvera. GO i KEGG analiza obogaćivanja izvršena je u DAVID bazi podataka7 kako bi se annotirala i minira mreža.

Grupisanje životinja i modela

U ovoj studiji (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.) izabrana je zebrafish divljeg tipa (AB soj, star 4 mjeseca). Održavali su se pod 14/10-h svjetlosnim/tamnim ciklusom na 28oC, slijedeći prethodnu metodu (Li Y. Q. et al., 2020). Svi eksperimenti zebrafiša su izvedeni pod nadzorom Komiteta za etiku životinja Kineskog farmaceutskog univerziteta.

Ličinke zebrafiša su podijeljene u šest grupa i tretirane od 3 dana nakon oplodnje (dpf) do 7 dpf: kontrolna grupa, grupa modela, model + donepezil hidroklorid (DPZ, Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd.) grupa, i model + ACT (HPLC čistoća 98%, Baoji Herbest Bio-Tech Co., Ltd.) grupe. Kontrolna grupa je održavana u mediju sa 0,2% DMSO a grupa modela je tretirana sa 150 uM AlCl3 (pH 5,8). Model + DPZ grupa je bio ko-tretiran sa AlCl3 i 8 uM DPZ. Model + ACT grupe su bili ko-tretirani sa AlCl3 i različitim koncentracijama ACT (200, 100, i 50 u M).

Bihevioralna analiza

Kretanje ličinki zebrafiša je zabilježio ViewPoint analizator ponašanja (Zebralab, 2018, ViewPoint Life Sciences Co., Ltd.) na 28oC. Ukratko, parametri ponašanja i obrada rezultata su bili u skladu s metodom koju smo ranije uspostavili (Li Y. Q. et al., 2020). Ovdje su odabrani prosječna brzina (AS), promjena brzine (AS), brzina oporavka disinezije (DRR) i efikasnost odziva (RE, %) za procjenu oporavka diskinezije kod zebrafiša.

Određivanje aktivnosti acetilholineteraze i holinske acetiltransferaze

Nakon tretmana od 3 do 7 dpf, prikupljene su ličinke zebrafiša za mjerenje aktivnosti acetilholineteraze (AChE) i Choline acetyltransferase (ChAT). Na osnovu protokola proizvođača, aktivnost je otkrivena enzimom povezanim sa imunosorbent testom (ELISA) (MLBIO Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, China).

Cell Cultures and Treatments

Ćelija BV-2 je kupljena od Američke kolekcije kulture tipa (ATCC, Manassas, VA, Sjedinjene Američke Države). Bili su kulturani u DMEM-u (KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina). Medij je dopunjavan sa 10% FBS (Gibco, Grand Island, NY, Sjedinjene Države),

100 U/ml penicilina, i 100 mg/ml streptomicina, u pratnji sa 95% zraka/5% CO2 pri 37oC. BV-2 ćelije su inkubirane SA ACT (50, 25, i 12,5 uM) ili stimulirane lipopolizaharidom (LPS, 1 ug/ml; Sigma- Aldrich, St Louis, MO, Sjedinjene Države) za 24 h. Ćelije su posmatrane pod obrtim mikroskopom (Nikon ECLIPSE Ti2, Japan).

Cell Održivost Assay

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (JianCheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina) je korišten za procjenu održivosti ćelija. Ukratko, apsorpcija je mjerena na 450 nm sa čitačom mikroplata (Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, Sjedinjene Američke Države).

Assay proizvodnje dušika oksida

Dušik oksid (NO) određen je mjereći nivoe nitrita u supernatantu BV-2 kulture koristeći Griess reagent. Ukratko, medij (100 ul) je prebačen na novu ploču od 96 wella, ista zapremina Griess reagenta je dodana svakom dobrom i reagirala je 15 min u mraku. Apsorpciju na 540 nm odredio je Microplate Reader.

Upalni citokini nivoi u supernatantu

Koncentracije TNF-a, IL-1β, i IL-10 u supernatantu ćelija BV-2 bile su utvrđene ELISA kitovima prema uputama proizvođača.

Cellular Metabolism Determination by HPLC-Q-TOF-MS Analysis

BV-2 ćelije su bile zasijene u šest-dobrom jelu odvojeno (n = 6/grupa). Nakon tretmana, medij je uklonjen, a ćelije su tri puta oprane hladnim PBS-om. Tada su odmah bili izloženi tekućem dušiku da potisnu metabolizam ćelija. Ćelije su pobrane sa 80% hladnog metanola. Da bi se olakšale padavine proteina, ćelije su bile snažno vrtlog 1 min i centrifugiran na 13.000 o/min (15 min, 4oC). Ćelijska suspenzija je sušena ispod potoka dušika. Sušeni talut rekonstituiran je u 150 ul pre-hlađenog 25% acetonitrila. Kako bi se osigurala stabilnost i tačnost analize sekvenci, svaki uzorak ćelija sa jednakim volumenom (10 ul) je kombinovan kao uzorci kontrole kvaliteta. Tokom detekcije metabolita, ovi uzorci su ubrizgani nakon svakih šest uzoraka kako bi se potvrdila njihova stabilnost. 1-ul alikvot je ubrizgan za HPLC-Q-TOF-MS.

Analiza je izvršena na Agilent 1290 HPLC sistemu

povezan sa Spektrometrom masenog spektrometra Agilent 6530 Quadrupole Time of-Flight (Q- TOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, United States). Razdvajanje je izvršeno na stubu UPLC BEH C18 za oslobađanje (2,1 min 100 mm, 1,7 um). Mobilna faza se sačinjala od 0,1% formik-vode (v/v; A) i acetonitrile (B).

Brzina protoka je postavljena na 0,4 ml/min sa sljedećim optimalnim stanjem elucijenta gradijenta: 0 do 2 min, 5% B; 2 do 20 min, 5 do 95% B (pozitivni ioni mod); 0 do 2 min, 5% B; 2 do 20 min,5 do 95% B (negativan ioni mod). Parametri operacije spektrometra mase su postavljeni kako slijedi: temperatura plina, 320oC; plin za sušenje, 10 L/min; nebulizer, 35 psi; VCap, 4.000 V; Fragmentor, 120 V.

podaci su sprovedeni sa metaboAnalyst8 . U kombinaciji s literaturom, diferencijalni metaboliti (VIP > 1, t-test p< 0.05)="" were="" identified="" on="" hmdb9="" .="" finally,="" pathway="" analysis="" was="" conducted="" with="">

Mjerenje mitohondrijskog membranskog potencijala

Potencijal mitohondrijske membrane (MMP) otkriven je pomoću fluorescentne sonde JC-1 (Beyotime, Kina) u skladu sa uputama proizvođača. Nakratko, ćelije iz različitih grupa isprane su PBS-om i inkubirali se sa JC-1 otopinom za mrljanje 20 min na 37oC. Nakon mrljanja, ćelije su dva puta oprane pomoću bafera za mrljenje. Zatim su fluorescentni signali otkriveni protokom ctometrije (BD Accuri C6).

Mjerenje mitohondrijskog adenozina 5f-trifosfata

Adenozin 5/-trifosfat (ATP) koncentracija u mitohondrijama je otkrivena od strane ATP Assay Kit (Beyotime, Kina). Ukratko, kulturni medij ćelija BV-2 iz različitih grupa je odbačen, a ćelije su homogenizirane lizisnim baferom na ledu. Supernatant dobiven nakon centrifugacije (12.000 g,

5 min) je korištena za određivanje koncentracije ATP-a. Luminescence je otkrio EnVision Multimode Microplate Reader (PerkinElmer).

Upravljanje(Alchajmerova bolest)

Mjerenje unutarćelijske reaktivne razine vrsta kisika

Reaktivne vrste kisika (ROS) Assay Kit (Beyotime, Kina) korištene su za mjerenje ros nivoa. Ćelije iz različitih grupa su inkubirali DCFH-DA (10 uM) 20 min na 37oC. Nakon utovara sonde, ćelije su tri puta oprane sa DMEM-om. Zatim su fluorescentni signali otkriveni protokom ctometrije (BD Accuri C6).

Transmission Electron Microscopy

BV-2 ćelije su sejale u jelu sa šest dobrota. Medij je uklonjen i 1 ml od 2,5% glutaraldehida je brzo dodan svakom izvoru. Zatim su ćelije sakupljene i popravljene sa novim 2,5% glutaraldehida na 4oC preko noći. Nakon fiksacije, dehidracije i embeddinga, ćelije su uočene sa HT7800 elektronskim mikroskopom (Hitachi, Tokyo, Japan).

RNK-Seq i Bioinformatička analiza podataka

Ukupno RNK iz BV-2 ćelija je ekstrahiran pomoću Trizol reagenta (Vazyme Biotech, Kina). Svi analitički uzorci su poslani Majorbiu (Shanghai Majorbio Bio-pharm Technology Co., Ltd.) za analizu RNK sekvence. Podaci su analizirani na online platformi Majorbio Cloud Platform10 . RSEM11 je korišten za kvantificiranje izobilja gena. U suštini, disencijalni izraz Sirovi podaci su upravljani pod MassHunter Workstation Software verzijom B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Sjedinjene Američke Države). Sirove podatke je predobrađila XCMS platforma. Analiza glavnih komponenti (PCA) i parcijalni least-squares diskriminantna analiza (PLS-DA) normalizirane analize je izvršena pomoću DESeq2/DEGseq/EdgeR sa Q vrijednosti 0,05; DEG sa | log2FC| > 1 i Q vrijednost 0,05 (DESeq2 ili EdgeR)/Q vrijednost 0.001 (DEGseq) su smatrani značajno različitim izraženim genima. Osim toga, izvršena je i funkcionalno-obogaćivanja, uključujući GO i KEGG kako bi se identificirali koji SU DEG-i značajno obogaćeni u GO terminima i putevima kod Bonferroni-corrected p-value 0,05 u odnosu na cijelu-transkriptomsku pozadinu. Izvorni podaci o sekvenci su dosađeni u bazu podataka ARHIVE ZA ČITANJE SEKVENCI NCBI.

Kvantitativna lančana reakcija polimerazije u realnom vremenu

Ukupan RNK ćelija BV-2 je beren koristeći RNA-easyTM Isolation Reagent (Vazyme Biotech, Kina), a reakcija obrnute transkripcije je obavljena sa FastKing-RT SuperMix (TIANGEN Biotech, Kina). Reakcije su izvedene prema protokolu proizvođača. CDNA je bila podvrgnuta kvantitativnim analizama lančane reakcije polimeraze u realnom vremenu (qRT-PCR) sa specifičnim primerima i TransStart TOP Green qPCR SuperMix (TransGen Biotech, Kina). Primeri su nabrojani u Dopunskom stolu 1 i β-aktin je korišten kao unutrašnja kontrola. 2-A CT metoda je korištena za kvantitativnu analizu.

Western Blot analiza

BV-2 ćelije su izlizane od strane RIPA liznog pufera (KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina) koji sadrži 1% Proteaze Inhibitor Koktel (Thermo Fisher) za dobivanje ukupnog proteina. Proteini su razdvojeni za 10% SDS-PAGE i preneseni na NC membrane. Nakon blokiranja sa 5% obranog mlijeka/BSA, Membrane su inkubirali ampka (Proteintech), p-AMPKa (Affinity Biosciences), PGC-1a (Proteintech), NF-kB (Proteintech), p-NF- kB (ABclonal) ili GAPDH (ABclonal) antitijela u 5% TBST pri 4oC noću. Membrane su inkubirani sekundarnim konjugiranim antitijela konjugiranim hrenovima (ABclonal) na 1 h. Za vizualizaciju i kvantitaciju korišteni su visoko-sig ECL western blotting substrat (Tanon, Kina), Gel imaging system (Tanon, Kina) i ImageJ softver.

Molekularno prisijanje

Analiza molekularnog pridiranja je izvršena pomoću Autodock softvera (Verzija 4.2). Afinitet između ACT-a i proteina je promatran od strane AutodockTools softvera. Trodimenzionalne (3D) proteinske strukture AMPKa (PDB ID: 5g5j) i NF-kB (PDB ID: 4q3j) su preuzeti iz Protein Data Bank12 .

Statistička analiza

Svi podaci su izraženi kao mean standard devijacija i analiziran od strane GraphPad Prism Software (Verzija 8.0.1). Razlike između grupa analizirane su jednosmjesnom analizom varijanse (ANOVA), a zatim Tukey-jev višestruki test usporedbe. p< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

Cistanche dodatak za Alchajmerovu bolest

REZULTATE

ACT-AD Targets Interaction Network and Pathway Prediction

Kroz konsolidaciju više baza podataka stečeno je 253 cilja ACT-a, dok je ukupno 1.697 ciljeva vezanih za AD. Nakon preslišavanja ciljne mreže, ukupno je 70 ciljeva apsorbovano u ACT-AD mrežu interakcija ciljnih interakcija (figura 1A). KEGG analiza obogaćivanja podrazumijevala je da ACT može imati širok spektar i višestruki ciljni efekat (na 1.1.) Također je sugeriše da ACT ima više puteva, ciljnih tačaka i elemenata u AD-u(Alchajmerova bolest)tretman. Klasificirajte ove puteve kako bi dobili precizno tumačenje mehanizama. ACT bi uglavnom mogao biti u korelaciji sa transdukcijom signala, endokrinim sistemom, imunološkim sistemom, i rastom ćelija i smrću da bi igrao konfrontacionu ulogu protiv AD(Alchajmerova bolest)(1C). Vrijedno je uočavanja da je velika većina ovih puteva povezana s reakcijom upale. Nagađa se da bi anti-upalna akcija ACT-a mogla biti neraskidivi dio njegove konfrontacijske uloge protiv AD(Alchajmerova bolest).

ACT Ublažena diskinezija i poboljšana funkcija holenergicnog sistema u AD(Alchajmerova bolest)Larve zebrafiša

Za verifikaciju mrežnog modela, AD izazvan AlCl3(Alchajmerova bolest)model u ličinkama zebrafiša korišten je za demonstraciju učinka ACT-a. Zapaženo je kretanje ličinke zebrafiša unutar svjetlosnih/tamnih ciklusa, a zabilježene su i njihove plivačke staze (na 1D. Rezultati su pokazali da je ACT efektivno povećao AS i AS zebrafiša, a sinergistički efekat se povećao sa povećanjem doza (figura 1E). DRR i RE su otkrili intuitivniju usporedbu ACT i DPZ (na 1. U skladu s tim, ACT je ublažio diskineziju, izlažući slične efekte DPZ-u.

Generalno je dogovoreno da holenergik sistem igra važnu ulogu u procesima učenja i pamćenja. Tako su aktivnosti AChE i ChAT korištene za otkrivanje efekta ACT. AlCl3 izlaganje kod zebrafiša je renderiran sa moždanom holenergičnom izmjenom (figura 1G). Bilo je značajno da je ACT tretman potisnuo aktivnost AChE. Osim toga, aktivnost ChAT-a je nakon ACT liječenja ispoljila umanjenje. Stoga, ACT je pokazao dubok utjecaj u ALCl3-induciranoj AD(Alchajmerova bolest)ličinke zebrafiša.

ACT Supressed M1 Polarization and Promoted M2 Polarization in LPS-Induced BV-2 Cells

Da bi se dalje potvrdila mreža, anti-upalni efekat ACT-a je proučavan in vitro koristeći BV-2 mikroglijalne ćelije. Nakon LPS tretmana za 24 h, održivost BV-2 ćelija se značajno snizila. Srećom, ACT je povećao ćelijsku održivost ćelija BV-2 ćelija izazvanih LPS-2 (2A). Osim toga, primjeæena je morfologija BV-2 ćelija. Nakon 24 h LPS stimulacije, pokazalo je da su BV-2 ćelije podlekle M1 polarizaciji. Morfološke promjene su bile sprijeèene ko-tretmanom ACT (na 2B.

Štoviše, rezultati su ukazali da, za razliku od ćelija BV-2 stimuliranih LPS-om, BV-2 ćelije koje su ko-tretirane sa ACT značajno potisnute TNF-a, IL-1β, i NO (figure 2C) izraze u supernatantu ćelija. To su klasični pro-upalni citokini kao pokazatelji polarizacije M1 mikroglije. Slično rezultatima ELISA-e, rezultati QPCR-a otkrili su da TNF-a, sintaza dušika oksida (iNOS),

IL-1β, i CD86 mRNA izrazi su bili značajno inhibirani act tretmanom u odnosu na LPS grupu (2D).

Nadalje, izmjerili smo nivo polarizacije M2 mikroglije elisama (figure 2C) i qPCR (figura 2E), a rezultati su ukazali da je ACT značajno povećao nivoe markera vezanih za M2 mikrogliju (IL-10, CD206, TGF-β, i Arg-1). Jednom riječju, ovi rezultati su pokazali da je ACT potisnuo M1 mikrogliju polarizaciju i promovirao M2 fenotip.

ACT Regulisana M1/M2 polarizacija putem inhibicije puta NF-kB

Transkriptomsku analizu je obavila RNK-seq za istraživanje mehanizma ACT u ćelijama BV-2 sa sveukupnog nivoa. PCA je ilustrirao da se kontrole, LPS i ACT grupe mogu dobro uvažati (na ilustraciji 3A). Otkriveno je 899 različito izraženih gena (DEG) između kontrolne grupe i LPS grupe, i 49 DEG-ova između LPS grupe i ACT

grupa (3B). Dosljedno, GO (figura 3C) i KEGG analiza obogaćivanja (figura 3D) otkrili su da je učinak ACT bio uključen u NF-kB put. Skup gena povezanih sa NF-kB putem je dodatno potvrđen, a na njihovu homeostazu je svakako uticao LPS. Kao što se očekivalo, ACT je značajno uticao na njihove izraze (na 3.

NF-kB put je klasičan put za regulaciju napredovanja upale, što u konačnici rezultira oslobađanjem pro-upalnih faktora. Da bi se dobila mehanistička podrška, ključni protein NF-kB puta je ocijenjen zapadnim blotom. LPS stimulacija je dovela do aktivacije NF-kB, povezanog s promocijom M1 polarizacije. U skladu sa RNK-seq analizom, ACT inhibira LPS-stimuliranu NF-kB fosforilaciju (3F). Stoga, ACT može osloboditi LPS-induciranu M1 polarizaciju putem NF-kB puta u BV-2 ćelijama.

ACT Umanjena Arginin Biosinteza kao i Pantotenate i CoA Biosinteza

Mrežno predviđanje ACT-a je otkrilo da je u vezi sa argininom (Arg) i prolinom metabolizmom (1B). RNK- seq je pokazao da su putevi pogođeni ACT-om također uključili Arg biosintezu kao i pantotenat i CoA biosintezu (na 3D. Predloženo je da su poremećaji metabolizma BV-2 ćelija izazvani stimulacijom LPS-a povezani sa M1 polarizacijom (Orihuela et al., 2016). Tako,

netargetirani metabolom ćelija od strane HPLC-Q-TOF-MS korišten je za identifikaciju učinka ACT na metabolizam ćelija. PCA i PLS-DA (figure 3G) su ilustrirali da se kontrolne, LPS i ACT grupe mogu dobro razlučiti na osnovu intraćeliularnih metabolita. Nivoi različitih metabolita u ćelijama BV-2 izazvanim LPS-om su promijenjeni nakon LIJEČENJA ACT-om (na 3H. U poređenju sa kontrolnom grupom, bilo je 11 metabolita koji su se značajno promijenili u LPS grupi (Dopunska tabela 2), dok je 14 metabolita bilo različito promijenjeno nakon liječenja ACT (Dopunska tabela 3), koji su uključivali 11 metaboličkih puteva (figura 3I). Efekt ACT se uglavnom sastoji od regulacije metabolizma aminokiselina, metabolizma nukleotida, energetskog metabolizma, i metabolizma kofaktora i vitamina. Zanimljivo je da su metabolički putevi dobiveni metabolomom bili u skladu s predviđanjima mreže i RNK-seq, uključujući Arg biosintezu kao i pantotenate i CoA biosintezu. Gore navedeno je pokazalo da ACT može regulirati Arg biosintezu kao i pantotenate i CoA biosintezu u ćelijama BV- 2 stimuliranim LPS-om.

Cistanche ekstrakt anti-Alchajmerova bolest

Pls kliknite ovdje na 2. dio