Smanjenje makrofaga smanjuje patologiju bolesti u glomerulonefritisu koji je ovisan o faktoru H Ⅱ

3. Rezultati

Inducirali smo CSS kod miševa ponavljanom imunizacijom apoferitinom konjske slezene. Životinje stvaraju aktivni antiapoferitinski IgG humoralni imunitetodgovor i deponovanje IgG u glomerulima. Naše ranije studije su otkrile da postoji povećan Mϕinfiltracija u bubregeu ovoj postavci.

3.1. Ekspresija gena makrofaga je povećana u ICGN bubrezima zavisnim od FH. Da bi se procenilo prisustvo Mϕs u FH-zavisnim ICGN bubrezima, qRT-PCR je izveden sa M2 makrofagnim markerima, CD204 (Mϕ receptor hvatač 1) i CD206 (Mϕ receptor manoze 1) [21–24]. Ekspresija oba gena u bubrezima je značajno povećana nakon tretmana apoferitinom kod FHKO miševa (Slika 1) što ukazuje napovećano prisustvo makrofaga u bubrezima.

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE SA 25% EHINAKOZIDA I 9% AKTEOZIDA ZA FUNKCIJU BUBREGA

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kupite za više detalja o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Promjene vremenskog toka tretmanom klodronatom u infiltraciji bubrežnih makrofaga kod FHKO miševa tretiranih apoferitinom. Da bismo odredili efikasnu metodu smanjenja Mϕs u FH-ovisnom ICGN-u, iscrpili smo Mϕs u fh-/- miševima

Slika 3: Dodatni podaci. Dati su profili protočne citometrije F4/80+ monocita iz kontrolnih i miševa tretiranih klodronatom. F4/ 80+ ćelije su značajno smanjene i dostižu manje od 10% tretmanom klodronatom. Svaka vremenska tačka n=6.

3.4. Smanjenje makrofaga smanjuje glomerular

Patologija u ICGN-u posredovanom FH. Na kraju eksperimenta procijenjeni su depoziti imunološkog kompleksa u bubrezima i histopatološke karakteristike ICGN-a. Imunofluorescentno bojenje za C3 i IgG otkrilo je da smanjenje Mϕ nije moduliralo imune komplekse u ovom okruženju. Reprezentativno imunofluorescentno bojenje i histopatologija prikazani su na Slici 5. Primarna histopatološka karakteristika je bila difuzna hipercelularnost glomerularnih čuperaka kod fh-/- miševa sa CSS je značajno smanjena pri smanjenju Mϕs.

3.5. Makrofagi moduliraju citokine u ICGN zavisnom od FH.

Jednom Mϕsinfiltriraju bubregi izloženi su upalnim stimulansima, oslobađaju citokine. ELISA-om smo procijenili nivoe TNF-a i IL-6 u cirkulaciji u plazmi i mCSF bubrega kod FHKO miševa tretiranih fiziološkim rastvorom, apoferitinom ili apoferitinom i klodronatom. Nivoi IL-6 u cirkulaciji bili su veoma niski kod miševa divljeg tipa i povećani kod FHKO miševa i smanjeni kod FHKO miševa tretiranih klodronatom (Slika 6). Tri citokina, TNF , IL-6 i mCSF su značajno povećani kod miševa tretiranih apoferitinom u poređenju sa kontrolama tretiranim slanim rastvorom. Smanjenje Mϕ klodronatom značajno je ograničilo porast citokina u ovom okruženju

3.6. Makrofagi Moduliraju Profibrotic

Molekuli i laminin u ICGN zavisnom od FH. Jednombubrezi razvijaju bolest, oni imaju tendenciju da postanu fibrozni. Mϕs učestvuje u fibroznom procesu prekomjernom proizvodnjom profibrotskih molekula. PCR u realnom vremenu je otkrio 75% povećanje ekspresije mRNA transformirajućeg faktora rasta-beta1 (TGFbeta1), 100% povećanje ekspresije metaloproteinaze-9 (MMP9) i 230% povećanje mRNA laminina. U skladu sa ekspresijom mRNA, ekspresija proteina laminina je značajno povećana kod fh-/- miševa sa CSS koja je smanjena u odsustvu Mϕs (Slika 7).

4. Diskusija

Naše nedavne studije su pokazale da u odsustvu FH miševi razvijaju difuznoproliferativni glomerulonefritis(GN) sa F4/80+ Mϕs oko lokacija IC-a [10]. Nadalje, naše studije pokazuju da Cd11b−/− fh−/− miševi imaju pogoršane karakteristike glomerulonefritisa [26]. S obzirom da bi prisustvo povećanih upalnih M1 makrofaga i njihova trajna aktivacija mogla uzrokovati patologiju tkiva, a njihova repolarizacija u protuupalni fenotip bi pomogla u rješavanju patologije bolesti, sadašnja studija je poduzeta kako bi se dalje razumjela uloga Mϕs u fh. -/- miševi sa ICGN. Povećano prisustvo Mϕs u bubrezima i rješavanje patologije bolesti iscrpljivanjem makrofaga tokom ICGN-a posredovanog FH pokazuju kritičnu ulogu Mϕs u ovom okruženju, te stoga mogu poslužiti kao važni terapeutski ciljevi u ovom okruženju.

Slika 5: Smanjenje Mϕs smanjuje glomerularnu patologiju kod ICGN-a zavisnog od FH. Date su reprezentativne slike glomerula kod miševa koji su tretirani fiziološkom otopinom (a), apoferitinom (b) i apoferitinom+klodronatom tretiranih miševa s nedostatkom FH. U (A), sekcije su obojene C3 (zeleno) i IgG (crveno), dok (B) prikazuje dijelove obojene PAS-om. IgG depoziti koji su povećani tretmanom apoferitinom ostali su nepromijenjeni, dok su glomeruli izgledali bliže normalnim nakon iscrpljivanja makrofaga.

Nedostatak FH dovodi do povećane proizvodnje C5a. C5a se vezuje za C5aR1 signalizirajući Mos bubrezima gdje oni doprinose inflamatornom miljeu. Osim toga, naše studije su također pokazale da u ovom okruženju prekomjerne generacije C5a, inaktivacija C5a izgleda ograničava bolest [10]. Aktivacija Mos-a uzrokuje njihovu polarizaciju, ali ostaju u stanju kontinuuma [27]. Naši rezultati u ovoj studiji pokazuju da je glomerularna bolest u CSS smanjena kod fh−/− miševa kod kojih je Mϕs bio osiromašen u poređenju sa fh-/- miševima bez deplecije makrofaga. Prema tome, eliminacija ICGN-a izazvanog Mϕs kod fh−/− miševa smanjuje patologiju bolesti. Međutim, Mϕs su također neophodni za proces popravke, a budući da Mϕs mijenja stanja iz pro- u protuupalna stanja i obrnuto, naš će budući napor biti da shvatimo da li bi promjena Mϕs krajolika bez njihovog iscrpljivanja mogla promijeniti patologiju bolesti.

Mϕs igraju važnu ulogu u pokretanju i održavanju fibroze, a također su uključeni u supresiju, rješavanje i preokret fibroze [28]. Naši rezultati pokazuju povećanu ekspresiju CD204+ i CD206+ Mϕ markera što ukazuje na njihovu povećanu prisutnost u ovoj postavci. Budući da su ovi Mϕs glavni izvor profibrotskih molekula, naši rezultati koji pokazuju povećanje TGF -1 kao i MMP9 sugeriraju da bi ovi Mϕs mogli direktno i indirektno doprinijeti fibroznim procesima u ICGN-u posredovanom FH kroz različite mehanizme ( 1,3,8,44). TGF -1 može promijeniti fibrozu regulacijom citokina. Osim toga, TGF -1 modulira biosintezu i ekspresiju C3 i faktora B u monocitima [29], a izmjena komplementa u imunim stanicama i ćelijama bubrega može olakšati fibrozu tkiva [30]. Međutim, potrebno je dešifrirati točne interakcije između makrofaga i komplementa, mehanizam/e koji su uključeni, njihove uloge i kompartmentalizaciju tkiva [31]. Naše studije su pokazale smanjenu ekspresiju laminina kod miševa sa osiromašenim Mϕs u poređenju sa miševima sa dovoljnim Mϕ. Da bismo bolje razumjeli kako FH reguliše fibrozni proces, moramo identificirati specifične Mϕ podskupove koji su prisutni u ICGN-u posredovanom FH i razjasniti doprinose svake populacije podskupa. Ove studije su važne jer su komplementarne terapije postale klinička stvarnost. Inhibitori su se razvijali i nastavljaju da se razvijaju protiv različitih ciljeva u kaskadi komplementa koji će blokirati nizvodne korake u aktivacionom putu(ovima). Trenutno, jedan od inhibitora komplementa u kliničkoj upotrebi je anti-C5 antitijelo, Eculizumab [32]. Stoga, identifikovanje patogenih komponenti komplementa u bolesti i dopuna toga regulacijom Mϕs populacije nije trivijalna stvar.

Slika 7: Taloženje laminina uFH-deficijentni bubrezisa ICGN se smanjuje smanjenjem Mϕs. (a) qRT-PCR za TGFB, MMP9 i laminin izmRNA bubregaizolovan od miševa nakon 5 sedmica fiziološkog rastvora i apoferitina i 3 sedmice klodronata. Izraz je normaliziran na GAPDH (n=6/grupa). (b) Reprezentativne IF fotomikrografije za bojenje lamininom u bubrezima istih grupa miševa. ∗P < 0:01.

Ukratko, ovdje smo proučavali ulogu Mϕs u FH-ovisnom ICGN modelu. Rezultati se takođe mogu primeniti u okruženjima neregulisane aktivacije komplementa sa imunološkim kompleksima kao što su oni uočeni kod različitih bolesti uključujući lupus nefritis, IgA nefropatiju i membransku nefropatiju. Pokazujemo važnost i regulacije komplementa FH i Mϕs statusa u bolesti. Stoga, farmakološko ciljanje kaskade komplementa i Mϕs status kod IC-posredovanog GN ima potencijalnu kliničku relevantnost.

Reference

[1] T. Mijović, A. Zeitouni i I. Colmegna,"Autoimuni senzorneuralni gubitak sluha: sučelje otologija-reumatologija," Reumatologija, vol. 52, br. 5, str. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin i AP Robertson,"Holinomimetički morantel kao blokator otvorenih kanala Ascaris suum ACR-16 nAChR," Invertebrate Neuroscience, vol. 16, br. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath i FC Fer venza,"Bolest bubrega uzrokovana disregulacijom alternativnog puta komplementa: etiološki pristup," Journal of the American Society of Nephrology, vol. 26, br. 12, str. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Komplementa i autoimune glomerularne bolesti," Trenutni smjerovi u autoimunosti, vol. 7, str. 165– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"Sistem komplementa u regulaciji adaptivnog imuniteta," Nature Immunology, vol. 5, br. 10, str. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll i RB Sim,"Komplement u zdravlju i bolesti," Napredni pregledi isporuke lijekova, vol. 63, br. 12, str. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris i G. Remuzzi,"Pregled aktivacije i regulacije komplementa," Seminari iz nefrologije, vol. 33, br. 6, str. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"Vezanje faktora H za kompleks fizioloških polianiona i C3b na stanicama je poremećeno kod atipičnog hemolitičko-uremičkog sindroma," Journal of Immunology, vol. 182, br. 11, str. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe i RJ Quigg,"Faktor komplementa h ograničava taloženje imunih kompleksa i sprečava inflzapaljenje i ožiljci u glomerulima miševa s kroničnom serumskom bolešću," Journal of the American Society of Nephrology, vol. 16, br. 1, str. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang i RJ Quigg,"C5a receptor ima ključnu ulogu u imunokompleksnom glomerulonefritisu u faktoru komplementa H-defistari miševi," Kidney International, vol. 82, br. 9, str. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph i PM Henson,"Monocit difffunkcije erentacije i prezentovanja antigena," Nature Reviews. Imunologija, vol. 17, br. 6, str. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang i DC Harris,"Heterogenost makrofaga, fenotipovi i uloge u bubrezimafibroza," Kidney International. Dodatak, vol. 4, br. 1, str. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang et al.,"Bubrežni F4/80+ CD11c+ mononuklearni fagociti pokazuju fenotipske i funkcionalne karakteristike makrofaga u zdravlju i kod adriamicin nefropatije," Journal of the American Society of Nephrology, vol. 26, br. 2, str. 349–363, 2015.