Lamivudin poboljšava kognitivni pad kod SAMP8 miševa: Integracija in vivo farmakološke evaluacije i mrežne farmakologije Ⅱ

3|REZULTATI

3.1|3TC poništava gubitak tjelesne težine uzrokovan starenjem i poboljšava ocjenu starenja

Promjene tjelesne težine miševa u različitim eksperimentalnim grupama prikazane su na slici 1D. Rezultati su pokazali da su svi miševi dobili tjelesnu težinu za 4 sedmice. Pod standardnom ishranom, SAMP8 miševi tretirani 3TC dobijali su na težini brže od onih koji su tretirani vozilima. Rezultati rezultata starenja prije i nakon tretmana 3TC ili nosačem pokazali su da su prosječni rezultati starenja SAMP8 miševa bili relativno viši, dok je obrnuti trend postignut tretmanom 3TC (Slika 1E). Rezultati bodova vezanih za starenje svake grupe miševa prikupljeni posljednjeg dana eksperimenta pokazali su da su SAMP8 miševi tretirani 3TC pokazali značajna poboljšanja u nekoliko ocjena starenja, uključujući sjaj kože (p < 0. 01, t=3.901), neprozirnost rožnjače (p < 0,01, t=4.753) i čir rožnjače (p < 0,05 , t=6.125) (Dopunska tabela S1).

Kliknite ovdje da biste saznali kako cistanche do kognitivne funkcijeI nabavite proizvode na prodaju

3.2|3TC poboljšava kognitivni pad kod SAMP8 miševa

Provedeni su Morrisovi testovi vodenog lavirinta da bi se procijenilokognitivni efektiod 3TC (Slika 2). Rezultati putanja i eksperimenata usmjerene navigacije za pet uzastopnih dana pokazali su da su SAMR1 miševi pokazali značajno niže latencije bijega od onih kod SAMP8 miševa (p < 0.05, t=3. 194) (Slika 2A–B). Međutim, trećeg i petog dana, latencije bijega kod SAMP8 miševa tretiranih 3TC bile su značajno kraće u poređenju sa miševima SAMP8 tretiranim vozilom (p < 0,05, t=3.115), dok nije bilo statističkih podataka. otkriven je značaj u poređenju sa grupom SAMR1. Iako je brzina plivanja miševa SAMP8 tretiranih sa 3TC prvog dana bila značajno brža od one u druge dvije grupe, nije otkrivena značajna razlika između tri eksperimentalne grupe u sljedeća 4 dana eksperimenata (slika 2C).

Rezultati ispitivanja sonde i putanje 6. dana pokazali su da su i SAMR1 i SAMP8 grupa tretirana 3TC provele više vremena u ciljnom kvadrantu od grupe SAMP8 tretirane vozilom (p < 0.{{ 19}}5, t=4.512; Slika 2D–E). Štaviše, broj ukrštanja je takođe bio veći i kod miševa SAMR1 i kod grupe koja je tretirana 3TC SAMP8 nego u grupi koja je tretirana vehikulom SAMP8, sa statistički značajnom razlikom otkrivenom između grupa sa i bez tretmana 3TC (p < 0.05, t=5.79; Slika 2F). SAMP8 grupa tretirana nosačem pokazala je najveće latencije za pronalaženje platforme pod vodom među svim grupama sa statistički značajnom razlikom otkrivenom između grupa koje su tretirane i netretiranih 3TC (p < 0,05, t=4.415; Slika 2G).

SLIKA 2 Efekti tretmana 3TC na poboljšanje kognitivnog pada kod SAMP8 miševa. (A) Mapa putanje miševa nakon ulaska u vodu iz drugog kvadranta tokom testa pozicioniranja navigacije 5. dan. (B) Izbjegavanje kašnjenja u eksperimentu pozicioniranja navigacije za svaku grupu. (C) Brzina plivanja miševa u svakoj grupi u testovima ponašanja. (D) Mapa putanje miševa u eksperimentu istraživanja svemira. (E) Procenat ukupnog vremena provedenog u ciljnom kvadrantu tokom ispitivanja sonde u svakoj grupi. (F) Broj puta kada su miševi prešli platformu u svakoj grupi u ispitivanjima sonde. (G) Vrijeme bijega do cilja. Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SD. Studentov t-test: *p < 0.05, **p < 0.01 i ***p < 0,001. ns: nema statističke značajnosti. Crne zvjezdice ili "ns" predstavljaju poređenje sa SAMR1 plus grupom vozila. Crvene zvjezdice ili "ns" predstavljaju poređenje sa grupom vozila SAMP8 plus. Svaka grupa se sastojala od najmanje osam životinja

3.3|Ciljni geni 3TC otkriveni kvantitativnim PCR-om u realnom vremenu

Prethodne studije su pokazale da 3TC može smanjiti SASP i IFN-I signale odgovora na ćelije glatkih mišića starijih miševa, ali nema izvještaja o povezanim genima neuroloških degenerativnih bolesti u moždanom tkivu. Da bismo istražili učinak 3TC na mozak miševa, istražili smo ekspresiju deset gena kandidata od interesa u hipokampusu i korteksu miševa koristeći kvantitativni PCR u realnom vremenu. U hipokampusu (Slika 3A), značajno povećani geni za starenje (grupe SAMR1 u odnosu na SAMP8 tretirane vehikulom) uključivali su jedan gen povezan s transpozonom (L1-ORF1, p < 0. 05), tri gena odgovora na IFN-I (Ifna, Irf7 i Oas1, p < {{20}}.05), dva gena povezana s AD (PS{ {19}} i APP, p < 0.01) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1, p < 0.01), dok je značajno smanjen -regulisani geni za 3TC tretman (grupe SAMP8 tretiranih vehikulom naspram SAMP8 tretiranih sa 3TC) uključivali su jedan gen vezan za transpozon (L1-ORF2, p < 0,05), dva gena odgovora na IFN-I (Ifna i Oas1, p < 0,001) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1, p < 0,01). Slični rezultati su dobijeni u korteksu, iako je regulacija gena povezanog sa AD smanjena tretmanom 3TC u korteksu u poređenju sa hipokampusom (p < 0,05; Slika 3B).

3.4|3TC ublažava morfološke abnormalnosti i gubitak neurona u hipokampusu SAMP8 miševa uzrokovane starenjem

Primijenili smo i H&E i Nissl metode bojenja kako bismo istražili morfološke promjene uzrokovane 3TC u hipokampusu, koji je bio ključno područje kognicije i pamćenja. U poređenju sa grupom SAMR1 tretiranih vehikulom, grupa SAMP8 tretirana vehikulom pokazala je povećanu stopu klirensa neurona hipokampusa, blago poremećen raspored ćelija, nuklearnu koncentraciju pronađenu u nekim neuronima i blagi edem hipokampusa. Ova oštećenja su poboljšana u grupama koje su tretirane 3TC (Slika 4A). Gubici Nissl-pozitivnih vitalnih neuronskih ćelija sa tipičnim neuropatološkim promjenama uočeni su u SAMP8 grupi na osnovu Nissl bojenja, dok su ove promjene djelimično poništene u grupi SAMP8 tretiranih sa 3TC (Slika 4B-C). Smrt neurona u hipokampusu takođe je otkrivena TUNEL bojenjem sa najviše i najmanje TUNEL pozitivnih ćelija (zeleno) uočeno u grupi SAMP8 tretiranoj vehikulom i SAMR1 grupi tretiranoj vehikulom, respektivno, dok je grupa od SAMP8 tretiran sa 3TC je otkriven značajno manje od grupe SAMP8 tretiranih vehikulom (Slika 4D-E).

3.5|Pretpostavljeni ciljevi 3TC

Mrežna farmakološka analiza otkrila je ukupno 269 proteina kao predviđene mete za 3TC, od kojih je 164 identificirano u Pharmmapper bazi podataka i 105 u ChEMBL bazi podataka, respektivno (dodatna tabela S3). PPI mreža je konstruisana na osnovu ciljnih gena 3TC koristeći String bazu podataka sa ukupno 32 jezgra čvora u mreži identifikovanih kao ključne mete 3TC kod SAMP8 miševa (Slika 5A). Koristili smo String 9.1 da oponašamo interakcije između ključnih ciljnih proteina 3TC da identifikujemo tri grupe proteina sa sličnim funkcijama (Slika 5B).

3.6|Analiza obogaćivanja ključnih ciljnih mreža 3TC

3.6.1|GO Analysis

Analiza GO obogaćivanja ciljnih gena identifikovanih pod tretmanom 3TC upotrebom STRING otkrila je ukupno 550 bioloških procesa sa p < 0.05 (Slika 6A; Dodatna tabela S4), kao što je odgovor na kemijsku kiselinu, odgovor na reaktivne vrste kisika i negativnu regulaciju apoptotičkog procesa. GO analiza je takođe identifikovala ukupno 23 ćelijske komponente sa p < 0,01, kao što su endomembranski sistem, citoplazmatski vezikula, vezikula, citoplazmatski deo i deo plazma membrane (dopunska tabela S5), dok je ukupno 69 molekularnih funkcija identifikovanih pomoću GO analize su grupisane u ukupno 19 kategorija (dopunska tabela S6). Vrijedi napomenuti da je termin vezivanja tau proteina, za koji se mislilo da je povezanAlchajmerova bolest, pokazao je značajan odnos sa 3TC (p < 0.05).

3.6.2|Metabolički putevi 3TC ciljnih mreža

Ukupno 109 značajnih puteva liječenja je pregledano KEGG analizom (p < 0.05; Slika 6B; Dodatna tabela S7) sa mnogim putevima povezanim s rakom, uključujući putevi u raku, hemijska kancerogeneza, rak prostate, proteoglikani kod raka i mikroRNA kod raka. Tri puta za koje je otkriveno da su povezani sa neuroinflamacijom, ćelijskom smrću i transdukcijom neuronskog signala uključivali su signalizaciju estrogena (p < 0.0001), fosfor inozitid 3-kinazu i protein kinazu B (PI3K/Akt) (p < 0,0001), i neuroaktivni signalni putevi interakcije ligand-receptor (p < 0,001).27–29

3.6.3|Način povezivanja

Docking studije su sprovedene između 3TC i tri odabrana potencijalna cilja, odnosno EGFR koji predstavlja signalni put estrogena, AKT1 predstavlja P13K/Akt signalni put i ADRB2 koji predstavlja signalni put neuroaktivne interakcije ligand-receptor. Rezultati analize načina vezivanja pokazali su (slika 6C) da su aminokiselinski ostaci Thr854, Asn842, Arg841 i Glu762 receptorskog proteina EGFR stupili u interakciju s malim molekulima 3TC liganda da formiraju vodikove veze, dok su aminokiselinski ostaci Lys55, Val30, A Met111, Val158, Asn114, Leu168, Ser155, Asp169, Lys153, Asn156s i Gly35 formirali su hidrofobne interakcije sa malim molekulima 3TC liganda. Aminokiselinski ostaci Asp292, Glu191, His194, Glu198s i Thr195 receptorskog proteina AKT1 formirali su interakciju vodonične veze sa 3TC, dok su aminokiselinski ostaci Phe179, Leu295, Glu198 i Lys179 formirali hidrofobnu interakciju sa 3TC. Ostaci aminokiselina Asp331 i Phe332 ADRB2 su u interakciji sa 3TC formirali vodikovu vezu, dok su aminokiselinski ostaci Phe336, Ala335, Val54, Ala57, Ile58, Leu64, Asn69, Ile72 i Pro330 formirali hidrofobnu interakciju ABRB2. Ovi rezultati studija pristajanja pružili su dokaze o vezivanju 3TC za njegove mete, što je bilo važno za razumijevanje mehanizma djelovanja lijeka. Dalje smo proveli in vitro eksperimente kako bismo potvrdili rezultate bioinformatičke analize

SLIKA 3 Efekti tretmana 3TC na ekspresiju gena kandidata u tkivima mozga miša. Miševi su tretirani nosačem ili 3TC kontinuirano tokom 4 sedmice. Za sve uslove, ekspresija L1-ORF1 i L1-ORF2, tri reprezentativna gena za IFN-I odgovor (Ifna, Irf7 i Oas1), dvaGeni povezani sa Alchajmerovom bolešću(PS{{0}} i APP) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1) u hipokampusu (A) i korteksu (B) procijenjeni su kvantitativnim PCR-om u realnom vremenu sa profiliranjem ekspresije gena prikazanih na histogramu. Studentov t-test: *p < 0.05, **p < 0,01 i ***p < 0,001. ns: nema statističke značajnosti. Crne zvjezdice ili "ns" predstavljaju poređenje sa SAMR1 plus grupom vozila. Crvene zvjezdice ili "ns" predstavljaju poređenje sa grupom vozila SAMP8 plus.

3.7|3TC štiti HT22 ćelije od citotoksičnosti izazvane FA regulacijom različitih molekula

Da bismo istražili efekte 3TC kao inhibitora reverzne transkriptaze na starenje neurona in vitro, inducirali smo starenje u HT22 stanicama sa FA. Rezultati su pokazali da je LINE-1 aktivirana u senescentnim neuronima, a ovaj trend je preokrenuo 3TC (Slika 7A-B). Pored toga, 3TC je pokazao antagonistički efekat na ćelijsku smrt izazvanu FA (slika 7C). Kao što se i očekivalo, stimulacija TH22 ćelija sa FA tokom 24 h rezultirala je značajnom inhibicijom ekspresije EGFR, p-AKT1 i ADRB2 (p < 0.001), u poređenju sa netretiranom kontrolom , dok je istovremeni tretman sa 3TC doveo do značajno povećane ekspresije FA induciranog EGFR, p-AKT1 i ADRB2 (p < 0,001; Slika 7D,E).

4|DISKUSIJA

Kognitivni pad, posebno gubitak pamćenja, obično je povezan s prirodnim starenjem. Theefekti starenjasu posebno izražene u prefrontalnom korteksu i hipokampusu, područjima mozga koja su kritično uključena u kogniciju i raspoloženje.30 SAMP8 miševi su izvedeni iz SAM-P/2 linije kao brzo starenje mišjeg modela demencije. Prethodna studija je pokazala da su SAMP8 miševi ispoljili kognitivni pad povezan sa starenjem sa kratkim životnim vekom, pokazujući progresivni deficit učenja i pamćenja, kao i neuropatološka obeležja demencije u prefrontalnom korteksu i hipokampusu.31 Životni vek SAMP8 miševa je skoro polovina tog SAMR1, koji su korišteni kao kontrole za SAMP8.32 U našoj studiji, miševi SAMP8 su odabrani kao idealan životinjski model za istraživanje opadanja kognitivnih funkcija tokom starenja, a homologni miševi koji se normalno razvijaju SAMR1 korišteni su kao anti- kontrolna grupa starenja

SLIKA {{0}}TC smanjuje neuronske povrede u hipokampusu SAMP8 miševa. (A) Fotomikrografije H & E obojenih sekcija hipokampusa za svaku grupu miševa (bar=50 μm). Crne strelice označavaju koncentrisane jezgre, a plave strelice označavaju područja u kojima su neuroni ozbiljno izgubljeni i neuređeni. (B) Identifikacija neuronskog preživljavanja Nissl bojenjem u hipokampusu (bar=20 μm). (C) Količina zdravih neuronskih ćelija u svakom vidnom polju sa gusto obojenim Nisslovim tijelima. (D) Slike apoptotičkih ćelija označenih TUNEL (zelenim) testom u svakoj grupi miševa (bar=20 μm). (E) Kvantifikacija TUNEL-pozitivnih ćelija u svakom vidnom polju. Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SD. Studentov t-test: ***p < 0,001. Crne zvjezdice predstavljaju poređenje sa SAMR1 plus grupom vozila. Crvene zvjezdice predstavljaju poređenje sa grupom vozila SAMP8 plus.

Starenje obično uzrokuje gubitak težine tijela zbog trošenja kostiju, atrofije mišića i disfunkcije u probavnom sistemu.33 Naši rezultati su pokazali da je 3TC djelimično ublažio trend gubitka težine. U poređenju sa netretiranim miševima, SAMP8 miševi tretirani sa 3TC pokazali su tendenciju povećanja telesne težine sa godinama. Ovi rezultati su u skladu s onima koji su prethodno izneseni, što sugerira da 3TC poboljšava zdravlje tijela miševa.34 Kako bi se objektivno i precizno procijenili efekti tretmana 3TC na poboljšanjekarakteristike starenjamiševa, snimili smo rezultate starenja tokom tretmana. Naši rezultati su pokazali da s povećanjem vremena tretmana 3TC, SAMP8 miševi pokazuju tendenciju usporavanja starenja. Konkretno, tretman 3TC je igrao značajnu ulogu u poboljšanju sjaja kože, neprozirnosti rožnjače i čira rožnjače uzrokovanih starenjem kod SAMP8 miševa. Ovi rezultati sugeriraju da cilj 3TC protiv starenja postoji na koži i tkivima rožnjače. Prethodne studije su potvrdile da je L1 korišćen kao cilj za poboljšanje degenerativnih bolesti uzrokovanih starenjem, dok su inhibitori reverzne transkriptaze uključujući 3TC korišćeni kao prenosivi inhibitori L1.13 Do danas, molekularni mehanizam uloge L1 u nervnom sistemu i mogućnost lečenja bolesti nervnog sistema kao što je AD regulacijom L1 nisu ubedljivo objašnjene. Nadalje, studije su sugerirale da genetska rekombinacija u APP genu može biti ključni događaj u patogenezi sporadične AD, koja je vrsta demencije.15 Rekombinacija neuronskih gena nije prijavljena, dok njena pojava i oštećenja DNK i RNK intermedijara zahtijevaju aktivnosti reverzne transkriptaze proteinskih funkcija. Stoga, inhibitori reverzne transkriptaze kao što je 3TC mogu igrati ulogu u prevenciji i liječenju AD koji uzrokuje kognitivni pad. Ova spekulacija je potvrđena našim rezultatima Morrisovih eksperimenata u vodenom lavirintu koji su istraživali efekte 3TC na kognitivne sposobnosti kod SAMP8 miševa.

SLIKA 7 Eksperimenti in vitro potvrdili su ključne molekule 3TC protiv neuronske degeneracije. Starenje HT22 ćelija mišjeg neurona je indukovano formaldehidom (FA). (A) Detekcija imunofluorescencije LINE-1 ORF1p u kontrolnim, FA i FA plus 3TC grupama (bar=20 μm). (B) Kvantifikacija imunofluorescentne analize u (A). (C) Kvantifikacija preživjelih neurona po ×400 polju u različitim grupama. (D) EGFR, p-AKT1 i ADRB2 detektovani su Western blot analizom. (E) Kvantifikacija Western blot analize u (D). Studentov t-test: ***p < 0,001. Crne zvjezdice predstavljaju poređenje sa kontrolnom grupom. Crvene zvjezdice predstavljaju poređenje sa FA grupom

Naši rezultati testova Morrisovog vodenog lavirinta pokazali su da su nakon 5 dana treninga plivanja, SAMP8 miševi koji su oralno uzimali 3TC uspjeli pronaći skrivenu platformu brže od netretiranih SAMP8 miševa. S obzirom da su miševi tretirani 3TC pokazali veću tjelesnu težinu, što može biti povezano s brojem skeletnih mišića, bilježili smo brzinu plivanja svake grupe miševa kako bi se eliminisao učinak mišićne snage. Iako su miševi koji su uzimali 3TC plivali brže od ostalih grupa prvog dana treninga plivanja, razlika se nije zadržala u naredna 4 dana. Stoga isključujemo utjecaj mišićne snage na rezultate testova vodenog lavirinta. Slično, rezultati eksperimenta istraživanja svemira 6. dana pokazali su da su SAMP8 miševi tretirani 3TC pokazali tendenciju aktivnije pronalaženja originalne platforme od netretiranih miševa. Ovi rezultati upućuju na to da tretman 3TC poboljšava kognitivne i memorijske padove uzrokovane starenjem kod SAMP8 miševa. Da bismo istražili potencijalne molekularne mehanizme 3TC koji poboljšava starenje mozga, primijenili smo kvantitativni PCR u realnom vremenu za mjerenje nivoa mRNA gena kandidata u tkivima hipokampusa i kortikala svake grupe miševa. Naši rezultati sugeriraju da tretman 3TC inhibira L1 induciran starenjem u mozgu i smanjuje ekspresiju gena povezanih s IFN, SASP i AD, što ukazuje da su signalni putevi aktivirani starenjem potisnuti tretmanom 3TC. Naši rezultati sugeriraju da 3TC može poboljšati inteligenciju i fenotipove starenja tako što inhibira transpoziciju L1 kako bi na kraju poboljšao kroničnu upalu u mozgu uzrokovanu starenjem. Napominjemo da je potrebno više studija kako bi se pružila snažna podrška ovim molekularnim mehanizmima poboljšanja starenja mozga 3TC tretmanom otkrivenim u ovoj studiji. Trenutno se u našoj laboratoriji provode istraživanja farmakološkog mehanizma inhibitora reverzne transkriptaze na nervnim ćelijama koristeći in vitro modele glijalnih i neuronskih ćelija starenja.

Naši rezultati eksperimenata bojenja HE i Nissl pokazali su da 3TC sanira gubitak neurona u hipokampusu uzrokovanstarenje, konačno ublažavajući neurodegeneraciju spašavanjem neurona od smrti. Osim toga, uočili smo više apoptotičkih ćelija u hipokampusu SAMP8 miševa u odnosu na SAMR1 miševe. Naši rezultati su dalje pokazali da tretman 3TC značajno smanjuje broj apoptotičkih ćelija, vjerovatno zbog direktnog efekta 3TC na proteine ​​povezane s apoptotičkim putem ili druge uzvodne molekule.

Učenje i pamćenje su važne kognitivne sposobnosti koje uključuju složenu mrežu funkcionalnih regija mozga koje zajedno rade na upravljanju i obradi informacija. Stoga, sva jedinjenja koja pokazuju efekte na mozak treba uzimati oprezno s potpuno razumijevanjem njihovih potencijalnih ciljeva. Pristup mrežne farmakologije je sistematska analitička tehnologija koja se koristi za istraživanje mreža interakcija više faktora kao što su bolesti, lijekovi, geni i proteinski ciljevi. Proveli smo mrežne farmakološke analize, uključujući PPI i analize obogaćivanja, na osnovu ukupno 269 potencijalnih ciljeva (sa 32 jezgrena cilja) 3TC označenih korištenjem Pharmmapper i ChEMBL baza podataka. Naši rezultati su pokazali da 3TC može igrati važnu ulogu u održavanju normalnih funkcija nervnog sistema putem signalizacije estrogena i signalnih puteva interakcije PI3K/Akt i neuroaktivnih ligand-receptor, što dalje objašnjava efekte 3TC na zaštitu normalnih nervnih funkcija. i inhibiranje smrti neuronskih ćelija. Odabrani su reprezentativni molekuli u relevantnim putevima za izvođenje molekularnog spajanja i in vitro eksperimenata kako bi se potvrdili rezultati bioinformatičke analize. Da bi se pružilo više dokaza koji podržavaju ove nagađane molekularne mehanizme 3TC koji rade sinergistički sa nervnim sistemom, neophodne su dalje studije kako bi se identifikovale tačne komponente uključene i regulisane u ovim putevima.

Kao dioantiretrovirusna terapija(ART), 3TC je opsežno proučavan proteklih godina i odobren je za liječenje kroničnog virusa hepatitisa B (HBV).35 Mora se napomenuti da ako se 3TC koristi za liječenjeneurodegenerativne lezije povezane sa starenjem, potrebno je uzeti u obzir njegovu farmakološku toksičnost zbog slabog imunološkog sistema kod starijih populacija i pacijenata oboljelih od raka. Studije su pokazale da uobičajene nuspojave 3TC uključuju infekciju gornjih disajnih puteva, mučninu, povraćanje, bol u trbuhu i dijareju. Stoga bi klinička primjena 3TC trebala biti izuzetno oprezna. Trenutno, 3TC se može koristiti kao farmakološko sredstvo za proučavanje molekularnih mehanizama, ali ne i kao pretpostavljena terapija. Ukratko, naša studija je po prvi put pokazala da 3TC poboljšava kognitivne funkcije SAMP8 miševa tako što preokreće starenje mozga, pružajući eksperimentalne dokaze za upotrebu inhibitora reverzne transkriptaze kao potencijalnog liječenja neurodegenerativnih bolesti.

ZAHVALNICA

Ovaj rad je podržala Nacionalna fondacija za prirodne nauke Kine (81670942, 81470704 i 81972057).

SUKOB INTERESA Autori izjavljuju da nemaju sukob interesa.

REFERENCE

1. Baulac S, Lu H, Strahle J, et al. Povećana DJ-1 ekspresija pod oksidativnim stresom i inMozak od Alchajmerove bolesti. Mol Neurodegener. 2009;4:12.

2. Delgado-Lara DL, González-Enríquez GV, Torres-Mendoza BM, et al. Utjecaj primjene melatonina na gene sata PER1 i BMAL1 kod pacijenata saParkinsonova bolest. Biomed Pharmacother. 2020;129:110485.

3. Agatonović-Kustrin S, Kettle C, Morton DW. Molekularni pristup u razvoju lijekova za Alchajmerovu bolest. Biomed Pharmacother. 2018;106:553-565.

4. Khosla S, Farr JN, Tchkonia T, Kirkland JL. Uloga ćelijskog starenja u starenju i endokrinim bolestima. Nat Rev Endocrinol. 2020;16:263-275.

5. Zolfaghari MA, Karimi A, Kalantari E, et al. Komparativna studija imunoreaktivnosti proteina dugo interspergiranih elemenata{1}} kod malignih bolesti kože. BMC Cancer. 2020;20:567.

6. Sae-Lee C, Biasi J, Robinson N, et al. Obrasci metilacije DNK LINE-1 i Alu za predsimptomatsku demenciju kod dijabetesa tipa 2. PLoS One. 2020;15:e0234578. 7. Baeken MW, Moosmann B, Hajieva P. Aktivacija retrotranspozona od strane distresiranih mitohondrija u neuronima. Biochem Biophys Res Commun. 2020;525:570-575. 8. Jones RB, Garrison KE, Wong JC, Duan EH, Nixon DF, Ostrowski MA. Inhibitori nukleozidnih analoga reverzne transkriptaze različito inhibiraju retrotranspoziciju ljudske LINE{13}}. PLoS One. 2008;3:e1547