Iridoidni i aciklični monoterpenski glikozidi, kankanozidi L, M, N, O i P iz Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT(Orobanchaceae) je višegodišnja parazitska biljka koja raste na korijenuSalvadorailiCalotropisvrsta, rasprostranjena u sjevernoj Africi, Arabiji i azijskim zemljama.1) Stabljike ove biljke (Kanka-nikujuyou na japanskom) tradicionalno se koriste zaliječenje impotencije, steriliteta, lumbaga i tjelesne slabostikao i sredstvo za poticanje cirkulacije krvi.1,2) Tokom naših studija o bioaktivnim sastojcima iz stabljikeC. tubulosa, 3-6) ranije smo izvijestili o dvadeset četiri feniletanoidna aminoglikozida uključujući kankanozide H1, H2, I, J1, J2, K1, i K2, i dva acilirana oligošećera iz svježih stabljikaC. tubulosa. 5,6) Nadalje, direktorfeniletanoidni glikozidi, ehinakozid, akteozid i izoakteozid, utvrđeno je da inhibiraju povećanje nivoa aspartat aminotransferaze (AST) i alanin aminotransferaze (soli) u serumu u oštećenoj jetri miševa izazvanoD-galaktozamin (D-GalN)/ lipopolisaharid u dozama od 25-100 mg/kgper os(p.o.). Također su razjašnjeni strukturni zahtjevi feniletanoidnih glikozida za hepatoprotektivnu aktivnost.5) U ovoj kontinuiranoj studiji o sastojcima u svježim stabljikamaC. tubulosa, dalje smo izolovali jedanaest iridoidnih glikozida uključujući kankanozide L (1), M (2), i N (3), sedam acikličkih monoterpenskih glikozida uključujući kankanozide O (4) i P (5), tri fenilpropanoida i četiri lignana. Ovaj rad se bavi izolacijom i razjašnjavanjem strukture pet novih jedinjenja (1-5).

PRIRODNI CISTANCHE TUBULOSA ZA UBLAŽAVANJE SEKSUALNE DISFUNKCIJE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Svježe stabljike C. tubulosa (uzgajane u Urumqiju, provincija Xinjiang, Kina) ekstrahovane su metanolom pod refluksom da bi se dobio metanolni ekstrakt (8,36% iz svježih stabljika). Iz metanolnog ekstrakta, H2O- i MeOH-eluirane frakcije (5,63% i 2,73%, respektivno) dobijene su Diaion HP-20 kolonskom hromatografijom (H2O→MeOH) kako je prethodno opisano.5) Frakcija eluirana MeOH je podvrgnuti SiO2 i ODS kolonskoj hromatografiji i na kraju HPLC-u da bi se dobili kankanozidi L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) i P (5, 0 .0002%), 6-deoksikatalpol3,7) (6, 0.197%), barciozid3,7) (7, { {147}}.0583%), glurozid3,7) (8, 0.0443%), kankanoizid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), musaenozidna kiselina3,7) ( 10, 0,0056%), 8- epiloganska kiselina3,8) (11, 0,0023%), 8-epideoksiloganska kiselina3,7) (12, 0,0004%), genipozidna kiselina3,7) (13, 0,0040% ), kankanozid E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienska kiselina3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetil-8-hidroksioktadien-1-il-ObD-glukopiranozid10) (16, 0,0082%), 8-hidroksigeraniol 8-O-bD-glukopiranozid11) (17, 0,0044%), betulalbuzid A12) (18, 0,0004%), četinar13) (19, 0,00in3) (19, 0,00in) 20, 0,0015%), sinapinski aldehid 4-ObD-glukopiranozid14) (21, 0,0001%), ( )-pinorezinol ObD-glukopiranozid4,8,15) (22, 0,0010%), eukommin A2302 %), izoeukomin A17) (24, 0,0010%) i ( )-siringarezinol ObD-glukopiranozid4,8,18) (25, 0,0044%).

Strukture kankanozida L (1), M (2) i N (3)

Kankanozid L (1) je dobijen kao bijeli prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 - 45.7 u MeOH). Njegov IR spektar pokazao je jaku apsorpcionu traku na 3433 i 1{{20}}80 cm- 1 što ukazuje na glikozidni dio. Bombardiranje brzim atomom (FAB)-MS od 1 ciklusa u modovima pozitivnih i negativnih jona pokazalo je kvazimolekularne pikove iona pri m/z 371 [M Na] i 347 [M-H]-, respektivno, a molekulska formula je bila određena kao C15H24O9 FABMS mjerenjem visoke rezolucije. Kisela hidroliza 1 sa 1,0 M hlorovodoničnom kiselinom (HCl) oslobađa D-glukozu, koja je identifikovana HPLC analizom pomoću optičkog detektora rotacije.3-6) 1 H- i 13C-NMR spektri 1 (CD3OD, tabele 1, 2), koji su dodijeljeni različitim NMR eksperimentima,19) pokazali su signale koji se mogu pripisati četiri metilena [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= oko 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= oko 8). , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2.4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H svaki, oba d, J= 13.1 Hz, 10-H2)], dva metina [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8.9 Hz, 9-H) i 2.23 (1H, m, 5-H)], i acetal grupa [d 4.81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] zajedno sa b-glukopiranozilnom ostatkom [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment korelacione spektroskopije 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) na 1 je pokazao prisustvo parcijalnih struktura napisanih podebljanim linijama. U eksperimentu heteronuklearne korelacije višestrukih veza (HMBC) na 1, uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih protona i ugljika (1-H i 3-C, 8-C; {{ 49}}H i 7-H i 10-C; 8-C; }}H2 i 7-C, 8-C 1 -H i 1-C) kao što je prikazano na slici 1. Zatim, relativna stereostruktura 1 je okarakterisana faznom osjetljivošću; Eksperiment nuklearne Overhauserove spektroskopije poboljšanja (NOESY osjetljiv na fazu), koji je pokazao NOE korelacije između sljedećih protonskih parova (1-H i 3aH; 3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H i 5-H, 5- H i 6b-H, 9-H i 7-H; i 10-H2), kao što je prikazano na slici 1. 1 H- i 13C-NMR spektri 1 su se mogli položiti na one glavnog iridoidnog sastojka 6-deoksikatalpola (6), osim za signale zbog na zasićeni d-laktolni dio. Konačno, hidrogenacija 6 je dala 1, tako da je stereostruktura kankanozida L razjašnjena kao 3,4- dihidro{102}}deoksikatalpol (1).

PRIRODNA CISTANCHE TUBULOSA ZA UBLAŽAVANJE POREMEĆAJA UBUĐENJA POŠTE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanozid M (2) je dobijen kao bijeli prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 - 18.7 u MeOH). IR spektar 2 pokazao je apsorpcione trake na 3433, 1736, 1655 i 1076 cm- 1 koje se mogu pripisati hidroksilnim, d-laktonskim, olefinskim i eterskim dijelovima. FAB-MS spektar pozitivnih jona od 2 pokazao je kvazimolekularni pik jona na m/z 353 [M Na] , a molekulska formula je određena kao C15H22O8 FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije pozitivnih jona. Kisela hidroliza 2 sa 1,0 M HCl oslobađa D-glukozu. 1 H- i 13CNMR spektri 2 (CD3OD, tabele 1, 2) pokazali su signale koji se mogu pripisati četiri metilena [d 1,66, 2,11 (1H svaki, oba m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H svaki, oba m, 6-H2), 4.29 (1H, ddd, J= 2.8, 8.4, 14.3 Hz, 3b-H), 4.32, 4.51 (1H svaki, oba d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4.35 (1H, ddd, J= 3.1, 6.7, 14.3 Hz, 3a-H)], dva metina [d 2.97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefin [d 5,94 (1H, m, 7-H)] i zasićena laktonska grupa (d C 174.9) zajedno sa bD-glukopiranozilnom ostatkom [d 4.32 (1H, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment 1 H–1 H COZY na 2 pokazao je prisustvo parcijalnih struktura napisanih podebljanim linijama i, u HMBC eksperimentu, uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih protonskih i ugljičnih parova ({{ 103}}H i 1-H i 9-H i 8-C; }}H2 i 7-C, 8-C, 9-C 1 -H i 10-C); Relativnu stereostrukturu 2 karakterizira NOESY eksperiment osjetljiv na fazu, koji je pokazao korelacije NOE između sljedećih protonskih parova (3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H i 5- H; 5-H i 6b-H, 9-H) kao što je prikazano na slici 1. Dakle, stereostruktura 2 je razjašnjena kao što je prikazano.

Kankanozid N (3) je izolovan kao bijeli prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 25 - 24.6 u MeOH). U pozitivno-jonskom FAB-MS od 3, kvazimolekularni pik jona je uočen na m/z 371 [M Na] . Molekularna formula C16H28O8 određena je FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije. Kisela hidroliza 3 sa 1.0 M HCl oslobađa D-glukozu. Podaci 1 H- i 13C-NMR (CD3OD, tabele 1, 2) pokazali su signale koji se mogu pripisati metilu [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], četiri metilena {d 1.37, 1.87 (1H svaki, oba m, 7-H2), 1.65, 1.81 (1H svaki, oba m, 6-H2), [3.65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9.8 Hz), 3.90 (1H, dd, J= 5.9, 9.8 Hz), 11-H2] i [3.70 (1H, dd, J= 3.3, 12.0 Hz), 3.88 (1H, m), 3-H2]}, četiri metina [d 1.69 (1H, m, 4-H), 1.75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)], i hemiacetalna grupa [d 4,67 ( 1H, d, J= 7.4 Hz, 1-H)] zajedno sa bD-glukopiranozilnom ostatkom [d 4.26 (1H, d, J= 7.9 Hz, {{101 }}H)]. Iridoidna struktura 3 je razjašnjena eksperimentima 1 H–1 H COZY i HMBC, a relativna stereostruktura je okarakterisana fazno osetljivim NOESY eksperimentom kao što je prikazano na slici 1. Shodno tome, sterostruktura 3 je razjašnjena kao što je prikazano.

PRIRODNA CISTANCHE TUBULOSA ZA RJEŠAVANJE SEKSUALNOG PROBLEMA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Strukture kankanozida O (4) i P (5)

Kankanozidi O (4) i P (5), C16H26O8, takođe su dobijeni kao beli prah sa negativnim optičkim rotacijama (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 oba u MeOH). IR spektri 4 i 5 su pokazali apsorpcione trake na 3433, 1696, 1647 i 1076 cm- 1 za 4, i 3434, 1701, 1647 i 1{ {95}}76 cm- 1 za 5, pripisuje se glikozidnim, karboksilnim i olefinskim funkcijama. Njihovi UV spektri su pokazali zajednički maksimum apsorpcije na 217 nm što ukazuje na prisustvo a,b-nezasićene karboksilne kiseline u oba. Kisela hidroliza 4 i 5 oslobađa D-glukozu, dok enzimskom hidrolizom sa glukozidazom, 4 i 5 daje (2E,6E)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{37} },6-oktadienska kiselina20) (4a) i (2E,6E)-8-hidroksi-3,7- dimetil-2,{{ 47}}oktadienska kiselina21) (5a), respektivno. 1 H- i 13C-NMR podaci 4 (CD3OD, tabele 2, 3) pokazali su signale koji se mogu pripisati dva metila [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}}.0 Hz, 9-H3)], tri metilena {d 2.19 (2H, br t, J= oko 7 Hz, 5-H2), 2.36 (2H, m, 4-H2), [4.24 (1H, dd, J= 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J= 6.2, 12.0 Hz), { {96}}H2]}, i dva trisupstituirana olefina [d 5.41 (1H, ddd, J= 1.2, 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1.0 Hz, 3-H)] zajedno sa b-Dglukopiranozilnim dijelom [d 4.34 (d, J= 7.8 Hz, 1 -H)]. Poređenjem ugljičnih signala u 13C-NMR spektru 4

sa onima od 4a, uočen je glikozilacijski pomak na poziciji 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Položaj glukozidne veze je također potvrđen eksperimentima HMBC kao što je prikazano na slici 2. Shodno tome, stereostruktura 4 je razjašnjena kao (2E,6E)-8-bD-glukopiranosiloksi-2,{{ 16}}dimetil-2,6-oktadienska kiselina. S druge strane, 1 H- i 13C-NMR podaci za 5 (CD3OD, tabele 2, 3) ukazuju na prisustvo (2E,6E)-8-hidroksi{{30}} ,7-dimetil-2,6-otadienska kiselina [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H svaki, oba br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5.47 (1H, tq, J= 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5.67 (1H, br s, 1-H )] zajedno sa bD-glukopiranozilnim dijelom [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. Povezanost bD-glukopiranozilnog dijela u 5 je razjašnjena na osnovu HMBC eksperimenata kao što je prikazano na slici 2. Nadalje, uočen je tipičan pomak glikozilacije za signale na 8- poziciji (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). na osnovu gore navedenih dokaza, utvrđeno je da je stereostruktura 5 (2E,6E)-8-bD-glukopiranosiloksi-3,7-dimetil-2,{{103 }}oktadienska kiselina.

Učinci sastojaka na citotoksičnost izazvanu faktorom nekroze tumora-a (TNF-a) u L929 stanicama

Poznato je da TNF-a posreduje u raznim povredama organa putem indukcije ćelijske apoptoze. U slučaju jetre, biološki efekti TNF-a su uključeni u ozljede jetre uzrokovane toksinima jetre, ishemiju/reperfuziju, virusni hepatitis i alkohol.22-24) Stoga se TNF-a smatra važna meta za otkrivanje protuupalnih i hepatoprotektivnih agenasa. Na osnovu gore navedenog koncepta, istražili smo zaštitne sastojke iz proizvoda koji se prirodno pojavljuju na ćelijskoj smrti izazvanoj TNF-a u ćelijama L929, TNF-a-osjetljivoj ćelijskoj liniji.25) Ranije smo izvještavali

da je utvrđeno da nekoliko sastojaka iz Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) i Sapindus rarak, 36-38) pokazuju inhibitorne efekte citotoksičnosti izazvane TNF-a u ćelijama L929. Budući da feniletanoidni sastojci C. tubulosa (nprehinakozid, akteozid i izoakteozid, itd.) 5) također inhibirao ovu citotoksičnost, dalje smo ispitali iridoidne, fenilpropanoidne i lignanske sastojke kao što je prikazano u Tabeli 4. Kao rezultat, kankanozid A (9, inhibicija: 16,3±2.0% na 1 00 mM), musaenozidna kiselina (10, 44,7± 8,7%), 8-epigaminska kiselina (11, 10,7± 0,4%), 8-hidroksi geraniol 8-ObD- Utvrđeno je da glukopiranozid (17, 21,3±2,4%) i ( )-pinorezinol ObD-glukopiranozid (22, 22,3±1,6%) pokazuju značajnu aktivnost. Iako su njihove aktivnosti bile slabije od aktivnosti ehinakozida (IC50= 31.1 mM), akteozida (17,8 mM) i izoaceteozida (22,7 mM), osnovnih feniletanoidnih sastojaka.5)

PRIRODNI CISTANCHE TUBULOSA ZA POBOLJŠANJE SEKSUALNE FUNKCIJE PHGS75% ECH 30% ACT 12%