HydroZitLa inhibira formiranje kalcijum-oksalatnog kamena kod nefrolitnih pacova i promoviše dugovječnost nematoda Caenorhabditis Elegans, 2. dio

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i sposobnost uklanjanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

cistanche supplement

Kliknite na Cistanche Norge

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Na osnovu naših sadašnjih nalaza, HydroZitLa je vršio antipatogenu funkciju kroz najmanje dva puta. Prvo, smanjio je izlučivanje oksalata u urinu, smanjio kapacitet kristalizacije CaOx u urinu i isporučio citrat. Drugo, sadržavao je biljne polifenole koji su bili sposobni da ublaže oksidativni stres i upalu, stoga inhibiraju litogenezu CaOx. U osnovi, oksalat se endogeno sintetizira u jetri koristeći glioksilat kao istaknuti prekursor41. Glioksilat se sintetizira iz glikolata pomoću enzima glikolat oksidaze (GO), a dalje se pretvara u oksalat pomoću laktat dehidrogenaze (LDH). Otkrili smo da HydroZitLa značajno smanjuje izlučivanje oksalata u urinu kod pacova tretiranih EG. Nagađali smo da HydroZitLa inhibira sintetički put oksalata u jetri kroz smanjenje jetrenih enzima uključenih u metabolizam glioksilata, posebno LDH i GO. Prethodna studija Kailasha i Varalakshmija pokazala je da ekstrakt stabljike banane smanjuje nivoe GO i LDH u jetri kod hiperoksaluričnih pacova izazvanih natrijum glikolatom27. Poonguzhali i Chegu su također izvijestili da sirovi ekstrakt iz stabljike banane smanjuje urinarni oksalat, glikolnu kiselinu i glioksilnu kiselinu kod hiperoksaluričnih pacova izazvanih glikolatom30. Nedavno su Patankar et al. pokazali su da njihova biljna formulacija, nazvana Herbmed Plus (koja sadrži stabljiku banane), smanjuje nivo aktivnosti LDH u tkivima jetre i bubrega42. Da bi se potvrdila naša spekulacija, treba dalje istražiti ekspresiju jetrenih i bubrežnih enzima uključenih u sintezu oksalata kod EG pacova tretiranih HydroZitLa.

cistanche nedir

Nekoliko linija dokaza snažno podupire da su oksidativni stres, upala i ozljeda bubrežnih tubula kritično uključeni u litogenezu CaOx3,4,15,43–45. Oksidativni stres izazvan kristalima oksalata i/ili CaOx uzrokuje ozljedu bubrežnih tubula koja stvara mjesta za nukleaciju kristala, adheziju, retenciju, agregaciju i konačno formiranje nidusa43,46,47. Nadalje, oksidativni stres aktivira inflamatornu reakciju koja zauzvrat ubrzava litogeni proces4,47,48. Stoga je fitomedicina koja ima antioksidativna i protuupalna svojstva obećavajuća mjera za prevenciju stvaranja bubrežnih kamenaca24. Aggarwal et al. demonstrirano u EG-induciranom nefrolitskom modelu štakora da bergenin (bioaktivno fenolno jedinjenje izolovano iz Bergenia ligulata) ima snažan antipatogeni efekat za ublažavanje oksidativnog stresa, ublažavanje mitohondrijalne disfunkcije i smanjenje tubularne povrede i upale49. Pokazalo se da rutin i kurkumin (dobro poznate autohtone fitokemikalije sa antioksidativnim i antiinflamatornim svojstvima) inhibiraju tubulointersticijska oštećenja i naslage kristala kod nefrolitičkih pacova izazvanih EG50. Takođe je pokazano da polifenoli iz sjemenki grožđa inhibiraju intrarenalne naslage CaOx kristala kod EG-indukovanih litijaznih štakora, vjerovatno kroz njihovu antioksidativnu aktivnost51. Pokazalo se da ajurvedska biljna formulacija Herbmed smanjuje upalne ozljede i naslage kristala u bubrezima nefrolitičkih pacova izazvanih EG42. U ovoj studiji smo pokazali da HydroZitLa smanjuje intrarenalni oksidativni stres, upalu i naslage kristala CaOx, što sugerira da HydroZitLa ispoljava antioksidativno i protuupalno djelovanje kako bi spriječio stvaranje CaOx bubrežnog kamenca.

Eksperimentalno je dokazano da su nekoliko biljnih polifenola korisni za produženje životnog vijeka i odlaganje starenja52. Resveratrol je najbolje okarakterisan polifenolni spoj koji produžava životni vijek. Djeluje prvenstveno kroz aktivaciju sirtuina i smanjenje oksidativnog stresa53. Efekat dugovječnosti resveratrola testiran na modelu C. elegans varira od studija s povećanjem srednjeg životnog vijeka u rasponu od 10 do 65 posto 54,55. HydroZitLa je značajno produžila životni vijek divljeg tipa C. elegans do 34 posto bez znakova toksičnosti, što sugerira da je učinak HydroZitLa na produženje životnog vijeka uporediv s onim od resveratrola. Ograničenje u ishrani je poznati ključni mehanizam dugovječnosti56. Stope faringealnog pumpanja u poređenju između HydroZitLa crva i kontrolnih crva bile su uporedive, što ukazuje na to da HydroZitLa produži životni vijek nije rezultat ograničenja u ishrani.

HydroZitLa je značajno smanjio akumulaciju autofluorescentnog pigmenta lipofuscina za starenje u C. elegans, što ukazuje na efekat protiv starenja. ROS i oksidativni stres su dobro poznati induktori SIPS-a, a oksidativni stres ubrzava skraćivanje telomera57. Nedavno smo pokazali da oksalat, COM i urin pacijenata sa CaOx kamencima izazivaju prerano starenje, povećanje p16 i atriciju telomera u bubrežnim tubularnim ćelijama kroz oksidativni stres 58. U ovoj studiji smo pokazali da HydroZitLa inhibira trošenje telomera, povećanje regulacije p16, prerano starenje u HK-2 ćelijama izloženim H2O2, oksalatu i COM. Iako molekularni mehanizam za ovaj efekat protiv starenja nije razrađen, za HydroZitLa je sugerirano da mehanički spriječi prerano starenje kroz inhibiciju skraćivanja telomera i smanjenje ekspresije p16.

Iako biljni lijekovi i fitomedicini progresivno postaju popularni i globalno prihvaćeni, naučni dokazi o djelotvornosti i sigurnosti moraju se pružiti i ne smiju biti kompromitovani. Interakcija između biljaka i lijekova teško je predvidjeti jer se jako razlikuje među pojedincima, ovisno o nekoliko faktora kao što su polimorfizmi enzima citokroma P450 i transporteri lijeka, te postojećih zdravstvenih stanja59. Neželjeni efekti istodobne primjene biljaka i lijekova moraju se pomno pratiti kako bi se identificirale potencijalne interakcije biljaka i lijekova. Najpoznatije biljke koje su ozbiljno stupile u interakciju sa drogama su beli luk, Baizhi, Danggui, ginseng, ginkgo, sladić, kantarion, kava, crni i dugi biber, Danshen, Huangqin i mlečni čičak59. Prema našim saznanjima, nisu zabilježene ozbiljne nuspojave ili interakcije lijekova za stabljiku banane, cvijet leptira plavog graška i drvo sapana. Na Tajlandu se stabljika banane konzumira kao sastojak hrane. Previše (prekomjerna konzumacija) soka od stabljike banane može uzrokovati alergiju, bolove u trbuhu i povraćanje, stoga se preporučuje umjerena konzumacija. Cvijet plavog graška se najčešće koristi u hrani kao prirodna boja, a koristi se i za pripremu čaja. Štetni efekti prekomjerne konzumacije čaja od cvijeta plavog graška, na primjer, želudac, mučnina i alergijske reakcije, rijetko su prijavljeni. Sapan drvo se takođe često koristi kao prirodna boja za hranu, a u zajednicama (uključujući zajednice na Tajlandu) se obično konzumira kao zdravo piće. Međutim, kontraceptivna funkcija (antifertilnost kod mužjaka) ekstrakta drveta sapana prikazana je na modelu štakora, jer ometa spermatogenezu60. S druge strane, srž Caesalpinia sappan L. koristi se kao lijek za ginekološke simptome, uključujući oligomenoreju i amenoreju61. Stoga, sigurnost dugotrajne konzumacije HydroZitLa kod ljudi tek treba da se utvrdi u kliničkom ispitivanju.

rou cong rong benefits (2)

Ova studija ima neka ograničenja. Precizna aktivna jedinjenja odgovorna za inhibicionu funkciju CaOx kamenca nisu identifikovana i okarakterisana. Tačni mehanizmi HydroZitLa da inhibira stvaranje CaOx kamena kod pacova nisu bili opsežno istraženi. Antipatogeni učinak HydroZitLa ovisan o dozi nije ispitivan. Doza HydroZitLa koja bi mogla značajno povećati nivoe citrata u urinu kod nefrolitnih pacova nije istraživana. Fenolni profil HydroZitLa treba dalje istražiti. Mehanizam promocije dugovječnosti od strane HydroZitLa kod C. elegans nije bio intenzivno istražen. Konačno, specifični spojevi u HydroZitLa odgovorni za dugovječnost i anti-aging nisu identificirani i okarakterizirani.

U zaključku, HydroZitLa je razvijen kako bi istovremeno normalizirao faktore rizika od stvaranja CaOx kamena opskrbom tekućine, citrata i prirodnih antioksidansa. Eksperimentalno, HydroZitLa je inhibirao intrarenalni depozit CaOx kod nefrolitnih pacova. Efikasnost HydroZitLa inhibitora CaOx kamena bila je ekvivalentna trenutno korištenom kalijum citratu (Uralyt-U). HydroZitLa je efikasno ublažio oksidativni stres i in vitro i in vivo. Izvanredno, HydroZitLa je produžio životni vek i odložio početak starenja kod C. elegans. Nadalje, HydroZitLa značajno inhibira skraćivanje telomera, ekspresiju p16 i prerano starenje u ljudskim bubrežnim stanicama. Ovi pretklinički nalazi sugeriraju da je HydroZitLa klinički obećavajuća alternativa za liječenje CaOx nefrolitijaze, praćeno promocijom dugovječnosti i prednostima protiv starenja. Klinička ispitivanja su neophodna da bi se potvrdila terapijska efikasnost HydroZitLa kod ljudi.

materijali i metode

Proizvodnja HydroZitLa, sadržaj antioksidansa i nutritivna činjenica. HydroZitLa je koncentrat pića od ljekovitog bilja lokalno dostupan u Tajlandu32. Napitak se priprema razrjeđivanjem HydroZitLa koncentrata (55 mL u zatvorenoj vrećici) sa vodom za piće (do krajnje zapremine od 500 mL). Ružičasto-ljubičaste je boje sa ukusnim kiselkasto-slatkim ukusom. Glavni sastojci HydroZitLa bili su vodeni ekstrakt stabljike banane (Musa sapientum L.) i limunska kiselina (16 mEq/kesici). Tradicionalne Tai ljekovite biljke uključujući Clitoria ternatea L. (prašak cvijeta leptira plavog graška) i Caesalpinia sappan L. (prašak drveta Sappan) korištene su kao prirodne boje. Stevija i sukraloza su bili zaslađivači. Proizvod je odobren od strane Tai FDA 10. aprila 2019. godine u kategoriji pića u zapečaćenoj ambalaži (Food serijski br. 10–1-02, 244–5-0005).

Ukupni antioksidativni kapacitet (TAC) HydroZitLa bio je 21,87 ± 7,96 mg antioksidativnog kapaciteta ekvivalentnog vitamina C po vrećici (dopunska slika 8). Ukupni sadržaj fenola (TPC) bio je 19,99 ±0,83 mg ekvivalenta galne kiseline/100 g. Ukupan sadržaj favonoida (TFC) bio je 4,59±0,31 mg katehin ekvivalenta/100 g. Za kontrolu kvaliteta, TAC, TPC i TFC su korišteni kao parametri kontrole kvaliteta. Nivoi TAC-a, TPC-a i TFC-a u stabljici banane, cvijetu leptira plavog graška i ekstraktima drveta sapana između serija i vremena skladištenja nisu se značajno razlikovali. U proizvodnji HydroZitLa, TAC, TPC, TFC i brix vrijednost (17±2) korišteni su kao parametri kontrole kvaliteta za održavanje konzistentnosti između serija.

Ukupna energija HydroZitLa po vrećici (porciji) bila je 25 kcal. Nisu otkriveni sadržaji proteina, masti i holesterola. Ukupni ugljikohidrati bili su 6 g, šećer je bio<1 g, and sodium was 10 mg. The potassium content was 240 mg/100 g. Soluble and insoluble dietary fibers were 0.74 and 0.43 g/100 g, respectively. Te pH of HydroZitLa was 3.4.

Procjena toksičnosti.Prisustvo Escherichia coli, Clostridium spp., Salmonella spp. i Staphylococcus aureus u HydroZitLa analizirao je Biro za kvalitet i sigurnost hrane, Ministarstvo javnog zdravlja, Tajland. Metalni profil HydroZitLa je analiziran ICP-OES.

In vivo akutnu toksičnost HydroZitLa na miševima testirao je Institut za istraživanje ljekovitog bilja, Ministarstvo javnog zdravlja, Tajland. HydroZitLa ili voda (kontrola) oralno je davana miševima u dozi od 20 mL/kg (n=10 po grupi). Miševi su posmatrani 14 dana prije obdukcije. Pregledane su i upoređene grube lezije u visceralnim organima između HydroZitLa i kontrolne grupe.

Ispitivanje agregacije CaOx.Zasječeni COM kristali su pripremljeni62 i razrijeđeni na 50 mg/mL u 0.05 M Tris/0.15 NaCl, pH 6,5. HydroZitLa, ili BSA, ili destilovana voda (prazna) (200 µL) dodana je u svježe pripremljenu radnu COM suspenziju sjemena (2 mL). Nakon miješanja, apsorbancija na 620 nm je izmjerena kao osnovna linija (AT0). Nakon inkubacije na 37 stepeni u trajanju od 10 minuta, ponovo je izmjerena apsorbancija na 620 nm (AT10). Koeficijent agregacije (AC) izračunat je na sljedeći način: AC=((AT0− AT10)/10)×1000. Veća AC vrijednost ukazuje na veću COM agregaciju.

Određivanje stanične linije, citotoksičnosti i intracelularnog ROS-a.HK{{0}} ćelije (ATCC, VA, USA) su održavane u DMEM-u sa dodatkom 10 posto fetalnog goveđeg seruma i 1 posto Pen-Strep pod 37 stepeni, 5 posto CO2 i 95 posto vlage. Citotoksičnost HydroZitLa u HK-2 ćelijama procijenjena je MTT testom63. HK-2 ćelije su zasijane (200 ćelija/jažici), uzgajane preko noći u 96-jažici i tretirane različitim koncentracijama HydroZitLa (0 kao kontrola, 1,25 posto, 2,5 posto, 5 posto, 10 posto, 20 posto, 40 posto, 50 posto, 80 posto i 100 posto v/v) tokom 24 h. Nakon ispiranja, dodat je MTT rastvor, inkubiran 1 h, a zatim odbačen. Dimetil sulfoksid je dodan da rastvori kristale formazana. Izmjerena je apsorpcija na 570 nm. Vijabilnost ćelija (procenat) je izračunata korišćenjem neobrađenih ćelija kao kontrole (100-postotna održivost).

Inhibicija intracelularne ROS proizvodnje od strane HydroZitLa određena je testom dihloro-dihidro-fluorescein diacetata (DCFH-DA) na ploči sa 96-jažicom 64,65. HK-2 ćelije su kombinovane sa 0.1 M rastvorom DCFH-DA i inkubirane na 37 stepeni 30 min. Nakon ispiranja, ćelije su izazvane sa H2O2 ili COM (sa i bez 10 posto v/v HydroZitLa). Intenzitet fluorescencije (pobuđen na 485 nm i emitovan na 535 nm) mjeren je na početku (T0) i 60 min (T60). Proizvoljna fluorescentna jedinica (AFU), koja je označavala nivo generisanja ROS-a, izračunata je na sljedeći način: AFU= T60/T0.

Merenje karbonilacije proteina.Sadržaj karbonila proteina, kao indikatora oksidacije proteina, mjeren je prema našim ranijim izvještajima64–66. Tretirane HK-2 ćelije (u 100-mm posudi) lizirane su puferom za radioimunoprecipitacijski test koji sadrži koktel inhibitora proteaze. Ukupna koncentracija proteina je izmjerena Bradfordovim testom. Ćelijski lizat je inkubiran sa 10 mM rastvorom dinitrofenilhidrazina (DNPH) ili 2 N HCl tokom 1 h u mraku. Dodana je hladna 20% trihloroctena kiselina i inkubirana 10 minuta na ledu. Pelete su sakupljene centrifugiranjem, isprane etil acetatom:etanolom (1:1) i ponovo rastvorene sa 6 M gvanidin HCl. Izmjerena je apsorpcija (A) na 375 nm. Sadržaj karbonila proteina normaliziran ukupnom koncentracijom proteina izračunat je na sljedeći način: ((ADNPH – AHCl)×45,45)/koncentracija proteina.

cistanche side effects reddit

Model pacova za CaOx nefrolitijazu.EG (1 posto v/v) dodan u vodi za piće (slobodan pristup ad libitum, 35 dana) korišten je za indukciju CaOx nefrolitijaze kod pacova. Mužjaci Wistar štakora (6-8 sedmica, 180-300 g) podijeljeni su u četiri grupe, i to EG (n=6), EG plus HydroZitLa (n=6), EG plus Uralyt-U (n=6) i normalne kontrolne (n=2) grupe. Svi pacovi su smešteni u kaveze od nerđajućeg čelika na 25 stepeni u ciklusu svetlo-mrak od 12:12 h. Dva kontrolna štakora su namjerno korišćena samo za poređenje depozita CaOx u bubrezima pacova i imunohistohemiju, a ne za hemiju urina. HydroZitLa i Uralyt-U su hranjeni nasilno dva puta dnevno (ujutro i uveče) u ukupnoj dozi citrata od 2 mEq dnevno. Ova primijenjena doza citrata bila je ekvivalentna 60,8 mEq citrata kod ljudi izračunata na osnovu konverzije doze koju su predložili Reagan-Shaw et al.67. 24-Uzorci urina uzeti su na kraju intervencije (35. dan) koristeći timol kao konzervans. Pacovi su anestezirani izofluranom i žrtvovani. Oba bubrega su uklonjena, isječena i fiksirana u 10 posto neutralnog formalinskog pufera za histološko ispitivanje.

Svi pacovi su kupljeni od Nacionalnog centra za laboratorijske životinje, Univerziteta Salaya Campus Mahidol, Nakhonpathom, Tajland. Eksperimentalne procedure su sprovedene u skladu sa smernicama za eksperimentalne životinje od strane Nacionalnog saveta za istraživanje Tajlanda i odobrene od strane Komiteta za institucionalnu negu i upotrebu životinja, Medicinski fakultet Univerziteta Chulalongkorn (br. 022/2560). Naša studija je provedena u skladu sa smjernicama ARRIVE.

Depozicija CaOx u bubrežnim presecima polarizovanom mikroskopijom.Sekcije bubrega pacova fiksirane u parafin su pripremljene pomoću automatiziranog procesora tkiva. H&E bojenje je obavljeno prema standardnoj proceduri. Dvolomni kristalni depoziti CaOx u H&E obojenim rezovima su vizualizirani pomoću polariziranog svjetlosnog mikroskopa (OLYMPUS BX50, Japan).

Yasue bojenje za CaOx histohemiju.Sekcije bubrežnog tkiva su deparafinizirane, rehidrirane, potopljene u 5% octenu kiselinu na 30 minuta da bi se uklonili kalcijum fosfat i kalcijum karbonat, i isprani destilovanom vodom 68. Sekcije su inkubirane sa 5% AgNO3 12 minuta, isprane i inkubirane sa zasićenom kiselinom. kiseline u 10 posto amonijuma u trajanju od 1 min. Obojeni delovi su isprani sa 50 posto etanola, isprani destilovanom vodom, dehidrirani, očišćeni i montirani. Crni CaOx precipitati su vizualizirani pod svjetlosnim mikroskopom69.

Imunohistohemijsko bojenje.Nakon deparafinizacije i rehidracije, uzimanje antigena je izvršeno kuhanjem u natrijum citratnom puferu uz korištenje mikrovalne pećnice. Endogeni H2O2 je inaktiviran inkubacijom sa 0.3 posto H2O2 tokom 30 minuta. Nespecifično vezivanje je blokirano inkubacijom sa normalnim konjskim serumom u trajanju od 20 minuta. Sekcije su zatim inkubirane sa 1:1,000 4-HNE (ab46545, Abcam, Cambridge, UK) ili cijepanom kaspazom-3 (5A1E, Cell Signaling Technology, MA, USA) primarnim antitijelom na 4 stepena preko noći, nakon čega slijedi inkubacija sa sekundarnim antitijelima na 37 stepeni u trajanju od 30 min. Nakon ispiranja, sekcije su inkubirane sa ABC reagensom (VECTASTAIN® ABC kit) 30 minuta, natopljene u 1% diaminobenzidin reagens za bojenje 5 minuta i kontraobojene hematoksilinom 5 minuta. Konačno, sekcije su dehidrirane, očišćene, montirane i vizualizirane pod svjetlosnim mikroskopom.

Mjerenje citrata, oksalata, mokraćne kiseline i iCOCI u urinu. Nivo citrata u urinu određen je tečnom hromatografijom visokih performansi (Varian Medical Systems, Kalifornija, SAD) koristeći ROAorganic Acid H plus kolonu (300×7,8 mm) (Phenomenex, CA, USA) i eluiran sa 5 mM H2SO4 pri brzini protoka od 0,5 mL/min. Nivoi oksalata i mokraćne kiseline u urinu mjereni su kapilarnom elektroforezom (Beckman Coulter, CA, USA) razdvojenim na 25 stepeni sa naponom od -20 kV. Urinarni iCOCI test je urađen prema našem prethodnom izvještaju 38.

C. elegans soj i održavanje.Soj divljeg tipa C. elegans Bristol N2 i njegov laboratorijski izvor hrane E. coli OP50 dobijeni su od Caenorhabditis Genetics Centra, Univerziteta Minnesota, SAD. Uzgajani su i održavani u agar pločama za podlogu za rast nematoda sa travnjakom E. coli OP50 na 20 stepeni 70. Svi eksperimenti su sprovedeni na mladim odraslim crvima sinhronizovanim po godinama.

Test životnog veka.Analiza životnog vijeka izvršena je u tečnom mediju71. Ukratko, 10 mladih odraslih nematoda sinhronizovanih sa uzrastom prebačeno je u 24-ploču sa M9 puferom zajedno sa E. coli OP50 i 5-fuoro-2′-deoksiuridinom za prevenciju proizvodnje potomstva. Različite koncentracije HydroZitLa dodane su upotrebom destilovane vode kao kontrole nosača. Žive nematode su brojane svaka 24 h. Nematode su smatrane mrtvima kada nisu reagovale na nežno guranje pomoću platinaste petlje.

Test faringealnog pumpanja.Pumpanje ždrijela (indikator sposobnosti unosa hrane) mjereno je kod mladih odraslih nematoda (~10) u poređenju između kontrole i dodatka HydroZitLa, praćenjem faringealne kontrakcije u trajanju od 30 s na svaka 24 h pod stereomikroskopom (SMZ{ {3}}, Motić, Kina) dana 0 (prije suplementacije), 5, 10 i 1572.

Lipofuscin test.Praćena je akumulacija lipofuscina u nematodama divljeg tipa nakon suplementacije različitim koncentracijama HydroZitLa (20 posto, 30 posto, 40 posto v/v) tokom 5 dana. Kao kontrola korišteni su crvi hranjeni E. coli OP{5}}ima. Nakon intervencije, crvi su nekoliko puta isprani puferom M9 i stavljeni na staklo u kap natrijum azida. Fluorescentno snimanje izvedeno je konfokalnim mikroskopom ZEISS LSM 700. Slike su dalje analizirane pomoću softvera Image J, a intenzitet fluorescencije je predstavljen kao proizvoljne jedinice (AU)72.

Mjerenje relativne dužine telomera. Relativna dužina telomera (RTL) mjerena je u HK-2 ćelijama tretiranim H2O2 (25 µM), natrijum oksalatom (NaOx, 900 µM) i COM (25 µg/cm2) sa ili bez HydroZitLa (10 posto v /v). RTL je određen kvantitativnom lančanom reakcijom polimeraze u realnom vremenu (qPCR)73. Izračunava se na osnovu omjera broja kopija telomernih ponavljanja i broja kopija gena u jednoj kopiji (36B4 gen) koji je proporcionalan prosječnoj dužini telomera. Korišteni prajmeri su bili sljedeći: telomera (naprijed) 5′-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3′, telomera (obrnuta) 5′-GGC TTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCTA} ′forward (naprijed) ′-CAGCAAGTGGGAAGGTGT AATCC{{23 }}′ i 36B4 (obrnuto) 5′-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA-3′. PCR je amplifikovan na 95 stepeni tokom 10 minuta, nakon čega je usledilo 40 ciklusa od 95 stepeni u trajanju od 15 s i 54 stepena u trajanju od 1 min.

Dvostruko bojenje SA‑‑gal i p16.HK{{0}} ćelije uzgojene na pokrovnim stakalcima tretirane su sa H2O2, NaOx i COM sa i bez 10 posto v/v HydroZitLa tokom 72 h za indukciju SIPS-a. Nakon tretmana, ćelije su fiksirane i obojene svježe pripremljenim rastvorom X-gal (Vivantis, Malezija) 12-16 h, isprane, permeabilizirane sa 0,1 posto Triton X-100 (Amresco, TX, SAD) 3 min. , i blokiran zbog nespecifičnog vezivanja sa 1 posto normalnog konjskog seruma (Gibco, MA, SAD) na 37 stepeni tokom 1 h. Ćelije su zatim inkubirane sa 1:10,000 p16 primarnim antitijelom (ab108349, Abcam) na 4 stepena preko noći, nakon čega je uslijedilo 1:10,000 Alexa Fluor® 488-konjugirano sekundarno antitijelo ( Cell Signaling Technology) na 37 stepeni tokom 30 min. Obojeno pokrovno staklo je montirano Fluoroshield medijumom za montažu sa 4′,6-diamidino-2-fenilindolom (Abcam). SA- -gal-pozitivne stare senescentne ćelije (plave) i ćelije koje eksprimiraju p16- (zelene) su vizualizovane i snimljene korišćenjem sistema za snimanje EVOS FL Auto 2 (Thermo Fisher Scientific, MA, SAD).

Statistička analiza.Svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± standardna devijacija ili medijan (interkvartilni raspon), prema potrebi. Dva uzorka t-test ili Mann-Whitney test je urađen kako bi se testirala razlika između dvije grupe. Jednosmjerna analiza varijanse ili Kruskal-Wallisov test, praćena testom višestrukog poređenja, korištena je za testiranje razlike između tri ili više grupa. GraphPad Prism Sofware verzija 9 (GraphPad Sofware Inc., CA, SAD) je korišten za računanje i grafove. P<0.05 was considered significant.

Reference

1. Michell, AR Urolitijaza – historijski, komparativni i patofiziološki aspekti: Pregled. JR Soc. Med. 82, 669–672 (1989).

2. Shah, J. & Whitfield, HN Urolitijaza kroz vijekove. BJU Int. 89, 801–810 (2002).

3. Boonla, C. et al. Messenger RNA ekspresija monocitnog hemoatraktantnog proteina-1 i interleukina-6 u bubrezima koji sadrže kamen. BJU Int. 101, 1170–1177 (2008).

4. Boonla, C. et al. Fibroza i dokaz za epitelno-mezenhimsku tranziciju u bubrezima pacijenata sa kamenčićima. BJU Int. 108, 1336–1345 (2011).

5. Chuang, TF et al. Rizik od hronične bolesti bubrega kod pacijenata sa bubrežnim kamencima - kohortna studija širom zemlje. BMC Nephrol. 21, 292 (2020).

6. Dhondup, T. et al. Rizik od ESRD-a i smrtnosti kod formiranja kamenca u bubrezima i mokraćnoj bešici. Am. J. Kidney Dis. 72, 790–797 (2018).

7. Kum, F. et al. Da li kamenje i dalje ubija? Analiza smrti od kamene bolesti 1999–2013 u Engleskoj i Velsu. BJU Int. 118, 140–144 (2016).

8. Geraghty, RM, Cook, P., Walker, V. & Somani, BK Evaluacija ekonomskog tereta bolesti bubrežnih kamenaca u UK: Retrospektivna kohortna studija sa prosječnim praćenjem od 19 godina. BJU Int. 125, 586–594 (2020).

9. C. Türk (predsjedavajući), AN, A. Petrik, C. Seitz, A. Skolarikos (potpredsjednik), K. Tomas & Guidelines Associates: NF Davis, JFD, R. Lombardo, N. Grivas, Y. Ruhayel. Smjernice Europskog udruženja urologa (EAU) o urolitijazi.

10. Jendle-Bengten, C. & Tiselius, HG Dugotrajno praćenje formiranja kamenaca tretiranih niskom dozom natrijum-kalijum citrata. Scand. J. Urol. Nefrol. 34, 36–41 (2000).

11. Schwille, PO, Herrmann, U., Wolf, C., Berger, I. & Meister, R. Citrat i rekurentna idiopatska kalcijum urolitijaza. Longitudinalna pilot studija o metaboličkim efektima oralnog kalijum citrata primijenjenog na kratkoročne, srednjoročne i dugotrajne lijekove pacijenata s kamencima. Urol. Res. 20, 145–155 (1992).

12. Tracy, CR & Pearle, MS Ažuriranje o medicinskom upravljanju kamenom bolešću. Curr. Opin. Urol. 19, 200–204 (2009).

13. Mechlin, C., Kalorin, C., Asplin, J. & White, M. Splenda® poboljšava toleranciju oralnog dodatka kalijum citrata za prevenciju stvaranja kamenca: Rezultati randomiziranog dvostruko slijepog ispitivanja. J. Endourol. 25, 1541–1545 (2011).

14. Boonla, C. Oksidativni stres kod urolitijaze, Reaktivne vrste kiseonika (ROS) u živim ćelijama, Cristiana Filip i Elena Albu, IntechOpen.

15. Boonla, C., Wunsuwan, R., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Urinarni 8-hidroksideoksiguanozin je povišen kod pacijenata sa nefrolitijazom. Urol. Res. 35, 185–191 (2007).

16. Khan, SR Hiperoksalurija izazvana oksidativnim stresom i antioksidansi za zaštitu bubrega. Urol. Res. 33, 349–357 (2005).

17. Khan, SR Reaktivne vrste kiseonika kao molekularni modulatori formiranja kamenca u bubregu kalcijum oksalata: dokazi iz kliničkih i eksperimentalnih istraživanja. J. Urol. 189, 803–811 (2013).

18. Kittikowit, W. et al. Povećano oksidativno oštećenje DNK uočeno u bubrežnim biopsijama susjednih kamenaca kod pacijenata s nefrolitijazom. Urolitijaza 42, 387–394 (2014).

19. Yasui, T. et al. Liječenje urolitijaze zasnovano na patofiziologiji. Int. J. Urol. 24, 32–38 (2017).

20. Huang, HS, Ma, MC & Chen, J. Ishrana sa niskim sadržajem vitamina E pogoršava formiranje kristala kalcijum oksalata preko pojačanog oksidativnog stresa u hiperoksaluričnom bubrezima pacova. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 296, F{3}} (2009).

21. Huang, HS, Chen, J., Chen, CF & Ma, MC Vitamin E smanjuje formiranje kristala u bubrezima pacova: Uloga smrti bubrežnih tubularnih ćelija i inhibitori kristalizacije. Kidney Int. 70, 699–710 (2006).

22. Tamilselvan, S. & Menon, M. Terapija vitaminom E sprečava taloženje kristala kalcijum oksalata u bubrezima izazvano hiperoksalurijom, poboljšavajući antioksidativni status bubrežnog tkiva. BJU Int. 96, 117–126 (2005).

23. Tamilselvan, S. & Selvam, R. Efekat vitamina E i manitola na renalnu retenciju kalcijum oksalata u eksperimentalnoj nefrolitijazi. Indian J. Biochem. Biophys. 34, 319–323 (1997).

24. Butterweck, V. & Khan, SR Biljni lijekovi u liječenju urolitijaze: alternativa ili komplementarna? Planta Med. 75, 1095–1103 (2009).

25. Kasote, DM, Jagtap, SD, Tapa, D., Khyade, MS & Russell, WR Biljni lijekovi za urinarne kamence koji se koriste u Indiji i Kini: pregled. J. Ethnopharmacol. 203, 55–68 (2017).

26. Abu Zarin, M., Tan, JS, Murugan, P. & Ahmad, R. Istraživanje potencijalne anti-urolitijazne aktivnosti iz različitih tipova ekstrakta Musa pseudo-stabljike u inhibiciji kristalizacije kalcijum oksalata. BMC Complement Med. Ter. 20, 317 (2020).

27. Kailash, P. & Varalakshmi, P. Efekat soka stabljike banane na biohemijske promene u jetri normalnih i hiperoksaluričnih pacova. Indian J. Exp. Biol. 30, 440–442 (1992).

28. Prasad, KV, Bharathi, K. & Srinivasan, KK Procjena Musa (rajske sorte Linn.)–"Puttubale" soka od stabljike za antilitijatsku aktivnost kod albino pacova. Indian J. Physiol. Pharmacol. 37, 337–341 (1993).

29. Panigrahi, PN, Dey, S., Sahoo, M. & Dan, A. Antiurolitička i antioksidativna efikasnost Musa paradisiaca pseudostema na nefrolitijazu izazvanu etilen glikolom kod pacova. Indian J. Pharmacol. 49, 77–83 (2017).

30. Poonguzhali, PK & Chegu, H. Utjecaj ekstrakta stabljike banane na faktore rizika za urinarni kamenac kod normalnih i hiperoksaluričnih pacova. Br. J. Urol. 74, 23–25 (1994).

31. Pillai, RG Jezgro Musaovog pseudostema u liječenju mokraćnih kamenaca. Anc Sci Life. 15, 2–6 (1995).

32. Lordumrongkiat, N., Chotechuang, N., Madared, N., Jindatip, D. & Boonla, C. Ukupni fenoli, ukupni flavonoidi i ukupni antioksidativni kapacitet napitka od ljekovitog bilja: HydroZitLa. Chula Med. J. 64, 381–388 (2020).

33. Sakhaee, K. Farmakologija kamene bolesti. Adv. Chronic Kidney Dis. 16, 30–38 (2009).

34. Baumann, JM & Afolter, B. Paradoksalna uloga makromolekula u urinu u agregaciji kalcijum oksalata: Još jedan zahtjev za povećanje diureze u metafilaksiji kamenca. Urolitijaza 44, 311–317 (2016).

35. Reddy, AJ et al. Antikonvulzivni i antioksidativni efekti ekstrakta stabljike Musa sapientum na akutne i kronične eksperimentalne modele epilepsije. Pharmacogn. Res. 10, 49–54 (2018).

36. Jaafar, NF, Ramli, ME & Mohd Salleh, R. Optimalno stanje ekstrakcije Clitorea ternatea fower na antioksidativne aktivnosti, ukupne fenole, ukupne flavonoide i ukupne sadržaje antocijana. Trop. Life Sci. Res. 31, 1–17 (2020).

37. Nirmal, NP, Rajput, MS, Prasad, RG & Ahmad, M. Brazilin iz Caesalpinia sappan heartwood i njegove farmakološke aktivnosti: Pregled. Asian Pac. J. Trop. Med. 8, 421–430 (2015).

38. More-Krong, P. et al. Klinička validacija urinarnog testa indeksa kristalizacije kalcijum oksalata (iCOCI) reagovanog na indol za dijagnosticiranje urolitijaze kalcijum oksalata. Sci. Rep. 10, 8334 (2020).

39. Yasui, T. et al. Efekti citrata na formiranje bubrežnog kamenca i ekspresiju osteopontina u modelu urolitijaze štakora. Urol. Res. 29, 50–56 (2001).

40. Ghaeni, FA, Amin, B., Hariri, AT, Meybodi, NT i Hosseinzadeh, H. Antilitijatični efekti krocina na litijazu izazvanu etilen glikolom kod pacova. Urolitijaza 42, 549–558 (2014).

41. Holmes, RP & Assimos, DG Sinteza glioksilata, i njena modulacija i uticaj na sintezu oksalata. J. Urol. 160, 1617–1624 (1998).

42. Patankar, S., Fanthome, B. & Bhalerao, SS Efikasnost herbed plus kod urolitnih pacova: Eksperimentalna studija. J. Ayurveda Integr. Med. 11, 250–255 (2020).

43. Chaiyarit, S. & Tongboonkerd, V. Mitohondrijalna disfunkcija i bolest bubrežnih kamenaca. Front Physiol. 11, 566506 (2020).

cistanche portugal

44. Holoch, PA & Tracy, CR Antioksidansi i istorija bubrežnih kamenaca koji su sami prijavili: Nacionalna anketa o zdravlju i ishrani. J. Endourol. 25, 1903–1908 (2011).

45. Khan, SR Da li je oksidativni stres, veza između nefrolitijaze i gojaznosti, hipertenzije, dijabetesa, hronične bolesti bubrega, metaboličkog sindroma? Urol. Res. 40, 95–112 (2012).

46. Hirose, M. et al. Povreda bubrežnih tubularnih epitelnih ćelija i oksidativni stres izazivaju formiranje kristala kalcijum oksalata u bubrezima miša. Int. J. Urol. 17, 83–92 (2010).

47. Khan, SR Reaktivne vrste kiseonika, upala i kalcijum oksalat nefrolitijaza. Transl. Androl. Urol. 3, 256–276 (2014).

48. Boonla, C. et al. Inflamatorni i fibrotični proteini su proteomski identificirani kao ključni proteinski sastojci u urinu i kamenom matriksu pacijenata s bubrežnim kamencima. Clin. Chim. Acta 429, 81–89 (2014).

49. Aggarwal, D., Gautam, D., Sharma, M. & Singla, SK Bergenin ublažava oštećenje bubrega reverzijom mitohondrijalne disfunkcije u modelu hiperoksaluričnog štakora izazvanog etilen glikolom. EUR. J. Pharmacol. 791, 611–621 (2016).

50. Ghodasara, J., Pawar, A., Deshmukh, C. & Kuchekar, B. Inhibicijski efekat rutina i kurkumina na eksperimentalno indukovanu kalcijum oksalatnu urolitijazu kod pacova. Pharmacogn. Res. 2, 388–392 (2010).

51. Grases, F. et al. Utjecaj polifenola iz sjemenki grožđa na bubrežnu litijazu. Oksid. Med. Cell. Longev. 2015, 813737 (2015).

52. Cherniack, EP Potencijalni uticaj biljnih polifenola na proces starenja. Forsch Komplementmed. 17, 181–187 (2010).

53. Wood, JG et al. Aktivatori sirtuina oponašaju ograničenje kalorija i odgađaju starenje metazoa. Nature 430, 686–689 (2004).

54. Bonkowski, MS & Sinclair, DA Usporavanje starenja po dizajnu: porast NAD( plus ) i jedinjenja koja aktiviraju sirtuin. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 17, 679–690 (2016).

55. Bhullar, KS & Hubbard, BP Produženje životnog i zdravstvenog vijeka pomoću resveratrola. Biochim. Biophys. Acta. 1852, 1209–1218 (2015).

56. von Frieling, J. & Roeder, T. Faktori koji utiču na prevođenje ograničenja u ishrani u duži život. IUBMB Life 72, 814–824 (2020).

57. von Zglinicki, T. Oksidativni stres skraćuje telomere. Trends Biochem Sci. 27, 339–344 (2002).

58. Chuenwisad, K. et al. Prerano starenje i skraćivanje telomera izazvano oksidativnim stresom od oksalata, kalcijum oksalat monohidrata i urina kod pacijenata sa kalcijum oksalat nefrolitijazom. Front. Immunol. 12, 696486 (2021).

59. Hu, Z. et al. Interakcije biljaka i lijekova: pregled literature. Drugs 65, 1239–1282 (2005).

60. Susanti, S. & Imannura, P. Efekat ekstrakta drveta Secang (Ceasalpinia Sappan L.) na morfologiju spermatozoida i reverzibilni proces kod mužjaka pacova. In Proceeding in Te 2nd Joint International Conferences. ISBN: 978-602-5842-03-0 (2018).

61. Kim, BS et al. Caesalpinia sappan inducira apoptotičku ćelijsku smrt u ektopičnim 12Z ćelijama endometrijuma supresijom ekspresije piruvat dehidrogenaze kinaze 1. Exp. Ter. Med. 21, 357 (2021).

62. Boonla, C., Youngjermchan, P., Pumpaisanchai, S., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Litogena aktivnost i klinički značaj lipida ekstrahiranih iz urina i kamena pacijenata sa nefrolitijazom. Urol. Res. 39, 9–19 (2011).

63. Kloypan, C., Srisa-art, M., Mutirangura, A. & Boonla, C. LINE-1 hipometilacija izazvana reaktivnim vrstama kiseonika je posredovana smanjenjem S-adenozilmetionina. Cell Biochem. Funct. 33, 375–385 (2015).

64. Whongsiri, P., Phoyen, S. & Boonla, C. Oksidativni stres u urotelnoj karcinogenezi: Mjerenja karbonilacije proteina i intracelularne proizvodnje reaktivnih vrsta kiseonika. Metode Mol. Biol. 1655, 109–117 (2018).

65. Whongsiri, P. et al. Oksidativni stres i reaktivacija LINE-1 kod raka mokraćne bešike su epigenetski povezani kroz aktivno formiranje hromatina. Slobodni Radic. Biol. Med. 134, 419–428 (2019).

66. Whongsiri, P. et al. LINE-1 ORF1 protein je pojačano reguliran reaktivnim vrstama kisika i povezan je s progresijom urotelnog karcinoma mokraćne bešike. Cancer Genom. Proteom. 15, 143–151 (2018).

67. Reagan-Shaw, S., Nihal, M. & Ahmad, N. Ponovo pregledan prevod doze sa životinja na ljude. FASEB J. 22, 659–661 (2008).

68. Yasue, T. Histohemijska identifikacija kalcijum oksalata. Acta Histochem. Cytochem. 2, 83–95 (1969).

69. Evan, AP i dr. Randallov plak pacijenata s nefrolitijazom počinje u bazalnim membranama tankih Henleovih petlji. J. Clin. Invest. 111, 607–616 (2003).

70. Prasanth, MI, Santoshram, GS, Bhaskar, JP & Balamurugan, K. Ultraviolet-A pokreće fotostarenje kod modela nematode Caenorhabditis elegans na putu ovisnom o DAF-16. Dob (Dordr) 38, 27 (2016).

71. Brimson, JM, Prasanth, MI, Plaingam, W. & Tencomnao, T. Bacopa monnieri (L.) wettst. Ekstrakt štiti od toksičnosti glutamata i povećava dugovječnost Caenorhabditis elegans. J. Tradit. Kompleks. Med. 10, 460–470 (2020).

72. Prasanth, MI, Brimson, JM, Chuchawankul, S., Sukprasansap, M. & Tencomnao, T. Antiaging, otpornost na stres i neuroprotektivna efikasnost Cleistocalyx nervosum var. ekstrakti voća panacee koristeći model Caenorhabditis elegans. Oksid. Med. Cell. Longev. 2019, 7024785 (2019).

73. Cawthon, RM Mjerenje telomera kvantitativnim PCR. Nukleinske kiseline Res. 30, e47 (2002).

Priznanja

Studiju je finansijski podržao Fond Research Gap iz Ministarstva nauke i tehnologije, Nacionalne agencije za razvoj nauke i tehnologije (NSTDA) i Univerziteta Chulalongkorn (GB-rgf_60_2905_0003 do CB), te Tajlandsko naučno istraživanje i Inovacije, Industry Division (RDG6150088 do CB) i Medicinski fakultet Univerziteta Chulalongkorn (Fond za usklađivanje). NL je primila 90. godišnjicu univerzitetskog fonda Chulalongkorn (Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund). Autori zahvaljuju na podršci za istraživanje i inovacije koju pružaju Univerzitetski tehnološki centar Chulalongkorn i Tajlandski fond za naučna istraživanja i inovacije (TSRI) (CU_FRB640001_01_2). Hvala gospođici Natcha Madared na odličnoj pomoći. Budite zahvalni osoblju u objektu za životinje Medicinskog fakulteta Univerziteta Chulalongkorn. Zahvaljujemo docentu dr. Sitthichai Ukritchonu i prof. dr. Manathipu Osiriju na njihovoj podršci u korištenju polarizirane mikroskopije.

Doprinosi autora

NL: Izvedeni eksperimenti na ćelijama i štakorima i prikupljeni podaci. NC: Prikupio podatke i pomogao u osmišljavanju istraživačke ideje i analizi podataka. MP: Osmislio i izveo C. elegans eksperiment, te izvršio analizu podataka C. elegans. DJ: Pomagao u imunohistohemijskim eksperimentima i snimanju. CM: Pomagao u sekciji tkiva. KC: Izveo eksperimente skraćivanja telomera i starenja. AL: Uspio sam pristupiti objektu sa životinjama za eksperiment sa štakorima. TT: Pomogao u osmišljavanju i dizajnu eksperimenta C. elegans. CB: Osmislio i dizajnirao studiju, izvršio statističku analizu i napisao rukopis. Svi autori su recenzirali rukopis.

Konkurentni interesi

CB, NC i NL su izumitelji HydroZitLa. Univerzitet Chulalongkorn i pronalazači posjeduju intelektualnu svojinu za HydroZitLa. Nijedan od ostalih autora nema nikakav sukob interesa koji bi se izjasnio o ovom radu.