Niosomalni nanonosači za poboljšanu isporuku kvercetina u kožu sa funkcijama anti-tirozinaze i antioksidansa

sažetak:

Ova studija je imala za cilj da ispita efikasan flavonoid sa obećavajućim izbjeljivanjem i antioksidativnim kapacitetima, te dizajnira niosome punjene flavonoidima kako bi se poboljšala njegova rastvorljivost, stabilnost i penetracija. Eksperimenti uklanjanja slobodnih radikala in vitro protiv tirozinaze i 1,1-difenil-2-pikrilhidrazila (DPPH) sprovedeni su kako bi se istražio izbjeljivanje i antioksidativni kapacitet nekoliko flavonoida, uključujući kvercetin, morin, festin, miricetin, rutin i breviscapin.

Proučavani su provodljivost, viskozitet i veličina čestica formulacije nejonskih surfaktantnih vezikula (niozoma) zasnovane na Span{{0}}RH40-u različitim omjerima mase kako bi se odredila najprikladnija formulacija. Niozomi napunjeni lijekovima okarakterizirani su po veličini, zeta potencijalu, morfologiji i efikasnosti zarobljavanja. Također su proučavani fotostabilnost, rastvorljivost, ponašanje oslobađanja, ex vivo penetracija lijeka i zadržavanje kože. Rezultati su pokazali da kvercetin ima značajne kapacitete za izbjeljivanje i antioksidaciju, a Span60-RH40 u masenom odnosu 9:11 formira sferične ili ovalne niozome od 97,6 ± 3,1 nm sa rasponom zeta potencijala od 31,1 ± 0,9 mV i lijeka u rasponu od 31,1 ± 0,9 mV. efikasnost zarobljavanja čak 87,3 ± 1,6 procenata. Niosomi su značajno poboljšali rastvorljivost i fotostabilnost kvercetina.

Nadalje, u poređenju s otopinom kvercetina, kvercetin-liposomi su imali prednosti odloženog oslobađanja i poboljšane transdermalne penetracije, uz zadržavanje kože 2,95 puta veće od otopine kvercetina.

Antioksidans je svaka supstanca koja može efikasno inhibirati reakciju oksidacije slobodnih radikala pri niskim koncentracijama. Njegov mehanizam djelovanja može biti direktno djelovanje na slobodne radikale ili indirektno konzumiranje tvari koje lako stvaraju slobodne radikale kako bi se spriječile daljnje reakcije. Dok ljudsko tijelo neizbježno proizvodi slobodne radikale, ono također prirodno proizvodi antioksidativne tvari koje se odupiru slobodnim radikalima kako bi se suprotstavili oksidativnim napadima slobodnih radikala na ljudske stanice. Istraživanja su dokazala da je antioksidativni sistem ljudskog organizma sistem sa potpunim i složenim funkcijama uporedivim sa imunološkim sistemom. Što je jači antioksidativni kapacitet organizma, to je ono zdravije i život mu je duži. U našem istraživanju smo otkrili da Cistanche deserticola ima i antioksidativni učinak. Cistanche deserticola je bogata polisaharidima, flavonoidima, alkaloidima, flavonoidnim glikozidima, flavonskim kiselinama i drugim komponentama, a ove tvari imaju snažno antioksidativno djelovanje. Mogu se oduprijeti oksidativnom stresu i smanjiti oštećenje stanica hvatanjem slobodnih radikala, smanjenjem oksidacijskih reakcija i povećanjem aktivnosti antioksidativnih enzima, čime imaju antioksidativnu ulogu.

Click cistanche deserticola dodatak proizvodu

Ključne riječi:

anti-tirozinaza; antioksidans; niosomi; fotostabilnost; transdermalna isporuka.

1. Uvod

Flavonoidi su široko rasprostranjeni u voću, povrću i začinskom bilju i imaju ekstenzivno biološko djelovanje, uključujući antivirusno, protuupalno, antikancerogeno, antioksidativno i antitirozinazno [1,2]. Nedavno je potraga za novim sigurnim inhibitorom tirozinaze dobila veliku pažnju u oblasti kozmetike, jer neki od poznatih inhibitora, kao što su kojična kiselina, hidrokinon i kortikosteroidi, mogu izazvati zdravstvene probleme, poput dermatitisa i iritacije kože. , ohronoza, citotoksičnost i rak kože [3]. Zbog svoje niske toksičnosti i značajnog antioksidativnog i antitirozinaznog djelovanja, flavonoidi su privukli veliko interesovanje kao potencijalni prirodni izbjeljivači i antioksidansi za upotrebu u proizvodima za njegu kože [4–6].

Međutim, flavonoidi imaju mnogo različitih struktura, uključujući različite konfiguracije sa istom matičnom jezgrom, ali je još uvijek nejasno koje vrste struktura posjeduju i moćne anti-tirozinazne i antioksidativne sposobnosti. Osim toga, većina flavonoida ima lošu topljivost u vodi i liposolubilnost, a umjerena lipofilnost i niska molekularna težina su faktori za koje se zna da pospješuju bolje prodiranje. Drugi značajan faktor koji utiče na efikasnost komponenti su biološke barijere same kože, kao što je stratum corneum. Iako fizičko-hemijske metode, uključujući jontoforezu, ultrazvuk, mikroigle, sisteme za injekcije bez igle i pojačivače penetracije, mogu promovirati prodiranje aktivnih sastojaka kroz stratum corneum, ove metode mogu biti invazivne, iritirati kožu i skupe su.

S druge strane, pojavili su se neki novi sistemi za isporuku aktivnih sastojaka posredovani nosačem, uključujući emulziju, micele, vezikule i ciklodekstrin, kako bi se poboljšala efikasnost postojećih sastojaka, posebno onih sa slabom rastvorljivošću i biodostupnošću. Vezikule su dobile više pažnje za transdermalnu isporuku. Među vezikulama, transferzomi su dobro deformabilni liposomi sa poboljšanom perkutanom permeabilnosti i mogu poboljšati rastvorljivost i stabilnost lijeka. Transferzomi se sastoje od specifičnog omjera fosfolipida i surfaktanata, dok su fosfolipidi skupi i lako se oksidiraju.

Stoga je traženje drugih stabilnih i zamjenjivih vezikula zanimljiv predmet istraživanja. Niozomi su nejonski surfaktantni vezikularni sistemi, prvi put prijavljeni 1979. kada su primijenjeni u kozmetičkoj industriji [7], ali su od tada proučavani kao sistem za isporuku lijekova u farmaciji [8–13]. Fizička svojstva, tehnike pripreme i strukture niosoma su vrlo slične onima liposoma. Međutim, niosomi također imaju prednosti u transdermalnoj isporuci lijeka, kao što je produženo oslobađanje lijeka, bolja penetracija i veće zadržavanje kože [14], jeftiniji su za pripremu i stabilniji [15]. Stoga se niosomi mogu primijeniti u kozmetičkoj industriji [16–18].

Rani surfaktantni vezikuli su pripremljeni korištenjem ionskih tenzida [19–22]. Sveobuhvatne studije toksičnosti tenzida su pokazale da su kationski surfaktanti najtoksičniji, a slijede anionski surfaktanti, dok su neionski surfaktanti najmanje toksični. Stoga, uzimajući u obzir sigurnost i industrijsku primjenu, upotreba liposoma koji sadrže neionske surfaktante je bolja opcija za transdermalnu dostavu. Zbog strukture amfifilnih dvoslojeva, raspon skale hidrofilno-lipofilne ravnoteže (HLB) od 4 do 8 će biti lakši za formiranje niozoma iz [14,23,24].

Stoga će formulirani, nejonski surfaktanti s različitim HLB vrijednostima biti lakši za formiranje niosoma. Span, Tween i Brij su uobičajeni nejonski surfaktanti koji se koriste za pripremu liposoma [15,25–34]. Nejonski surfaktanti s dugim ugljikovodičnim lancima bez dvostrukih veza su prihvatljivi kandidati jer se mogu formirati stabilni niosomi s potencijalom za povećano opterećenje lijekom. Span60, sa niskom HLB vrijednošću, široko se koristio za formiranje niosoma [15,29,31,33,34]. Nejonski surfaktanti s visokim HLB vrijednostima, kao što su Tween20, Tween60, Tween80, Brij35 i Brij58, ne formiraju lako niozome sami ili bez optimalne količine holesterola [28,35,36], zbog svoje glomazne hidrofilne glave i kratke ugljikovodične lance. Stoga su u stanju da formiraju niosome samo uz dodatak holesterola ili kada su formulisani sa drugim surfaktantima [10,27,31,37–39]. Cremophor RH40 je visoko hidrofilan i ima nisku toksičnost, te se široko koristi u formulacijama oralnih lijekova, ali nijedan izvještaj ne ukazuje na upotrebu Cremophor RH40 u formulaciji liposoma.

U ovoj studiji smo pregledali flavonoide sa dobrim izbjeljivanjem i antioksidativnim efektima i istražili Span60-RH40, nejonski surfaktantni sistem s različitim omjerima lipida za formiranje niozoma. Niozomi napunjeni kvercetinom su okarakterisani za veličinu vezikula, zeta potencijal, efikasnost inkapsulacije i transmisionu elektronsku mikroskopiju (TEM), a takođe su ispitane njihova rastvorljivost i fotostabilnost. Osim toga, pacovi su korišteni za istraživanje transdermalne penetracije niosoma napunjenih kvercetinom.

2. Rezultati

2.1. Tirozinaza inhibicija flavonoida

Dobro je poznato da flavonoidi posjeduju višestruke hidroksilne grupe (slika 1) koje su važne za djelovanje anti-tirozinaze. Izvještava se da su broj i položaj hidroksilnih grupa, kao i prisustvo dijelova šećera povezani sa inhibicijom tirozinaze. U Tabeli 1, Myricetin nije pokazao aktivnost protiv tirozinaze jer lako formira jake intermolekularne vodonične veze koje mogu ometati helaciju s tirozinazom. Rutin i breviscapin nisu pokazali obećavajuću aktivnost protiv tirozinaze, dok su kvercetin, morin i festin pokazali znatno više anti-tirozinazne aktivnosti od arbutina, koji je uobičajeno sredstvo za izbjeljivanje koje se koristi u kozmetici.

2.2. Antioksidativna aktivnost flavonoida

Flavonoids can scavenge free radicals as antioxidants by donating a hydrogen atom. The antioxidant activity of flavonoids is related to the number of hydroxyl groups and their structure. This includes (i) the presence of an ortho-hydroxyl group in the B ring; (ii) the presence of a C2-C3 double bond in the C ring; (iii) or the presence of a C-3 hydroxyl group [40–42]. As shown in Table 2, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of the six compounds is in the following order: quercetin = fest in>miricetin=morin > rutin > BHT ≈ breviscapin. Kvercetin i festin su imali najmoćniji kapacitet uklanjanja radikala.

2.3. Formulacija niosoma

2.3.1. Provodljivost sistema Span60-RH40

Transferzomi su nestabilni jer se prvenstveno sastoje od fosfolipida koji se mogu lako oksidirati, uzrokujući curenje lijeka. Niozomi su identificirani kao alternativa za transfersome u transdermalnoj isporuci. Iako mnogi neionski surfaktanti mogu formirati niozome [15,26,28], neionski surfaktanti sa nezasićenim ugljikovodičnim lancima su manje stabilni od neionskih surfaktanata sa zasićenim ugljikovodičnim lancima [37]. Stoga smo u ovoj studiji odabrali Span60 i RH40, od kojih oba nemaju dvostruke veze, da formiramo niosome kako bismo poboljšali njihovu stabilnost.

Provedena su mjerenja provodljivosti kako bi se odredilo ponašanje agregacije nejonskih surfaktanata u vodenom rastvoru. Provodljivost Span60-RH40 dispergovanog u vodi postepeno se povećavala od masenog omjera od 4:16 do 9:11, a zatim je u platou između masenih omjera od 9:11 do 13:7 i smanjena sa 13:7 na 16 :4 (Slika 2a). Dvije granične tačke mogu ukazivati ​​na promjene u mikrostrukturi agregata. Kao što je prikazano na slici 3, pri omjeru mase 9:11, počeli su se formirati niosomi.

2.3.2. Veličina sistema Span60-RH40

Veličina čestica je važan indeks za procjenu nanometarskih čestica. Mjerenje veličine sistema Span60-RH40 sa različitim omjerima mase surfaktanta moglo bi dalje odražavati promjenu mikrostrukture agregata u sistemu. Kao što je prikazano na slici 2b, u početku je veličina agregata bila relativno mala i konstantna pri omjeru mase od 4:16 do 9:11. Nakon toga, veličina agregata je uvelike porasla pri omjeru mase od 9:11 do 13:7, a zatim je kontinuirano naglo porasla pri omjeru mase od 13:7 do 16:4, koji je bio čak i do ~1 µm. Spontani strukturni prijelaz agregata Span60/RH40 dodatno je potvrđen veličinom agregata u kombinaciji s vodljivošću i viskozitetom.

2.3.3. Viskoznost sistema Span60-RH40

Viskozitet sistema Span60-RH40 prikazan na slici 2c predstavlja odgovarajuće promjene. Prvo, viskozitet sistema Span60-RH40 bio je nizak i konstantan pri omjeru masa od 4:16 do 9:11. Zatim, pri omjeru masa od 9:11 do 13:7, viskoznost se značajno promijenila, sa povećanjem i potom opadanjem viskoziteta. Provodljivost i veličina o kojima smo raspravljali također su se desili u skladu sa promjenama u ovom rasponu masenog omjera Span60-RH40. Nakon toga, pri omjeru mase od 13:7 do 16:4, viskoznost je naglo porasla.

2.4. Veličina, Zeta potencijal, morfologija i efikasnost hvatanja kvercetin-niosoma

Kvercetin je napunjen niosomima Span60-RH40, a zatim homogeniziran pod pritiskom od 1500 bara. Kao što je prikazano u tabeli 3, hidrodinamički prečnik praznih niosoma i kvercetin-liposoma bio je 146,4 ± 5,4 nm i 97,6 ± 3,1 nm, respektivno.

Zeta potencijal je proučavan kako bi se razumjeli površinski naboji niosoma. Zeta potencijal praznih niozoma i kvercetin-niozoma bio je −41,2 ± 0,6 mV i −31,1 ± 0},9 mV, respektivno (Tabela 3). TEM slika na slici 4b pokazala je da su kvercetin-niozomi sferni ili ovalni. Efikasnost hvatanja kvercetin-liposoma bila je 87,3 ± 1,6 posto, što je više od onih u rasponu od 48,4 posto do 78,4 posto u prethodnim radovima [37,43,44]. Povećana efikasnost hvatanja lijeka može se pripisati afinitetu između lijekova i dvosloja niosoma [45].

2.5. Rastvorljivost u vodi i ravnotežna rastvorljivost kvercetina

Kao što je prikazano na slici 5, rastvorljivost kvercetina u vodi je bila izuzetno niska. Njegova rastvorljivost nije imala značajnu razliku (P > 0.05) u fosfatnom puferu sa različitim pH u poređenju sa onim u vodi. Rezultat ravnotežne rastvorljivosti kvercetina pokazao je da je kvercetin visoko topiva komponenta. Kao što se vidi na slikama 6 i 7, ravnotežna rastvorljivost kvercetina je ostala stabilna u različitim omjerima voda/n-oktanol, ali se smanjila na pH 8,0 jer se struktura kvercetina promijenila u bazičnim uvjetima, uzrokujući povećanje rastvorljivosti u vodi.

Međutim, loša rastvorljivost kvercetina u vodi bila je ograničena na njegovu primenu. Na osnovu tabele 4, poboljšana je rastvorljivost kvercetina u surfaktantima o kojima se govori u nastavku, posebno u 0.6 posto Tween80 (P < 0.05). Međutim, njegova rastvorljivost je dodatno poboljšana unošenjem u niosome. Kvercetin (300 µg/mL) je bio napunjen u niozomima i visoka inkapsulacija Span60-RH40 noizoma je bila 87,3 ± 1,6 posto, stoga je rastvorljivost kvercetina u niozomima bila 261,9 ± 4,8 µg/mL, što je bilo {{{mL) 17}} puta veća od one u vodi (P < 0,05).

2.6. Fotostabilnost kvercetin-niosoma

Kvercetin ima slabu fotostabilnost i brzo se razgrađuje pod izlaganjem sunčevoj svjetlosti ili UV zračenju [46–48], vjerovatno zato što kvercetin podliježe fotooksidaciji nakon UV zračenja [49]. Međutim, fotostabilnost je neophodna da bi kvercetin pokazao svoje aktivnosti. Kao što je prikazano na slici 8, niosomi su efektivno poboljšali fotostabilnost kvercetina i ostali su na 88,06 posto nakon 10 dana izlaganja jakom svjetlu. Kvercetin je bio zaštićen od UV zračenja jer je bio inkapsuliran u dvoslojevima niosoma. Molekuli 2019, 24, x ZA RECEPT 8 od 18 izloženosti jakom osvetljenju. Kvercetin je bio zaštićen od UV zračenja jer je bio inkapsuliran u dvoslojevima niosoma.

2.7. In vitro ponašanje kvercetin-niozoma

Odgovarajući medijum za oslobađanje je pregledan da bi se održali uslovi ponora, stoga je procenjena rastvorljivost kvercetina u različitim medijumima. Rezultati u Tabeli 5 pokazuju da je kvercetin imao veću rastvorljivost u Tween80 vodenoj vodi i da se njegova rastvorljivost postepeno povećavala sa povećanjem koncentracije Tween80. Rastvorljivost kvercetina se povećala na 76,07 ± 3,11 µg/mL u kiselim uslovima. Stoga je, uzimajući u obzir pH ljudske kože, 0,8 posto Tween80 (pH 5,0) odabrano kao medij za otpuštanje za proučavanje ponašanja oslobađanja slobodnog kvercetina i kvercetin-niozoma.

Kao što se vidi na slici 9, u poređenju sa kvercetin-niosomima, slobodni kvercetin se oslobađa mnogo brže u medijumu za oslobađanje, što pokazuje da niosomi imaju efekat produženog oslobađanja. Odloženo oslobađanje smanjuje vrijeme primjene, smanjuje toksičnost i održava efikasnu koncentraciju lijeka.

2.8. Ex vivo studije permeacije i retencije kože

Otopina {{0}},6 posto Tween80 korištena je kao medij za oslobađanje penetracije u ovoj studiji. U našoj exvivo studiji penetracije, kvercetin nije mogao biti određen u mediju za oslobađanje penetracije, što je ilustrovalo da kvercetin nije prodirao u dermis i dospio do medija za oslobađanje, ali su niosomi značajno poboljšali zadržavanje kvercetina na koži (P < 0.{101} {20}}5). Kao što je prikazano u Tabeli 6, zadržavanje u koži kvercetin-niosoma (1,92 plus 0.74 ug/cm?), kvercetin-niosoma-1 posto propandiola (2,34 plus 0,40 ug /cm?), a kvercetin-transferzomi (2,53 plus 0,40 ug/cm-) su bili značajno veći u poređenju sa kvercetin-propandiolom (0,65 plus 0,10 ug/cm2) (P < 0,05).

3. Diskusija

Prethodne studije su utvrdile da je slobodna hidroksilna grupa na poziciji C-3 igrala važnu ulogu u inhibiciji tirozinaze [50–52]. Suprotno tome, 3-O-glikozidi mogu ometati njihovo vezivanje za aktivna mjesta tirozinaze i mogu biti razlog zašto rutin nije pokazao anti-tirozinazno djelovanje. Nasuprot tome, šećerna grupa koja se nalazi na poziciji C-7 imala je mali uticaj na aktivnost anti-tirozinaze i nije blokirala helaciju sa tirozinazom [51].

Međutim, prisustvo dodatne hidroksilne grupe na C-30 poziciji B prstena povećalo je inhibiciju tirozinaze [53,54]. Breviscapin nije pokazao aktivnost protiv tirozinaze jer mu je nedostajala C{4}} hidroksilna grupa i C-30 hidroksilna grupa koje su mogle imati efekta na aktivnost antitirozinaze, a ne na prisustvo 7- O-glikozidi. U analizi odnosa strukture i aktivnosti kvercetina i morina, uočili smo da je IC50 vrijednost morina oko 1/3 vrijednosti kvercetina i jedina razlika između strukture kvercetina i morina je položaj hidroksilnih grupa u B prstenu.

Stoga je prisustvo o-dihidroksil grupa u B prstenu povećalo aktivnost anti-tirozinaze. IC50 vrijednost festina bila je oko 1/20 vrijednosti kvercetina i jedina razlika između strukture kvercetina i festina je u tome što je festin odsustvo C-5 hidroksilne grupe u A prstenu. Hidroksilna grupa na poziciji C-5 također igra važnu ulogu u povećanju aktivnosti inhibicije tirozinaze, jer može kelirati Cu2 plus na aktivnom mjestu tirozinaze sa karbonilom na poziciji C-4 [50 ]. Kvercetin posjeduje slobodne hidroksilne grupe, ne samo na pozicijama C-3 i C-5 C prstena već i na C-30 poziciji B prstena. Dakle, kvercetin pokazuje mnogo snažniju inhibiciju tirozinaze u odnosu na druge flavonoide.

Flavonoidi ne samo da imaju obećavajuću aktivnost protiv tirozinaze, već imaju i snažno antioksidativno djelovanje. Kvercetin ima dodatnu C-5 hidroksilnu grupu; međutim, i kvercetin i fisetin su imali isti antioksidativni kapacitet, što sugerira da je C-5 hidroksilna grupa imala mali utjecaj na uklanjanje radikala. Miricetin posjeduje više hidroksilnih grupa u B prstenu, ali nije pokazao jače antioksidativno djelovanje od kvercetina ili fizetina. To može biti zato što miricetin može formirati jake intermolekularne vodikove veze i niže doniranje atoma vodika.

Slično, morin je pokazao niži antioksidativni kapacitet od kvercetina i festina zbog hidroksilne konfiguracije B prstena, što je ilustrovalo da je o-dihidroksil u B prstenu važan za povećanje kapaciteta uklanjanja radikala. Međutim, rutin i breviskapin su imali značajno niže antioksidativne kapacitete jer rutin ima glikozide na poziciji C-3 koji stvaraju sterične smetnje. Breviskapin ima jednu hidroksilnu grupu u B prstenu i ima manje slobodnih hidroksilnih grupa. Shodno tome, rezultati u ovom radu ukazuju da je hidroksilna konfiguracija B prstena bila značajna za antioksidativni kapacitet flavonoida, dok je A prsten imao mali uticaj na kapacitet uklanjanja radikala. Dodatno, blokiranje ili uklanjanje hidroksilne grupe na poziciji C-3 može smanjiti kapacitet uklanjanja radikala flavonoida.

Span60 i RH40 nisu sposobni za jonizaciju. Stoga se čini da naboji potiču iz interakcije između hidrofilnih grupa glave Span60 i RH40 formirajući vodonične veze [55], kada se nabijeni agregati formiraju između lipofilnog Span60 i hidrofilnog RH40.

Stoga, provodljivost može biti posljedica kombinacije Span60 i RH40. Provodljivost se u početku povećala, vjerovatno zato što dodavanje Span60, koji se povezuje sa RH40, formira nabijene miješane micele. Povećanje raspona60 također je povećalo broj nabijenih agregata i provodljivost se postepeno povećavala. Tačka preloma se dogodila pri omjeru mase 9:11. Iznenadna promjena sugerira da se mikrostruktura agregata može promijeniti i da se mogu formirati niosomi. Konduktivnost se kasnije malo smanjila i ostala relativno konstantna, što može ukazivati ​​na formiranje niosoma, jer su naboji bili zatvoreni. Još jedna tačka preloma dogodila se pri omjeru mase od 13:7 i provodljivost se naglo smanjila, međutim, veličina agregata se povećavala s povećanjem Span60, vjerovatno zbog gustih klastera većih multilamelarnih niosoma koji se formiraju i pojave bijelog taloga [56 ,57], što uzrokuje smanjenje slobodnih naelektrisanih agregata.

Spontani strukturni prijelaz agregata Span60-RH40 dodatno je potvrđen veličinom agregata u kombinaciji sa provodljivošću i viskozitetom. Kada je maseni udio RH40 bio dominantan, veličina agregata bila je relativno konstantna i mala. Sistem je imao viskozitet sličan vodi i mogu se formirati miješane micele. Sa povećanjem masenog udjela Span60, hidrofobnost sistema se povećala, a viskozitet i veličina agregata su se povećali. Povećanje raspona 60 može izazvati stvaranje niosoma. Međutim, s daljnjim povećanjem Span60, viskoznost i veličina su također naglo porasli zbog postojanja obilnih većih multilamelarnih niosoma, što je uzrokovalo stvaranje precipitata. Formiranje niosoma je također potvrđeno TEM (slika 3).

Kada je koncentracija Span60 bila niska, sistem Span60-RH40 imao je viskozitet sličan vodi, a veličina agregata je bila relativno mala, što ukazuje na formiranje miješanih micela. Od omjera mase od 9:11 do 13:7, viskoznost i zamućenost sistema su istovremeno porasli. Očigledna promjena viskoznosti može biti povezana s prijelazom micele u kruti i viskozni noisome, jer su surfaktanti čvrsto spakovani i formiraju se dvoslojevi; ovo zapažanje je u skladu sa literaturom [57,58]. Između masenih omjera 13:7 i 16:4, viskoznost se značajno povećala, vjerovatno zbog postojanja obilnih većih multilamelarnih niosoma koji uzrokuju stvaranje precipitata.

Zanimljivo je da su kvercetin-niosomi imali manje veličine od praznih niosoma, što je bilo prema ranije objavljenim studijama [43]. Ilustrovano je da ako se molekuli koji pokazuju dobar afinitet sa sastavnim surfaktantima niosoma ugrade unutar dvoslojeva, to bi izazvalo smanjenje veličine vezikula. Ovo zapažanje može biti posljedica efekta snažnog afiniteta za lijekove i niozome na držanje različitih lamela zajedno, čineći membranu čvršćom [14]. Apsolutna vrijednost zeta potencijala za kvercetin-liposome bila je niža od vrijednosti praznih liposoma (Tablica 3). To može biti posljedica interakcije kvercetina sa glavnom grupom surfaktanata koji neutraliziraju negativne naboje na površini niosoma. Ovo zapažanje je takođe ranije objavljeno; da lijekovi mogu smanjiti negativne površinske naboje [59].

Utvrdili smo da je kvercetin nerastvorljiv u vodi i fosfatnom puferu. U prethodnim studijama, da bi se održalo stanje upijanja slabo rastvorljivih lekova u medijumu za oslobađanje penetracije, često su se koristili korastvarači, uključujući alkohole i surfaktante [14], stoga je kao rastvor korišćen 0.6% Tween80 rastvor medij za oslobađanje penetracije kako bi se održalo stanje sudopera.

Međutim, s obzirom na efikasnost, za njegu kože i liječenje kožnih bolesti, efikasnije je i sigurnije zadržati komponente ili lijekove duboko u koži nego ući u krvotok. U našem istraživanju, iako kvercetin nije prodirao kroz dermis u medij, eksperimenti zadržavanja kože pokazali su da u poređenju sa slobodnim kvercetinom, niosomi poboljšavaju prodiranje kvercetina u epidermis.

Stoga, niosomi mogu biti obećavajući sistem za isporuku u kozmetičke svrhe i liječenje kožnih bolesti. Kvercetin je visoko topiv u liposolubilnosti i njegova niska rastvorljivost u vodi ograničila je njegov razvoj i primenu. Niosomi punjeni kvercetinom nisu samo poboljšali rastvorljivost u vodi već i transdermalnu apsorpciju kvercetina. Kvercetin-niozomi su imali 3-putostruko povećanje zadržavanja kože u odnosu na otopinu kvercetin-propandiola. Nakon dodavanja 1 posto propandiola, pojačivača penetracije, u originalnu formulaciju niosoma Span60-RH40, njegova transdermalna apsorpcija je poboljšana, uporediva sa onom kod kvercetin-transfersoma.

4. Materijali i metode

4.1. Materijali

Kvercetin, morin, festin, miricetin, rutin i breviscapin su kupljeni od DATIAN Biology Co (Shanxi, Kina), -arbutin od Beijing Brilliance Biochemical Co, Ltd (Peking, Kina) i 1,1-diphenyl{{ 3}}pikrilhidrazil (DPPH) iz Guangzhou Qiyun Bio-technology Co (Guangzhou, Kina). Natrijum dihidrogen fosfat, dinatrijum hidrogen fosfat, dimetil sulfoksid (DMSO) i apsolutni etil alkohol kupljeni su od DAMAO HEMIJSKIH REAGENSA FACTORY (Tianjin, Kina). Span60 je kupljen od Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co, Ltd (Tianjin, Kina), a Cremophor RH40 od ​​Guangzhou Jiefu Trading Co, Ltd (Guangzhou, Kina). Mužjaci Sprague-Dawley pacova (200 ± 20 g) korišteni su i isporučeni od Guangdong Animal Experiment Center (Guangzhou, Kina). Pacovi su držani pod standardnim uslovima temperature, vlažnosti i osvetljenja, sa standardnom ishranom za glodare i vodom. Istraživanje je odobrio Komitet za eksperimentalnu etiku životinja Guangdong Pharmaceutical University (NO. SPF2017120, Guangzhou, Kina).

4.2. In vitro aktivnost flavonoida inhibicije tirozinaze

Test inhibicije tirozinaze izveden je na osnovu prethodne studije sa malim modifikacijama [2]. Aktivnost inhibicije tirozinaze određena je spektrofotometrom praćenjem stvaranja dopahroma na 493 nm. Reakcioni sistem, kao što je prikazano u tabeli 7, sadržavao je 0.5 mL različitih koncentracija flavonoida, uključujući arbutin, kvercetin, morin, festin, rutin i breviscapin, i 0.5 mL tirozinaze (120 jedinica/mL u fosfatnom puferu, pH 6,8), koji su kombinovani sa 1,5 mL fosfatnog pufera (pH 6,8). Nakon inkubacije na 30 ◦C tokom 10 min, u sisteme je dodato 0,5 mL l-tirozina. Reakcioni sistemi su inkubirani na 30 ◦C 20 min i apsorbanca je određena na 493 nm. Arbutin je korišten kao pozitivna kontrola. Stepen inhibicije uzorka izražen je kao koncentracija inhibicije od 50 posto (IC50).

4.3. In vitro antioksidativna aktivnost flavonoida

Antioksidativna aktivnost flavonoida je mjerena brzinom izbjeljivanja DPPH, koju je objavio Blois [60]. U svom radikalnom obliku, DPPH apsorbira na talasnoj dužini od 515 nm, ali se njegova apsorpcija smanjuje nakon redukcije antioksidansom ili radikalnim spojem. Aktivnost uklanjanja radikala DPPH flavonoida procijenjena je prema metodi koju je opisao Rui Yang, uz neke modifikacije [61]. Ukratko, 5 mL DPPH (30 µg/mL) pomiješano je sa 0,1 mL apsolutnog etil alkohola i 0,1 mL uzoraka različitih koncentracija. Zatim je određena apsorpcija smjesa na 515 nm. Aktivnost uklanjanja radikala DPPH izračunata je na sljedeći način:

4.4. Formulacija niosoma

Na osnovu prethodnih istraživanja i objavljenih radova koji su pokazali da je Span60 uobičajen surfaktant koji se koristi za formiranje niosoma [15,27,31], dizajnirali smo sistem formulacije nejonskih surfaktanata koristeći Span60 i RH40 u različitim masenim omjerima. Ispitivani su provodljivost, viskozitet i veličina kao indeksi kako bi se odredio odgovarajući omjer nejonskih surfaktanata koji formiraju liposome.

Istraženi omjeri mase Span60 i RH40 bili su 4:16, 6:14, 8:12, 9:11, 10:10, 12:8, 13:7, 14:6 , 15:5 i 16:4 (ukupna težina: 2 g). Span60 je otopljen na 80 ◦C i zatim miješan sa RH40 miješalicom 2 min. Zatim su smjese hidratizirane sa 100 mL vode na 80 ◦C 10 min. Provodljivost (DDS-11A konduktometar, Shanghai Ridao Scientific Instruments Co., Ltd., Šangaj, Kina), viskozitet (Ubbelode viskozimetar, 0,4–0,5 mm, Shanghai Liangjing Glass Instrument Factory, Šangaj, Kina) i veličina (Nano-ZS90, Malvern, Malvern, UK) nejonskih surfaktantnih sistema mjereni su na sobnoj temperaturi.

4.5. Priprema i evaluacija niosoma napunjenih kvercetinom

4.5.1. Priprema niosoma napunjenih kvercetinom

Na osnovu TEM slike sistema Span{{0}}RH40 (Slika 3), Span60 i RH40 u masenom odnosu 9:11, izgleda da se formiraju sferni ili ovalni niosomi. Stoga su niosomi napunjeni kvercetinom pripremljeni sa masenim omjerom Span60/RH40 od ​​9:11 korištenjem aparata za magnetno miješanje. Span60 (0,9 g), RH40 (1,1 g) i kvercetin (30 mg) su istopljeni zajedno. Zatim je u smešu dodato 100 mL prečišćene vode na 80 ◦C i hidratizovano 10 min. Formirani su niosomi napunjeni kvercetinom i zatim ohlađeni na sobnu temperaturu. Bistri niosomi su dobijeni obradom homogenizacijom pod visokim pritiskom na 1500 bara.

4.5.2. Veličina, Zeta potencijal i morfologija niosoma napunjenih kvercetinom

Veličina i zeta potencijal praznih niosoma i niosoma napunjenih kvercetinom izmjereni su pomoću Malvern Zetasizer-a (ZS90 plus MPT-2, Malvern, Malvern, UK). Morfologija niosoma napunjenih kvercetinom okarakterisana je transmisijskom elektronskom mikroskopom. Uzorci kvercetin-niozoma su stavljeni na bakarnu rešetku i nakon 1 min, višak uzorka je uklonjen filter papirom. TEM je korišten za promatranje uzoraka nakon negativnog bojenja fosfovolframnom kiselinom.

4.5.3. Efikasnost hvatanja droga

Efikasnost hvatanja lijeka niosoma napunjenih kvercetinom određena je tehnikom centrifugiranja na mini koloni. Minikolona je pripremljena upotrebom hidratizirane disperzije Sephadex G50 u špric od 5 mL, koji je centrifugiran 30 s na 900 o/min. Alikvot niosoma napunjenih kvercetinom (400 µL) je uzet u minikolonu, a eluti su sakupljeni centrifugiranjem na 1500 rpm tokom 3 min. Eluti su razrijeđeni do 10 mL metanolom i vorteksirani, a 10 µL filtriranih uzoraka je ubrizgano u tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC). Zatim je slobodni kvercetin eluiran centrifugiranjem sa 25 mL 80% metanola, a sadržaj kvercetina je određen HPLC.

4.6. Rastvorljivost u vodi i ravnotežna rastvorljivost kvercetina

Rastvorljivost kvercetina u vodi je mjerena sa 15 mL prečišćene vode, fosfatnih pufera različitih pH vrijednosti (pH 5.0, 6.0, 6.8, 7.4, 8.0) i višak kvercetina i stavljen u bočice. Bočice su mućkane 24 h u vodenom kupatilu na 37 ◦C i supernatant je određen HPLC-om nakon centrifugiranja.

Ravnotežna rastvorljivost kvercetina izvedena je korišćenjem sistema n-oktanol-voda sa omjerima n-oktanol/voda od 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1: 7 i 1:8. Zatim je pripremljeno 70 µg/mL rastvora kvercetina vodom zasićenim rastvorom n-oktanola i uzeto je 1 mL rastvora kvercetina od 70 µg/mL u osam bočica, a zatim 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL , 6 mL, 7 mL i 8 mL prečišćene vode dodano je u odgovarajuće bočice.

Proučavana je i ravnotežna rastvorljivost kvercetina u n-oktanol-pufer sistemima pri različitim pH vrednostima. Odnos n-oktanol-pufera izabran je na 1:2 na osnovu rezultata ravnotežne rastvorljivosti kvercetina u sistemu n-oktanol-voda. 2 mL zapremine od 70 µg/mL rastvora kvercetina i 4 mL rastvora fosfatnog pufera zasićenog n-oktanolom na različitim pH vrednostima dodato je u bočice i bočice su mućkane 24 h na 37 ◦C vodeno kupatilo. Zatim je uzeto 0,2 mL rastvora kvercetina u sloju n-oktanola i razblaženo do 5 mL (oko 2,8 µg/mL) upotrebom mobilne faze (metanol-1 procenat fosforne kiseline=60:40). Uzorci su određeni HPLC. Standardna otopina kvercetin n-oktanola (70 µg/mL) je razrijeđena i određena kao što je gore opisano.

4.7. Fotostabilnost kvercetin-niosoma

Rastvor kvercetin metanola (300 µg/mL) je dodan u prozirne bočice i stavljen na sunčevu svjetlost. Zatim je sadržaj kvercetina određen HPLC u 0, 12, 24, 36, 48, 60 i 72 h. Kvercetin-niosomi su raspoređeni u prozirne bočice i smešteni u komoru za ispitivanje stabilnosti svetlosti (PTOP-500B, Zhejiang TOP Instrument Co., Ltd., Zhejiang, Kina) sa osvetljenošću od 4500 ± 500 LX tokom 10 dana. Uzorak od 0,2 g kvercetin-liposoma je uzet 0, 5. i 10. dana i rastvoren u 10 mL etanola. Uzorci su određeni HPLC-om nakon centrifugiranja i filtracije sa Millipore filter membranom od 0,22 µm. Fotostabilnost je procijenjena procentom preostalog kvercetina u različitim vremenima zračenja, u poređenju sa neeksponiranim uzorcima.

4.8. In vitro studija oslobađanja

4.8.1. Rastvorljivost kvercetina u različitom mediju za oslobađanje

Rastvorljivost kvercetina je ispitivana u različitim medijima za oslobađanje, uključujući {{0}}.1 posto, 0.2 posto, 0.3 posto, 0.4 procenat , {{10}}.6 procenata i 0.8 procenata Tween80 vodeni rastvor, kao i 0.2 procenta, 0.4 procenta i 0,6 posto SDS vodeni rastvor. Vodeni rastvor od 15 mL Tween80 i SDS u različitim koncentracijama i višak kvercetina stavljen je u svaku od bočica. Bočice su mućkane u vodenom kupatilu na 32 ◦C 24 h. Nakon 24 h, 5 mL suspenzije je centrifugirano na 3000 RMP tokom 15 minuta i 0,2 mL supernatanta je razrijeđeno do 2 mL i određeno pomoću HPLC.

4.8.2. Oslobađanje lijeka dijalizom

Studija rastvorljivosti kvercetina predstavljena u Tabeli 5 ilustrovala je da 0.8 posto Tween80 (pH 5.0) vodeni rastvor ispunjava uslove za ponor i odgovara pH vrijednosti ljudske kože. Stoga je ponašanje oslobađanja slobodnog kvercetina i kvercetin-liposoma ispitano u 0,8 posto Tween80 (pH 5,0) vodenoj otopini.

Vrećica za dijalizat (8000–14,000 molekulske težine cutting) je obrađena sa 2 posto NaHCO3 i 1 mmol/mL EDTA otopine. 10 mL (300 µg/mL) kvercetin-niozoma i otopina kvercetin-propandiola dodano je u vrećice za dijalizat i stavljeno u posude za rastvaranje koje sadrže 1000 mL 0,8 posto Tween80 (pH 5,0) vodenog rastvora na 32 ◦. Posude za otapanje stavljene su na magnetnu mješalicu pri brzini od 100 o/min. Medijum za oslobađanje (2 mL) je povučen u 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 24 h i zamenjen je praznim medijumom za oslobađanje (2 mL). Povučeno 2 mL medija za oslobađanje je centrifugirano na 3000 r/min 15 minuta i filtrirano. Oslobođeni kvercetin je kvantifikovan pomoću HPLC.

4.9. Ex vivo studije prodiranja lijekova i retencije u koži

Pacovi su žrtvovani cervikalnim iščašenjem, dlake na trbuhu su obrijane, a zatim je koža trbuha odvojena i stavljena u fiziološki rastvor. Nakon toga, potkožno tkivo (mišić, masnoća i vaskulum) je uklonjeno hirurškim makazama i hemostatskim pincetama, a zatim pohranjeno na 4 ◦C sa fiziološkim rastvorom za dalja ispitivanja.

Studije permeacije i retencije lijeka u koži kvercetin-niosoma, kvercetiniosoma-1 posto propandiola, kvercetin-transfersoma (sastavljenih od fosfolipida i Tween80 u masenom omjeru 9:11) i slobodnog kvercetina -propandiol otopine su provedene kako bi se ispitala njihova transdermalna isporuka pomoću TK-20B transdermalnog difuzionog uređaja sa efektivnom površinom difuzije od 2,99 cm2. Zatim je kao medij za oslobađanje penetracije odabrano rješenje 0.6 posto Tween80. Tkivo kože je postavljeno između difuzijske ćelije i ćelije receptora, a 0.4 mL preparata kvercetina (ekvivalentno 120 µg kvercetina) je naneseno na kožu. Medij za penetraciju (0,5 mL) je povučen iz receptorske ćelije na 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 24 h uz zamjenu svježeg penetracionog medija (0,5 mL). Medij za penetraciju povučen u različitim vremenskim tačkama razrijeđen je do 7 mL sa metanolom i određen HPLC nakon centrifugiranja i filtracije.

Nakon eksperimenta permeacije, proveden je eksperiment sa zadržavanjem lijeka u koži. Nakon 24 h, kožna tkiva su izolirana, zatim potpuno izrezana u 7 mL metanola nakon ispiranja kvercetina s površine destilovanom vodom i ekstrahirana 40 min ultrazvučno. Zatim su uzorci vorteksirani i centrifugirani, a supernatant je analiziran pomoću HPLC nakon filtracije kroz 0,22 µm Millipore filter membranu.

4.10. HPLC metoda

Analitička kolona je bila Dimark C18 (150 mm × 4,6, 5 µm). Mobilna faza se sastojala od metanola i 1 posto H3PO4 (60:40, v/v). Brzina protoka je postavljena na 1 mL/min na 30 ◦C i volumen injekcije od 10 µL. Pik kvercetina je detektovan na 363 nm.

4.11. Statistička analiza

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost eksperimenata ± standardna devijacija (SD) i analizirani su korištenjem jednosmjerne analize varijanse (ANOVA), nakon čega je uslijedilo Tukeyjevo višestruko poređenje nakon testa. Statističke razlike koje daju P < 0.05 smatraju se statistički značajnim.

5. Zaključci

Provjerili smo kvercetin, prirodni flavonoid koji posjeduje moćne izbjeljujuće i antioksidativne kapacitete, i formulisali liposome koristeći nejonski surfaktantni sistem kako bismo poboljšali rastvorljivost, fotostabilnost i sposobnost prodiranja u kožu.

Doprinosi autora:

Konceptualizacija, WC i XL; metodologija, WC; softver, YH; validacija, BL, YH i ZC; formalna analiza, BL; istraga, JY; resursi, HX; kuriranje podataka, BL; pisanje—priprema originalnog nacrta, BL; pisanje—pregled i uređivanje, XL; vizualizacija, WC; nadzor, XL; nabavka sredstava, XL

finansiranje:

Ovo istraživanje nije dobilo vanjsko finansiranje.

Sukobi interesa:

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

1. Chhikara, N.; Kaur, R.; Jaglan, S.; Sharma, R.; Gat, Y.; Panghal, A. Bioaktivna jedinjenja i farmakološke i prehrambene primene Syzygium cumini—pregled. Funkcija hrane. 2018, 9, 6096. [CrossRef] [PubMed]

2. Carol López de Dicastillo Carol López Bustos, F.; Valenzuela, X.; López-Carballo, G.; Vilariño, JM; Galotto, MJ Čileanska bobica, Ugni molinae, Turcz. Ekstrakt voća i lišća sa zanimljivim antioksidativnim, antimikrobnim i inhibitornim svojstvima tirozinaze. Food Res. Int. 2017, 102, 119–128.

3. Chiari, ME; Vera, DM; Palacios, SM; Carpinella, MC Inhibicijska aktivnost tirozinaze 6-izoprenoid supstituiranog flavanona izoliranog iz Dalea elegans. Bioorg. Med. Chem. 2011, 19, 3474–3482. [CrossRef] [PubMed]

4. Sirat, HM; Rezali, MF; Ujang, Z. Izolacija i identifikacija uklanjanja radikala i inhibicije tirozinaze polifenola iz Tibouchina semidecandra. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 10404–10409. [CrossRef] [PubMed]

5. Xiong, Z.; Liu, W.; Zhou, L.; Chen, J. Polifenol oksidaza gljive (Agaricus bisporus) inhibirana apigeninom: Multispektroskopske analize i računarska simulacija pristajanja. Food Chem. 2016, 203, 430–439. [CrossRef] [PubMed]

6. Yan-Zhen, Z.; Da-Fu, C.; Geng, D.; Guo, R. The Substituent Effect on the Radical Scavenging Activity of Apigenin. Molecules 2018, 23, 1989.

7. Handjani-Vila, RM; Ribier, A.; Rondot, B.; Vanlerberghie, B. Disperzije lamelnih faza nejonskih lipida u kozmetičkim proizvodima. Int. J. Cosmet. Sci. 1979, 1, 303–314. [CrossRef] [PubMed]

8. Yoshida, H.; Lehr, CM; Kok, W.; Junginger, HM; Verhoef, JC; Bouwstra, JA Niosomi za oralnu isporuku peptidnih lijekova. J. Control. Izdanje 1992, 21, 145–153. [CrossRef]

9. Uchegbu, IF; Double, JA; Kelland, LR; Turton, JA; Florence, AT Aktivnost niosoma doksorubicina protiv ćelijske linije raka jajnika i tri in vivo modela tumora miševa. J. Drug Target. 1996, 3, 399–409. [CrossRef]

10. Alsarra, IA; Bosela, AA; Ahmed, SM; Mahrous, GM Proniosomes kao nosač lijeka za transdermalnu dostavu ketorolaka. EUR. J. Pharm. Biopharm. 2005, 59, 485–490. [CrossRef]

11. Hong, M.; Zhu, S.; Jiang, Y.; Tang, G.; Pei, Y. Efikasno ciljanje tumora hidroksi kamptotecinom napunjenih PEGiliranih lipozoma modificiranih transferinom. J. Control. Izdanje 2009, 133, 96–102. [CrossRef] [PubMed]

12. Tavano, L.; Muzzalupo, R.; Picci, N.; de Cindio, B. Ko-kapsulacija antioksidansa u lipozomske nosače: Studije oslobađanja u gastrointestinalnom traktu za nutraceutske primjene. Colloid Surf. B Biointerface 2014, 114, 82–88. [CrossRef] [PubMed]

13. Sohrabi, S.; Haeri, A.; Mahboubi, A.; Mortazavi, A.; Dadashzadeh, S. Niozomi moksifloksacina ugrađeni u gel u hitozanu: efikasan antimikrobni hibridni sistem za infekciju opekotina. Int. J. Biol. Macromol. 2016, 85, 625–633. [CrossRef] [PubMed]

14. Kumar, N.; Goindi, S. Statistički dizajnirane nejonske surfaktantne vezikule za dermalnu isporuku itrakonazola: Karakterizacija i in vivo evaluacija korištenjem standardiziranog modela infekcije Tinea pedis. Int. J. Pharm. 2014, 472, 224–240. [CrossRef] [PubMed]

15. Cerqueira-Coutinho, C.; Dos Santos, EP; Mansur, CR Niosomi kao sistemi za nano-isporuku u farmaceutskoj oblasti. Crit. Rev. Ther. Drug Carr. Syst. 2016, 33, 195. [CrossRef]

16. Yeh, MI; Huang, HC; Liaw, JH; Huang, MC; Huang, KF; Hsu, FL Dermalna isporuka niosomima ekstrakta crnog čaja kao sredstva za zaštitu od sunca. Int. J. Dermatol. 2013, 52, 239–245. [CrossRef] [PubMed]

17. Manconi, M.; Sinico, C.; Valenti, D.; Loy, G.; Fadda, AM Niozomi kao nosači za tretinoin. I. Priprema i svojstva. Int. J. Pharm. 2002, 234, 237–248. [CrossRef] 18. Manconi, M.; Valenti, D.; Sinico, C.; Lai, F.; Loy, G.; Fadda, AM Niozomi kao nosači za tretinoin: II. Utjecaj vezikularne inkorporacije na fotostabilnost tretinoina. Int. J. Pharm. 2003, 260, 261–272. [CrossRef]

19. Kunitake, T.; Takahata, Y. Sintetička dvoslojna membrana. J. Am. Chem. Soc. 1977, 99, 3860–3861. [CrossRef]

20. Brady, JE; Evans, DF; Kachar, B.; Ninham, BM Spontane vezikule. J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4279–4280. [CrossRef]

21. Kaler, E.; Murthy, A.; Rodriguez, B.; Zasadzinski, J. Spontano formiranje vezikula u vodenim mješavinama jednostranih surfaktanata. Science 1989, 245, 1371–1374. [CrossRef] [PubMed]

22. Kaler, EW; Herrington, KL; Murthy, AK; Zasadzinski, JAN Fazno ponašanje i strukture mješavina anjonskih i katjonskih tenzida. J. Phys. Chem. 1992, 96, 6698–6707. [CrossRef]

23. Uchegbu, IF; Vyas, SP vezikule (niozomi) na bazi nejonskog surfaktanta u isporuci lijekova. Int. J. Pharm. 1998, 172, 33–70. [CrossRef]

24. Mahale, NB; Thakkar, PD; Mali, RG; Walunj, DR; Chaudhari, SR Niosomes: Novi nejonski stabilni vezikularni sistemi sa produženim oslobađanjem – pregled. Adv. Colloid Interface Sci. 2012, 183–184, 46–54. [CrossRef] [PubMed]

25. Udupa, N.; Chandraprakash, KS; Umadevi, P.; Pillai, GK Formulacija i evaluacija metotreksatnih niosoma. Drug Dev. Commun. 1993, 19, 12. [CrossRef]

26. Uchegbu, IF; Florence, AT Nejonske surfaktantne vezikule (niozomi): fizička i farmaceutska hemija. Adv. Colloid Interface Sci. 1995, 58, 1–55. [CrossRef]

27. Yoshioka, T.; Sternberg, B.; Florence, AT Priprema i svojstva vezikula (niozoma) sorbitan monoestera (Span 20, 40, 60 i 80) i sorbitan triestra (Span 85). Int. J. Pharm. 1994, 105, 1–6. [CrossRef]

28. Manosroi, A.; Wongtrakul, P.; Manosroi, J.; Sakai, H.; Sugawara, F.; Yuasa, M.; Abe, M. Karakterizacija vezikula pripremljenih s različitim nejonskim surfaktantima pomiješanim s kolesterolom. Colloid Surf. B Biointerface 2003, 30, 129–138. [CrossRef]

29. Alsarra, IA Evaluacija proteasoma kao alternativne strategije za optimizaciju transdermalne isporuke piroksikama. J. Microencapsul. 2009, 26, 272–278. [CrossRef]

30. Sharma, S.; Das, A.; Dasgupta, A.; Lee, WM; Kim, JO; Oh, DH; Kim, DD; Kim, JS; Yoo, BY; Choi, HG; et al. Formulacija i in vitro procjena minoksidil niosoma za poboljšanu isporuku kože. Int. J. Pharm. 2009, 377, 1–8.

31. Junyaprasert, VB; Singh, P.; Suksiriworapong, J.; Chantasart, D. Fizičko-hemijska svojstva i propusnost kože Span 60/Tween 60 niosoma elaginske kiseline. Int. J. Pharm. 2012, 423, 303. [CrossRef] [PubMed]

32. Manosroi, A.; Khanrin, P.; Lohcharoenkal, W.; Götz, F.; Manosroi, W.; Manosroi, J. Transdermalno poboljšanje apsorpcije kroz kožu pacova galidermina napunjenog liposomima. Int. J. Pharm. 2010, 392, 304–310. [CrossRef] [PubMed]

33. Auda, SH; Fathalla, D.; Fetih, G.; El-Badry, M.; Shakeel, F. Niosomi kao transdermalni sistem za isporuku lijeka za celekoksib: In vitro i in vivo studije. Polym. Bik. 2016, 73, 1229–1245. [CrossRef]

34. Manosroi, A.; Jantrawut, P.; Manosroi, J. Protuupalna aktivnost gela koji sadrži nove elastične niozome zarobljene diklofenak dietil amonijumom. Int. J. Pharm. 2008, 360, 156–163. [CrossRef] [PubMed]

35. Shahiwala, A.; Misra, A. Studije o lokalnoj primjeni normalno zarobljenog nimesulida. J. Pharm. Pharm. Sci. 2002, 5, 220–225. [PubMed]

36. Pardakhty, A.; Varshosaz, J.; Rouholamini, A. In vitro studija polioksietilen alkil eter niosoma za isporuku inzulina. Int. J. Pharm. 2007, 328, 130–141. [CrossRef] 37. Abdelbary, G.; El-Gendy, N. Niosome-Encapsulated Gentamicin for ofthalmic Controlled Delivery. Aaps Pharmscitech 2008, 9, 740–747. [CrossRef] [PubMed]

38. Wadda Abbad, S.; Yu, F.; Munyendo, WLL; Wang, J.; Lv, H.; Zhou, J. Formulacija, karakterizacija i farmakokinetika niosoma Morin hidrata pripremljenih od različitih nejonskih surfaktanata. Int. J. Pharm. 2013, 456, 446–458. [CrossRef]

39. Mishra, J.; Swain, J.; Mishra, AK Ispitivanje temperaturno zavisnih promjena međufazne hidratacije i viskoziteta Tween20: holesterol (1:1) niozomska membrana koristeći Fisetin kao fluorescentnu molekularnu sondu. Phys. Chem. Chem. Phys. 2018, 20, 13279–13289. [CrossRef]

40. Procházková, D.; Boušová, I.; Wilhelmová, N. Antioksidativna i prooksidativna svojstva flavonoida. Fitoterapia 2011, 82, 513–523. [CrossRef]

41. Cherrak, SA; Mokhtari-Soulimane, N.; Berroukeche, F.; Bensenane, B.; Cherbonnel, A.; Merzouk, H.; Elhabiri, M. In vitro Antioksidans protiv metalnih jona kelirajuća svojstva flavonoida: Istraživanje strukture i aktivnosti. PLoS ONE 2016, 11, e0165575. [CrossRef] [PubMed]

42. Amic, D.; Davidović-Amić, D.; Beslo, D.; Rastija, V.; Lučić, B.; Trinajstić, N. SAR i QSAR antioksidativnog djelovanja flavonoida. Curr. Med. Chem. 2007, 14, 827–845. [CrossRef] [PubMed]

43. Machado, ND; Fernando, SO; De Rossi, RH; Fernandez, MA Ciklodekstrin je modificirao niozome da inkapsuliraju hidrofilna jedinjenja. RSC Adv. 2018, 8, 29909–29916. [CrossRef]

44. Imran, M.; Shah, MR; Ullah, F.; Ullah, S.; Elhissi, AMA; Nawaz, W.; Ahmad, F.; Sadiq, A.; Ali, I. Liposomalni nanonosač na bazi glikozida za poboljšane in vivo performanse Cefixime-a. Int. J. Pharm. 2016, 505, 122–132. [CrossRef] [PubMed]

45. Hao, Y.; Zhao, F.; Li, N.; Yang, Y.; Li, K. Studije o visokoj inkapsulaciji kolhicina u sistemu buke. Int. J. Pharm. 2002, 244, 73–80. [CrossRef]

46. ​​Anandam, S.; Selvamuthukumar, S. Izrada ciklodekstrinskih nanospužva za isporuku kvercetina: fizičko-hemijska karakterizacija, fotostabilnost i antioksidativni efekti. J. Mater. Sci. 2014, 49, 8140–8153. [CrossRef]

47. Lv, X.; Liu, T.; Ma, H.; Tian, ​​Y.; Li, L.; Li, Z.; Gao, M.; Zhang, J.; Tang, Z. Priprema mikroemulzija na bazi esencijalnog ulja za poboljšanje rastvorljivosti, pH stabilnosti, fotostabilnosti i propusnosti kvercetina kroz kožu. AAPS PharmSciTech 2017, 18, 3097–3104. [CrossRef]

48. Azzi, J.; Jraij, A.; Auezova, L.; Fourmentin, S.; Greige-Gerges, H. Nova otkrića za inkapsulaciju i očuvanje kvercetina sa ciklodekstrinima, liposomima i lijek-u-ciklodekstrin-u-liposomima. Food HydroColloid 2018, 81, 328–340. [CrossRef]

49. Smith, GJ; Thomsen, SJ; Markham, KR; Andary, C.; Cardon, D. Fotostabilnost prirodnih 5-hidroksi flavona, flavonola, njihovih glikozida i njihovih aluminijskih kompleksa. J. Photochem. Photobiol. A Chem. 2000, 136, 87–91. [CrossRef]

50. Kubo, I.; Kinsthori, I. Flavonoli iz cvijeta šafrana: inhibitorna aktivnost tirozinaze i mehanizam inhibicije. J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4121–4125. [CrossRef]

52. Kim, YJ; Uyama, H. Inhibitori tirozinaze iz prirodnih i sintetičkih izvora: struktura, mehanizam inhibicije i perspektiva za budućnost. Cell. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef] [PubMed]

52. Kim, D.; Park, J.; Kim, J.; Han, C.; Yoon, J.; Kim, N.; Seo, J.; Lee, C. Flavonoidi kao inhibitori tirozinaze gljiva: studija o gašenju fluorescencije. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 935–941. [CrossRef] [PubMed]

53. Fan, M.; Zhang, G.; Hu, X.; Xu, X.; Gong, D. Kvercetin kao inhibitor tirozinaze: Inhibitorna aktivnost, konformaciona promena i mehanizam. Food Res. Int. 2017, 100, 226–233. [CrossRef] [PubMed]

54. Didem ¸Söhreto ˘glu Suat, S.; Burak, B.; Özel, A. Inhibicija tirozinaze nekim flavonoidima: Inhibicijska aktivnost, mehanizam in vitro i siliko studija. Bioorg. Chem. 2018, 81, 168–174. [CrossRef] [PubMed]

55. Gopinath, D.; Ravi, D.; Karwa, R.; Rao, B.; Shashank, A.; Rambhau, D. Farmakokinetika Zidovudina nakon intravenske bolusne primjene novog Niosome preparata bez holesterola. Arzneimittelforschung 2011, 51, 924–930. [CrossRef] [PubMed]

56. Ghosh, S.; Ghatak, C.; Banerjee, C.; Mandal, S.; Kuchlyan, J.; Sarkar, N. Spontana tranzicija micele-vezikule-micele u mješavini kationskog surfaktanta i jonske tekućine slične anionskom surfaktantu: čisti nelipidni mali jednoslojni vezikularni predložak koji se koristi za studiju otapala i rotacijske relaksacije. Langmuir 2013, 29, 10066–10076. [CrossRef]

57. Sakai, T.; Ikoshi, R.; Toshida, N.; Kagaya, M. Termodinamički stabilno formiranje vezikula i tranzicija vezikula-micela jednostranog anionskog surfaktanta u vodi. J. Phys. Chem. B 2013, 117, 5081. [CrossRef]

58. Ghosh, S.; Mondal, S.; Pan, A.; Mitra, RK; Ghosh, S. tranzicija kationskog gemini surfaktanta posredovana ionskom tekućinom od micele u vezikulu: spektroskopsko istraživanje. Meka materija 2018, 14, 4185–4193.

59. Mukherjee, B.; Patra, B.; Layek, B.; Mukherjee, A. Uzdržano oslobađanje aciklovira iz nano-liposoma i nano-liposoma: In vitro studija. Int. J. Nanomed. 2007, 2, 213–225.

60. Blois, MS Određivanje antioksidansa upotrebom stabilnog slobodnog radikala. Nature 1958, 181, 1199–1200. [CrossRef]

61. Rui, Y.; Ying, G.; Weixin, W.; Chen, H.; On, Z.; Jia, A.-Q. Antioksidativni kapacitet fenola u cvjetovima Camellia nitidissima Chi i njihova identifikacija pomoću HPLC Triple TOF MS/MS. PLOS ONE 2018, 13, e0195508.

Dostupnost uzorka:

Uzorci jedinjenja nisu dostupni od autora.

© 2019 autora. Imalac licence MDPI, Basel, Švicarska. Ovaj članak je članak otvorenog pristupa koji se distribuira pod uslovima i odredbama licence Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Primljeno: 2. aprila 2019.; Prihvaćeno: 21. juna 2019.; Objavljeno: 24. juna 2019

For more information:1950477648nn@gmail.com