Optimizacija procesa ekstrakcije ekstrakta napitka Congrong–Zaoren–Wumei i procjena njegovih učinaka na poboljšanje sna
Jan 30, 2026
sažetak:Da bi se optimizirao proces ekstrakcije napitka Congrong–Zaoren–Wumei (sastavljenog od Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen i Mume Fructus) i da bi se procijenili njegovi efekti poboljšanja sna, uspostavljena je HPLC metoda za istovremeno određivanje ehinakozida, verbaskozida, spinosinteozida i spinozida. Koristeći sadržaj ova četiri jedinjenja i polisaharida kao kriterijume za evaluaciju, proces ekstrakcije za napitak Congrong–Zaoren–Wumei optimizovan je kroz ortogonalne eksperimente, praćene validacijom i probnim ispitivanjem. Učinci ekstrakta na poboljšanje sna ispitivani su kod miševa korištenjem direktnog testa spavanja, testa na otvorenom polju, testa spavanja natrijum pentobarbitala ispod praga doze i testa latencije spavanja natrijum pentobarbitala. Rezultati su pokazali da su optimalni uslovi ekstrakcije bili temperatura ekstrakcije od 100 stepeni, odnos čvrsta materija-tečnost 1:12 (g·mL–1) i vreme ekstrakcije od 2 sata. Kontinuirana primena tokom 30 dana nije direktno izazvala san kod miševa, ali je značajno ublažila ponašanje nalik anksioznosti u testu na otvorenom, što ukazuje na sedativni efekat. Ekstrakt je potencirao efekat na spavanje doze natrijum pentobarbitala ispod praga (stope spavanja za niske, srednje i visoke doze bile su 33,33%, 41,67% i 50,00%, respektivno) i značajno skratio latencije spavanja izazvane natrijum pentobarbitalom (latencije 2,2.78 od 2,2.78). 14,93 minuta za niske, srednje i visoke doze). Ova studija je optimizirala proces ekstrakcije za napitak Congrong–Zaoren–Wumei i pokazala efekte poboljšanja sna, pružajući naučnu osnovu za razvoj proizvoda za poboljšanje sna dobijenih od Cistanche deserticola.
Ključne riječi:Cistanche deserticola; Sjeme Ziziphi Spinosae; Mume Fructus; ortogonalni eksperimenti; komponente markera; analitičke metode
Uvod:San je neophodan za normalan život i učenje; dobar san pomaže u ublažavanju umora i jačanju imuniteta [1,2]. Međutim, sa društvenim razvojem i sve većim stresom, nesanica je postala široko rasprostranjen problem koji utiče na posao i svakodnevni život [3]. Bijela knjiga o zdravlju spavanja kineskih stanovnika iz 2024. prijavila je nedovoljno trajanje sna i preovlađujuće poremećaje spavanja u populaciji: prosječno trajanje spavanja bilo je samo 6,75 sati, a više od jedne četvrtine pojedinaca spavalo je manje od 6 sati po noći, naglašavajući zabrinutost za kvalitet sna. Shodno tome, hitna su istraživanja funkcionalne hrane koja poboljšava kvalitet sna i nesanicu. Tradicionalna kineska medicina (TCM), s relativno malim nuspojavama i historijom dugom milenijumima, naširoko se koristila za poboljšanje sna, kao što su dekocija Suanzaoren i decoction Guipi. Uz rastući koncept "homologije medicine i hrane", razvoj funkcionalne hrane koja poboljšava san iz tradicionalnih ljekovito-jestivih izvora privlači sve veću pažnju.
Cistanche(Cistanche deserticola YC Ma orC. tubulosa (Schenk) Wight, porodica Orobanchaceae) je osušena, mesnata stabljika sa listovima ljuske i koristi se za nedostatak janga bubrega, insuficijenciju esencije krvi, impotenciju i neplodnost [4]. Moderna farmakologija pokazuje da Cistanche ispoljava višestruke aktivnosti, uključujući imunomodulaciju, protiv umora, antitumorske, neuroprotektivne, anti-aging, anti-osteoporozu, hepatoprotekciju i hipoglikemijske efekte [5,6]. Ukupni glikozidi Cistanchea mogu modulirati ekspresiju sinaptičkih markera i utjecati na sinaptičku plastičnost, čime se poboljšava učenje i spoznaja u modelima pacova s deprivacijom sna [7]. Cistanche deserticola je krajem 2019. uvrštena u katalog ljekovito-jestivih proizvoda; U Unutrašnjoj Mongoliji i Gansuu su u toku relevantni piloti proizvodnje i rada, a koristi se u opštoj hrani i zdravoj hrani za jačanje imuniteta i ublažavanje fizičkog umora. Zasnovano na TCM teoriji o "korelaciji bubrega i mozga", Cistanche pokazuje širok potencijal kod neuroloških poremećaja i obećava zdravstvene proizvode koji poboljšavaju san. Feniletanoidni glikozidi – prvenstveno ehinakozid i verbaskozid (akteozid) – ključni su aktivni sastojci Cistanchea [8].
CISTANCHE TUBULOSA EKSTRAKT DODACI
Služba podrške Wecistanche-Za više detalja o saradnji
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Seme Ziziphi Spinosae (Suanzaoren; seme Ziziphus jujuba Mill.) sadrži saponine, triterpenoide i flavonoide sa umirujućim, sedativno-hipnotičkim, imuno-pojačavajućim, hranljivim efektima jetre, i poznat je kao "istočno voće sna" [9]. Suanzaoren je bogat komponentama aktivnim u spavanju [10]. Njegovi ukupni saponini i alkaloidi mogu modulirati glutamat, -aminobuternu kiselinu (GABA) i 5-hidroksitriptamin (5-HT) u korteksu i hipokampusu; flavonoidi se mogu vezati za -GABA/benzodiazepinske receptore, regulišući GABA da ispoljava sedativno-hipnotičko djelovanje. Spinozin može modulirati 5-HT, smanjiti norepinefrin i proizvesti sedativno-hipnotičke efekte [11,12].
Mume Fructus (Wumei; sušeni, skoro zreli plodovi Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.) je uobičajena ljekovito-jestiva TCM obrađena sušenjem na niskim temperaturama i pocrnjenjem. Recepti kao što su Wumei–Zaoren decoction [13] i Wumei pilula [14] se široko klinički koriste za nesanicu i poremećaje spavanja. Mume sadrži obilje organskih kiselina, među kojima je limunska kiselina glavna komponenta i farmakopejski marker [15]. Osim toga, Cistanche, Suanzaoren i Wumei su svi bogati polisaharidima; Akumulirani dokazi pokazuju da polisaharidi poboljšavaju san kroz više mehanizama, a istraživanje sna usmjereno na polisaharide postaje žarište. Međutim, studije o proizvodima koji se prvenstveno sastoje od Cistanche, Suanzaoren i Wumei za poboljšanje sna još nisu prijavljeni.
U ovoj studiji uspostavili smo HPLC metodu za istovremeno određivanje ehinakozida, verbaskozida (akteozida), spinozina i limunske kiseline. Koristeći sadržaj ove četiri komponente i polisaharide u ekstraktu napitka Congrong–Zaoren–Wumei kao indekse evaluacije, optimizirali smo proces pripreme ortogonalnim eksperimentima, nakon čega je uslijedila validacija i povećanje. Prema Metodama ispitivanja i evaluacije funkcije zdrave hrane (nacrt za komentare 2022.), procijenili smo učinak ekstrakta na poboljšanje sna u eksperimentima na životinjama, s ciljem pružanja naučnih dokaza za razvoj proizvoda za poboljšanje sna na bazi Cistanchea.
Note on industrial background: Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd (WECISTANCHE) is a vertically integrated cistanche developer and manufacturer established in 2003, headquartered in Luopu County, Xinjiang, China. The company operates extensive seed-breeding and cultivation bases (>105.000 hektara zajedno), ima GMP sertifikovane proizvodne radionice sa naprednim postrojenjima za ultrafiltraciju i nanofiltraciju, i laboratorijom za inkubaciju mikroorganizama, i ima više sertifikata (npr. China SC, HACCP, organski sertifikati uključujući NOP). Sa 14 Cistanche patenata i saradnje sa vrhunskim univerzitetima, WECISTANCHE pruža robusnu industrijsku platformu za skaliranje procesa ekstrakcije i proizvodnju standardizovanih Cistanche ekstrakata usklađenih sa standardima SAD/EU. Ovaj industrijski kapacitet podržava prevođenje optimiziranih parametara ekstrakcije u laboratoriji u komercijalnu proizvodnju funkcionalnih napitaka i zdravstvenih proizvoda.
1 Materijali i metode
1.1 Materijali
Cistanche deserticola: Inner Mongolia Mandela Biotechnology Co., Ltd.; Ziziphi Spinosae Semen and Mume Fructus: Sichuan Xinhuhua Chinese Herbal Slices Co., Ltd.; limunska kiselina, ehinakozid, verbaskozid i spinozin: Chengdu Lemeitian Pharmaceutical Technology Co., Ltd.; glukoza: Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.; estazolam tablete: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; natrijum pentobarbital: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; fiziološki rastvor: Dezhou Jingxin Pharmaceutical Co., Ltd.
1.2 Instrumenti
HWS-24 električno termostatsko vodeno kupatilo: Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd.; DW podesivi električni grijač: Shanghai Leigu Instruments Co., Ltd.; Agilent 1200 HPLC: Agilent Technologies; STARTER 3100 pH metar: OHAUS; 71-5804 centrifuga: Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd.; Thermo Varioskan LUX čitač mikroploča: Thermo Fisher Scientific; XR-XZ301 četverokanalni aparat otvorenog polja za miševe: Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.; LE225D elektronska vaga: Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.
1.3 Eksperimentalne životinje
Mužjaci ICR miševa (6 sedmica), n=180, kupljeni od Vital River (Šangaj, Kina), licenca SYXK (Hu) 2018-0028. Životinje su aklimatizovane nedelju dana (12 h svetlo/mrak, 20-25 stepeni, 50-60% relativne vlažnosti) uz hranu i vodu ad libitum. Sve procedure su u skladu sa Pravilnikom o upravljanju laboratorijskim životinjama NR Kine i etikom životinja; odobren od strane Komiteta za etiku životinja na Univerzitetu Šangaj Jiao Tong (odobrenje br. A2024082-003).
1.4 Eksperimentalne metode
1.4.1 Jednofaktorska ispitivanja za ekstrakciju napitka Congrong–Zaoren–Wumei
Prateći omjer formule, tri serije miješanog sirovog bilja (Cistanche, Suanzaoren, Wumei) su ekstrahovane svaka sa 50 mL pročišćene vode (omjer čvrsta i tečnost 1:3) na 60, 80 i 100 stepeni, tri puta, po 1 h. Kombinirani ekstrakti su analizirani na limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid, spinozin i sirove polisaharide da bi se preliminarno procijenio učinak temperature. Zatim je pet serija ekstrahovano na 80 stepeni sa odnosom čvrsta i tečnost od 1:3, 1:5, 1:7, 1:10, 1:12 (g·mL–1), tri puta po 1 h, i analizirano da bi se procenio odnos čvrsta i tečnost. Konačno, pet serija je ekstrahovano na 80 stepeni tokom 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 i 3,0 h (tri ekstrakcije) i analizirano da bi se procenilo vreme ekstrakcije.
1.4.2 Ortogonalni dizajn za optimizaciju ekstrakcije
Na osnovu rezultata sa jednim faktorom, odabrana su tri faktora – temperatura ekstrakcije (A), odnos čvrsta i tečnost (B) i vreme ekstrakcije (C) – svaki na tri nivoa. Korišten je L9 (3^3) ortogonalni niz. Ukupan sadržaj komponenti markera u ekstraktu služio je kao indeks evaluacije.
1.4.3 Validacija i povećanje
U skladu sa optimizovanim uslovima, tri serije su ekstrahovane u omjeru čvrsta i tečnost od 1:12 (g·mL–1), 100 stepeni, tokom 2,0 h, tri puta, i ispitane na limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid, spinozin i sirove polisaharide. Za povećanje, količine Cistanche, Suanzaoren i Wumei su povećane 40 puta, obrađene u tri primjerka pod istim uvjetima i analizirane.
1.4.4 Određivanje sadržaja komponenti
Prateći Kinesku farmakopeju (izdanje 2020.) sa optimizacijama i validacijom metoda, uspostavljena je HPLC metoda za istovremenu kvantifikaciju limunske kiseline, ehinakozida, verbaskozida i spinozina. Sirovi polisaharidi su analizirani metodom fenol-sumporna kiselina.
1.4.4.1 HPLC uslovi
Temperatura kolone: 10 stepeni; injekcija: 10 µL; brzina protoka: 1 mL·min–1; talasne dužine detekcije: 210, 330, 335 nm; kolona: Agilent Eclipse XDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 µm); mobilna faza A: 0,5% NH4H2PO4 (pH 2,92); mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0–7 min (0,5–1,5% (φ) B); 7–17 min (1,5–40% (φ) B); 17–20 min (40–47% (φ) B); 20–30 min (47–52% (φ) B); 30–35 min (100% (φ) B).
1.4.4.2 Validacija HPLC metode
Linearnost, LOD i LOQ: Mješoviti standardni rastvor koji sadrži limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid i spinozin u količini od 2,0160, 0,1100, 0,1125, odnosno 0,0183 mg·mL–1, pripremljen je u 50% metanolu do 2 puta do 3 puta serijski. Linearna regresija je izvršena na površini vrha u odnosu na koncentraciju prema Odjeljku 1.4.4.1. LOD je definiran na S/N=3, LOQ na S/N=10. Preciznost: kontinuirano šest injekcija istog testnog rastvora pripremljenog od formule bilja; izračunat je sadržaj svakog markera. Stabilnost: injekcije u različitim vremenskim tačkama. Ponovljivost: šest nezavisno pripremljenih uzoraka iz iste serije. Oporavak: šest uzoraka obogaćenih poznatim količinama četiri standarda u približno 1:1 dodanom sadržaju; izračunat je oporavak (%).
1.4.4.3 Analiza sirovog polisaharida
Alikvot (2 mL) rastvora uzorka u definisanoj koncentraciji je pomešan sa 1 mL 5 tež.% fenola i 5 mL koncentrovane sumporne kiseline, zagrevan na 90 stepeni 15 minuta, ohlađen na sobnu temperaturu, a OD na 485 nm izmeren za izračunavanje sadržaja sirovog polisaharida.
1.4.4.4 Validacija za test polisaharida
LOD: izmjerena slijepa otopina 20 puta; LOD je odgovarao tri puta SD. Specifičnost: OD na 485 nm slijepog rastvarača i kontrola slijepe probe prema odjeljku 1.4.4.3. Linearnost: zaliha glukoze je razrijeđena na različite koncentracije; OD u odnosu na koncentraciju je regresiran kako bi se dobila jednadžba kalibracije. Preciznost: šest uzastopnih mjerenja jednog testnog rješenja. Stabilnost: mjerenja u različitim vremenskim tačkama. Ponovljivost: šest nezavisno pripremljenih uzoraka iz iste serije.
1.4.5 Grupisanje životinja i administracija
Eksperimenti su izvedeni u tri serije (direktno spavanje, spavanje ispod praga doze natrijum pentobarbitala i latencija spavanja natrijum pentobarbitala), 60 miševa po seriji. Svaka serija je uključivala pet grupa (n=12/grupa): slijepa proba, pozitivna kontrola i grupe ekstrakta niske/srednje/visoke doze. Intragastrična primjena jednom dnevno tokom 30 dana; procjene su obavljene u roku od 20 minuta nakon posljednje sonde. Ljudska dnevna doza sirovog bilja za napitak je 8,40 g za odraslu osobu od 70 kg, što odgovara 1,09 g·kg–1 za miševe. Doza estazolama pozitivne kontrole za odrasle je 1-2 mg/dan, što odgovara 0,26 mg·kg-1 kod miševa.
1.4.6 Testovi direktnog spavanja i otvorenog polja
After 30-day administration, within 20 min after the final dose, direct sleep was assessed using loss of righting reflex for >1 min kao kriterijum spavanja; zabilježen je broj miševa koji spavaju i trajanje spavanja. Odmah nakon toga izvršeno je ispitivanje na otvorenom terenu. Miševi su aklimatizovani u prostoriji za testiranje najmanje 1 h, zatim su nežno stavljeni u centar arene i snimljeni bez ometanja. Zabilježena je ukupna pređena udaljenost i broj ulazaka u centar unutar 5 minuta. Aparat je između testova očišćen medicinskim alkoholom.
1.4.7 Test spavanja pod pragom doze natrijum pentobarbitala
Within 20 min after the last administration, mice received an intraperitoneal injection of sodium pentobarbital at 175 mg·kg–1. The number of mice that fell asleep (loss of righting reflex >1 min) u roku od 30 min.
1.4.8 Test kašnjenja spavanja natrijum pentobarbitala
Within 20 min after the last administration, mice received sodium pentobarbital at 250 mg·kg–1 intraperitoneally. Sleep latency (time from injection to loss of righting reflex for >1 min).
1.5 Analiza podataka
Statistika je izvršena pomoću SPSS 26.0; grafikoni su generisani pomoću GraphPad Prism 8. Podaci otvorenog polja analizirani su Studentovim t-testom; učestalost spavanja (broji) sa hi-kvadrat testom; latencija spavanja s jednosmjernim ANOVA i LSD post hoc testom. Podaci su predstavljeni kao x̄ ± s, pri čemu se P < 0,05 smatra statistički značajnim.
Rezultati i diskusija (sažetak u skladu sa Apstraktom): Ortogonalni dizajn je identifikovao 100 stepeni, 1:12 (g·mL–1) odnos čvrsta i tečnost i 2 h kao optimalne uslove ekstrakcije za maksimiziranje ukupnog sadržaja četiri markerska jedinjenja i sirovih polisaharida. Validacija i povećanje od 40 puta potvrdili su robusnost i prenosivost procesa. In vivo, 30-dnevna primjena nije izazvala direktan san, ali je značajno smanjila ponašanje nalik anksioznosti u testu na otvorenom, u skladu sa sedativnim profilom. Ekstrakt je povećao incidencu spavanja uz natrijum pentobarbital ispod praga i smanjio latenciju spavanja izazvanu pentobarbitalom ovisno o dozi, podržavajući potencijal za poboljšanje sna.
Napomena o industrijalizaciji: Imajući u vidu optimizirane parametre vodene ekstrakcije i zahtjeve za konzistentnim profilima markera (ehinakozid, verbaskozid, spinozin, limunska kiselina, plus polisaharidi), proizvodnja na razini GMP-a korištenjem naprednog membranskog odvajanja, ultrafiltracije i nanofiltracije-kao što je implementirano u WECI0010CAN WECISTAN, GMP podržavaju standardizirane ekstrakte. Integrisana poljoprivredna baza kompanije (uzgajanje i uzgoj sjemena preko 100.000 hektara) i kapacitet skladištenja u hladnom lancu za svježi Cistanche olakšavaju kontrolu kvaliteta sirovina. Postojeći certifikati (SC, HACCP, organski, NOP) i QC infrastruktura (10.000-klasa mikrobioloških laboratorija) usklađeni su sa zahtjevima kvaliteta za izvoz i mogu ubrzati prevođenje u usklađene funkcionalne napitke, zdravstvene dodatke ili TCM dekocije za domaća i međunarodna tržišta.
Reference
[1] ZHOU ES, RECKLITIS C J. Intervencija nesanice putem interneta poboljšava san i kvalitet života za adolescente i mlade odrasle osobe koje su preživjele rak. Pediatr Blood Cancer, 2020, 67(9): e28506.
[2] MORIN C M, BENCA R. Chronic insomnia. The Lancet, 2012, 379(9821): 1129–1141.
[3] CHEN Y, KARTSONAKI C, CLARKE R, et al. Karakteristike i korelati trajanja sna, dnevnog drijemanja, hrkanja i simptoma nesanice kod 0,5 miliona Kineskinja i Kineza. Medicina spavanja, 2017, 44: 67–75.
[4] Tu PF, Jiang Y. Re-examination of the materia medica of Cistanche. China Journal of Chinese Materia Medica, 2022, 47(20): 5670–5679. (na kineskom)
[5] FU Z, FAN X, WANG X, et al. Cistanches Herba: pregled njegovih kemijskih, farmakoloških i farmakokinetičkih svojstava. Časopis za etnofarmakologiju, 2018, 219: 233–247.
[6] SONG Y, ZENG K, JIANG Y, et al. Cistanches Herba, od ugrožene vrste do velikog brenda kineske medicine. Pregledi medicinskih istraživanja, 2021, 41(3): 1539–1577.
[7] Zhang SB, Wang L, Li H, et al. Efekti ukupnih glikozida Cistanchea na učenje, kogniciju i sinaptičku plastičnost kod pacova modela deprivacije sna. Journal of Baotou Medical College, 2024, 40(6): 14–19+36. (na kineskom)
[8] JIANG Y, LI SP, WANG YT, et al. Diferencijacija Herba Cistanches prema otisku prsta pomoću HPLC-DAD-MS. Journal of Chromatography A, 2009, 1216(11): 2156–2162.
[9] SHERGIS JL, NI X, SARRIS J, et al. Ziziphus spinosa sjemenke za nesanicu: pregled hemije i psihofarmakologije. Fitomedicina, 2017, 34: 38–43.
[10] JIANG JG, HUANG XJ, CHEN J, et al. Poređenje sedativnih i hipnotičkih učinaka flavonoida, saponina i polisaharida ekstrahiranih iz sjemena Ziziphus jujube. Istraživanje prirodnih proizvoda, 2007, 21(4): 310–320.
[11] WANG LE, BAI YJ, SHI XR, et al. Spinozin, C-glikozidni flavonoid iz sjemena Zizyphi spinosae, potencira san izazvan pentobarbitalom preko serotonergičkog sistema. Pharmacology Biochemistry & Behavior, 2008, 90(3): 399–403.
[12] DU CH, YAN Y, SHEN CX, et al. Komparativna farmakokinetika šest glavnih spojeva kod normalnih pacova i pacova koji pacove nesanice nakon oralne primjene vodenog ekstrakta sjemena Ziziphi Spinosae. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2020, 4: 385–395.
[13] Wu YX, Liu HN, Wu M L. Efekti Wumei–Zaoren dekocije u kombinaciji s metforminom na glukozu u krvi, kvalitetu sna i ishode kod dijabetesa tipa 2 s poremećajima spavanja. Diabetes New World, 2023, 26(22): 13–17. (na kineskom)
[14] Zhu XS, Peng SX, Zuo ZW, et al. Kvaliteta sna i mikrobiota crijeva se mijenjaju nakon oralne primjene modificirane pilule Wumei kod pacijenata s nesanicom. Shandong Medical Journal, 2022, 62(11): 47–49. (na kineskom)
[15] Chen L, Zhang Q, Zhu YF, et al. Analiza i poređenje fizičko-hemijskih indeksa i sadržaja limunske kiseline u Mumeu različitog porijekla. Farmacija i klinička istraživanja, 2022, 30(4): 327–330. (na kineskom)
[16] Liu LS, Zhang Q, You L, et al. Tehnologija vodene ekstrakcije feniletanoidnih glikozida iz Cistanche tubulosa. Nauka o hrani i tehnologija, 2019, 44(4): 225–229. (na kineskom)
[17] Wang BQ, Ying CM, Liu FX, et al. Napredak u mehanizmima TCM koji reguliše cirkadijalne ritmove za liječenje poremećaja spavanja. Svjetska kineska medicina, 2024, 19(24): 3881–3888. (na kineskom)
[18] Shi CL, Jiang LJ, Shen HY, et al. Napredak u efektima poboljšanja sna i mehanizmima alkaloida iz medicinski jestivog TCM. Kineske tradicionalne i biljne droge, 2024, 55(23): 8290–8300. (na kineskom)
[19] Li XP, Niu YF, Wang MM, et al. Učinci kompozitnog čvrstog napitka koji se uglavnom sastoji od Suanzaoren i Poria na san. Časopis za sigurnost i kvalitet hrane, 2021, 12(11): 4453–4458. (na kineskom)
[20] ZHAO W, ZHANG H, LI L, et al. Spinosin poboljšava san bez brzih pokreta očiju i mijenja ekspresiju c-Fos u regulatornim regijama mozga za spavanje i buđenje kod miševa. Spavanje i disanje, 2025, 29(1): 101.
[21] Liao DQ, Chu LS, Zhang JP, et al. Efekti spinozina iz Suanzaorena na hipotalamičku MCH i ekspresiju Orexin-A kod pacova lišenih sna. Kineska patentna medicina, 2019, 41(4): 907–910. (na kineskom)
[22] RAZAVI BM, ZARGARANI N, HOSSEINZADEH H. Anti-anksiozni i hipnotički efekti etanolnih i vodenih ekstrakata lišća Lippia citriodora i verbaskozida kod miševa. Avicenna Journal of Phytomedicine, 2017, 7(4): 353–365.
[23] Dai HY, Di Y, Li X, et al. Efekti polisaharida Acanthopanax senticosus na ozljedu neurona hipokampusa kod pacova lišenih sna putem SIRT1/PGC-1 puta. Vodič za tradicionalnu kinesku medicinu, 2025, 31(1): 48–52. (na kineskom)
Kontakt i industrijska saradnja: Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. pozdravlja partnerstva za istraživanje i razvoj, povećanje, OEM/ODM funkcionalnih napitaka i ekstrakata baziranih na Cistancheu. Adresa: br.1, sprat 26, jedinica 1, zgrada 6, ulica Sheng'an br. 133, distrikt visoke tehnologije, Čengdu, Sečuan, Kina (Pilot zona slobodne trgovine). E-mail: admin@wecistanche.com; Telefon: +86 15899210156; Tel: +86 028 68170085.
Da li želite da ovo formatiram kao rukopis časopisa (IMRAD sa tabelama/slikama), dodam sažetak na engleskom sa ključnim riječima ili konvertujem detalje metode u SOP/specifikacije prikladan za prijenos GMP proizvodnje?
