Intestinalna permeabilnost i depresija kod pacijenata sa inflamatornom bolešću crijevaⅠ
Dec 20, 2023
Sažetak: Depresija je globalni zdravstveni problem koji zahtijeva ranu i tačnu dijagnozu kako bi se osigurao brz pristup odgovarajućem liječenju. Nedavna pažnja fokusirana je na analizu osovine mozak–creva–mikrobiota među više psihopatoloških puteva. Crijevna barijera igra ključnu ulogu, a disfunkcije koje se javljaju na ovom nivou imaju implikacije na mentalno zdravlje. Ova studija imala je za cilj da istraži ulogu biomarkera intestinalne permeabilnosti, tj. kalprotektina, zonulina, proteina koji veže lipopolisaharide (LBP) i proteina koji veže masne kiseline u crevima (I-FAB), u depresiji kod pacijenata sa inflamatornom bolešću creva (IBD). ).
Ovo je prva studija ove vrste koja se odvija u Rumuniji, istočnoj Evropi, s naglaskom na pacijente sa Crohnovom bolešću i ulceroznim kolitisom. Korelacije identificirane između depresije i kalprotektina i depresije i LBP-a imaju potencijal da rasvijetle proces brze dijagnoze depresije uz pomoć biomarkera. Budući da je depresija povezana sa smanjenjem kvaliteta života pacijenata sa IBD, potreba za pristupom odgovarajućim tretmanima mora biti hitna.
1. Uvod
Depresija je individualni, profesionalni i društveni invaliditet povezan sa somatskim bolestima [1,2] i sa visokim rizikom od smrtnosti od samoubistva [3]. Međutim, pristup specijalistima, tačna dijagnoza i efikasan lijek su ograničeni [4]. Rana i tačna dijagnoza [5,6], kao i personalizirani odabir liječenja [7], neophodni su za smanjenje patnje i financijskog tereta bolesti [3]. Prema dijagnostičkim kriterijima u Dijagnostičkom i statističkom priručniku za mentalne poremećaje (DSM V) [8], depresija je afektivni poremećaj sa heterogenom grupom simptoma. Za postavljanje dijagnoze potrebno je prisustvo pet od devet sljedećih simptoma: depresivno raspoloženje, nedostatak zadovoljstva, poteškoće sa spavanjem i apetitom, nizak nivo energije, kognitivne promjene, osjećaj krivice i samoubilačke ideje. patofiziološki mehanizmi za korist od efikasnog lečenja nisu poznati. Nekoliko mehanizama je dovedeno u pitanje, ali se teorije i dalje razvijaju.
Tako su istražene disfunkcije na osovini hipotalamus-hipofiza, neurotransmiterima, vagusnom živcu, kratkolančanim metabolitima masnih kiselina, triptofanu, inflamatornim faktorima i osi mozak-crijevo-mikrobiota [9-12]. Dokazano je da ne samo da poremećaji uzrokovani stresom donose promjene u sastavu crijevne mikrobiote kroz osovinu hipotalamus–hipofiza–nadbubrežna žlijezda, nego i crijevo utiče na
centralnog nervnog sistema putem vagalne stimulacije, crijevne permeabilnosti i oslobađanja upalnih i protuupalnih spojeva i promjena u cirkulirajućim agensima u krvi [13]. Tokom protekle dvije decenije, proučavanje uključenosti osovine mozak–creva–mikrobiota u mentalne poremećaje dobilo je zamah [9,14]. U ovom kontekstu, uloga sindroma curenja crijeva je dobila više pažnje [15,16].
Crijevna barijera ima glavnu ulogu u probavi i apsorpciji nutrijenata; sekundarno, ona strogo kontrolira transport antigena iz lumena u submukozu i održava ravnotežu između tolerancije i imunološkog odgovora koji uzrokuje upalu. Na integritet crijevne barijere može utjecati prehrana, disbioza crijevne mikrobiote ili drugi faktori. Oni imaju potencijal da izazovu imunoaktivaciju translokacijom mikrobnih antigena i metabolita. Trenutno se serumski zonulin, intestinalni protein koji vezuje masne kiseline (IFABP/FABP2) i LBP, kao i fekalni albumin, kalprotektin i zonulin, analiziraju kao crijevna propusnost markeri [17]. Kalprotektin je protein koji veže kalcij i cink, prvobitno izolovan iz leukocita; koristan je u razlikovanju upalnih bolesti crijeva od sindroma iritabilnog crijeva. Igra glavnu ulogu tokom upale i smatra se proteinom akutne faze [18 ].
Normalne vrijednosti su između 10 i 50 ili 60 (ug/g). Vrijednosti iznad 200 (ug/g) mogu ukazivati na upalnu bolest, a vrijednosti iznad 500-600 (ug/g) svakako ukazuju na postojanje crijevne bolesti [19]. Protein koji vezuje lipopolisaharide (LBP) je esencijalna lipidna komponenta vanjske membrane gram-negativnih bakterija [20], što uzrokuje endotoksemiju [21]. LBP koji proizvode hepatociti, masno tkivo i crijevne stanice funkcioniraju kao protein akutne faze I i igra važnu ulogu u imunološkom odgovoru [22]. LBP je prisutan u serumu u koncentracijama od 5-15 mg/mL i povećava se 10 do 50 puta tokom reakcije akutne faze. Funkciju barijere održava zonulin, poznat kao jedini fiziološki modulator bliskih intracelularnih spojeva (TJs) [15,23, 24]. Zonulin reverzibilno otvara TJ, djelujući na receptor 2 aktiviran proteazom koji se nalazi u intracelularnom prostoru spojnog kompleksa [25]. Srednja vrijednost zonulina je 34 ng/mL [26].
Protein koji vezuje intestinalne masne kiseline (I-FABP/FABP2) je jedan od devet različitih identifikovanih FABP, koji pripadaju superfamiliji proteina koji vezuju lipide. Glavna uloga je intracelularni transport i regulacija apsorpcije masnih kiselina [27]. Kada dođe do oštećenja epitelne crijevne barijere, I-FABP se oslobađa u cirkulaciju i njegova koncentracija u plazmi se povećava [28]. Smatra se da je granična vrijednost za I-FAPB 2 ng/mL. U ovom kontekstu, željeli smo istražiti ulogu biomarkera intestinalne permeabilnosti u depresiji kod pacijenata sa inflamatornom bolešću crijeva (IBD) (i) ispitivanjem odnosa između kalprotektina, zonulina, LBP , IFABP/FABP2 i depresijom i (ii) procjenom utjecaja depresije na kvalitetu života.
2. Materijali i metode
2.1. Studijska grupa
Početna grupa uključivala je 60 pacijenata sa Klinike za gastroenterologiju Kliničke bolnice u Konstanci u periodu od aprila do juna 2021. Kriterijumi za uključivanje bili su dijagnoza IBD, starosti 18 i više godina, znanje čitanja i pisanja i saglasnost za učešće u studiji. Kriterijumi za isključenje bili su uskraćivanje pristanka, teška depresija ili drugi teški mentalni poremećaji zbog kojih su upućeni u specijaliziranu psihijatrijsku službu. Nakon informiranog pristanka, istraživač je telefonom kontaktirao pacijente radi primjene sociodemografskog upitnika o depresiji i upitnika o kvaliteti život. U studiju je uključeno 30 pacijenata koji su prošli sve faze studije.
2.2. Korišteni upitnici
Upitnik o zdravlju pacijenata-9 (PHQ-9) [29] je primijenjen na učesnike kako bi se procijenio nivo depresije na koji su bili pogođeni. Ovaj standardni upitnik sadrži devet stavki na koje treba odgovoriti na osnovu simptoma koje je pacijent imao u posljednjih 14 dana. Rezultati su klasifikovani na sljedeći način: 1–4 minimalna depresija, 5–9 blaga depresija, 10–14 umjerena depresija, 15–19 umjereno teška depresija i 20–27 teška depresija Slično, primijenili smo upitnik za kvalitet života (EQ{{ 14}}D) [30,31] za prikupljanje podataka o kvaliteti života. Stavke sadržane u ovom alatu su mobilnost pacijenta, samozbrinjavanje, bavljenje uobičajenim aktivnostima, bol ili nelagoda, te anksioznost ili depresija doživljena. Na pitanja se odgovara na skali od pet nivoa.
2.3. Sakupljanje uzoraka i laboratorijska analiza
Serološki uzorci za zonulin, IFABP/FABP2, LBP i fekalni uzorci za kalprotektin su prikupljeni prema protokolu za prikupljanje i transport potencijalno infektivnih bioloških uzoraka. Uzorci seruma su sakupljeni venskom punkcijom, natašte i u vakutajneru sa aktivatorskom krpom. Uzorci fekalija su sakupljeni iz spontano ispuštene stolice u posudama bez podloge. Serum je testiran na zonulin sa MyBioSource Kit, Inc. (San Dijego, Kalifornija, SAD). i IFABP/FABP2 i LBP sa kompletom Wuhan Fine Biotech Co., Ltd. (Wuhan, Kina). Uzorci su testirani na kalprotektin sa kompletom EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG. Svi testovi su obavljeni enzimskim imunosorbentnim testom (ELISA) na ADALTIS Analyzer GEN-4 i Victor X4 prema uputstvima proizvođača kompleta.
Raspon normalnih vrijednosti definirao je proizvođač kompleta samo za kalprotektin na sljedeći način: Manje ili jednako 50.0 mcg/g kao normalno, 50.1– 120,0 mcg/g kao granična vrijednost, i veće ili jednako 120,1 mcg/g kao pozitivno na crijevnu bolest. Za zonulin, proizvođač reakcionog kompleta nije naveo nikakve donje granice detekcije. Donja granica detekcije za IFABP/FABP2 komplet bila je 0,156 ng/mL, 3,125 ng/mL za LBP i 3,125 ng/mL za kalprotektin. Za zonulin, I-FABP/FABP2 i LBS/LBP, proizvođač kompleta nije saopštio raspon normalnih vrijednosti, a korištene su vrijednosti koje su koristili drugi autori u svojim studijama. Serum je ekstrahiran iz svakog uzorka krvi centrifugiranjem na 3000× g 30 min koristeći Thermo Scientific SL16R centrifugu.
Svi dobijeni serumi su držani zamrznuti na -200 ◦C do izvršenja analiza. Za IFABP/FABP2 i LBP, uzorci su razrijeđeni na 1/2 puferom za razrjeđivanje uzorka prije testiranja. Uzorci stolice su čuvani na -20 ◦C do dana testiranja. Ekstrakcija uzorka stolice izvedena je pomoću pufera za ekstrakciju od 980 i.j. zajedno sa 20 mg stolice, miješana je 30 s, a zatim centrifugirana na 2000× g 10 minuta koristeći Thermo Scientific SL16R centrifugu. Razblaživanje uzoraka je zatim izvedeno sa 980 iu pufera za uzorke i 20 iu ekstrakcionog supernatanta.
Za četiri markera korišćene su mikroploče sa 96 jažica obloženih antitijelima za hvatanje: anti-kalprotektin antitijela, anti-IFABP/FABP2 antitijela, anti-LBP antitijela ili anti-zonulin antitijela. Principi testa su bili isti zasnovani na tehnologiji imunološkog testiranja vezanog za enzime (ELISA). Standardni uzorci, uzorci za testiranje i detekciona antitijela konjugirana biotinom su kasnije dodani u jažice. TMB supstrati (3,30,5,50-tetrametilbenzidin) korišteni su za vizualizaciju enzimske reakcijeHRP (peroksidaza hrena). HRP je katalizirao TMB kako bi proizveo plavi proizvod koji se promijenio u žuti nakon dodavanja otopine za zaustavljanje kiseline.
Gustoća žute mrlje bila je proporcionalna količini uzorka zarobljenog u ploči. Intenzitet boje je mjeren na 450 nm u čitaču mikroploče, a zatim je izračunata ciljna koncentracija.
2.4. Statistička analiza
Statistička analiza je izvršena korištenjem IBM SPSS statističkog softvera verzije 23 (Armonk, NY, SAD: IBM Corp.). Podaci su predstavljeni kao medijan i IQR (interkvartilraspon P75–P25) za kontinuirane varijable u slučaju iskrivljenih distribucija ili kao procenti za kategoričke varijable.
Pošto je Shapiro-Wilkov test normalnosti pokazao, u slučaju analiziranih kontinuiranih varijabli, statističke vrijednosti testa čija je vjerovatnoća (p) bila niža od nivoa značajnosti {{0}}.05, uslov normalnost nije ispunjena, osim varijabli LBP i PHQ 9, za koje je p >=0.05. Smatrali smo da je prikladniji anonparametarski pristup proučavanju korelacije između dotičnih varijabli, sa prikazom Spearmanovog rho koeficijenta korelacije (ρ) i s njim povezane vjerovatnoće (p). Nivo značajnosti je postavljen na 0,05.
Prirodni biljni lijek za ublažavanje zatvora-Cistanche
Cistanche je rod parazitskih biljaka koji pripada porodici Orobanchaceae. Ove biljke su poznate po svojim lekovitim svojstvima i vekovima se koriste u tradicionalnoj kineskoj medicini (TCM). Cistanche vrste se pretežno nalaze u sušnim i pustinjskim regijama Kine, Mongolije i drugih dijelova Centralne Azije. Biljke cistanche karakteriziraju mesnate, žućkaste stabljike i visoko su cijenjene zbog svojih potencijalnih zdravstvenih koristi. U TKM-u se vjeruje da Cistanche ima tonik i da se obično koristi za ishranu bubrega, povećanje vitalnosti i podršku seksualne funkcije. Također se koristi za rješavanje problema vezanih za starenje, umor i cjelokupno blagostanje. Iako Cistanche ima dugu istoriju upotrebe u tradicionalnoj medicini, naučna istraživanja o njegovoj efikasnosti i bezbednosti su u toku i ograničena. Međutim, poznato je da sadrži različite bioaktivne spojeve kao što su feniletanoidni glikozidi, iridoidi, lignani i polisaharidi, koji mogu doprinijeti njegovim ljekovitim učincima.
Wecistanche'scistanche prah, cistanche tablete, cistanche kapsule, a drugi proizvodi se razvijaju koristećipustinjacistanchekao sirovine, a sve to ima dobar učinak na ublažavanje opstipacije. Specifičan mehanizam je sljedeći: Vjeruje se da Cistanche ima potencijalne prednosti za ublažavanje opstipacije na osnovu njegove tradicionalne upotrebe i određenih spojeva koje sadrži. Iako su naučna istraživanja posebno o djelovanju Cistanchea na zatvor ograničena, smatra se da ima više mehanizama koji mogu doprinijeti njegovom potencijalu za ublažavanje opstipacije. Laksativan efekat:Cistanchese dugo koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini kao lijek za zatvor. Vjeruje se da ima blagi laksativni učinak, koji može pomoći u poticanju pražnjenja crijeva i izazvati zatvor. Ovaj efekat se može pripisati raznim spojevima u Cistancheu, kao što su feniletanoidni glikozidi i polisaharidi. Vlaženje crijeva: Na osnovu tradicionalne upotrebe, smatra se da Cistanche ima hidratantna svojstva, posebno usmjerena na crijeva. Promoviranje hidratacije i podmazivanja crijeva može pomoći u omekšavanju alata i olakšati lakši prolaz, čime se ublažava zatvor. Protuupalni učinak: Zatvor ponekad može biti povezan s upalom u probavnom traktu. Cistanche sadrži određene spojeve, uključujući feniletanoidne glikozide i lignane, za koje se vjeruje da imaju protuupalna svojstva. Smanjenjem upale u crijevima, može pomoći u poboljšanju pravilnosti pražnjenja crijeva i ublažavanju zatvora.
