Istraživanje mehanizma pomoću koje CISTANCHE Deserticola tretira Alzheimerovu bolest koristeći mrežnu farmakologiju i eksperimentalnu validaciju

2 rezultata

2.1 Projekcija glavnih aktivnih sastojaka i sastojka ciljeva Cistanche Deserticola

Cistanche Deserticola pretražena je putem TCMSP baze podataka i švicarskom WDE platformom, a književnost je rezultirala 8 glavnih aktivnih sastojaka, naime iclicacton, Yangambin, Quercetin, Arachidonate, Marckine, Acteoside, Ehinacoside i Beta-Sitosterol, sa ukupno 307 ciljeva sastojaka.

2.2 Projekcija ciljeva bolesti i pripreme venna dijagrama, izgradnja mreže proteina-proteinske interakcije (PPI) i idite i kegg

Analiza obogaćivanja izvedena je putem OMIM-a, genena podataka i NCBI baza podataka, te ukupno 2 013 ciljevi povezanih sa oglasima dobivene su nakon projekcije. Uvezite ciljeve CISTENCHE Deserticola Component i ciljeve povezane sa oglasom na mrežnu web lokaciju Venny Diagram i dobijate ukupno 207 ciljeva preseljenih lijekova i nacrtajte venn dijagram, kao što je prikazano na slici 1A. Uvezite 207 ciljeva raskrižja u bazu podataka u nizu za analizu interakcije bolesti bolesti lijekova. Zatim uvozite datoteku podataka u softver Citoscape, a nakon stupnja, blizina i između numeričkog skrininga, 42 ciljeva i 593 ivice. Prema sortiranju veličine stupnjeva, TNF, AKT1, CASP3, PPARG, EGFR, MMP9, ESR1, HIF1A odabrani su kao ključni ciljani geni, a nacrta se dijagram mrežnog mreže proteina-proteina (slika 1B).

Da bi se objasnio životni proces ciljeva koji su uključeni u obradu oglasa Cistanche Deserticola, koristi se za obavljanje analize Gong Insament na gore navedenim ciljevima na 42 mete, uključujući tri dela: molekularna funkcija (MF) i biološki proces (BP). Projekti su prikazani sa standardom P≤ 0. 0 5, a deset deset ćelijskih komponenti, molekularnih funkcija i bioloških procesa izvučeni su u dijagrame mjehura pomoću microbiology internetskog crtanja (slika 1c); David Online alat korišten je za obavljanje analize obogaćivanja Kegg na 42 zajedničke ključne ciljeve bolesti i lijekova, a projekti sa P≤0.05 su prikazani. Rezultati su pokazali da je obogaćeno ukupno 172 puteve signala. Top 20 staza odabrani su u skladu s P vrijednosti, a dijagram mjehurića izvučen je pomoću mikrobiološke mrežne platforme (slika 1D). Rezultati obogaćivanja pokazali su da mehanizam cistanche Deserticola u liječenju oglasa može biti usko povezan sa PI3K-Akttom stazom, stazom raka, žarišta adheziji i drugim putevima.

Slika 1 (a) Alzheimerova meta bolesti i komponenta cistanke cilja venn grafikon; (B) mreže interakcije proteina-proteina; (C) Idite analizu obogaćivanja mjehurići dijagram; (D) Kegg analiza obogaćivanja mjehurići dijagram

2.3 Priprema karte ciljane sa solistom-saldentalne bolesti-staze

Kombinacijom rezultata obogaćivanja Kegg sa rezultatima izgradnje PPI mreže, može se izvući mrežaste mreže sa sastojkom za solid-putanje naziva (slika 2). Plavi trokut: droga Cistanche Deserticola; Narančasti trokut: oglas za bolest; svijetlo zeleni krug: glavni sastojak lijeka; Žuti krug: Glavni put koji se odnosi na bolest koju tretira Cistanche Deserticola; tamnozereni pravokutnik: meta povezana s lijekom; ivica: korelacija između čvorova

Slika 2 Ukupna udaljenost pređena od miševa u svakoj grupi navigacijskog testa mjesta prije odlaska na pozornicu (x  s, mm)

TAB 3 Latencija bijega miševa u svakoj grupi mjesta za navigacijsku test (x  s, s)

* Napomena: U poređenju sa Samri grupom,P <{0}} 0 5; U poređenju sa modelom grupe, † p <0,05; L-GCS i H-GCS grupe, ‡ p <0,05.

Ako su vam potrebne dodatne izmjene, samo me obavijestite!

Slika 3 postotak vremena provedenog u ciljnom kvadrantu i broj puta, platforma koju svaka grupa miševa pređe u ispitivanju suđenja sonde

2.4.2 Y Experiment Maze

Rezultati Eksperimenta Y laviriment pokazali su da: u poređenju sa SAMR1 grupom, vreme modela grupe za istraživanje romana i stopu alternacije značajno su smanjene (P<0.05); compared with the Model group, the M-GCs group and H-GCs group's novel The arm exploration time was significantly increased (P<0.05); the spontaneous alternation rate of new arms in the GCs-administered group was significantly higher than that in the Model group (P<0.05), among which the spontaneous alternation rate of the M-GCs group was higher than that of the other administration groups ( P <0.05) (Fig. 4).

2.5 Efekti GC-a na broj i morfologiju miša Hipocampalnih neurona

Rezultati bojenja Nissl pokazali su da su neuronske piramidalne ćelije u grupi SAMR1 okrugle ili ovalne, s kompletnim oblikom i urednim rasporedom. Intracelularna nissl tijela bila su duboko obojena, a broj je bio veći. U poređenju sa SAMR1 grupom, neuronalne piramidalne ćelije u grupi modela su bile prekršene morfologije somatskih ćelija, aranžman je bio raštrkan, a niska tela bile su lagano obojene, a broj kompletnih piramidalnih stanica značajno je smanjen (P<0.05); compared with the Model group, the morphology of the pyramidal cells in the GCs administration group was more complete and the arrangement was more complete. Relatively neat, the number of complete pyramidal cells increased significantly (P<0.05). Among them, most pyramidal cells in the M-GCs group were complete in shape and more neatly arranged. The number of complete pyramidal cells was significantly higher than that in other drug administration groups. increased (P <0.05), as shown in Figure 5.

2.4.2 Y Experiment Maze

Rezultati Eksperimenta Y laviriment pokazali su da: u poređenju sa SAMR1 grupom, vreme modela grupe za istraživanje romana i stopu alternacije značajno su smanjene (P<0.05); compared with the Model group, the M-GCs group and H-GCs group's novel The arm exploration time was significantly increased (P<0.05); the spontaneous alternation rate of new arms in the GCs-administered group was significantly higher than that in the Model group (P<0.05), among which the spontaneous alternation rate of the M-GCs group was higher than that of the other administration groups ( P <0.05) (Fig. 4).

2.5 Efekti GC-a na broj i morfologiju miša Hipocampalnih neurona

Rezultati bojenja Nissl pokazali su da su neuronske piramidalne ćelije u grupi SAMR1 okrugle ili ovalne, s kompletnim oblikom i urednim rasporedom. Intracelularna nissl tijela bila su duboko obojena, a broj je bio veći. U poređenju sa SAMR1 grupom, neuronalne piramidalne ćelije u grupi modela su bile prekršene morfologije somatskih ćelija, aranžman je bio raštrkan, a niska tela bile su lagano obojene, a broj kompletnih piramidalnih stanica značajno je smanjen (P<0.05); compared with the Model group, the morphology of the pyramidal cells in the GCs administration group was more complete and the arrangement was more complete. Relatively neat, the number of complete pyramidal cells increased significantly (P<0.05). Among them, most pyramidal cells in the M-GCs group were complete in shape and more neatly arranged. The number of complete pyramidal cells was significantly higher than that in other drug administration groups. increased (P <0.05), as shown in Figure 5.

2.6 Učinak GCS-a na izraz PI3K-AKT staze povezanih proteina i tau proteina u mišem hipokampusu

Imunohistohemijski rezultati boje pokazali su da je u usporedbi s grupom SAMR1, broj pozitivnih ćelija koji izražava PI3K i P-Akt u području Hipocampal CA1 u grupi modela u grupi modela (P<0.05), and the number of positive cells expressing P-Tau was significantly increased (P < 0.05); compared with the Model group, the number of positive cells in the hippocampal CA1 area of PI3K and P-Akt in the GCs group was significantly increased (P<0.05), and the number of positive cells expressing P-Tau was significantly reduced (P<0.05 ); among them, the number of positive cells expressing PI3K and P-Akt in the CA1 area of mouse hippocampus was significantly increased in the M-GCs group compared with other GCs administration groups (P<0.05), see Figure 6.

Sl. 7 Eksperimentalna traka za bezumni blot

TAB 4 Vrijednost apsorpcije trake (x  s)

* Napomena: U poređenju sa Samri grupom,P <{0}} 0 5; U poređenju sa modelom grupe, † p <0,05; L-GCS i H-GCS grupe, ‡ p <0,05.

3 Rasprava

Alzheimerova bolest je zajednička neurodegenerativna bolest. Kao hronična bolest s podmuklenim početkom i kontinuiranim napredovanjem, karakteriziraju ga nenormalne kliničke manifestacije poput memorije, jezika, spoznaje, ličnosti i ponašanja funkcija [15,16]. Trenutno je patogeneza Alzheimerove bolesti složena, a puno je teorija poput taloženja amiloida Aβ, oksidativni stres neurona, neuroinfalmacija, nenormalnog fosforizacije neravnoteže tau proteina i crijevne flore. Među njima, upalna apoptoza neurona uzrokovanih TAU proteinom fosforilacijom važan je mehanizam kognitivnog oštećenja kognitivnog oštećenja [17,18]. Tau protein je protein koji je povezan sa mikrotubulom (mape) povezane sa neuronskim osovinama. Njegova glavna funkcija je promocija formiranja mikrotubula, održavanje njihove stabilnosti i reguliranje akukonjskog transporta [19,20]. Prekomjerna fosforilacija TAU proteina izgubit će sposobnost da se veže za mikrokulama, što uzrokuje mikrotubule depolimerizaciju, osobne disfunkcije i neurofibrilarne tangere, što dovodi do neuronalne degeneracije i apoptoze [21]. Studije su otkrile da su razni povezani signalni putevi usko povezani sa fosforizacijom TAU proteina, među kojima se intracelularna fosfatidylinositol Kinase / Protein Kinase B (PI3K / AKT) put igra ključnu ulogu u fosforizaciji TAU proteina, a njegov nenormalni izraz može imati značajan utjecaj na rast, razvoj i apoptozu Nervne ćelije [22].

U gore spomenutu mrežnoj farmakološkoj studiji, Idite i Kegg obogaćina analiza pokazala je da I3K / AKT put igra ključnu ulogu u poboljšanju oglasa Cistanche Deserticola, te je usko povezana sa apoptozom ćelije, senilnu formiranje ploče i neuronske tangele; Zajedničke ciljeve GCS-a i oglasa prikazani su kroz bazu podataka niza, među kojima je AKT1 bio važan ključni cilj i ključni protein na PI3K / AKT stazi. PI3K, kao molekul uzvodno, specifična je intracelularna fosfatidylinositol kinaza [23]. U sisarima, porodica PI3K ima tip I, II i III izozime, od kojih su tipa I izoozima glavne regulatorne ciljeve na PI3K-AKT stazi. Kad se ISIMIME PI3K veže za proteine, poput tirozinskih receptora Kinaze, PI3K može biti fosforikran i aktiviran, fosforizacija PIP2 cilja izvan ćelijske membrane kako bi postala i fosforila Akt1, podtip AKT-a [24-26]. Članovi porodice AKT imaju mogućnost regulacije bioloških funkcija, uključujući preživljavanje ćelija, širenje, metabolizam i rast. S jedne strane, fosforjelirani AKT1 može fosforizati želište smrti (loše) povezano sa β-ćelijskim CLL / limfomom (BCL {-2) u nastajanju Serine 136, na taj način inhibiraju apoptozu ćelije [27]. S druge strane, može regulirati nizvodne proteine ​​MTOR, GSK3β i Foxo, i na taj način smanjivanje proizvodnje P-Tau proteina [28-30].
Budući da se povećanje P-tau proteina može smatrati neobičnim patološkom karakteristikom oglasa, vjeruje se da je usko povezano sa kognitivnim padom i sinaptičkim gubitkom. Stoga aktivacija PI3K / AKT signalizing puta može igrati važnu ulogu u poboljšanju Alzheimerove bolesti.

Cistanche Deserticola je mesnati stabljika sa osušenim ljuskim listovima biljke Cistanche Deserticola. Toplo je u prirodi, slatko i slano u ukusu, a pripada bubregu i meridijanima velikim crevima. To je lijek za tonificiranje bubrega i jačanje yang-a, vlažnom crijevima i oslobađanje zatvor [31]. Ima efekte anti-apoptoze, anti-oksidacije, regulišući autofagiju i neuroendokrinu, poboljšavajući fizičku snagu i poboljšanje učenja i spoznaje. Ima važnu vrijednost u prevenciji i liječenju bolesti centralnog nervnog sistema [32]. Mnoge literature zapisuju da CISTANCHE Deserticola može zaštititi i uzbuđivati ​​aminokiseline u autofagiji neurona ozlijeđenih cerebralnom ishemijom-reperfuzijom, poboljšavajući neuronski oksidativni stres u dementu, zaštititi mikrogličarni odgovor na poticaj lipopolisacharida i poboljšati imunološku funkciju starenja štakora [33-36]. Gore navedeni eksperimenti u ponašanju pokazali su da su u usporedbi s grupom modela, miševi u GCS grupi imali značajna poboljšanja u učenju i spoznaju (P<0.05); Nissl staining experiments found that the number of pyramidal cells in the GCs group was significantly increased compared with the Model group, with complete morphology and neat arrangement (P<0.05); immunohistochemistry and Western blot experiments found that GCs could significantly increase the expression of PI3K and P-Akt proteins in the hippocampus of SAMP8 mice and significantly reduce the expression of P-Tau protein (P<0.05), which indicates that Cistanche deserticola may play a role in improving Alzheimer's disease by regulating the PI3K-Akt signaling pathway and affecting the production of P-Tau. This study used SAMP8 mice to construct an Alzheimer's disease model. Through network pharmacology, the main mechanism of action of Cistanche deserticola in treating Alzheimer's disease was explored, and a preliminary discussion of the mechanism of action and the optimal drug dose were explored. The subsequent exploration will continue to explore the mechanism of action and efficacy of Cistanche deserticola in improving the learning and cognitive function of AD model animals, in order to provide more modern scientific basis for the development of Cistanche deserticola products for the prevention and treatment of AD.