Poboljšanje proizvodnje ehinakozida i akteozida dvostepenim elicitacijom u kulturi ćelijske suspenzije Cistanche Deserticola

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen i dr

Abstract

U odgovarajućim koncentracijama, poliamini su potaknuli rast kalusa iechinacosidesadržajCistanche deserticoladok je Ag plus povećao sadržajechinacosideiacteoside. U periodu 20-dnevne kulture, kada su putrescin (25 lM) i Ag plus (10 lM) dodani 8. i 16. dana, respektivno,echinacosideproizvodnja (1,7 gl–1) iacteosideproizvodnja (0.4 gl–1) dostigla je maksimum, koji je bio 1.4- i 1.5- puta onih pojedinačnih tretmana putrescinom, 1.6- puta i 1.4- puta više onih u jednom tretmanu Ag plus, respektivno. Egzogeni putrescin je povećao vitalnost ćelija i antioksidativnu enzimsku aktivnost značajno tako povećao konačnu biomasu. Dodatak Ag plus značajno je povećao sadržaj H2O2 i aktivnost fenilalanin-amonijak-lijaze što je dovelo do većegechinacosideiacteosidesadržaja.

Ključne riječiakteozid,Cistanche deserticola, Echinacoside, Elicitor, Kultura suspenzije

Skraćenice

APOX askorbat peroksidaza

CAT Catalase

H2O2 Vodikov peroksid

PAL Fenilalanin amonijak-liaza

PeGs feniletanoidni glikozidi

ROS reaktivne vrste kiseonika

SOD Superoksid dismutaza

Cistanche deserticola

Click to Cistanche UK i proizvodi ekstrakta Cistanche

Uvod

Cistanche deserticolaYC Ma se široko koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini. Feniletanoid glikozidi (PeG) su glavni bioaktivni sastojci ove biljke. Među PeG,echinacosideiacteosidesu glavne komponente za poboljšanje seksualne potencije, regulaciju imunološke funkcije, uklanjanje slobodnih radikala i svojstva protiv starenja (Song et al. 2003). Zbog prekomjerne eksploatacije, otežanog uzgoja i narušenog okoliša, divlja Cistanche deserticolabiljke su na rubu izumiranja. Kultura biljnih ćelija može biti atraktivna alternativa za dobijanje ovih bioaktivnih komponenti. Glavni problemi sa kojima se susreće in vitro kulturaCistanche deserticolaimaju nisku biomasu i nizak sadržaj PeG. Prijavljeno je da mnogi elicitori stimulišu PeGsintezu (Cheng et al. 2005, 2006; Lu i Mei 2003; Ouyang et al. 2003a; Xu et al. 2005), ali nažalost, većina elicitora je smanjila biomasu ćelije.

Posljednjih godina istražuje se kombinacija različitih elicitora u kulturi suspenzije biljnih stanica. Zbog različitog djelovanja različitih elicitora, kombinacija različitih elicitora može postići sinergijski učinak. Elicitori se mogu u isto vrijeme dodati, na primjer, u kulturi suspenzije Taxus spp. (Yuan et al. 2002) i ginseng (Bae et al. 2006). S druge strane, dodavanje različitih elicitora u fazi rasta biomase i fazi proizvodnje sekundarnog metabolita dalo je maksimalnu proizvodnju biomase i taksola u kulturi suspenzije Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Međutim, postoji nekoliko izvještaja u vezi s korištenjem kombiniranih elicitora u ćelijskoj kulturi Cistanche deserticola.

EhcinacosideinCistanche deserticola

Prethodni izvještaji oCistanche deserticolafokusiran na povećanje sadržaja PeG, ali su elicitori kao što su poliamini za promicanje biomase djelimično zanemareni. Poliamini mogu promovirati biomasu kalusa tako što povećavaju ćelijsku proliferaciju i ublažavaju ćelijsko starenje (Bais andRavishankar 2002). Nedavno je objavljeno da su poliamini bili uključeni u interakciju sa etilenom i tolerancijom na stres, dok su etilen i vrste reaktivnog kiseonika (ROS) od abiotskog stresa rezultirale starenjem i smrću ćelija (Cona et al. 2006). S druge strane, oksidativni stres uzrokovan elicitorima rezultirao je akumulacijom ROS-a, uključujući vodikov peroksid (H2O2) i superoksidni anion (O2–), za koje je izvješteno da posreduju u programiranoj ćelijskoj smrti i sekundarnoj metabolitesintezi kao signalnim molekulima (Yuan et al. 2001. Xu i Dong 2005.). Na primjer, H2O2 je inducirao gensku ekspresiju fenilalanin amonijak-lijaze (EC 4.3.1.5), ključnog enzima za odbrambeni odgovor i sekundarni metabolizam (Desikan et al. 1998), koji je regulirao proizvodnju PeG u ćelijskoj kulturiCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). S obzirom na oksidativni stres, neki metalni joni, kao što su Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, efikasno podstiču sekundarnu metabolitesintezu u mnogim biljkama (Zhao et al. 2005). Možda oni mogu poboljšati aktivnost PAL i proizvodnju PeG. U ovoj studiji, poliamini i metalni joni, kao i kombinacija ovih elicitora, primijenjeni su za pojačavanje rasta kalusa,echinacoside, iacteosidesadržaj Cistanche deserticola. Osim toga, istražen je i odnos između elicitora i sadržaja H2O2, kao i njihov učinak na aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima.

materijali i metode

Biljni materijali

Cistanche deserticolaćelijske linije su inducirane iz stabljike. Nakon sterilizacije, stabljika je izrezana na komade od oko 1 cm3 i kultivirana na B5 mediju (Gamborg et al. 1968) koji sadrži 5 lM naftalenoctene kiseline (NAA), 9 lM 6-benzil adenina (6-BA), 4 lM 2,4-dihlorofenoksisirćetna kiselina (2,4-D) i 30 g saharoze l–1. Nakon 30 dana, svijetložuti kalus je izvađen i subkulturiran na B5 mediju sa 5 lMNAA, 9 lM 6-BA i 1 lM 2,4-D, a kultura suspenzije ćelija je uspostavljena prema metodama of Ouyang et al. (2003b).

Kultura kalusa

Oko 1,5 g svježeg kalusa (0.125 g DW) iz 20-dnevne suspenzije kultureCistanche deserticolaje inokuliran u Erlenmajerovu tikvicu od 250-ml koja sadrži 50 ml B5 podloge. B5 medijum je dopunjen sa 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D i 30 g saharoze l–1 pri pH od 5,6 pre autoklaviranja. Svi eksperimenti su izvedeni sa tri ponavljanja na 25 stepeni u mraku na rotacionoj mućkalici (110 obrtaja min–1) tokom 20 dana.

ActedosieinCistanche deserticola

Elicitor tretmani

U jednom eksperimentu elicitacije, filter-sterilizirane otopine putrescina (Put), spermina (Spm), spermidina (Spd), srebrnitrata i kobalt hlorida dodane su u mediju u predviđenim koncentracijama kako bi se istražili njihovi efekti na rast kalusa i sadržaj PeG. Sa optimalnim tipom i koncentracijom elicitora, istražen je efekat vremena hranjenja. Zatim, na osnovu optimalne koncentracije i vremena hranjenja, kombinacija različitih elicitora je dizajnirana da poboljša proizvodnju PeG u dvofaznom eksperimentu elicitacije. Kultura kalusa bez elicitora je bila kontrola. Da bi se istražio mehanizam djelovanja elicitora, kalus je izvađen u dizajnirano vrijeme nakon dodavanja elicitora za dalju analizu u dvofaznom eksperimentu elicitacije.

Biohemijski testovi

U predviđeno vrijeme nakon dodavanja elicitora, ćelije su filtrirane i nježno isprane destilovanom vodom. Potom je ćelijska održivost određena bojenjem 2,3,5-trifenil tetrazolijum hloridom prema metodi Verleysenet al. (2004), Indeks održivosti je definisan kao apsorpcija mjerena po gramu svježeg tkiva. Sadržaj H2O2 u svježim ćelijama određen je metodom Velikova i sar. (2000). Određivanje aktivnosti fenilalanin amonijak-liaze (PAL) (EC 4.3.1.5) zasnovano je na metodi Koukol i Conn (1961). Metode korištene za ekstrakciju superoksid dismutaze (SOD) (EC1.15.1.1), katalaze (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbat peroksidaze (APOX) i određivanje bile su iste kao kod Jebare et al. (2005).

Mjerenje biomase, ehinakozida i akteozida

Za određivanje suhe težine (DW), kalus je filtriran i ispran destilovanom vodom, a zatim osušen zamrzavanjem do konstantne težine da bi se zabilježila suha težina.

Suve ćelije (20 mg) su ekstrahovane sa 10 ml 50 posto (v/v)metanola na sobnoj temperaturi ultrazvukom (40 kHz, 160 W) tokom 15 minuta. Nakon filtracije kroz filter od 0,22 lm, 20 ll uzoraka je ubrizgano u HPLC sistem (Waters 2695) opremljen sa C18 kolonom (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, veličina čestica 5 μm). Mobilna faza se sastojala od metanola i 0,05 posto rastvora sirćetne kiseline i vode (v/v) u omjeru 35:65 (v/v). Brzina protoka je bila 1,0 ml min^–1, temperatura kolone je bila 30 stepeni, a talasna dužina UV detekcije (Waters 2996) bila je 334 nm.

Kalibracione krive odechinacosideiacteosidebili u dobroj linearnosti u rasponu od {{0}}.2–6.4 lg(r=0.9997) i 0.16–4.6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995. Prosječni oporavak ehinakozida i akteozida (n=5) bio je 98,7 posto (RSD=1,5 posto) i 98,2 posto (RSD=1 .28 posto), respektivno. Eksperimenti preciznosti i tačnosti pokazali su dobre rezultate, relativna standardna devijacija je bila manja od 2 procenta. Granice kvantifikacije bile su 0,04 i 0,06 lg za ehinakozid i akteozid, respektivno. Standardi ehinakozida i akteozida su kupljeni od NICPBP (Nacionalni institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, Peking, Kina). Proizvodnja ehinakozida/akteozida=Sadržaj ehinakozida/akteozida (mg g–1 DW) x Biomasa (g DW l^–1).

Statističke analize

Svi eksperimenti i određivanja su ponovljeni tri puta i sve vrijednosti su bile srednje vrijednosti triplikata ± SE. Podaci su predati analizi varijanse (jednosmjerna ANOVA, Tukey test) kako bi se otkrile značajne razlike pomoću PROC ANOVA SAS verzije 6.12.

Rezultati

Učinci poliamina na rast kalusa,echinacoside, iacteosidesadržaj.

Tabela 1 pokazuje efekte poliamina na rast kalusa,echinacoside, iacteosidesadržajCistanche deserticola. Put i Spm su značajno podsticali rast kalusa pri odgovarajućoj koncentraciji. Oko 25 lM Put je bio najefikasniji, a biomasa (11,2 g DW l–1) je bila 1.3- puta više od kontrole. Istovremeno pojačan poliaminimaechinacosidesadržajem značajno. Kada se doda 25 lM Put,echinacosidesadržaj je povećan za 46 procenata u poređenju sa kontrolom, dok nije nađeno značajno povećanje sadržaja akteozida.

Učinci Ag plus i Co2 plus na rast kalusa, sadržaj ehinakozida i akteozida

Efekti metalnih jona na rast kalusa,echinacoside, iacteosideSadržaj je ilustrovan u tabeli 2. Sadržaj ehinakozida i akteozida je u velikoj meri promovisan Ag plus dok je rast kalusa bio blago inhibiran. Kada se doda 10 lM Ag plus,echinacosidesadržaj iacteosidesadržaj je povećan za 73 posto, odnosno 62 posto u odnosu na kontrolu. Istovremeno nije bilo značajne razlike u biomasi između tretmana Ag plus i kontrole. Co2 plus jedva da je pokazao pozitivne efekte na rast kalusa i sadržaj PeG.

Efekti vremena hranjenja na rast kalusa, sadržaj ehinakozida i akteozida

Put (25 lM) i Ag plus (10 lM) su odabrani za dalje eksperimente. Efekti vremena hranjenja na rast žuljeva,echinacoside, iacteosideSadržaj je prikazan u tabeli 3. Kada je 8. dana dodat Put (25 lM), dobijena je maksimalna biomasa (11,8 g DW l–1). U međuvremenu,echinacosidesadržaj je povećan na 107,2 mg g–1 DW dokacteosidesadržaj je bio skoro isti kao i kontrolni.

Ag plus dodavanje u ranije vrijeme dovelo je do manje biomase. Dodavanje Ag plus (10 lM) 16. dana, obaechinacosidesadržaj (127,9 mg g–1 DW) iacteosidesadržaj (34,2 mg g–1 DW) je dostigao maksimum, koji je bio 2.2- puta i 1.4- puta od onih u kontroli, respektivno.

Kombinovani efekti Puta i Ag plusa na rast kalusa, proizvodnju ehinakozida i akteozida

Kao što je prikazano u rezultatima pojedinačnih elicitora, dodatak Puta u ranoj fazi povećao je biomasu, a Ag plus dodatak u kasnoj fazi promovira sadržaj ehinakozida i akteozida bez značajnog smanjenja biomase. Tako je dizajniran dvostepeni protokol elicitacije. Put (25 lM) i Ag plus (10 lM) dodani su u odgovarajućim optimalnim fazama.

Slika 1 prikazuje efekte kombinacije dodavanja Putand Ag plus na rast kalusa,echinacoside, iacteosideproizvodnje za razliku od kontrole. Kada je Put (25 lM) dodan 8. dana i Ag plus (10 lM) dodat 16. dana, optimalna biomasa (11,4 g DW l–1), sadržaj ehinakozida (152,4 mg g–1 DW) i sadržaj akteozida (36,1 mg g–1 DW) postignuti su 20. dana (slika 1). Theechinacosideproizvodnja (1,7 gl–1) iacteosideproizvodnja (0.4 gl–1) iznosila je 3.3-puta i 2.1-puta od onih u kontroli, respektivno, koje su bile veće od onih u pojedinačnom elicitaciji (tabela 3) . U poređenju sa tretmanom sa jednim elicitorom,echinacosideiacteosideproizvodnja kombinovanjem elicitora bila je 1.4- i 1.5- puta onih u tretmanu single Put, 1.6- puta i 1.4- puta onih pojedinačnih Ag plus tretmana , odnosno. Produžena kultura smanjena je biomasa, proizvodnja ehinakozida i proizvodnja akteozida (slika 1)

Slika 1 Profili biomase (A),echinacoside, iacteosideproizvodnja (B) sa/bez kombinovanja elicitora u kulturi suspenzijeCistanche deserticola. Vertikalne trake predstavljaju standardnu ​​grešku od tri ponavljanja. Kalus, 0.125 g DW, inokuliran je u Erlenmajerove tikvice od 250-ml koje sadrže 50 ml B5 podloge. Put (25 lM) i Ag plus (10 lM) dodani su 8. i 16. dana, respektivno. Eksperimenti su rađeni na 25 stepeni u mraku na rotacionoj mućkalici (110 obrtaja min–1) tokom 20 dana

Utjecaj Puta i Ag plus na vitalnost stanica, sadržaj H2O2 i aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima

Razumjeti mehanizam djelovanja elicitora na rast stanica i sekundarni metabolizamCistanche deserticola, promjene vijabiliteta stanica, sadržaja H2O2 i aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima nakon dodavanja Puta i Ag plus ispitivane su u dvostepenoj elicitacionoj kulturi. Kada je Put dodat 8. dana (0 h na sl. 2), sadržaj H2O2 se brzo smanjio, što je samo 48,9 posto kontrole u 6. satu, respektivno, i vratio se na nivo kontrole postepeno nakon 24 h (sl. 2A). Vijabilnost ćelija se povećavala do 12 h, a zatim je stalno opadala, što je bilo 26,9 procenata i 16,7 procenata više od kontrole u 24 h i 48 h (slika 2B). Aktivnosti SOD i APOX su se značajno povećale nakon 6 h, a aktivnost SOD se smanjila na sličan nivo kontrole nakon 24 h dok je APOX aktivnost i dalje bila 1.3- puta u odnosu na kontrolu (Slika 2C, D). Dodavanje nije pokazalo značajan uticaj na aktivnost CAT (Slika 2E). Smanjenje sadržaja H2O2 i rast aktivnosti antioksidativnih enzima značili su manje oksidativno oštećenje i održavali više ćelija održivim od kontrole.

Slika 2 Promjene sadržaja H2O2, vitalnosti ćelije, APOX, SOD, CAT i PAL aktivnosti nakon dodavanja 8. dana kulture suspenzijeCistanche deserticola. Vertikalne trake predstavljaju standardnu ​​grešku od tri ponavljanja

Istovremeno, aktivnost PAL dostigla je maksimum u 12. satu, a zatim se postepeno smanjivala na nivo sličan kontroli nakon 48 h (slika 2F).

Ćelije su kontinuirano uzgajane nakon dodavanja Puta, a Ag plus je dodat mediju 16. dana (0 h na slici 3). Sadržaj H2O2 se brzo povećavao i zadržao značajno viši nivo od kontrole do 48 sati (slika 3A). Međutim, vitalnost ćelija je značajno inhibirana i postala manja (slika 3B). APOX aktivnost je zadržala konstantan nivo i smanjila se nakon 24 h (slika 3C). Aktivnosti SOD-a i CAT-a su se naglo povećale nakon 3 h i dostigle svoj maksimum u 12 h i 6 h, respektivno, koje su bile 1.6- puta i 10- puta veće od kontrola, a zatim polako opadale (Sl. 3D , E). Aktivnost PAL-a se povećala na 2.1-puta od kontrole nakon 24 h, što je i dalje bilo 22,5 posto više od kontrole nakon 48 h (slika 3F).

Slika 3 Promjene sadržaja H2O2, vitalnosti ćelije, APOX, SOD, CAT i PAL aktivnosti nakon Ag plus dodavanja 16. dana kulture suspenzijeCistanche deserticolasa Put dodatkom danas 8. Vertikalne trake predstavljaju standardnu ​​grešku tri ponavljanja.

Diskusija

Poliamini i ioni metala pokazali su različite utjecaje na rast kalusa i proizvodnju PeGCistanche deserticola. U odgovarajućim koncentracijama, poliamini su uglavnom pojačavali rast tekalusa, dok je Ag plus promovirao proizvodnjuechinacosideiacteosideznačajno. Kada su i Put i Ag plus u optimalnoj koncentraciji dodani u različito vrijeme, pojavili su se neki sinergijski efekti.

Za rast kalusa, promotivni efekat se oslanjao na vrstu poliamina, koncentraciju i vrijeme hranjenja. 25 lMPut je bio najefikasniji za rast kalusa kada je dodat 8. dana. Elicitor je pokazao optimalni efekat promocije u ranoj fazi rasta. Iako je utvrđeno da Ag plus i Co2 plus povećavaju sekundarne metabolite u različitim biljkama (Zhaoet al. 2005), samo je Ag plus pokazao pozitivan učinak na sadržajechinacosideiacteoside. Budući da bi Ag plus mogao inhibirati vitalnost i proliferaciju stanica, dodatak Ag plus 16. dana pojačao je proizvodnjuechinacosideiacteosidebez značajnog smanjenja biomase.

Kada su biljne ćelije izložene tretmanu elicitorom, elicitor inicira transdukciju signala sa površine plazma membrane i proizvodnju ROS-a, inducira odbrambeni odgovor biljaka i pojačava sekundarni metabolizam biljke regulacijom ključnih enzima koji kataliziraju biosintezu ciljnih sekundarnih metabolita (Zhao et al. 2005). Oksidativni stres zbog tretmana elicitorom rezultira akumulacijom ROS-a i može se ublažiti antioksidantenzimima, uključujući SOD, APX, CAT i POD. Kada je oksidativno oštećenje izvan funkcije antioksidantenzima, biljne stanice mogu umrijeti jer se vitalnost stanica smanjuje.

Smatra se da H2O2, vrsta ROS-a, posreduje u programiranoj ćelijskoj smrti i reguliše sekundarnu metabolitesintezu indukujući ekspresiju mnogih odbrambenih gena i biosintetskih gena sekundarnih metabolita, kao što je PAL. Smatra se da H2O2, vrsta ROS-a, posreduje u programiranoj ćelijskoj smrti i reguliše sekundarnu metabolitesintezu indukujući ekspresiju mnogih odbrambenih gena i biosintetskih gena sekundarnih metabolita, kao što je PAL.

Poliamini su poboljšali toleranciju na abiotski stres tako što su efikasno hvatali ROS, štiteći nukleinsku kiselinu i membranu (Alca´zar et al. 2006.) i povećavajući aktivnost antioksidantenzima (Tang i Newton 2005.). Prema izvještaju Papadakisa i Roubelakis-Angelakisa (2005), Put je pokazao bolji efekat blokiranja na akumulaciju ROS od Spd i Spm. Kao što je prikazano u našim rezultatima, konačni tretman biomasom inPut bio je veći od onih u tretmanima Spd i Spm. Egzogeni put je smanjio sadržaj H2O2, povećao aktivnost enzima antioksidansa i efikasno vitalnost ćelija. Vjerovatno je veća vitalnost ćelija doprinijela većoj proliferaciji i većoj biomasi. Tada bi se moglo objasniti zašto je Ag plus dodavanje u ranijem vremenu dovelo do manje biomase za Ag plus povećana akumulacija H2O2 i značajno smanjena vitalnost ćelija. Aktivnosti antioksidativnih enzima su poboljšane kako bi se ublažio oksidativni stres bez utjecaja na vitalnost stanica. Ag plus dodatak je također promovirao PALactivity kao i proizvodnjuechinacosideiacteosideznatno. Mehanizam bi mogao biti u skladu sa rezultatima Desiken et al. (1998) i Yuan et al. (2001). H2O2 može igrati ključnu ulogu u proliferaciji ćelija i proizvodnji PeG. Povećajte PAL aktivnost iechinacosidesadržaj u određenom stepenu, moguće na neki drugačiji način za Put smanjen sadržaj H2O2.

Posljednjih godina većina izvještaja se fokusirala na učinak jednog elicitora na rast kalusa i sadržaj PeGsCistanche deserticola. Međutim, mnogi elicitori nisu pojačali rast kalusa u optimalnoj koncentraciji, kao što su aschitosan, funal elicitor (Fusarium solani), metil jasmonat i salicilna kiselina (Cheng et al. 2006; Lu i Mei2003; Xu et al. 2005). Mješavina rijetkih zemnih elemenata poboljšala je rast ćelija i proizvodnju PeG, 26 posto i 167 posto više od onih u kontroli (Ouyanget al. 2003b). Ponovljeno elicitiranje sa jednim elicitorom je takođe značajno povećalo proizvodnju PeG (Cheng et al.2005, 2006). Dobra je alternativa da se dobije optimalna proizvodnja biomase i PeG dodavanjem različitih elicitora u različitim fazama. Kada je 25 lM Put i 10 lM Ag plus dodato 8. i 16. dana, respektivno,echinacosideproizvodnja (1,7 gl–1) i proizvodnja akteozida (0.4 gl–1) dostigle su maksimum, koje su bile veće od onih iz pojedinačnih Put ili Ag plus elicitacije kao i prethodnih izvještaja.

Od: ' Poboljšanjeechinacosideiacteosideproizvodnju dvofaznom elicitacijom u kulturi ćelijske suspenzijeCistanche deserticola' byWen-Hao Chen i dr

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Reference

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Učešće poliamina u odgovoru biljaka na abiotički stres. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Povećana produktivnost ginsenozida kombinacijom etefona i metil jasmonata u kulturama adventivnih korijena ginsenga (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Uloga poliamina u ontogeniji biljaka i njihove biotehnološke primjene. Kult organa tkiva biljnih ćelija 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Ponovljeno izvlačenje povećava akumulaciju feniletanoidnih glikozida u kulturama ćelijske suspenzijeCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Poboljšanje biosinteze feniletanoidnih glikozida uCistanche deserticolakulture stanične suspenzije pomoću elicitora hitozana. J Biotechnol 121:253–260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funkcije amin oksidaza u razvoju i odbrani biljaka. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin i vodonik peroksid iniciraju programiranu ćelijsku smrt, ali imaju različite efekte na ekspresiju odbrambenih gena u kulturama suspenzije Arabidopsis. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Potrebe za nutrijentima u suspenzijskim kulturama ćelija korijena soje. Exp Cell Res 50:151–158 Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Promjene u
aktivnosti askorbat peroksidaze, katalaze, gvajakol peroksidaze i superoksid dismutaze u kvržicama graha (Phaseolus vulgaris) pod stresom od soli. J Plant Physiol 162:929-936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Poboljšana proizvodnja taksola kombinacijom faktora indukcije u suspenziji ćelijske kulture Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolizam aromatičnih i svojstva fenilalanin deaminaze Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692–2698
Lu CT, Mei XG (2003) Poboljšanje proizvodnje feniletanoidnih glikozida pomoću gljivičnog elicitora u kulturi stanične suspenzijeCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Formiranje feniletanoidnih glikozida od straneCistanche deserticolakalus uzgojen na čvrstoj podlozi. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Efekti rijetkih zemnih elemenata na rastCistanche deserticolaćelije i proizvodnju feniletanoidnih glikozida. J Biotechnol 102:129–134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005.) Poliamini inhibiraju stvaranje superoksida posredovano NADPH oksidazom, a putrescin sprječava programiranu ćelijsku smrt izazvanu vodonik peroksidom generiranim poliamin oksidazom. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Napredak u istraživanju farmakološke aktivnosti u biljkamaCistancheHoffing et Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Poliamini smanjuju oksidativna oštećenja izazvana solima povećanjem aktivnosti antioksidativnih enzima i smanjenjem peroksidacije lipida u borovini iz Virdžinije. Plant Growth Regul 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oksidativni stres i neki antioksidativni sistemi u tretiranim kiselim kišama su zaštitna uloga egzogenih poliamina za biljke. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Evaluacija analitičkih tehnika za predviđanje održivosti nakon krioprezervacije. Kult organa tkiva biljnih ćelija 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2– iz oksidativnog praska izazvanog elicitorom neophodan je za pokretanje aktivacije fenilalanin amonijak-lijaze i sinteze katarantina u ćelijskim kulturama Catharanthus roseus. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Efekti metil jasmonata i salicilne kiseline na sintezu feniletanoidnih glikozida u suspenzijskim kulturamaCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Put prenosa signala za oksidativni prasak i proizvodnju taksola u suspenzijskim kulturama Taxus Chinensis var. mairei izazvan oligosaharidom iz Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Putevi djelovanja elicitora na putu biosinteze taksola i njihov sinergijski učinak. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Transdukcija signala Elicitor dovodi do proizvodnje sekundarnih metabolita biljaka. Biotechnol Adv 23:283–333