Identifikacija Hidrogen Peroksid Responsive ESTs uključeni u Phenylethanoid Glycoside Biosynthesis u Cistanche Salsa Cell Culture

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Apstraktno
Vodikov peroksid je efikasan abiotski elicitor koji može inducirati sekundarnu biosintezu metabolita u biljkama. Pokazujemo da u kulturi suspenzije ćelija ljekovite biljke koja je tolerantna na solCistancheSalsa, proizvodnja bioaktivnih komponentifenilethanoidglycosides(PeGs) je povećan nakon liječenja H2O2. Za identifikaciju gena vezanih za PeG-e(fenilethanoidglycosides )Biosinteza zahvaćena H2O2, konstruirali smo supresivnu hibridizaciju biblioteke H2O2 responzivnih gena koristećiCistancheSalsaćelijske linije i identifikovano 105 izraženih oznaka sekvenci (EST) i 85 gena. EST biblioteka funkcionalna annotacija i genske ontologije analize su pokazale gene vezane za različite stresne odgovore, biosintezu sekundarnih metabolita, i transkripcionu regulaciju. Među njima, identifikovali smo dva gena vezana za PEG(fenilethanoidglycosides )put biosinteze (4-koumarat koenzyme A ligaza i cinnamat 4-hidroksilaza), i dva faktora transkripcije WRKY tipa. Izraze odabranih gena nakon liječenja H2O2 analizirao je RT-qPCR. Rano povećana transkripcija PeG-a(fenilethanoidglycosides )geni puta biosinteze nakon tretmana otkrili su da je H2O2 inducirao PeGs(fenilethanoidglycosides )biosinteza putem up-regulacije njenih ključnih gena.
Dodatne ključne reci: cinnamate-4-hidroksilasa, 4-coumarat coenzyme A ligaz, suppression subtractive hybridization.CistancheSalsa.fenilethanoidglycosides.

Uvođenje

CistancheSalsaje višeletni biljni parazit na korijenu Haloxylos ammodendrun, a raste u pustinjskom području zapadne Kine. Vekovima,Cistanchevrsta je korištena kao tradicionalna biljna medicina (Wang et al. 2012). Bioaktivne komponente sufenilethanoidglycosides(PeGs) koji imaju izuzetan učinak na reaktivne vrste kisika (ROS) clearance, zaštita od zračenja, poboljšanje imuniteta, i anti-aging (Nan et al. 2013). PeGs(fenilethanoidglycosides )biosinteza uCistanchese pokreće iz fenilalanina (fig. 1 Suppl.) i sintetizirana kofeinske kiseline je dalje glycosylated za formiranje raznih PeG-ova(fenilethanoidglycosides )(Wang et al. 2012). Tri glavna PeG-a(fenilethanoidglycosides ), echinacoside, acteoside, i 2'-acetylacteoside, smatraju se najaktivnije komponente uCistanche(Kobayashi et al. 1984). Kako bi se poboljšao njihov sadržaj uCistancheCelična kultura, različiti elicitori su testirani uključujući chitosan, putrescine, Ag+, i osmotski stres (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu i Cheng 2008). Međutim, geni uključeni u PEG-e(fenilethanoidglycosides )biosinteza uCistanche, uglavnom geni puta metabolizma fenilalanina, rijetko su identificirani. U Cistanche deserticola (Hu et al. 2011) nedavno je identificiran samo gen kodifikujući fenilalanin amonijak-lijaza (PAL). Drugi geni kodirati, na primjer, cinnamate-4-hidroksilaza (C4H), koji bi mogli katalizirati konvertovanje cinnama u kumarnu kiselinu, i 4-koumarat koenzima A ligaze (4CL), esencijalnog gena za biosinteze lignina i flavanoida, nisu pronađeni uCistanche.
Koristili smo ćelijske kultureCistancheSalsaza proučavanje PeG-ova(fenilethanoidglycosides )biosinteza i srodan genski izraz. Istražili smo i učinak efektivnog elicitora H2O2 na PeG-ove(fenilethanoidglycosides )biosinteze. Nadalje, pronaći rane responzivne gene koji su uključeni u PEG-e(fenilethanoidglycosides )Biosinteza, izvršili smo supresiju subtraktivnu hibridizaciju (SSH) za konstruiranje cDNA biblioteke gena koji reaguju na H2O2.

Fig. 1. Relativna ekspresija gena određena RT-qPCR nakon liječenja H2O2. CsWRKY1 - WRKY transkripcioni faktor (Contig07), CsC4H1 - cinnamat 4-hidroksilaza (Contig09), Cs4CL1 - 4-couma : ligaze (Contig03), CsHSP1 - protein toplotnog šoka 70 kDa (Contig 01), i CsSOD1 - superoksid dismutaze (Contig16). Ćelije su tretirane sa 80 μg dm-3 H2O2 u tekućem medijumu za 2 h i izrazi su upoređeni sa kontrolom tretiranom vodom. Znači +- SD od tri biološka ponavljanja; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Materijali i metode

Linija ćelija CS2001 uspostavljena je od laticeCistancheSalsa(C.A. Mey.) Beck je skupio u provinciji Neimenggu i subkulturirao. Metoda kulture je bila slična protokolu koji je ranije objavljen (Liu et al. 2007). Generalno, čvrsti Murashige i Skoog (1962; MS) medij je korišten za subkulturu i tekući medij za PeG-e(fenilethanoidglycosides )biosinteza (to je bio modificirani MS medij dopunjen sa 30 g dm-3 glukoze i 2,0 mg dm-3 indol-3-acetske kiseline). Za liječenje H2O2, 5,0 ± 0,2 g ćelija u periodu brzog rasta, obično 20 do 30 d nakon što su subkulturirane u čvrstom medijumu, bile su inokulirane u tekući medij od 50 cm3 u erlenmajeru od 250 cm3 i kulturan u mraku sa ili bez različitih koncentracija H2O2. The PeGs(fenilethanoidglycosides )sadržaj nakon 10 d indukcije od strane H2O2 analiziran je prema prethodno objavljenoj metodi (Liu et al. 2007) na osnovu tekuće hromatografije visoke performanse reverzne faze uz eluciju metanola gradijenta.

Ćelije 2 h nakon tretmana H2O2 prikupljene su iz medijuma filter papirom pomoću Büchner lijana, a zatim su zamrznute u tekućem dušiku i zemlji do praha. Svaka 2 g ćelije u prahu je lizana koristeći mješavinu od 1 cm3 od 2-merkaptoetanola, 1 cm3 od 200 g dm-3 sarkosila, i 8 cm3 OD GTC pufera (5 M guanidinium izotiocyanate, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourea, i 10 mM ditiotreitol). Ćelije su zatim inkubirali na ledu 15 min, zatim 1/3 volumena od 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, a ćelije su inkubirali na ledu 15 min, a zatim centrifugirali na 15 000 g 15 min. Supernatant je dodat jednakoj zapremini izopropanola da bi se precipitiralo ukupno RNK. Ukupan RNA je dodatno pročišćen od strane RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, USA) prema uputama proizvođača. Messenger RNA je bio izoliran iz totalne RNK koristeći Oligotex mRNA midi kit (Qiagen).

fenilethanoidglycosidesuCistancheSalsa

SSH biblioteka je generisana iz kontrole i 30 % uzoraka ćelija sa H2O2 elicitacijom 2 h nakon elicitacije koristeći PCR-select cDNA set za oduzimanje (Clontech, Mountain View, USA). Za izgradnju biblioteke, proizvodi su pročišćeni odvojeno koristeći gel za pročišćavanje (Qiagen) i klonirani u vektor pGEM-a koristeći ta-kloniranje (Tiangen, Peking, Kina). Plazmidi iz nezavisnih klonova su bili izolirani i sekvencirani pomoću T7 primera. Sve izražene sekvence tag (EST) sekvence iz biblioteke (sa uklonjenim vektorskim sekvencama) su korištene za sklop kontiga sa CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST su grupirani u kontig i singletons; oni su korišteni za homologiju pretraživanja koristeći BLASTx program u NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Sekvence su tada bile anotirane, analizirane i klasificirane prema genskom ontologijskom (GO) terminu koristeći Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Kvantitativna lančana reakcija polimeraznih polimeraza u realnom vremenu (RT-qPCR) izvedena je prema Bustin et al. (2009). Uzorci cDNA su sintetizirani pomoću PrimeScript RT reagenta (Takara, Dalian, Kina) od 0,5 μg od ukupnog RNK. RT-qPCR je izvršen koristeći SYBR Premix Ex Taq II i ROX plus kits (Takara) na ABI 7300 PCR sistemu (Primenjeni biosustavi, Foster City, SAD) sa tri tehničke replike. Primers su dizajnirani koristeći online Primer3 softver prema uputstvu koje je snabdeo Takara; primeri koji se koriste u ovoj studiji su nabrojani u Tabeli 1 Suppl. Genske ekspresije su normalizirane na 18S RNK, od kojih je izraz bio stabilno u svim uzorcima.

Rezultati su analizirani koristeći R verziju 3.1.1, značaj razlika je verificiran Studentov t-test.

Rezultate

Hidrogen peroksidom izazvan biosinteza sva tri glavna PeG-a(fenilethanoidglycosides )uCistancheSalsaćelije suspenzije (Tabela 1) ali bez očiglednog efekta na rast ćelija (smokva. S2). Sadržaj ehinakosidea povećao se već nakon liječenja 10 μg dm-3 H2O2 (P< 0.05),="" a="" higher="" increase="" was="" recorded="" after="" the="" 20="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment="" (p="">< 0.01),="" and="" the="" highest="" increase="" was="" after="" the="" 40,="" 80,="" and="" 160="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatments.="" similar="" results="" are="" shown="" for="" acteoside,="" but="" its="" content="" peaked="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment.="" the="" biosynthesis="" of="" 2'-acetylacteoside="" was="" less="" sensitive="" to="" h2o2="" treatment;="" a="" significant="" increase="" of="" its="" content="" (p="">< 0.05)="" was="" at="" h2o2="" concentrations="" over="" 40="" μg="" dm-3.="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment,="" the="" amount="" of="" all="" the="" three="" main="" pegs="">(fenilethanoidglycosides )značajno povećana (P< 0.01)="" over="" the="" control.="" therefore,="" this="" concentration="" was="" used="" in="" further="">
Za generiranje biblioteke obogaćene za rane responzivne gene koji su up-regulisani od strane H2O2, koristili smo CDNA izCistancheSalsaovjesne ćelije tretirane sa 80 μg dm-3 H2O2 za 2 h. Jednostruki sekvenciranje 129 rekombinantnih klonova u SSH biblioteci dalo je 105 čistih EST-ova nakon isključenja vektorske sekvence. Ovi jasni EST-ovi su korišteni za montažu od strane CAP3, a generisano je 18 kontiga i 67 singletona (Tabela 2). Tako je u ovoj biblioteci izolirano 85 gena. Srednje dužine čistih 105 EST je bila 527 bp, što je adekvatno za sekvencu zasnovanu na sličnosti funkcionalne klasifikacije.

fenilethanoidglycosidesuCistancheSalsa

Svih 85 gena dobivenih u biblioteci je izvukao BLASTx protiv GenBank baze podataka nevišnih proteina za sličnost sekvenci (E-vrijednost ≤ 0,001). 21 gen nije pokazao nikakve pogodke u bazi podataka, možda su specifični zaCistancheSalsa. Rezultati sa BLASThits su uvezeni u Blast2GO softver za daljnje analize obogaćivanja PUTEVA GO i KEGG. Od 64 gena sa BLAST hitovima, 50 je bilo anotirano prema opisu homolognih gena iz drugih vrsta. Anotiran geni su imenovani prema opisu BLAST hitova. Go analiza (fig. 3 Suppl.) pokazuje da je među tih 50 gena bilo uključeno 14 gena u odgovore na stimule, i preko 30 gena vezanih za metaboličke procese (Tabele 1 i 2). Među ovim genima, dva PeG biosinteza patway gen homologs su izolirani kao što se očekivalo: 4-koumarat koenzim A ligaza (nazvan Cs4CL1: Contig03) i cinnamat 4-hidroksilaza (nazvan CsC4H1: Contig14). Nadalje, RT-qPCR je izveden kako bi se potvrdili inducovani izrazi gena iz biblioteke nakon liječenja H2O2.

Da bi se potvrdilo da su bitni geni identificirani iz SSH biblioteke reagirao na tretman H2O2, izrazi dva PeG-a(fenilethanoidglycosides )geni vezani uz put biosinteze (Cs4CL1, CsC4H1), dva gena izazvana ROS-om (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), i jedan gen nalikovan faktoru transkripcije porodice WRKY (CsWRKY1: Contig 07) mjereni su RT-qPCR-om nakon liječenja H2O2 (fig. 1). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 i CsWRKY1 su bili regulisani više od 15 puta, 3 puta, 45 puta, odnosno 4 puta, odnosno 2 h nakon H2O2 tretmana. Izraz CsHSP1 je promijenjen samo 1,8 puta nakon liječenja H2O2.
Time-tok izraza CsWRKY1, CsC4H1 i Cs4CL1 nakon H2O2 tretmana dodatno je analiziran od strane RT-qPCR (fig. 2). CsC4H1 i Cs4CL1 izrazi su bili visoko povećani (više od 80 puta, odnosno 50 puta) nakon 16-h liječenja, a zatim i dolje regulirani nakon 32 h. Izraz CsWRKY1 je bio up-regulisan više od 20-fold na 4 h, a zatim je pao sa 8 h nakon toga (sliv 2).

Fig. 2. Relativni izraz CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) i Cs4CL1 (C) u različito vrijeme nakon liječenja sa 80 μg dm-3 H2O2. Izrazi su normalizirani u kontrolu; (tretirana vodom). Znači +- SD od tri biološka ponavljanja; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Rasprava

Vodikov peroksid je poznati biljni elicitor koji pokazuje različite efekte na biljke. Kao i ROS, može da inducira ROS sistem za raspršivanje koji se sačinjava od superoksidne dismutaze, katalaze, peroksidaza itd., i služi kao nizvodni signal soli, osmotske i dehidacije

naglašava (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Predloženo je da je H2O2 generacija u biljkama popraćena induciranom sekundarno-metabolitnom biosintezom uCistancheSalsakulture ćelija. Kao što se očekivalo, naši rezultati otkrivaju da PeGs(fenilethanoidglycosides )biosinteza uCistanche salsaceliju kulturu je inducirao nakon liječenja H2O2 (Tabela 1). Sadržaj tri glavna PeG-a(fenilethanoidglycosides )povećan nakon liječenja H2O2 što ukazuje na njegovu ključnu ulogu u biosintezi pegova. Geni obogaćeni u SSH biblioteci dodatno sugerisu njegov učinak na PeG-e(fenilethanoidglycosides )indukcija biosinteze uCistanche salsa.

Mnogi poznati geni koji reaguju na H2O2, kao što su askorbat peroksidaza (CISTH069, Karyotou i Donaldson 2005), h-quinone oksidoreductaza (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), i geni otpornosti na bolesti (Contig10, Nanda, et al. 2010), obogaćeni su u SSH biblioteci (Tabela 3, Tabela 2 Suppl.). Neki od ovih tipičnih ROS responzivnih gena sa induciranim izrazom nakon liječenja H2O2 dodatno su potvrđeni od strane RT-qPCR (fig. 1 i 2) što ukazuje da je ovdje konstruirana kvalifikovana SSH biblioteka. U ovoj biblioteci su pronađena i dva gena za put biosinteze, CsC4H1 i Cs4CL1, a ova dva genska izraza su izazvana tretmanom H2O2 na vrijeme zavisan način (sliv 2). Sugerira da je liječenje H2O2 inducirao PeG-e(fenilethanoidglycosides )biosinteza na genetičkom nivou putem regulacije GENA PAL puta. Međutim, PAL i drugi nizvodni geni biosinteze PeGs (Wang et al. 2012) nisu identificirani u SSH biblioteci; Možda zato što biblioteka nije dovoljno sekvencisana. Odnos između CsC4H1 i Cs4CL1 je inducirao izraze i povećanu biosintezu PeG-ova nakon liječenja H2O2 treba razjasniti daljnjom analizom.

Pored GENA PAL pathwaya izazvanih tretmanom H2O2, dva faktora transkripcije porodice WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) pronađena su u SSH biblioteci (Tabela 3 i Tabela 2 Suppl.), a csWRKY1 induciran izraz je potvrđen od strane RT-qPCR- a. Njegova ekspresija se odaziva na liječenje H2O2 ranije od izraza dva PAL pathway gena, Cs4CL1 i CsC4H1 (fig. 2). Iz prethodnih studija, uočeno je su-izražavanje nekih WRKY transkripcionih faktora i PAL pathway gena u riži (Gupta et al. 2012). Nadalje, PAL genska ekspresija je up-regulisana u OsWRKY03 over-expression mutant (Liu et al. 2005). Gore pomenuta dva faktora transkripcije porodice WRKY možda su uključena i u PeG-ove(fenilethanoidglycosides )biosinteza uCistancheSalsa. Zanimljivo je da su EST-i vezani za dehidaciju (CISTH067, CISTH064) pronađeni u SSH biblioteci, što može sugerirati da je tretman H2O2 bio vezan za dehidaciju koja se odnosi na ekspresiju gena uCistancheSalsakao što se primjećivala u drugim biljkama (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Jedan gibberellin (GA) gen povezan sa signalom, gid1b-like (CISTH092), identificiran je u SSH biblioteci koji implicirao vezu GA signalizacije i H2O2 tretmana uCistancheSalsa, koja je također prijavljena u ječmu (Bahin et al. 2011). Međutim, potrebno je više studija da bi se potvrdilo da li su ti geni vezani za PEG(fenilethanoidglycosides )biosinteze. Osim gore spomenutih gena, SSH biblioteka konstruirana ovdje također predstavlja gene sa ili bez BLAST hitova. Poboljšava naše razumijevanje H2O2 efekta na C. salsu i prvo isporuči informacije svojih gena uključenih u biosintezu pegova.

Zakljucimo, procijenili smo ucinak H2O2 na PeG-ove(fenilethanoidglycosides )indukcija uCistancheSalsakulture ćelija. SSH biblioteka je konstruirana nakon tretmana H2O2, a izražavanje izabranih gena je potvrđeno od strane RT-qPCR-a. Identificirana su dva gena vezana za biosintezu peg-biosinteze i drugi geni koji reaguju na H2O2. Ovi nalazi će proširiti naše razumijevanje pegova izazvanih H2O2(fenilethanoidglycosides )biosinteza uCistancheSalsana molekularni nivo, pružajući informacije za gensku manipulacijuCistancheSalsaćelijske kulture za poboljšanje PeG-ova(fenilethanoidglycosides )Proizvodnju.

Od: ' Identifikacija vodikovog peroksida responzivnih EST-ova uključenih u feniletanoidnu biosintezu glikozida u cistanche salsa cell culture' poJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Reference

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Crosstalk između reaktivnih vrsta kisika i hormona signalnih puteva regulira mirovanje žita u ječmu. - Plant Cell Environ. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Reaktivne vrste kisika generirane proteinom toplinskog šoka (Hsp) koji inducira proizvod doprinosi proizvodnji Hsp70 i Hsp70 posredovanom zaštitnom imunitetu u Artemiji franciscana protiv patogenih vibriosa. - Dev. Comp. Imunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, R.I., Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, F.J., Villalba, J.M.: Expression of NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 in HeLa cells - uloga vodikovog peroksida i faze rasta. - J. Biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, S.A., Vandesompele, J., Pfaffl, M.W.: Standardizacija qPCR i RT-qPCR. - Genet. Eng. Biotechnol. Vijesti 29: 40-43, 2009.
Cheng, X.Y., Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, C.Z.:Cistanchedeserticola cell suspension cultures :fenilethanoidglycosidesbiosinteze i antioksidantne aktivnosti. Obradi biohemiju. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, X.Y., Zhou, H.Y., Cui, X., Ni, W., Liu, C.Z. Poboljšanjefenilethanoidglycosidesbiosinteza uCistanchedeserticola cell suspension cultures by chitosan elicitor. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisic acid mediates hydrogen peroxide production in kikiriki induced by water stress. Biol, plant. 57: 555-558, 2013.
Gupta, S.K., Ra, i A.K., Kanwar, S.S., Chand, D., Singh, N.K., Sharma, T.R.: Single functional blast resistance gene Pi54 aktivira složeni obrambeni mehanizam u riži. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, G.S., Jia, J.M., Hur, Y.J., Chung, Y.S., Lee, J.H., Yun, D.J., Chung, W.S., Yi, G.H., Kim, T.H., Kim, D.H.: Molekularna karakterizacija fenilalanin amonijako-lijaze gena izCistancheDeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Reakcija biljaka na stres vode: uloga reaktivnih vrsta kisika. - Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, R.P.: Askorbat peroksidaza, strvinar vodikovog peroksida u glioksisomalnim membranama. - Arc h. Biochem. Biofiz. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studije o konstituentimacistancheje herba. 4. Izolacija i strukture 2 nova fenilpropanoida glycosides, cistanoside-C, i cistanoside-D. - Hem, farma, bik. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, C.Z., Cheng, X.Y.: Poboljšanjefenilethanoidglycosidesbiosinteza u celijskih kulturamaCistanchedeserticola po osmotskom stresu. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, J.Y., Guo, Z.G., Zeng, Z.L.: Poboljšana akumulacijafenilethanoidglycosidesprekursor hranjenjem do ovjesne kultureCistancheSalsa. - Biohema. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, X.Q., Bai, X.Q., Qian, Q., Wang, X.J., Chen, M.S., Chu, C.C.: OsWRKY03, transkripcioni aktivator riže koji funkcionira u obrambenom signalnom putu uzvodno od OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. - Physiol, biljka. 15: 473-497, 1962.
Nan, Z.D., Zeng, K.W., Shi, S.P., Zhao, M.B., Jiang, Y., Tu, P.F.:Fenilethanoidglycosidessa anti-upalnim aktivnostima iz stecakaCistanchedeserticola kulturan u pustinji Tarim. Fitoterapija 89: 167-174, 2013.
Nanda, A.K., Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktivne vrste kisika tokom biljno-mikroorganizma rane interakcije. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Poboljšana proizvodnjafenilethanoid glycosidesprekursor hranjenjem ćelijske kultureCistancheDeserticola. Obradi biohemiju. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Poboljšana proizvodnjafenilethanoidglycosidesporedCistancheDeserticola ćelije kulture u unutrašnjoj petlji airlift bioreactor sa sifter riser. - Enzim Mikrobiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, A.R., Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomska i histohemijska karakterizacija in vitro haustoriuma iz korijena Castilleja tenuiflora. Biol, plant. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, Y.J., Lee, O.R., Parvin, S., Balusamy, S.R., Khorolragchaa, A., Yang, D.C.: Aklimacija vodikovog peroksida pojačava toleranciju soli aktivirajući proteine povezane s odbranom u Panax ginseng C.A. Meyeru. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, H.M., Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, A.R., Fisahn, J., Segundo, B.S., Guiderdoni, E., Schippers, J.H.M., Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regulira reaktivne vrste kisika zavisne od signala tokom početnog odgovora na stres soli
u riži. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, X.Y., Xie, W.Y.:CistancheDeserticola Y.C. Ma, "Desert Ginseng": osvrt. - Amer. J. brada. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, S.G., Chung, B.Y., Kim, J.H., Lee, K.S., Kim, J.S. Uzorak taloћenja vodikovog peroksida u lisnim ovojnici pirinиa pod stresom soli. Biol, plant. 50: 469-472, 2006.
Zhou, X.F., Jin, Y.H., Yoo, C.Y., Lin, X.L., Kim, W.Y., Yun, D.J., Bressan, R.A., Hasegawa, P.M., Jin, J.B.: CYCLIN H1 regulira sušne stresne odgovore i plavi svjetlosni stomatni otvor inhibicijom reaktivne akumulacije kisika u Arabidopsisu. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.