JAK inhibitor blokira signalizaciju JAK-STAT-APOL1 u glomerularnim ćelijama i podocitopatiju u organoidima ljudskog bubrega izazvanu COVID-19-citokinom

Abstract

Uzroci infekcije COVID-19kolaps glomerularnih kapilaraigubitak podocita, završava ateška bolest bubregapozvaoNefropatija povezana s COVID-19-om(COVAN). Osnovni mehanizam COVID-19 nije poznat. Pretpostavili smo da citokini inducirani COVID-19 pokreću ekspresiju patogenog APOL1 putem JAK-STAT signalizacije, što rezultira gubitkom podocita i COVAN fenotipom. Ovdje smo, na osnovu devet slučajeva COVAN dokazanih biopsijom, po prvi put pokazali da APOL1 protein je obilno izražen u podocitima iglomerularni endotelćelije (GEC) COVAN bubrega, ali ne u kontrolama. Štaviše, većina (77,8%) pacijenata sa COVAN-om nosila je dvaAPOL1alela rizika. Pokazali smo da rekombinantni citokini inducirani SARS-CoV-2 djeluju sinergistički na pokretanjeAPOL1ekspresija putem JAK-STAT puta u primarnim ljudskim podocitima, GEC-ima imikroorganoidi bubregaizvedeno iz nosioca dvaAPOL1alele rizika, ali ih je blokirao JAK1/2-inhibitor, baricitinib. Po prvi put smo pokazali da JAK-STAT-APOL1 signalizacija izazvana citokinom smanjuje održivost bubrežnih organoidnih podocita, ali je spašena baricitinibom. Naši rezultati zajedno potvrđuju zaključak daCitokini izazvani COVID-19-idovoljni su za pokretanje podocitopatije povezane s COVAN putem JAK-STAT-APOL1 signalizacije i taj JAK-inhibitor bi mogao blokirati ovaj patogeni proces. Ovi nalazi sugeriraju da JAK-inhibitori mogu imati terapeutske prednosti u liječenju citokin-indukovane APOL1-posredovane podocitopatije.

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kupite za više detalja o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

NABAVITE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE SA 25% EHINAKOZIDA I 9% AKTEOZIDA ZA INFEKCIJU BUBREGA

Uvod

Zatajenje bubrega je razorna komplikacijaCOVID-19 infekcija. Do 50% bolničkih i 70% prijema na odjele intenzivne njege COVID-19 je komplikovano akutnom ozljedom bubrega (AKI), što zauzvrat povećava smrtnost za 30-50% (1, 2). Serija slučajeva biopsije bubrega otkrila je da je kolapsirajuća glomerulopatija najčešća histopatološka dijagnoza kod AKI-ja povezane s COVID-19- (3). Karakteristična karakteristika kolapsirajuće glomerulopatije povezane sa COVID-19- (skraćeno COVAN) je njena skoro isključiva sklonost ka Afroamerikancima ili crncima koji nose dva alela rizika Apolipoproteina L1 (APOL1) (3, 4). Dva alela rizika (nazvana G1 i G2) pojavila su se kao kodirajuće varijante u genu APOL1 i daju zaštitu od afričke tripanosomijaze. Međutim, nošenje G1G1, G2G2 ili G1G2 (koji se nazivaju visokorizični genotipovi) povećava rizik od niza bolesti bubrega i objašnjava veći dio rizika od nedijabetičke bolesti bubrega među Afroamerikancima (5-8). Procjenjuje se da 13% Afroamerikanaca nosi visokorizične APOL1 genotipove (7). Tokom pandemije COVID-19, studije su otkrile da je izvanrednih 92% slučajeva COVAN dokazanih biopsijom bilo kod nosilaca visokorizičnih APOL1 genotipova, od kojih je 61% zahtijevalo dijalizu prilikom prezentacije (3, 9). Ovi nalazi utvrđuju da su varijante APOL1 glavni faktor koji doprinosi rasnom disparitetu u zdravstvenim ishodima COVID{39}}. Uprkos ovoj impresivnoj povezanosti, ćelijski mehanizam koji povezuje visokorizične APOL1 genotipove sa infekcijom SARS CoV{42}} i patogenezom kolapsirajuće glomerulopatije COVAN-a ostaje nepoznat.

Snažna epidemiološka povezanost između visokorizičnog genotipa APOL1 i COVAN-a dovela je do hipoteze da je COVID-19-inducirao ekspresiju APOL1 G1 ili G2 u podocitima i glomerularnim endotelnim stanicama - ćelije bubrega koje su utjecale na kolaps glomerulopatije - pokreću patogenezu COVAN. Ovu hipotezu podržavaju nedavni izvještaji da je transgena prekomjerna ekspresija alela rizika APOL1 u podocitima miša ili glomerularnim endotelnim stanicama uzrokovala podocitopatiju, endoteliopatiju, glomerulopatiju i kliničke manifestacije zatajenja bubrega (10-14). Ovi modeli bolesti miševa sugeriraju da bi mehanizam koji leži u osnovi ekspresije APOL1 izazvane COVID-19-bio potencijalna terapijska meta za COVID-19. Međutim, postoje dvije važne nepoznanice. Prvo, nije poznato da li je ekspresija proteina APOL1 povećana u glomerulima pacijenata sa COVAN-om. Drugo, nije poznato da li SARS-CoV-2 indukuje ekspresiju APOL1 direktno virusnom infekcijom ćelija bubrega ili indirektno preko efekata SARS-CoV-2-indukovane citokinske oluje.

Neuspjeh otkrivanja SARS-CoV-2 ubiopsije bubrega COVAN-apacijenti pružaju indirektnu podršku hipotezi da je COVAN vjerovatno rezultat efekata citokinske oluje, a ne direktne virusne infekcije parenhima bubrega. Povremeno otkrivanje virusnih čestica SARS-CoV{1}} bilo je u obdukcijskim uzorcima bubrega kod kojih se nije mogao isključiti zbunjujući efekat autolize tkiva (3, 4, 15, 16). Zapaženo je da je nekoliko upalnih citokina i hemokina povećano userumi pacijenata sa COVID-19i/ili COVAN (4, 17, 18). Ova lista uključuje citokine kao što su interferoni alfa, beta, gama i TNF za koje se ranije znalo da pojačavaju ekspresiju APOL1. Međutim, lista također uključuje nekoliko inflamatornih citokina koji su snažno regulirani infekcijom COVID-19. Nije poznato da li ovi citokini imaju aditivne, sinergističke ili antagonističke efekte na ekspresiju APOL1 i pridruženu podocitopatiju.

U trenutnoj studiji, riješili smo ove praznine u znanju koristeći biopsije bubrega dobijene od devet pacijenata sa COVAN-om i dva ljudska kontrolna bubrega kako bismo istražili da li je i gdje APOL1 protein eksprimiran u COVAN-u i kontrolnim bubrezima. Profilirali smo osamnaest citokina izazvanih COVID-19- kako bismo identificirali osam citokina koji su bili dovoljni, u odsustvu SARS-CoV-2, da sinergistički induciraju ekspresiju APOL1 u primarnim ljudskim glomerularnim stanicama i uzrokuju podocitopatiju u mikro- organoidi. Ova studija ne samo da nudi prvi dokaz u eksperimentalnom modelu izvedenom od ljudi da COVID-19 citokinska oluja inducira ekspresiju APOL1 i podocitopatiju, već također identificira uobičajeni signalni put koji posreduje u patogenim efektima. Ova studija ima implikacije koje bi mogle utjecati na strategije za skrining i liječenje COVID-19 kod pacijenata crne rase i latinoameričkih pacijenata. To postavlja pitanja o sigurnosti dodatnih interferona kao COVID-19 terapije kod crnaca i hispanoameričkih osoba koje nose visokorizične APOL1 genotipove (19, 20).

Rezultati

Ekspresija APOL1 je pojačana u podocitima i glomerularnim endotelnim ćelijama pacijenata COVAN. Da bismo ispitali da li pacijenti s dijagnozom COVAN dokazanom biopsijom imaju povećanu ekspresiju proteina APOL1 u svojim podocitima i glomerularnim endotelnim stanicama (GEC), izvršili smo imunohistokemijsko obojenje APOL1, sinaptopodina (protein diferenciranih podocita povezan s aktinom) i CD31 (marker endotelnih ćelija) na biopsijama bubrega dva pacijenta sa COVAN dijagnozom (Slika 1). Ekspresija APOL1 bila je obilna u glomerulima oba slučaja 1, koji je biopsiran deset mjeseci nakon dijagnoze COVID-19 (Slika 1A-F), i slučaja 6, koji je biopsiran devet dana nakon dijagnoze COVID-19 (Slika 1G-L). Kod oba pacijenta, bilo je jako APOL1 bojenje u podocitima pozitivnim na sinaptopodin (strelica; slika 1B, E, H i K) i duž CD31-pozitivnog glomerularnog endotela (vrh strelice; slike 1C, F, I i L ). Prisutnost proteina APOL1 u podocitima i GEC-ima u periodu od 9 dana i 10 mjeseci nakon dijagnoze COVID-19 infekcije sugerira da se ekspresija APOL1 inducira rano i da može perzistirati u glomerulima nekoliko mjeseci, dugo nakon pokretanja COVID{{ 27}} infekcija je riješena.

Ekspresija APOL1 je pojačana u biopsijskom tkivu slučajeva COVAN, ali ne i u kontrolama. Kako bismo dalje procijenili generalizabilnost ovih imunohistohemijskih nalaza, identifikovali smo ukupno devet slučajeva COVAN sa dostupnim biopsijskim tkivom za genotipizaciju i IHC (Slika 2) kao i dva kontrolna pacijenta, uključujući jednu kontrolu obdukcije pacijenta koji je imao COVID{{2 }} infekcije, ali nije razvio AKI (Slike 2B i 2C). Klasične histopatološke karakteristike COVAN-a uključivale su kolaps glomerularnog kapilarnog pramena sa hipertrofijom i proliferacijom susjednih podocita, često s kapljicama reapsorpcije proteina podocita koje su povezane s glomerularnom proteinurijom (gipka slika 1 i gipka slika 2). APOL1 IHC bojenje nije bilo u svim glomerulima kontrola (slika AC), ali je prisutno u glomerulima svih devet pacijenata sa COVAN-om (slika 2D-X). Bojenje APOL1 bilo je obilno u citoplazmi podocita, GEC-a i u nekim parijetalnim epitelnim ćelijama (Slika 2N, heširani krug) (Slika 1, Slika 2 i Suppl Slika 3). APOL1 protein se mogao vidjeti u glomerulima sa otvorenim kapilarima, kao iu područjima glomerularnog kolapsa. Očigledno prisustvo proteina APOL1 unutar nekog lumena kapilara vjerovatno predstavlja cirkulirajući APOL1, koji proizvodi prvenstveno jetra (21). Štaviše, APOL1 je također viđen u peritubularnim kapilarama i u oštećenim tubularnim epitelnim ćelijama (zvjezdice). Specifičnost i značaj ovog posljednjeg nalaza je nejasan. Značajno je da je sedam od devet slučajeva COVAN-a nosilo visokorizični genotip APOL1 (Slika 2D-V). Druga dva slučaja, slučaj 9 i slučaj 4, nosili su niskorizične G0G0 genotipove (Slike 2W i 2X). Uprkos tome što je genotip niskog rizika, ekspresija APOL1 u slučaju 9 bila je uporediva sa onim u sedam slučajeva visokog rizika (Slika 2W). Postojala su samo dva glomerula u slučaju 4 biopsije bubrega, a ekspresija APOL1 je bila niža u ovim glomerulima (slika 2X). Zajedno, ovi nalazi pokazuju da je bazalna ekspresija APOL1 bubrega niska u glomerulima pojedinaca bez glomerularne ozljede, čak i kada pojedinac ima infekciju COVID{41}}; dok ekspresija APOL1 postaje povećana u podocitima i GEC-ima u okruženju COVAN u 89% naših slučajeva.

Kao što je prikazano u Tabeli 1, sedam od devet pacijenata (77,8%) sa COVAN dokazanim biopsijom se identificiralo kao Afroamerikanac. Šest od ovih sedam pacijenata (85,7%) imalo je visokorizične APOL1 genotipove (četiri G1G1, jedan G1G2, jedan G2G2). Poređenja radi, 13% Afroamerikanaca nosi visokorizični APOL1 genotip. Preostala dva pacijenta su se identifikovala kao belci Hispanoamerikanci, ali jedan od njih je takođe nosio visokorizični genotip APOL1. Ukupno, sedam od devet COVAN pacijenata (77,8%) imalo je visokorizične APOL1 genotipove. Srednja starost slučajeva bila je 51 godina (raspon 37-60). Svih devet slučajeva razvilo je akutnu povredu bubrega i imalo je različite stepene proteinurije, u rasponu od subnefrotskog do nefrotskog raspona (1.4- 14 g/24 sata). Većina biopsija je obavljena najmanje 1 mjesec nakon infekcije COVID-19, s izuzetkom slučaja 6 koji je biopsiran 9 dana nakon pozitivnog PCR testa. Biopsija jednog pacijenta nije obavljena do 10 mjeseci nakon infekcije koja je posljedica nepotpunog oporavka. Svih devet biopsija pacijenata pokazalo je kolapsirajuću glomerulopatiju, tubularne ozljede i intersticijsku upalu. Endotelne tubularne retikularne inkluzije nisu uočene ni u jednom slučaju. Značajno je da u dvije COVAN biopsije koje su testirane na direktnu SARS-CoV-2 virusnu infekciju putem IHC-a i in situ hibridizacije, virus nije otkriven (podaci nisu prikazani).

Rekombinantni COVID-19-inducirani citokini sinergistički reguliraju ekspresiju APOL1 u primarnim ljudskim glomerularnim endotelnim stanicama i podocitima. Da bismo istražili da li je citokinska oluja izazvana COVID-19- dovoljna da pokrene ekspresiju APOL1 u ljudskim glomerularnim ćelijama, uzgajali smo primarne ljudske podocite izolovane iz bubrega preminulog donora i primarnih ljudskih glomerularnih endotelnih ćelija (GEC) u 1 od 18 citokina i hemokina prethodno zabilježeno da je povišen u serumu pacijenata sa SARS-CoV-2 (Slika 3A) (4, 17). Identitet podocita je potvrđen višestrukim markerima podocita uključujući Wilmsov tumor1, sinaptopodin, nefrin i podokaliksin (Slika 3B i Suppl Slika 4A-B). GEC identitet je potvrđen ekspresijom PECAM1 u odnosu naljudski embrionalni bubreg293 cells (HEK) (Figure 3C). Induced APOL1 expression was quantitated by qPCR and immunoblot after 48hr treatment in GECs (Figure 3D and 3F) and podocytes (Figure 3E and 3G). Consistent with prior report (22), we found that interferons (gamma > beta > alpha) robustly induced expression of APOL1 in both GECs and in podocytes. Similarly, we found that TNF also induced a modest APOL1 expression in GECs and podocytes. Unexpectedly, we found that three cytokines-IL-6, IL-1β, and IL-18, which were previously unrecognized as inducers of APOL1 expression, also individually induced modest APOL1 expression in GECs or podocytes. Notably, the combination of all 18 recombinant cytokines produced a synergistic upregulation of APOL1 that was an order of magnitude higher than that produced by any of the interferons alone (Figure 3D). These effects were not only observed with cytokine concentration of 50ng/mL (Figures 3D and 3E) but also at 20ng/mL and 10ng/mL (Supplemental Figure 5). Cytokine conditions inducing >1,5 puta APOL1 transkript u poređenju sa kontrolom tretiranom podlogom dalje je analiziran na značaj. Značajnost je procijenjena korištenjem nesparenog t-testa sa Holm-Sidakovom korekcijom za višestruka poređenja. Prijavljene P-vrijednosti su prilagođene p-vrijednosti. Ovi rezultati proširuju listu fizioloških citokina koji su sposobni da indukuju ekspresiju APOL1 izvan dobro poznatih interferona i TNF-a. Važno je da rezultati također sugeriraju da sinergija citokina izazvanih COVID{10}}om može biti relevantnija za regulaciju APOL1 od utjecaja samog izolovanog citokina.

JAK-STAT signalizacija posredujeEkspresija APOL1 izazvana COVID-19-citokinom. Zatim smo istražili da li citokini inducirani COVID-19 pojačavaju ekspresiju APOL1 putem zajedničkog intracelularnog signalnog puta koji bi se mogao iskoristiti kao terapeutska meta. Ranije je objavljeno da interferonsku indukciju APOL1 posreduje JAK-STAT1/2 (22, 23). Pokazalo se da je signalizacija preko IL-6 receptora posredovana STAT3, a prijavljeno je da i IL-1 i TNF indirektno aktiviraju STAT3 (24, 25). Od interesa, Meliambro i saradnici su nedavno izvijestili o povećanju regulacije fosfo-STAT3 u biopsijskom tkivu u slučaju COVAN-a i nefropatije povezane s HIV-om (HIVAN) u poređenju sa kontrolom (26). Na osnovu ovih osnovnih informacija, pretpostavili smo da su putevi JAK1/2-STAT1/2/3 primarni posrednici efekata citokina indukovanih COVID{23}} u pokretanju ekspresije APOL1. Da bismo testirali ovu hipotezu, odredili smo stanje ovih signalnih puteva mjerenjem fosforiliranih STAT1, 2 i 3 u lizatima GEC-a nakon njihovog kultiviranja u pojedinačnim ili kombinovanim citokinima tokom 48 sati (Slika 3F). Interferoni tipa I (IFN i IFN) su povećali fosforilaciju STAT1-3 dok je IFN povećao fosforilaciju STAT 1 i 3. IL-1, TNF i IL-6 su povećali fosforilaciju samo STAT3. Kombinirani citokini povećavaju fosforilaciju STAT1-3. Znajući da su JAK1 i JAK2 primarne uzvodne protein kinaze koje fosforilišu STAT1-3, pretpostavili smo da bi inhibicija JAK1/2 blokirala ekspresiju APOL1 indukovanu "svim citokinima". U skladu sa ovim predviđanjem, otkrili smo da je JAK1/2-specifični inhibitor, baricitinib, značajno smanjio ekspresiju APOL1 mRNA i APOL1 putem GEC-a i primarnih podocita tretiranih potpuno citokinom (Slika 3D G). Zajedno, ovi rezultati pokazuju da je JAK-STAT signalizacija primarni put koji posreduje u ekspresiji APOL1 izazvanoj COVID{51}}citokinom.

Citokini izazvani COVID-19- su dovoljni da pokrenu ekspresiju APOL1 u bubrežnim mikroorganoidima ljudskim iPSC izvedenim putem JAK-STAT puta. Mikroorganoid ljudskog bubrega je dokazana platforma za modeliranje ljudske bolesti bubrega i olakšavanje kliničkog prijevoda. Pitali smo da li su rezultati koje smo dobili od primarnih ljudskih podocita i GEC-a generalizirani i potvrđeni modelom mikroorganoida bubrega koji je izveden od ljudi. Stoga smo generirali bubrežne mikroorganoide iz induciranih pluripotentnih matičnih stanica (iPSC) afroameričkog nositelja genotipa G1G2 APOL1 kako bismo istražili regulaciju, ekspresiju i ishode APOL1 u ovom modelu (slika 4A). Uzgajali smo bubrežne mikroorganoide u IFN 10ng/mL ili kombinaciji osam citokina (IFN, IFN, IFN, IL-18, IL-8, IL-6, TNF, IL{{18 }} ) svaki po 10 ng/mL bilo u odsustvu ili prisustvu baricitiniba, 10 µM tokom 24 sata. Ovih osam citokina odabrano je zbog uočene regulacije ekspresije APOL1 u prethodnim eksperimentima. Podociti i tubularne epitelne ćelije u mikroorganoidima bubrega su potvrđene markerima (slika 4B). U skladu sa literaturom (27), endotelne ćelije su bile nedovoljno zastupljene u mikroorganoidima bubrega (podaci nisu prikazani). Otkrili smo da je bazalna ekspresija proteina APOL1 bila niska u mikroorganoidima. Tretman IFN-om izazvao je značajnu ekspresiju APOL1, s najvećim intenzitetom ko-lokaliziranim na područjima markera podocita, podokaliksina. Koktel citokina izazvao je veliku i robusnu ekspresiju APOL1 kroz mikroorganoidnu strukturu u poređenju s drugim tretmanima. Grupe tretirane IFN plus baricitinibom i svi citokini plus baricitinib nisu pokazale ekspresiju APOL1, što je u skladu sa potpunom inhibicijom efekta citokina. Ekspresija APOL1 u bubrežnim mikroorganoidnim podocitima je podsjećala na ekspresiju u podocitima COVAN pacijenata. Međutim, za razliku od COVAN bubrega u kojima nije uočena značajna ekspresija APOL1 u zdravim tubularnim epitelnim ćelijama, mikroorganoid bubrega E-Cadherin-pozitivne tubularne epitelne ćelije eksprimiraju APOL1. Ova razlika može biti posljedica razlika u membranskim citokinskim receptorima ili epigenetskim faktorima koji utiču na ekspresiju proteina u nezrelim tubulima bubrežnih mikroorganoida. Ukratko, mikroorganoidi bubrega dobiveni iz humanog iPSC-a kultivirani s citokinima izazvanim COVID{45}} pokazuju snažnu regulaciju patogenog G1G2 APOL1 proteina i ekspresija je blokirana inhibicijom JAK-STAT signalizacije.

JAK-STAT-APOL1 signalizacija izazvana citokinom smanjila je vitalnost bubrežnih mikroorganoidnih podocita koje je spasio JAK-inhibitor. Na kraju smo pitali da li G1G2 APOL1 izražen u bubrežnim mikroorganizmima narušava vitalnost podocita. Pretpostavili smo da bi varijanta proteina APOL1 izazvana citokinom uzrokovala gubitak podocita – karakterističan fenotip COVAN-a. Da bismo testirali ovu hipotezu, izolovali smo podocite iz bubrežnih mikroorganoida nastalih iz iPSC-a nosioca G1G2. Podociti su uzgajani u IFN (10 ng/mL) ili u kombinaciji osam citokina (10 ng/mL svaki), u prisustvu i odsustvu baricitiniba (10 µM) tokom 96 sati (Slike 5A i B). Tretman citokinom snažno je inducirao ekspresiju APOL1 i ovu ekspresiju je blokirao baricitinib, u skladu s našim ranijim eksperimentima (slika 5C). U skladu s tim, tretman citokinom je uzrokovao značajan gubitak podocita kao što je indicirano testom održivosti i ukupnim ćelijskim ATP-om (Slike 5D i 5E). Zanimljivo, baricitinib je u potpunosti spasio gubitak podocita izazvan citokinom. Zajedno, ovi rezultati podržavaju zaključak da citokini inducirani COVID{25}}pokreću JAK-STAT-APOL1 signalizaciju što zauzvrat uzrokuje ozljedu i gubitak podocita. Zaštitni efekat JAK-inhibicije na vitalnost podocita snažno podržava ovu hipotezu.

Diskusija

Glavni zaključci trenutne studije su da nekoliko citokina izazvanih COVID-19- osim interferona djeluje sinergistički putem JAK-STAT signalizacije kako bi potaknulo ekspresiju patogenog APOL1, što rezultira povredom i gubitkom podocita koji je blokiran inhibicijom JAK. Na osnovu serije slučajeva, po prvi put pokazujemo da je protein APOL1 u izobilju eksprimiran u podocitima i GEC pacijenata s dijagnozom COVID-19, ali ne u glomerulima zdravih kontrola niti COVID-19-pozitivnih, već COVAN-negativna kontrola. U tri eksperimentalna modela demonstriramo da su rekombinantni citokini pojačano regulirani u infekciji COVID-19 dovoljni da pokrenu robusnu ekspresiju APOL1, i neočekivano, da je snažan sinergizam proizveden kombinacijom citokina bio posredovan pretežno putem zajedničkog intracelularnog signalnog puta. Zajedno, naši eksperimentalni dokazi snažno podržavaju uzročnu vezu između JAK-STAT-APOL1 signalizacije izazvane citokinom i in vivo COVAN glomerularnog fenotipa i podržavaju daljnja istraživanja ovog terapeutskog cilja.

Povećana učestalost visokorizičnog APOL1 genotipa (77,8%) među pacijentima sa COVAN-om o kojoj ovdje izvještavamo korelira sa nedavnim međunarodnim multicentričnim pregledom patologije koji je prijavio visokorizični APOL1 genotip kod 91,7% pacijenata sa COVAN-om (3). S obzirom na to da je učestalost visokorizičnog genotipa APOL1 u općoj afroameričkoj populaciji 13% (28), otkrivanje učestalosti od 77-90% u COVAN-u je duboko i uporedivo sa 60-70% učestalošću prijavljenom u Nefropatija povezana sa HIV-om (HIVAN) (28-31). Postojanje preostalih 20-30% slučajeva COVAN (i HIVAN) koji ne nose visokorizične APOL1 genotipove ukazuje na mogućnost APOL{{20}}nezavisnog patomehanizma ili mogućnost da u nekim slučajevi COVID-19-indukovana suprafiziološka ekspresija G0 APOL1 također može uzrokovati podocitopatiju. Raščlanjivanje ovih mogućnosti će zahtijevati daljnje studije. Ipak, prethodno smo demonstrirali uljudski embrionalni bubreg(HEK) ćelije sa tetraciklin-inducibilnim APOL1 ekspresionim sistemom da je citotoksičnost APOL1 i varijantna i doza zavisna (32, 33). Dozno zavisnu citotoksičnost APOL1 takođe su prijavili drugi istraživači u sličnim ćelijskim sistemima (34). Štaviše, APOL1 transgeni modeli miševa nisu samo potvrdili uzročnu vezu između alela rizika APOL1 i povrede podocita, već su pokazali da je stepen podocitopatije u korelaciji sa nivoima ekspresije APOL1 (10, 12-14, 35) . Naše otkriće da je osam od devet slučajeva COVAN pokazalo robusnu glomerularnu ekspresiju APOL1 u odnosu na kontrole i dokaz da ekspresija endogenih alela rizika APOL1 uzrokuje podocitopatiju u mikroorganoidima ljudskog bubrega podržava uzročnu vezu između APOL1 i podocitopatije. S druge strane, nedostatak APOL1 u glomerulima COVID-19 pozitivne, ali AKI negativne G0G0 kontrole autopsije sugerira da infekcija COVID{26}} bez indukcije APOL1 nije dovoljan pokretačCOVAN bolest.