Neuroprotective Effects Of Four Phenylethanoid Glycosides On H2O2-Induced Apoptosis On PC12 Cells Via The Nrf2/ARE Pathway
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao i Baiyi Lu 1,*
1. Uvod
Oksidativni stres, koji je neravnoteža antioksidativne homeostaze, izaziva peroksidaciju lipida, povredu proteina i DNK, starenje ćelija i smrt ćelija. Ovaj proces najvjerovanije doprinosi nekoliko neurodegenerativnih poremećaja, kao što su Alchajmerova bolest (AD), Parkinsonova bolest (PD), i ishemija/reperfuzija [1]. Poznato je da vodikov peroksid (H2O2), koji je jedna od glavnih reaktivnih vrsta kisika (ROS), uzrokuje peroksidaciju lipida i oštećenje DNK [2]. Štaviše, H2O2 je endogeni izvor hidroksil slobodnih radikala koji doprinosi pozadinskom nivou ćelijskog oksidativnog stresa [3,4]. Stoga, terapijska strategija za sprečavanje oksidativne apoptoze izazvane stresom može imati potencijal u neurodegenerativnim bolestima liječenje.
Nuklearni faktor erithroid 2-vezani faktor 2 (Nrf2), je transkripcioni faktor koji je snažno povezan sa oksidativnim stresom. Aktivacija Nrf2 inducira transkripciju brojnih antioksidativnih i detoksikacionih gena, uključujući heme oksigenazu-1 (HO-1), NAD(P)H kinonske oksidoreduktaze 1, anti-upalne [13], i imunomodulatorne [14] bioaktivnosti. Osmanthusfragrans je čest sastojak u nekoliko azijskih jela i dugo je konzumiran. Ranije smo pokazali da O.fragrans cvijet izdvaja pojačano prostorno učenje i pamćenje, inhibira oksidativna oštećenja, i izlaže neuroprotektivne aktivnosti u starenju izazvanom d-galaktozom u ICR modelu miša [15]. Salidroside, akteoside i izoakteoside su glavni phG odgovor za antioksidativne aktivnosti O.fragrans cvijeće ekstrakti [16].
Studije o neuroprotektivnom efektu phG-ova su došle do poželjnih rezultata. Salidroside je značajno smanjila apoptozu ćelija PC12 koje su bile izložene u MPP+ [17,18]. Acteoside je također ublažio apoptozu izazvanu MPP+i oksidativni stres u PC12 ćelijama [19] i A p25-35-induciranoj SH-SY5Y ozljedi ćelija [20]. Echinacoside je istražen na tumor nekrozi faktor-a (TNFa)-inducirana apoptoza u SH-SY5Y ćelijama [21], Dopaminergička toksičnost izazvana MPTP-om u miševe [22], primarne kulture kortikalnih ćelija oštećenih glutamatom [23], i oštećenja izazvana 6-OHDA u PC12 ćelijama [24]. Rezultati su ukazali da phG-i pokazuju cistoprotektivni efekat i da su potencijalni agensi za liječenje neurodegenerativnih bolesti. Studije su pokazale antioksidativna svojstva phG-ova podložu mnogim drugim bio-aktivnostima za ove spoje [25]. Međutim, malo je studija istražilo molekularni mehanizam phG-ova protiv oksidativne toksičnosti.
U našoj studiji odabrali smo četiri tipična PhG-a na način kako slijedi: salidroside (fenilethanoid monosaharidi), akteoside (fenilethanoidni disaharidi), izoakteoside (fenilethanoidni disaharidi), i ehinakoside (fenilethanoid trisaharidi). Koristili smo model neuronske smrti koristeći različite PC12 ćelije [26] za istraživanje zaštitnog efekta i molekularnog mehanizma phG-ova na modelu pc12 izazvanih H2O2. Demonstrirali smo da su PhG-i aktivirali Nrf2/ARE put vezujući se za protein 1 povezan s Kelchom (Keap1). Ovaj proces upregulirao je antioksidantne enzime i povećao otpor PC12 ćelija na oksidativni stres.
Liječenje neurodegenerativnih poremećaja:PhGs iz cistanche
2. Rezultati
2.1. PhGs Suppressed H2O2-Induced Cytotoxicity in PC12 Cells
Testirani su cytotoxic efekti H2O2 i PhGs (0,1,1,5, i 10 卩g/mL) na PC12 ćelije. Rezultati su pokazali da je H2O2 inducirao gubitak održivosti PC12 ćelija u manirama ovisnim o koncentracijama i vremenu (na 1A. Izlaganje PC12 ćelija na 200 H2O2 za 2 h rezultiralo je održivošću ćelija od 57,4%. Pretreatment ćelija sa PhG-om na 0,1,1, 5, i 10 昭/mL nije imao uticaja na održivost ćelija (1B) i označeno zaštićene PC12 ćelije od oštećenja izazvanih H2O2 poboljšanjem održivosti ćelija kao 9,549-22,141%, 12.092-25.289%, 1.470-9.289%, odnosno 3.411-11.441%(1C). Međutim, salidroside (0,1 ^g/mL), izoakteoside (0,1, 1, 5, i 10 ^g/mL), echinacoside (0,1,1, i 5 ^g/mL) predtreatment nije pokazao značajnu razliku na ozljedama ćelija izazvanih HzOz-om. Pretreatment ćelija sa phG-ovima također je ameliorirao morfološku karakteristiku koju je inducirao H2O2 (1D.
Figura 1.PhGs je potisnuo H2O2-induciranu cistotoksičnost u PC12 ćelijama. Održivost ćelija je otkrivena od strane MTT-a. Cytotoxic effect of H2O2 (A) and PhGs (B) at different concentrations on PC12 cells. (C) PhGs attenuated H2O2-induced snižavanje održivosti ćelija. PC12 ćelije su inkubovane sa PhGs (0,1, i 10 mg/mL) za 24 h, a zatim inkubiran sa 200 pM H2O2 za još 2 h nakon što su phGs uklonjeni. (D) Morfološko promatranje. Ćelije nakon liječenja su opažene faznim kontrastnim mikroskopom (x100), CK: normalna grupa, H2O2: H2O2 tretirana grupa, HL: salidroside niska doza tretirana grupa, HH: salidroside visoka doza tretirana grupa, ML: acteoside niska doza tretirana grupa, MH: acteoside visoka doza tretirana grupa, IL: izoakteoside niska doza tretirana grupa, IH: izoakteoside visoka doza tretirana grupa, SL: ehinakozid niska doza tretirana grupa, SH: echinacoside visoka doza tretirana grupa. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">
2.2. PhGs Suppressed H2O2-Induced Intracellular Accumulation of ROS, Lipid Peroxidation (MDA), and Increased Superoxide Dismutase (SOD) Activities in PC12 Cells
Izloženost PC12 ćelija na 200 pM H2O2 za 2 h povećala je NIVO ROS- a, sadržaj MDA i snižila aktivnost SOD-a (na 2. PhGs pretreatment attenuated ROS nivo, salidroside, i akteoside, a visoka doza izoakteoside i echinacoside pretreatment značajno utemeljenje ROS nivo (p< 0.01).="" salidroside="" pretreatment="" showed="" no="" effect="" on="" mda="" content,="" but="" acteoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" (p="">< 0.05).="" isoacteoside="" and="" echinacoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" to="" a="">
Na 2.PhGs je blokirao ROS i MDA akumulaciju i povećao aktivnosti SOD-a u PC12 ćelijama. PC12 ćelije su inkubovane sa PhGs (0,1, i 10 h/mL) za 24 h, a zatim inkubiran sa 200 |^M H2O2 za još 2 h nakon što su phG-i uklonjeni. (A) PhGs blokirao ROS i MDA akumulaciju. (B) PhGs blokirali MDA akumulaciju. (C) PhGs je povećao aktivnosti SOD-a. CK: normalna grupa, Model: H2O2 tretirana grupa, Salidroside: salidroside tretirana grupa, Acteoside: acteoside tretirana grupa, Isoacteoside: izoacteoside tretirana grupa, Echinacoside: echinacoside tretirana grupa. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group,="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">
2.3.PhGs Reversed H2O2-Induced Apoptosis in PC12 Cells
Liječenje H2O2 (200 |1M) za 2 h značajno je povećalo apoptozu u PC12 ćelijama, sa ukupnom apoptotikom do 16,02% (na 3. Međutim, pretreatacija phG-om (0,1 i 10 卩g/mL) za 24 h je umanjila stopu apoptoze na način zavisan od koncentracije (p< 0.01).="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside,="" and="" echinacoside="" markedly="" decreased="" the="" percentage="" of="" cell="" apoptosis="" by="" 4.750-6.627%,="" 4.413-5.800%,="" 6.593-10.047%,="" and="" 1.530-7.510%,="">
Na 3.. PhGs je preokrenuo apoptozu izazvanu H2O2 u PC12 ćelijama. PC12 ćelije su inkubovane sa PhGs (0,1, i 10 卩g/mL) za 24 h, a zatim inkubiran sa 200 pM H2O2 za još 2 h nakon što su phG-i uklonjeni. Zatim je apoptoza mjerena protoknom cistometrijom pomoću PI/FITC fluorescentne sonde. CK: normalna grupa, Model: H2O2 tretirana grupa, Salidroside: salidroside tretirana grupa, Acteoside: acteoside tretirana grupa, Isoacteoside: izoacteoside tretirana grupa, Echinacoside: echinacoside tretirana grupa. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">
2.4. PhGs Reversed H2O2-Induced Downregulation of Protein Expression of HO-1, NQO1, GCLC, and GCLM
HO-1, NQO1 i glutamat-cistein ligaza (GCL) su važni ćelijski antioksidantni enzimi, a HO-1, NQO1, a katalitičke ili modificirane podjenice GCL (GCLC ili GCLM) su Nrf2 regulirani nizvodni geni [27]. Proteinska ekspresija HO-1, NQO1, GCLC, i GCLM je uočljiva nakon liječenja. Pronađena je očigledna razlika između proteinske ekspresije HO-1 i NQO1 sa H2O2 ili bez nje (figura 6A-C) (p< 0.01).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" p^g/ml)="" reversed="" the="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" ho-1="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml),="" nqo1="" (except="" acteoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" h2o2="" also="" downregulated="" gclc="" and="" gclm="" protein="" expression="" (p="">< 0.05)="" (figure="" 6a,d,e).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" reversed="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" gclc="" (except="" echinacoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01)="" and="" gclm="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" then,="" the="" chemical="" inhibitors="" for="" ho-1="" were="" used="" to="" further="" evaluate="" the="" roles="" of="" the="" antioxidant="" enzymes="" in="" regulating="" the="" protection="" of="" phgs="" against="" h2o2-induced="" cytotoxicity.="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" prevented="" h2o2-induced="" cytotoxicity,="" but="" such="" protective="" effect="" was="" reversed="" by="" ho-1="" inhibitor="" znpp="" (p="">< 0.01)="" at="" 20="" pm="" (figure="" 6f,="" p=""><>
2.5. Keap1 Expression and Molecular Docking Analysis
U fiziološkim uvjetima, Keap1 djeluje kao represorni protein Nrf2 tako što se vezuje za Neh2 domen Nrf2 i cilja Nrf2 na Cul3-based E3 ubiquitin ligaze za ubikvitinaciju i naknadno degradaciju proteasomom 26S [28]. Kapacitet vezanja za Keap1 od PhG-ova je evaluiran molekularnom analizom prisušavanja kako bi se istražio mehanizam pod njihovim antioksidantnim efektom.
Antioksidans efekt: CistanchePhGs
3. Diskusija
Istražili smo neuroprotekciju phG-ova na H2O2 induciranu-cistotoksičnost u PC12 ćelijama. Rezultati pokazuju da je phG-ov predtreatment značajno potisnuo HzOz-induciranu cistotoksičnost, otežavao intraćelijsku ROS razinu, poboljšao razinu intraceliularnih antioksidativnih enzima i na kraju preokrenuo H2O2-induciranu cistotoksičnost u PC12 ćelijama. Štoviše, PhGs je povećao transkripcionu aktivaciju Nrf2, preokrenuo HzOz-induciranu downregulaciju proteinske ekspresije HO-1, NQO1, GCLC i GCLM. Osim toga, PhG-i su pokazali potencijalnu interakciju s Nrf2 vezivnim mjestom u Keap1 proteinu.
U H2O2-induciranoj povredi PC12 ćelija, peroksidacija lipida, koja se odnosi na oksidativnu degradaciju lipida, povećala je ovlaštenost membrana, što je dovelo do oštećenja ćelija [29]. MDA formacija se široko koristi kao indeks peroksidacije lipida [30]. H2O2 je poboljšao ROS proizvodnju i iscrpio antioksidantne odbrambene enzime, kao što su SOD, katalaza i GPx. Ovaj proces dovodi do oksidativnog stresa [31], koji igra ključnu ulogu u uzročju i napredovanju većine neurodegenerativnih poremećaja. U skladu sa prethodnim studijama, posmatrali smo povećani nivo ROS-a, smanjene intraćelijske antioksidantne enzime, i poboljšanu apoptozu PC12 ćelija nakon liječenja H2O2. PhGs pretreatment značajno attenuated HzOz-induced povećanje intracellular ROS, poboljšana intracellular antioksidant enzima, i na kraju obrnuto HzOz-induciranu cistotoksičnost u PC12 ćelijama.
Kuang et al. [32] je izvijestio da je echinacoside pokazao značajan neuroprotektivni učinak na H2O2-induciranu cistotoksičnost u PC12 ćelijama kroz mitohondrijski apoptotski put. U ovoj studiji, otkrili smo da echinacoside, salidroside, acteoside, i izoacteoside pokazuju neuroprotektivne efekte tako što pojačava antioksidativno djelovanje PC12 ćelija jer su povećale transkripcionu aktivaciju Nrf2 i upregulirale nizvodni proteinski izraz HO-1, NQO1, GCLC, i GCLM. Brojne studije su jasno pokazale da aktivacija Nrf2 ciljnih gena, posebno HO-1, u astrocitima i neuronima snažno štiti od upale, oksidativnih oštećenja i smrti ćelija. Za HO-1 sistem je prijavljeno da je veoma aktivan u centralnom nervnom sistemu, a njegova modulacija očigledno igra presudnu ulogu u patogenezi neurodegenerativnih poremećaja [33]. Nedavne studije su također razjasnile ulogu Nrf2 u progresiji i riziku od PD [9] i Keap1 kao efikasne mete za reaktivaciju Nrf2 u AD [34]. Rezultati podržavaju nove dokaze za Nrf2 kao terapeutski cilj u neurodegenerativnim bolestima.
Analiza molekularnog prisipanja pokazala je da se PhG-i mogu vezivati za Keap1, sa sljedećim kapacitetima vezanja: echinacoside > izoakteoside > akteoside > salidroside. U skladu sa ovim rezultatima, PhGs pretreatment je doveo do Nrf2 nuklearne translokacije, sa sljedećim Nrf2 izrazom u jezgru: echinacoside > izoacteoside * acteoside > salidroside. Pretpostavili smo da je broj glikosidesa uticao na mogući režim vezivanja PhG-ova i Keap1, a režim vezivanja je dodatno izazvao oslobađanje Nrf2 iz Keap1. Ovaj proces je rezultirao aktivacijom Nrf2 i nizvodnih gena i na kraju štiti PC12 ćelije od H2 O2 -izazvanog oksidativnog stresa.
Neuroprotektivni efekti cistancheaPhGs
4. Materijali i metode
4.1. Hemijski spoj i reagenti
Salidroside (CAS No. 10338-51-9), akteoside (CAS broj 61276-17-3), izoakteoside (CAS broj 61303-13-7), i echinacoside (CAS broj 82854-37-3) su kupljeni od YYuanye Biotehnology Company (Šangaj, Kina). PhGs je bio rastvoren u PBS-u kako bi se proizveo 10 mg/mL dioničko rješenje, koje je pohranjeno na -20 °C. H2O2 je kupljen od Aladina® (Šangaj, Kina). RPMI-1640 srednji i fetusni serum goveda kupljen je od Hyclonea (Logan, UT, SAD), a 0,5% trypsina EDTA, penicilin i streptomicin su kupljeni od Keyija (Hangzhou, Kina). MDA, SOD dijagnostički paketi, MTT, i DCFH-DA su kupljeni od Beyotime Institute of Biotechnology (Nanjing, Jiangsu, China). Annexin V-FITC/PI double staining Kit je kupljen od Solarbio Life Sciences (Peking, Kina). Antitijela na Nrf2, Histone H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM, i p-actin, anti-miš-hren peroksid (HRP) IgG, i anti-zec-HRP-IgG su kupljeni od Abcam (London, Uk). Inhibitori HO-1 i ZnPP-a su kupljeni od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). RNAiso Plus, PrimeScript™RT reagent Kit with gDNA Eraser, i SYBR® Premix Ex Taq™ II su kupljeni od Takara (Shiga, Japan). Lipofectamine® RNAiMAX Transfection Reagent je kupljen od Thermo Fisher Scientific (Waltham, UK). Nrf2 siRNA sekvence su bile slijedeće: naprijed, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; i obrnuto, UUAAGACACUGUAUCGG. U međuvremenu, kontrolne siRNA sekvence su bile slijedeće: naprijed, UUCUCCGAACGUCACGU; i obrnuto, ACGUGACACGUUCGGAA.
4.2. Cell Culture
Linija feokromocitoma miša (PC12 ćelije) dobivena je iz Instituta za biohemiju i biologiju ćelija, SIBS, (CAS, Šangaj, Kina). Ćelije su održavane u RPMI-1640 (Hyclone) koji sadrži 10% fetalnog seruma goveda (Hyclone), 100 U/mL penicilina, i 0,1 mg/mL streptomicina pri 37 °C sa 5% CO2. Medij se mijenjao svaki drugi dan.
4.3. Cell ViabilityAssay
PC12 ćelije su sejale u 96-dobro pločama na 2 x 104 ćelije/well. Nakon pričvršćivanja, ćelije su preincubatovane sa ili bez inhibitora 20 min, inkubovane sa ili bez PhG-ova za 24 h, a zatim inkubovane sa H2O2 za još 2 h nakon što su phG-i uklonjeni. Nakon inkubacije, ćelije su tretirane sa 5 mg/mL MTT za 4 h na 37 °C, a mediji su pažljivo uklonjeni. Formazan kristali koji su se formirali preživjelim ćelijama su se rastvorili u 150 rL DMSO-a kako bi se generirala plava boja [35], a apsorbacija je izmjerena na 570 nm na čitaču ploča. Kontrole su utrošile istu koncentraciju medija samo sa DMSO-om. Održivost ćelija je normalizirana kao procenat kontrole.
Koncentracije phG-ova (0,1,1,5 i 10 Rg/mL) odabrane su u zavisnosti od analize toksičnosti phG-ova i prijavljenog cistoprotektivnog efekta ehinakosidea [32]. Prema izvještaju, nije bilo efekta cistotoksičnosti prikazanog ispod 10 Rg/mL, a prijavljeno je da echinacoside pokazuje cistoprotektivni učinak u modelu ćelija povrijeđenih HzOz.
4.4. Apoptosis Assay
Apoptoza je otkrivena sa Annexin V-FITC/PI duplim kitom za mrljanje (Solarbio). PC12 ćelije su sejale u 6-dobro pločama na 2 x 105 ćelija/well. Nakon pričvršćivanja, ćelije su tretirane phG-om (0,1 i 10 Rg/mL) 24 h i inkubirane sa H2O2 za još 2 h nakon uklanjanja PhG-ova. Nakon inkubacije, ćelije su oprane u hladnom PBS-u, centrifugiran dva puta pri 1500 o/min 10 min, a ponovo su se u 500 rL vezivnog bafera. Annexin V (5 rL) i propidij-iodid sa oznakom FITC.
Skraćenice
GCLC glutamat-cistein ligaze-katalitička podunit
GCLM glutamat-cistein ligaze-katalitički modifikator podunit
H2O2 vodikov peroksid
HO-1 heme kisikaze 1
Keap1 Kelch ECH asocijacija proteina 1
NQO1 NAD(P)H quinone oxidoreductase 1
Nrf2 nuklearni faktor erithroid 2-povezani faktor 2
PhGs salidroside, acteoside, izoacteoside, i echinacoside
ROS reaktivne vrste kisika
ZnPP cink protoporfirin
Cistanche deserticola ekstrakt: PHG cistanche
Reference
1. Sun, A.Y.; Chen, Y.M. oksidativni stres i neurodegenerativni poremećaji. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]
2. Maheshwari, A.; Micro, M.M.; Aggarwal, A.; Sharma, R.K.; Nandan, D. Pathways uključeni u apoptozu ćelija testisa izazvanu H2O2 in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]
3. Halliwell, B. Reaktivne vrste kisika i centralni nervni sistem. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]
4. Richardson, J.S.; Subbarao, K.V.; Ang, L.C. O mogućoj ulozi slobodne radikalne peroksidacije izazvane željezom u neurološkom degeneraciji u Alchajmerovu bolest. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]
5. Zhang, D.D. Mechanistic Studies of the Nrf2-Keap1 signalni put. Droga Metab. Rev. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]
6. Itoh, K.; Tong, K.I.; Yamamoto, M. Molekularni mehanizam aktivira Nrf2-Keap1 put u regulaciji adaptivnog odgovora na elektrofile. Slobodan Radic. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]
7. Kong, A.N.; Owuor, E.; Yu, R.; Hebbar, V.; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Induction of xenobiotic enzymes by the map kinase pathway and the antioksidant or electrophile response element (ARE/EpRE). Droga Metab. Rev. 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]
8. Buendia, I.; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, ja.; Egea, J.; Leon, R. Nrf2-ARE put: Nastajajući cilj protiv oksidativnog stresa i neuroinflamacije u neurodegenerativnim bolestima. Pharmacol. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]
9. Skibinski, G.; Hwang, V; Ando, D.M.; Daub, A.; Lee, A.K.; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, M.M.; Shabby, B.A.; Finkbeiner, S. Nrf2 ublažava LRRK2- i a-sinuclein-induciranu neurodegeneraciju modulacijom proteostaze. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]
10. Jimenez, C.; Riguera, R. Phenylethanoid glycosides in plants: Structure and biological activity. Nat. Prod. Rep. 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]
11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, ja.; Abrašev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Antioksidant i cholinesterases inhibitori aktivnosti Verbascum xanthophoeniceum Griseb. i njegove fenilethanoidne glikoside. Food Chem. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]
12. Li, N.; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Neuroprotektivni efektiCistanches HerbaTherapy on Patients with Moderate Alzheimer/s Disease. Evid.-Baziran komplement. Altern. Med. 2015, 2015,103985. [CrossRef] [PubMed]
13. Liu, Y.L.; On, W.J.; Mo, L.; Shi, M.F.; Zhu, Y.Y.; Pan, S.; Li, X.R.; Xu, Q.M.; Yang, S.L. Antimikrobne, anti-upalne aktivnosti i toksikologija fenilethanoidnih glycosides iz Monochasma savatieri Franch. Bivši Maxim. J. Etnopharmacol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]
14. Dong, Q.; Yao, J.; Fang, J.N.; Ding, K. Strukturalna karakterizacija i imunološka aktivnost dva hladno-vode ekstrakcivna polisaharida izCistanche deserticola Y. C. Ma. Karbohidr. Res. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]
15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C.; Zhao, Y. Osmanthusfragrans Flower Extract and Acteoside Protect Against d-Galactose-Induced Aging in a ICR Mouse Model. J. Med. Food 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]
16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B.; Cai, Z.; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Phenylethanoid Glycoside Profiles and Antioxidant Activities of Osmanthusfragrans Lour. Flowers by UPLC/PDA/MS and Simulated Digestion Model. J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]
17. Li, X.; Da, X.; Li, X.; Sun, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside štiti od MPP+inducirane apoptoze u PC12 ćelijama inhibijući NO put. Brain Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]
18. Zhang, L.; Ding, W.; Sun, H.; Zhou, Q.; Huang, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside štiti PC12 ćelije od apoptoze izazvane MPP+putem aktivacije puta PI3K/Akt. Hem za hranu, toksikol. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]
19. Sheng, G.Q.; Zhang, J.R.; Pu, X.P.; Ma, J.; Li, C.L. Zaštitni efekat verbaskoside na 1-metil-4- fenilpiridinium ionsku neurotoksičnost u PC12 ćelijama. Eur. J. Pharmacol. 2002, 451,119-124. [CrossRef]
20. Wang, H.; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Sun, X.; Zhang, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside štiti ljudske neuroblastoma SH-SY5Y ćelije protiv beta-amiloid-induciranih ćelija ozljede. Brain Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]
21. Min, D.; Jin, Y.Z.; Yong, J.; Zheng, B.L.; Yao, H.W. Echinacoside spašava SHSY5Y neuronske ćelije iz TNFa-inducirane apoptoze. Bradu. Pharmacol. Bik. 2005, 505,11-18.
22. Zhao, Q.; Gao, J.P; Li, W.W.; Cai, D.F. Neurotrofični i neurorescue efekti Echinacoside u subacute MPTP miš model Parkinsonove bolesti. Brain Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]
23. Koo, K.A.; Sung, S.H.; Park, J.H.; Kim, S.H.; Lee, K.Y.; Kim, Y.C. In vitro neuroprotektivne aktivnosti fenilethanoidnih glycosides iz Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]
24. Liu, Y.G.; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Da, X.S. Sintetički fenilethanoidni derivati glikozida kao potencijalni neuroprotektivni agensi. Eur. J. Med. Chem. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]
25. Fu, G.; Pang, H.; Wong, Y.H. Prirodno se javlja fenilethanoidni glycosides: Potencijalni vodi za nove terapije. Curr. Med. Chem. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]
26. Greene, L.A.; Tischler, A.S. Uspostavljanje noradrenergične klonalne linije pacovske adrenalne feokromocitomske ćelije koje reagiraju na faktor rasta živaca. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]
27. Liang, Q.N.; Sheng, Y.C.; Jiang, P.; Ji, L.L.; Xia, Y.Y.; Min, Y.; Wang, Z.T. Razlika glutation antioksidativnog sistema u novookošenoj i mladoj mišjoj jeti i njegovom učešću u hepatotoksičnosti izazvanoj izolinom. Arch. Toxicol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]
28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Oxidative Stress Sensor Keap1 Functions as an Adaptor for Cul3-Based E3 Ligase To Regulate Proteasomal Degradation of Nrf2. Mol. Cell. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]
29. Cornelius, C.; Crupi, R.; Kalabreze, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z.; Calabrese, E.J.; Cuzzocrea, S. Traumatska ozljeda mozga: oksidativni stres i neurozaštita. Antioksid. Redox Signal. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]
30. Hou, Z.; Luo, W.; Sun, X.; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang, Z.; Liu, B. Vodik bogat salin štiti od oksidativnih oštećenja i kognitivnih deficita nakon blage traumatske povrede mozga. Brain Res. Bull. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]
31. Ansari, M.A.; Roberts, K.N.; Scheff, S.W. Time course of contusion-induced oksidativnog stresa i sinaptičkih proteina u korteksu u pacovskom modelu TBI. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]
32. Kuang, R.; Sun, Y.; Yuan, W.; Lei, L.; Zheng, X. Zaštitni efekti echinacoside, jedan od feniletanoidnih glycosides, na H2O2-induciranu cistotoksičnost u PC12 ćelijama. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]
33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Abraham, N.G.; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Modulacija Nrf2/ARE puta po hrani polifenoli: nutriciona neuroprotektivna strategija za kognitivne i neurodegenerativne poremećaje. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]
34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, D.K.; Gatliff, J.; Gomez, P.B.; Bertrand, H.C.; Martinez, P.; Callard, R.; Snoeren, ja.; Cochem, H.M. Direct Keap1-Nrf2 poremećaj kao potencijalna terapeutska meta za Alzheimer/s bolest. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]
35. Hansen, M.B.; Nielsen, S.E.; Berg, K. Re-pregled i daljnji razvoj precizne i brze metode bojanja za mjerenje rasta ćelija/ćelija ubijanja. J. Immunol. Metode 1989, 119, 203-210. [CrossRef]
36. Press, C. Virtual Screening in Drug Discovery; Crc Press: Boca Raton, FL, USA, 2005.
37. Muegge, I.; Martin, Y.C.; Hajduk, P.J.; Fesik, S.W. Evaluation of PMF scoring in docking weak ligands to the FK506 binding protein. J. Med. Chem. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]
38. Kuntz, I.D.; Blaney, J.M.; Oatley, S.J.; Langridge, R.; Ferrin, T.E. Geometrijski pristup makromolekul-ligand interakcijama. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [CrossRef]
39. MD, E.; Murray, C.W.; Auton, T.R.; Paolini, G.V.; ja, R.P. Empirijskih funkcija za pogadjanje: Ja. Razvoj brze empirične funkcije za ocjenu vezivnog afiniteta ligandova u receptorskih kompleksa. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11,425-445.
© 2018 od autora. Licensee MDPI, Basel, Švicarska. Ovaj članak je članak otvorenog pristupa distribuiran pod uslovima i uslovima licence Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).
