HPLC određivanje ehinakozida u Cistanche Cistanche

HPLC određivanje ehinakozida u Cistanche Cistanche

Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Cilj:HPLC je odredio količinuechinacosideinCistanchemljeveno u tečnom azotnom stanju kao iu prirodno sušenom na zraku, upoređujući ga uwild cistancheiumjetno uzgojena Cistanche.

Metode:korišćen je lc{{0}}a HPLC sistem (Shimadzu, Japan). Kolona je bila YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japan); Mobilna faza: acetonitril-metanol-1 procenat mravlja kiselina (10:15:75); Talasna dužina detekcije 334 nm; Brzina protoka 0,7 mg · ml-1. Temperatura kolone 30 stepeni C.

Rezultati:različiti uslovi tretmana imali su vrlo jasan uticaj na sadržaj ehinakozida, sa generalno višim nivoima ehinakozida u Cistancheu mlevenom pod tečnim azotom nego u onim mlevenim u prirodnim uslovima sušenim na vazduhu; Sadržaj aktivnog sastojka u divljiniCistanchebio mnogo veći od onog u umjetnoj kulturi.

Click to Cistanche ekstrakt praha

Cistanche je ugrožena vrsta, parazitska biljka koja naseljava korijenje Clostridium, Salix rubrum. U Kini, Cistanche se uglavnom distribuira u Unutrašnjoj Mongoliji, Ningxia, Gansu i Xinjiang, sa odličnom reputacijom za "pustinjski ginseng", koji ima veliku ljekovitu vrijednost. Njegovi glavni ljekoviti sastojci su feniletanolni glikozidi, koji se mogu podijeliti na ehinakozid, list kohozid, cistanche i druge ovisno o njihovim supstituentima. Među njima, ehinakozid ima poboljšanu seksualnu funkciju, antioksidativno djelovanje i djelovanje na hvatanje slobodnih radikala, ali ima i neke antiapoptotičke učinke. Od 1980-ih, HPLC tehnologija, koja pruža jednostavnu i brzu metodu za odvajanje feniletanolnih glikozida, široko se koristi u odvajanju prirodnih proizvoda. HPLC metoda je odabrana za analizu sadržaja Cistanchea, glavnog aktivnog sastojka divljeg i umjetno uzgojenog Cistanchea, u različitim periodima rasta, pružajući naučnu osnovu za racionalan razvoj i korištenje Cistanchea i za efikasnu procjenu njegovog kvaliteta.

Instrumenti i reagensi

Shimadzu, Japan lc-20aparat HPLC, lc-20na tandem pumpi sa dvostrukim klipom, cto{2}}kolonska peć, spda-20 UV Vis detektor dvostruke talasne dužine; Kunshan kq{4}} ultrazvučni čistač; Acetonitril (hromatografski čist, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Metanol (kromatografski čist, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Mravlja kiselina (hromatografski čista, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); destilovana voda

Kontrola: ehineozid, sadržaj veći ili jednak 98,43 posto (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Pet uzoraka Cistanche: umjetno zasađeno godinu dana sa sljedećim Cistancheom, umjetno zasađeno za Cistanche, umjetno osušeno Cistanche, divlje Cistanche i umjetno zasađeno više od tri godine sa Cistancheom.

2 metode i rezultati

2.1 određivanje hromatografskih uslova

U cilju odvajanja pika izmjerenog ehineozida u LC hromatogramu od drugih supstanci, kao i kontrole tlaka pumpe i vremenskog rasporeda da budu unutar odgovarajućeg raspona, izvršena je eksperimentalna modifikacija hromatografskih uslova, a nakon Optimizacijskim eksperimentima s mobilnom fazom, zaključeno je da što je temperatura viša, vrijeme zadržavanja i koncentracija niža, to je pritisak pumpe kraći i vrijeme zadržavanja kraće, ali je visina pika bila niža, što je bilo nepovoljno za mjerenje. Mobilna faza je konačno određena kao acetonitril-metanol-1 posto mravlje kiseline (10:15:75), talasna dužina detekcije 334 nm, brzina protoka 0,7 mL/min i temperatura kolone 30 stepeni C, u skladu sa objektivnim uslovima sobne temperature i maksimalnog nosećeg pritiska pumpe, što je rezultiralo obiljem informacija sa oštrim oblicima vrhova i dobrim odvajanjem sastojaka.

2.2 Određivanje kolona

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japan).

2.3 Eksperimentalna priprema otopine

2.3.1 priprema standardnih otopina

Odgovarajuća količina standarda ehineozida je precizno izmjerena i dodana mobilnom fazom acetonitril-metanol-1 posto mravlje kiseline (10:15:75) da se napravi 0.0 6 mg · ML - 1, 0.05 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 i 0,005 mg · ML - 1 otopine standarda ehinakozida.

2.3.2 priprema test rastvora

Odgovarajuće količine umjetno zasađene svježe cistanche (ispod jedne godine), umjetno svježe cistanche i divlje svježe cistanche mljevene su u prah korištenjem maltera pod tečnim dušikom; Također, odgovarajuća količina od gore navedenih 3 Cistanchea je izrezana u blokove, osušena na zraku prirodno u ventilaciji u hladu, a nakon sušenja usitnjena i mljevena u prah. Umjetna suha cistanche i divlja preko tri godine suha cistanche su mljevena direktno u prah. 0.5 g Cistanche praha pripremljenog gore je uzeto i stavljeno u epruvetu za centrifugiranje, dodano je 25 ml mobilne faze, izvagano i natopljeno 30 min, sonikirano 40 min, ohlađeno i zatim ponovo izvagano da bi se nadoknadila težina koja nedostaje mobilnom fazom, promućkana i centrifugirana, a supernatant je uzet za 0,45 μM mikroporoznu filtersku membransku filtraciju.

2.4 grafikoni regresijskih krivulja za standardni uzorak ehinakozida

Pripremljeni standardni uzorci ehineozida su odvojeno ubrizgani u LC aparat, a koncentracija kontrole (mg · L{{0}}) je korišćena kao apscisa, a odgovarajuće površine pikova su ordinirane za crtanje standardna kriva, što je rezultiralo jednadžbom regresije: y=66 867 100x-46 360.83, R2=0.98637, koja je pokazala ehineozid na 0,1 ~ 1,2 ug unutar dobrog linearnog odnosa.

3 Diskusije

Ehinakozid je jedna od glavnih aktivnih komponenti Cistanchea, koja može dobro predstavljati kemijsku osnovu farmakološkog učinka Cistanchea, čineći procjenu kvaliteta medicinskog materijala i njegovog farmakološkog efekta u skladu, i poboljšavajući relevantnost procjene kvaliteta Cistanchea.

Različiti uslovi tretmana imali su jasan uticaj na sadržaj ehinakozida, sa generalno višim nivoima ehinakozida u Cistancheu mlevenom pod tečnim azotom nego u onim mlevenim u prirodnim uslovima sušenim na vazduhu. Uobičajeno sušenje na zraku smanjilo je količinu ehineozida, koji je mogao biti potrošen tokom sušenja na zraku ili pretvoren. Kako bi se spriječilo smanjenje sadržaja aktivnog sastojka i zajamčila efikasnost Cistanchea, potrebno je odabrati odgovarajući tretman.

Dosljedno, većina je vjerovala da se vještačko uzgojno okruženje Cistanchea, kao i navike rasta, ne razlikuju od divljeg bez razlike u kvalitetu, težilo je samo stavljanju naglaska na prinos i nije analiziralo kvalitet. Ova studija je pokazala da je količina umjetno uzgojenog Cistanche echinacosidea manja od količine divljeg Cistanche echinacoside. Najviši je bio {{0}}.3360 posto divljeg cistanchea, a najniži 0.007 0 posto umjetnog cistanchea. Stoga ga još uvijek treba proučavati u tehnologiji uzgoja kako bi se poboljšao sadržaj aktivnih sastojaka.

Kvaliteta Cistanchea ovisi o količini njegovog aktivnog sastojka, ehinakozida, koji zauzvrat ima jaku vezu sa godišnjim dobima, vremenom i načinom berbe, tako da pri berbi Cistanchea treba uzeti u obzir status akumulacije aktivnog sastojka i faza rasta i razvoja. Uzmite u obzir i kvalitet i prinos.

Metoda koja se spominje u ovom radu je jednostavna, precizna, ponovljiva i precizna za određivanje ehineozida. Korisno za određivanje Cistanchea.