Višekomponentni Prime-boost režimi vakcinacije protiv Chlamydia Trachomatis indukuju odgovore antitijela i T ćelija i ubrzavaju uklanjanje infekcije u modelu primata koji nije čovjek

Razvijanje vakcine protiv polno prenosivih bolesti je međunarodni prioritetInfekcije Chlamydia trachomatisu borbi protiv kontinuiranog globalnog širenja infekcije. Theoptimalna imunizacijastrategija tek treba da bude u potpunosti razjašnjena. Cilj ove studije bio je evaluacijastrategije imunizacijeu modelu neljudskog primata (NHP). Cynomolgus macaques (Macaqua fascicularis) imunizirani su različitim višekomponentnimprime-boost imunizacijarasporedi i naknadno izazvan sa C. trachomatis SvD u donjem genitalnom traktu. Imunizacijski antigeni uključivali su rekombinantni proteinski antigen CTH522 sa adjuvansom CAF01 ili aluminijum hidroksidom, MOMP DNK antigen i MOMP vektorske antigene (HuAd5 MOMP i MVA MOMP).

Kliknite ovdje da dobijete biljni cistanche za prevencijuInfekcije Chlamydia trachomatis

Svi antigenski konstrukti bili su visoko imunogeni i podižu značajne sistemske IgG odgovore specifične za C. trachomatis. Konkretno, grupe vakcinisane proteinom CTH522 podigle su brzi i jaki specifični IgG u serumu. Mapiranje specifičnih epitopa B ćelija unutar MOMP-a pokazalo je da su sve vakcinisane grupe prepoznale epitope blizu ili unutar varijabilnih domena (VD) MOMP-a, sa konzistentnim VD4 odgovorom kod svih životinja. Nadalje, serum iz svih vakcinisanih grupa mogao bi in vitro neutralizirati i SvD, SvE i SvF. Odgovori antitijela su se odrazili na vaginalnu i očnu sluznicu, što je pokazalo nivoe IgG koji se mogu detektirati. Vakcine su također izazvale reakcije posredovane ćelijama specifične za C. trachomatis, što je prikazano in vitro stimulacijom i intracelularnim citokinskim bojenjem mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC). Generalno, grupe vakcinisane proteinom (CTH522) uspostavile su multifunkcionalni odgovor CD4 T ćelija, dok su grupe vakcinisane DNK i vektorom takođe uspostavile odgovor CD8 T ćelija. Nakon vaginalne infekcije sa C. trachomatis SvD, nekoliko vakcinisanih grupa pokazalo seubrzano uklanjanje infekcije, ali posebno DNK grupa, pojačana CTH522 s adjuvansom CAF01 kako bi se postiglabalansirani CD4/CD8Odgovor T ćelija u kombinaciji sa anIgG odgovor, pokazaoubrzano uklanjanje infekcije.

KLJUČNE REČI vakcina, infekcija,imunologija, bakterije, CD4/CD8 limfociti,Chlamydia trachomatis

Uvod

Genitalne infekcije Chlamydia trachomatis godišnje uzrokuju oko 131 milion novih slučajeva širom svijeta (1) i predstavljaju veliki globalni zdravstveni problem jer potencijalno izazivateške komplikacijekao što je karlicainflamatorna bolest, ektopične trudnoće, ineplodnost(2, 3). Antibiotici i dalje nude efikasan tretman infekcija C. trachomatis. Međutim, budući da je infekcija asimptomatska u čak 75 posto slučajeva,većina infekcija se ne liječi, a prijenos nije prekinut (3). Općenito se slaže da je najefikasnije oružje protiv kontinuiranog širenja infekcija klamidijom profilaktička vakcina (4).

Uprkos višegodišnjim istraživanjima, vakcina još nije na tržištu. To je dijelom zbog složenog dvofaznog načina života C. trachomatis. Jedinstveni dvofazni životni ciklus C. trachomatis, sa intracelularnim i ekstracelularnim stadijima, izaziva imuni sistem. Vjeruje se da bi se zaštitni imunitet trebao sastojati od ćelijski posredovanih imunoloških odgovora (CMI), pored serotip specifičnih antitijela (5-13). Štaviše, stvaranje mukoznog imuniteta u genitalnom traktu predstavlja dodatni izazov za vakcinu.

U ovoj studiji, testirali smo različite strategije vakcinacije u modelu infekcije NHP klamidijom. Strategije su imale za cilj da izazovu antitela, CD4 T ćelije i/ili odgovor CD8 T ćelija. Osim toga, neke od vakcina su imale za cilj generiranje mukoznog odgovora. Antigeni odabrani za ovu studiju bazirani su na glavnom proteinu vanjske membrane. Prvo, generisan je konsenzusni MOMP antigen (Con E) zasnovan na približno 1500 serovarskih E ompA sekvenci kako bi se obezbedila visoka pokrivenost epitopa protiv najzastupljenijih sojeva C. trachomatis (14). Drugo, korišten je sintetički fuzioni protein, CTH522. CTH522 je rekombinantna, projektovana verzija MOMP-a, koja se sastoji od heterolognih imunorepeticija VD4 regiona iz četiri genitalna Ct serovara (D, E, F i G) (11). Strategija iza rekombinantnog fuzionog proteina je indukcija pojačanih odgovora na zaštitne epitope i induciranje unakrsne zaštite serovara (11).

Još jedna ključna karakteristika trenutnog eksperimenta bila je paralelna procjena CTH522 u dva izrazito različita adjuvantna sistema (AlOH i CAF01), u kombinaciji sa intranazalnim boosterom. Ova kombinacija je testirana na miševima i mini svinjama gdje se pokazalo da je visoko imunogena izazivanjem visokih titara neutralizirajućih antitijela, CD4 plus T stanica koje proizvode IFN-g i ubrzanim uklanjanjem infekcije genitalnim C. trachomatis (11-13 , 15). Nadalje, ovo poređenje odražava nedavno prvo kliničko ispitivanje na ljudima gdje se pokazalo da su obje formulacije imunogene i gdje je CAF01 bio superiorniji u indukciji neutralizirajućih serumskih antitijela i imunoloških odgovora posredovanih Th1 ćelijama (16). Da bi se inducirali jaki ćelijski imuni odgovori, a posebno odgovori CD8 T ćelija u kombinaciji sa odgovorima CD4 T ćelija, dio životinja je pojačan imunogenom CT522/CAF01 nakon prajminga Adeno vektorom pAL1112 (HuAd5-MOMP), MVA pox vektor, ili plazmidna DNK pcDNA3.1 koja isporučuje MOMP Con E antigen (14, 17). Sva tri vektora pokazala su se imunogenom u NHP, a nedavno je pokazano da strategija imunizacije koja kombinuje ove tri vakcine i konačnu dopunsku vakcinaciju sa adjuvansnim proteinskim antigenom inducira superiorne imune odgovore i dosledno povećava klirens intravaginalne C. trachomatis kod mišje C. model infekcije trachomatisom (14).

U ovoj studiji, pokazali smo da različite kombinacije višekomponentnih strategija imunizacije sa proteinskim vakcinama, DNK vakcinama i rekombinantnim virusnim vektorskim vakcinama u modelu nehumanog primata (NHP) rezultiraju različitim imunološkim odgovorima. Nadalje, primjećujemo da je režim koji koristi DNK prajmer i protein (CTH522/ CAF01) potaknuo ubrzani klirens bakterija nakon genitalnog izazova s ​​Chlamydia trachomatis.

Rezultati

Svi režimi vakcinacije pokazali su se sigurnim i izazvali su značajne sistemske odgovore antitijela

Ukupno 30 makaki cynomolgus je vakcinisano slijedeći različite režime vakcinacije s primarnim pojačanjem, uključujući proteinske, DNK i vektorske vakcine i različite načine primjene, kao što je prikazano na slici 1 i dodatnim slikama 6-10). Sve životinje su ostale zdrave tokom studije i nisu razvile mjerljive štetne efekte na imunizaciju. Osim toga, nismo primijetili značajne fluktuacije u težini ili temperaturi životinja (dodatne slike 1, 2).

U fiksnim vremenskim tačkama nakon imunizacije, serum je sakupljen i nivoi CTH522 specifičnog IgG u serumu su procijenjeni ELISA testom. Svih 5 vakcinisanih grupa utvrdilo je značajan serumski CTH522 IgG odgovor (Slika 2). Međutim, kinetika je bila malo drugačija u 5 vakcinisanih grupa. Sve životinje u grupama CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 i CTH522/CAF01 plus IN podigle su značajan titar IgG nakon samo 1 intramuskularne (IM) imunizacije, a titar IgG ostao je značajan do posljednje tačke uzorkovanja (Slike 2A- C). Nivoi IgG u serumu porasli su nešto sporije u grupama DNK plus CTH522 i vektora plus CTH522, gdje su sve životinje bile serokonvertirane u sedmici 8 i sedmici 4, respektivno (Slike 2D, E).

Grupe CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 plus IN i CTH522/CAF01 su značajno povećale serumski IgG nakon 3. IM dopunske vakcine u 16. sedmici (Slike 2A C). Grupe DNK plus CTH522 i vektori plus CTH522 su značajno povećale nivoe IgG u serumu nakon proteina/CTH522/ CAF01 IM bustera u 20. sedmici (Slike 2D, E). Nisu uočene značajne razlike u odgovorima serumskih antitijela nakon triputa IM vakcinacije sa CTH522 formuliranim ili sa CAF01 ili AlOH adjuvansom (Slike 2A, B), i intranazalne (IN) neadjuvantne dopunske imunizacije u CTH522/AlOH plus IN i CTH522/CAF01 plus IN grupe nisu izazvale nikakvo značajno povećanje titara IgG antitela u serumu (Slike 2A, B).

Kinetika serumskog IgG odgovora odražavala je kinetiku/nivoe u vaginalnim tečnostima, što ukazuje da su antitela otkrivena na površini vagine verovatno bila izvedena iz cirkulacije. Slično, očni nivoi IgG su također pratili nivoe IgG u serumu i, kako je uočeno u serumu, pokazalo je da IM booster u DNK/vektorskim grupama povećava očni titar IgG (dodatna slika 3).

Odgovori serumskih antitijela su usmjereni protiv varijabilnih domena 1, 3 i 4 u MOMP sekvenci

Dalje razjašnjenje prepoznavanja specifičnog epitopa od strane serumskih antitijela, nakon različitih režima vakcinacije, je zatim evaluirano. Serum je analiziran u 24. sedmici, odnosno nakon intranazalnih dopunskih vakcina u grupama 1 i 2, te nakon IM docjepnih vakcina u DNK i vektorskim grupama (grupe 4 i 5). Ove analize su izvedene sa peptidnim nizom koji pokriva CTH522, koji se sastoji od 15 mer peptida sa preklapanjem od 14 aminokiselina.

SLIKA 1 Dizajn studije. Slika prikazuje grupe, vakcine i puteve primjene (intramuskularno, IM ili intranazalno, IN) koji se koriste

SLIKA 2 (A–F) Odgovori serumskih CTH522 IgG antitela. Cynomolgus macaques su imunizirani slijedeći različite režime prvog pojačanja (n=5 po grupi) i serum je sakupljen svake druge sedmice. Specifična CTH522 IgG antitijela u serumu procijenjena su ELISA-om i ovdje izražena kao titar na skali log10. Sive strelice označavaju vakcinaciju. Svaka linija predstavlja jednu životinju. Statistička značajnost je označena zvjezdicama *p < 0.05 i **p < 0.01.

Generalno, prepoznati peptidi su locirani blizu i unutar varijabilnih domena (VD 1,3,4) MOMP-a. CTH522/AlOH grupa je čak pokazala i određeno prepoznavanje VD2 regiona. Sve životinje su uspostavile snažan odgovor na VD4 regiju koja sadrži konzervirani neutralizirajući epitop VD4 (11). DNK grupa je pokazala najuže prepoznavanje unutar VD (slika 3), dok je vektorska grupa pokazala nešto širi obrazac prepoznavanja. Grupe CTH522/CAF01 i CTH522/AlOH pokazale su najširu prepoznatljivost, posebno protiv SvF i SvG.

Serumska antitijela su bila u stanju da neutraliziraju SvD, SvE, SvF in vitro

Da bi se procijenio kapacitet antitijela izazvanih vakcinom da inhibiraju infekciju C. trachomatis njenih ciljnih ćelija, izveden je in vitro test neutralizacije. Koristeći ovaj test, ispitali smo neutralizaciju i SvD, SvE i SvF. Za analizu je korišten serum iz 24. sedmice, a kao kontrola je korišten serum iz grupe koja nije primila lijek. Svih pet vakcinisanih grupa pokazalo je sposobnost neutralizacije sva tri serovara (Slika 4). Protiv SvD grupa CTH522/AlOH plus IN pokazala je najviši titar neutralizacije od 50 posto, dok je protiv SvE grupa DNK/CTH522, iza koje slijedi CTH522/AlOH plus IN grupa, pokazala najviše neutralizacijske titre. Iako su sve grupe mogle neutralizirati SvF, titri neutralizacije od 50 posto bili su nešto niži za sve grupe protiv ovog serovara, u poređenju sa SvD i SvE. Grupa vektora plus CTH522 pokazala je najniži titar neutralizacije od 50 posto od svih vakcinisanih grupa.

Različiti režimi vakcinacije izazvali su različite profile T-ćelija

Za procjenu odgovora T-ćelija izazvanih vakcinacijom, PBMC su sakupljeni tokom perioda studije i kriokonzervirani. PBMC iz sedmice 0/osnovne i 22. sedmice su ponovno stimulirani peptidnim skupovima (MOMP) i procijenjeni na intracelularne citokine intracelularnim bojenjem citokina (ICS) i drugom citometrijom. PBMC-ovi su obojeni na sljedeće ćelijske markere: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 i citokine: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }A. Strategija gajtinga je prikazana na dodatnim slikama 4, 5. Stimulacija PBMC-a sa MOMP peptidnim pulom izazvala je značajan odgovor. Procenat antigen specifičnih CD154 plus CD4 plus T ćelija koje eksprimiraju kombinacije IL2, IFN-g i TNF-a porastao je 2 sedmice nakon posljednje imunizacije (W22) u svim vakcinisanim grupama (Slika 5). Većina ovih T ćelija bila je multifunkcionalna u smislu da su eksprimirala nekoliko citokina. Procenat antigen specifičnih CD137 plus CD8 T ćelija koje proizvode citokine samo je povećan u DNK i vektorskoj grupi (W22), (slika 6, koja pokazuje multifunkcionalnost CD137 plus CD8 plus T ćelija). U

SLIKA 3 Mapiranje epitopa u serumu u sedmici 24. Cynomolgus makaki su imunizirani slijedeći različite režime pojačanja (n=5 po grupi), a serum je sakupljen u sedmici 24. Odgovori IgG peptidnog niza na CTH522 15mer preklapanje peptidi su predstavljeni kao srednji signal za svaku grupu sa VD1 peptidima (narandžasto), VD2 (zeleno), VD3 (plavo) i VD4 iz SvD, E, F i G (crveno) istaknutim bojama.

SLIKA 4 In vitro neutralizacija seruma C. trachomatis SvD, SvE i SvF. Cynomolgus makaki su imunizirani slijedeći različite režime primarnog pojačanja (n=5 po grupi), a serum je sakupljen nakon završetka rasporeda imunizacije (24. sedmica). C. trachomatis SvD, SvE i SvF su inkubirane sa serumom svake životinje, a kapacitet serumskih antitijela da inhibiraju infekciju je procijenjen inkubacijom mješavine antitijela i bakterije na HaK ćelije i bojenjem za inkluzije. Crna linija pokazuje SvD, siva linija pokazuje SvE, a tamno siva isprekidana linija pokazuje SvF. Isprekidana crvena linija označava recipročni titar neutralizacije od 50 posto svakog serovara.

SLIKA 5 Odgovori CD4 T ćelija. Multifunkcionalne analize sedmica 22. Proizvodnja citokina od strane CD4 plus T ćelija analizirana ICS-om. Prikazani su multifunkcionalni odgovori nakon stimulacije sa skupovima preklapajućih peptida iz MOMP-a. Veličina svakog kolača je proporcionalna procentu CD154 plus CD4 plus T ćelija koje eksprimiraju najmanje jedan citokin, uključujući IFN-g, TNF-a i IL-2, i proporcijama ćelija koje eksprimiraju IFN-g i /ili TNF-a i/ili IL-2 citokini su prikazani u svakoj piti.

Ubrzani klirens vaginalne C. trachomatis SvD infekcije izazvane vakcinacijom

Da bi se procijenila zaštitna efikasnost imunog odgovora izazvanog vakcinom, životinje su izazvane vaginalnom infekcijom sa 5x107 IFU C. trachomatis SvD. Nakon inokulacije, vaginalno opterećenje hlamidijom je određeno PCR detekcijom klamidijske DNK u vaginalnim brisevima (Slika 7). Infekcija je uklonjena kod svih životinja do 5. sedmice u DNK plus CTH522/CAF01 grupi i Vector plus CTH522 grupi, do 6. sedmice u CAF01/ CTH522 grupi i do 8. sedmice u CTH522/Alum plus grupi IN grupa (slika 7). U kontrolnoj grupi, u sedmici 8, 80 posto životinja je izliječilo infekciju i 1 životinja je ostala PCR pozitivna u sedmici 9. IN booster u CTH522/CAF01 plus IN grupi nije povećao zaštitu (Slika 7). Log-rank (Mantel-Cox) test, upoređujući sve grupe, pokazao je P vrijednost od 0,0994, a poređenjem svake grupe pojedinačno sa kontrolnim grupama, samo je grupa DNK-CTH522 pokazala P vrijednost ispod 0,05 (P vrijednost =0.0257).

Diskusija

Ova studija je osmišljena da indukuje ćelijski imunitet (CD4 i CD8) u kombinaciji sa humoralnim imunitetom i da prilagodi fenotip adaptivnog imuniteta sa vakcinama protiv klamidije zasnovane na MOMP. Procjenjujemo imunogenost i zaštitnu efikasnost kombinovanih višekomponentnih strategija imunizacije sa proteinskim vakcinama (CTH522, Con E), DNK vakcinom i rekombinantnim virusnim vektorom (MVA MOMP), i vakcinama zasnovanim na adeno vektorima, kod primata koji nije čovek ( NHP) model.

Podaci su pokazali da su svi režimi imunizacije bili imunogeni i izazvali i ćelijski i humoralni odgovor koji se sastojao od neutralizirajućih antitijela (Slike 2-4). Proteinska vakcina CTH522 formulirana sa CAF01 ili AlOH pokazala je brzu indukciju sistemskog antigen-specifičnog IgG (slika 2). Nismo uočili nikakve značajne razlike između odgovora izazvanih AlOH i CAF01 adjuvansnim vakcinama, što je u skladu sa odgovorima uočenim kod ljudi sa ovim adjuvansima (16). Režimi vakcinacije DNK i vektora takođe su izazvali značajne titre sistemskih antitela specifičnih za antigen, koji su se značajno povećali nakon imunizacije proteinom (Slika 2). U skladu sa našim rezultatima, prethodna studija na miševima je takođe pokazala da režimi vakcinacije proteina izazivaju više nivoe antigen-specifičnih antitela u poređenju sa antigenima DNK i vektorske vakcine i takođe efikasno povećavaju titre za ove grupe (15).

MOMP sadrži četiri VD koje su izložene na površini infektivnog oblika Ct. Ove regije su glavna meta imuniteta zavisnog od antitela, kako kroz neutralizujuća antitela, tako i imunitet posredovan Fc receptorom (18). Prethodne studije su pokazale da je adaptivni prijenos neutralizirajućeg seruma izazvanog vakcinom značajno smanjio rano izlučivanje bakterija nakon infekcije C. trachomatis (6, 11, 19-21). Stoga se čini da antitijela igraju ulogu u neutralizaciji/kontroli početnog inokuluma, vjerovatno u saradnji sa ćelijskim imunitetom. Detaljnim mapiranjem epitopa B ćelija, pronašli smo prepoznavanje VD regiona 1, 3, 4 u svim grupama vakcina. Grupe DNK i vektora su takođe prepoznale VD1, 3 i 4 regione. Međutim, ove grupe su pokazale nešto uže prepoznavanje unutar ovih VD u poređenju sa CAF01 i AlOH grupama, što vjerovatno odražava da Con E antigen u vektorskim grupama ne sadrži VD4 regiju SvF i G (slika 3). Prepoznavanje regije VD4 je u korelaciji sa sposobnošću svih strategija vakcine da induciraju neutralizirajuća antitijela protiv SvD, SvE i SvF.

Parenteralna imunizacija sa CTH522 u CAF01 i AlOH indukovala je značajne nivoe mukoznih antitela (IgG) u genitalnom traktu i oku i nivoi u korelaciji sa titrima seruma (dodatna slika 3, nedelja 18). DNK i vektorske vakcine same po sebi nisu izazvale mukozni IgG, što odražava niže titre seruma u poređenju sa samim proteinom. Međutim, nakon CTH522/CAF01 IM bustera, ove grupe značajno povećavaju serumski Ab. nivoe i vaginalnog i očnog IgG, na nivou samog proteina (dodatna slika 3, sedmica 18). Paralelna procena CTH522 u različitim sistemima adjuvansa (AlOH i CAF01) praćena dva puta intranazalnim pojačavanjem antigenom nije imala efekat povećanja nivoa antitela u sluzokoži (dodatna slika 3, 22. nedelja). Tako se ukupni nivoi IgG u serumu odražavaju na sluznicu za sve grupe. Nedavno ispitivanje faze I na ljudima također je procijenilo paralelnu procjenu CTH522 u AlOH i CAF01, nakon čega je uslijedilo dva puta intranazalno pojačavanje. Ovdje su titri IgG sluzokože također dobro korelirali sa koncentracijom IgG u serumu (16). Međutim, za razliku od nalaza u NHP modelu, ispitivanje na ljudima pokazalo je efekat povećanja IN u grupi CAF01, što je rezultiralo povišenim nivoima i IgG i IgA. Nažalost, procjena IgA nije bila moguća u trenutnoj studiji, zbog ograničenog materijala i lažno pozitivnih signala koji su rezultat unakrsne reakcije sekundarnog antitijela korištenog u testu. Obje studije su koristile VaxINator uređaj, koji je dizajniran za atomiziranje nazalnih lijekova za adsorpciju sluznice. Međutim, nosna šupljina ljudi je mnogo prostranija nego kod NHP i moglo bi se nagađati da bi to moglo utjecati na ravnomjernu distribuciju i unos antigena.

Nekoliko studija na ljudima i glodarima pokazalo je važnost imuniteta Th1 T ćelija i efektorskog citokina IFN-g (8, 22–27). Nasuprot tome, manje se zna o zaštitnoj ulozi CD8 T ćelija (28–33). Sve grupe vakcina indukovale su CD4 T ćelije, ali samo grupe DNK i vektora pokazale su odgovor CD8 T ćelija (Slike 6 i 7). Na osnovu izmerenih citokina, CD8 T ćelije su bile sastavljene od ograničenog broja podskupova u poređenju sa CD4 T ćelijama, koje se mogu podeliti na 6 ili više podskupova, od kojih većina proizvodi nekoliko citokina (Slika 7). CD4 T ćelije su pokazale više podskupova ekspresije IL-2- nego CD8 T ćelija, koje su prvenstveno uključivale samo jednu IL-2-izražavajuću podskupinu, onu koja je eksprimirala IL-2 zajedno sa IFN-g i TNF- a (Slika 6). CD8 T ćelijama je dominirala velika populacija koja je proizvodila samo IFN-g, dok je druga dominantna podskupina CD8 T ćelija proizvodila i IFN-g i TNF-a. Ovaj obrazac citokina među CD4 T ćelijama i CD8 T ćelijama nije drugačiji od onoga što je uočeno kod miševa, kada se testiraju strategije vakcine koje mogu da induciraju i CD4 i CD8 T ćelije (34).

Slična strategija koja je uključivala DNK vakcinaciju praćena pojačavanjem imunostimulirajućim kompleksima (ISCOM) proteina MOMP (35) izazvala je snažnu zaštitu od infekcije pluća Chlamydia muridarum. U toj studiji, DNK MOMP (ili MOMP/ISCOMS) je izazvao značajno manju zaštitu (35). Druga studija je pokazala da vakcinacija miševa DNK MOMP plazmidima, bez podjedinične vakcine, nije uspjela zaštititi od genitalnog C. trachomatis izazova (36), što ukazuje da DNK strategija ima koristi od dopune podjediničnom vakcinom koja indukuje CD4 T ćelije i antitijela . Treba napomenuti da su DNK vakcine pokazale relativno niske profile imunogenosti u kliničkim ispitivanjima na ljudima, što će se možda morati pozabaviti budućim studijama (37).

Iako je doza infekcije Ct korištena u ovoj studiji veća od doze koju doživljava prirodna infekcija kod ljudi, odabrana je kako bi se osiguralo da su sve životinje zaražene, što je važno s obzirom na mali broj životinja u svakoj grupi. Doza je u skladu s dozom korištenom u prethodnim studijama, koja se kretala od 106 do 108 (38, 39). Smanjenje doze u našem modelu dovelo je do povećanih varijacija u vezi sa uzimanjem infekcije (podaci nisu prikazani). Korišćene su i manje doze koje se daju više puta (40, 41). Međutim, ovo nije optimalan protokol kada je cilj testirati zaštitnu efikasnost vakcina, posebno ako prirodni imunitet posreduje zaštitu prije nego što je protokol infekcije završen. Može se nagađati da upotreba visoke doze može zahtijevati imunološki odgovor koji sadrži sve ogranke imunološkog sistema, kao što su antigen specifične CD4 T ćelije, CD8 T ćelije, kao i neutralizirajuća antitijela, kako bi se moglo smanjiti bakterijsko nivoa. To bi također objasnilo zašto neutralizirajuća antitijela inducirana u svim grupama nisu dovela do značajne zaštite u svim grupama [iako smo primijetili trend rane zaštite u većini grupa, gdje se smatra da antitijela igraju ulogu (Slika 7)] . Trenutno pokušavamo razviti fizički relevantniji model.

Uzeti zajedno, naši podaci su pokazali da antigen CTH522 formuliran u adjuvansu CAF01 ili AlOH može inducirati i multifunkcionalne T ćelije i neutralizirajuća antitijela u NHP. Štaviše, naši rezultati sugeriraju da strategija heterologne vakcine koja se sastoji od DNK vakcine i podjedinice CTH522/CAF01 vakcine predstavlja obećavajuću strategiju vakcine za indukciju višestrukog imunološkog odgovora sa visokim nivoom neutralizirajućih Abs u kombinaciji sa snažnim odgovorima CD4 i CD8 T stanica koje može značajno ubrzati klirens infekcije C. trachomatis.

Pitajte za više:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel: plus 86 15292862950

Wecistanche Shop

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop