Glikozidi Cistanche poboljšavaju učenje i pamćenje u modelu vaskularne demencije štakora

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, Y.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1Odjel za neurologiju, bolnica Qilu na Univerzitetu Shandong, Jinan, Kina. & Institut za istraživanje mozga, Univerzitet Šandong, Šandong, NR Kina

2Odjel za neurologiju, Narodna bolnica Autonomne regije Unutrašnja Mongolija, NR Kina

Jin Chen i Yan-Mei Zhang podjednako su doprinijeli ovoj studiji

Abstract.– CILJ:Cistanche glikozidi(GC) su ekstrahovani iz Xin JiangaCistanche, koja se široko koristi kao kineska biljka. Ova studija ima za cilj da proceni efekte GC na vaskularnu demenciju (VD).

MATERIJALI I METODE: VD model je uspostavljen ligaturom bilateralne zajedničke karotidne arterije kod odraslih pacova Wistar, koji su svakodnevno primali ip primjenu fiziološkog rastvora, GC (10 mg/kg tjelesne težine/d, ip) ili oksiracetam (450 mg/kg tjelesne težine/d, ip) tokom 14 dana. Morris Water Maze test je vrednovao kognitivne performanse pacova. Hipokampus je seciran i podvrgnut proteomskoj i imunohistohemijskoj analizi. REZULTATI: GC grupa je pokazala značajno manju latenciju bijega od grupe VD četiri i pet dana nakon operacije. Nisu pokazali značajnu razliku u poređenju sa lažno operisanom grupom i kontrolnom grupom sa oksiracetamom. U hipokampusu, 21 proteinska tačka u GC grupi pokazala je različite nivoe ekspresije u poređenju sa VD grupom. Ovo uključuje četiri proteina koji su pokazali značajnu razliku: tri povećana proteina tioredoksin-sličan protein 1, mitogen-aktivirana protein kinaza kinaza 1 s dvostrukom specifičnošću i protein 2 povezan s dihidropiridin-nazom (CRMP-2), i jedan smanjena regulacija proteina glutation sintetaze. Imunohistohemijska analiza je pokazala da je nivo P-tau proteina bio značajno viši u grupi sa VD modelom nego u grupi koja je lažno operisana (p < 0,05).="" nakon="" gc="" tretmana,="" nivo="" p-tau="" proteina="" kod="" pacova="" modela="" vd="" pokazao="" je="" značajno="" smanjenje="" u="" poređenju="" sa="" vd="" grupom="" tretiranom="" fiziološkim="" rastvorom="" (p="">< 0,05).="" zaključci:="" gc="" igra="" ključnu="" ulogu="" u="" zaštiti="" hipokampalnih="" neurona="" u="" vd,="" smanjujući="" fosforilaciju="" p-tau="" i="" povećavajući="" nivo="" ekspresije="" crmp-2.="" farmakoekološka="" manipulacija="" gc="" nudi="" novu="" priliku="" za="" liječenje="">

Ključne riječi:

Vaskularna demencija, glikozidi cistanhe, proteomika, P-tau, protein srodan dihidropirimidinazi 2.

Kliknite na Cistanche i cistanche deserticola ma za poboljšanje pamćenja

Uvod

Vaskularna demencija (VD) je druga vodeća senilna demencija i uglavnom je uzrokovana ishemijskom cerebrovaskularnom bolešću. VD dovodi do heterogenog kognitivnog oštećenja i potrebni su novi efikasni terapijski lijekovi koji liječe ili sprječavaju progresiju VD1. Međutim, još uvijek ne postoji djelotvorna kineska biljka za poboljšanje kognitivnih oštećenja uzrokovanih cerebralnom ishemijom.

Glikozidi cistanche (GC) se široko koriste kao biljka sa neuroprotektivnim efektima. Herba Cistanches Extract poboljšavaučenje i pamćenjemiševa promicanjem diferencijacije neuronskih stanica, rasta neurita i formiranja sinapsi2. Glikozidi cistanhe mogu spriječiti apoptozu u neuronima cerebelarne granule i ispoljiti anti-apoptozni efekat inhibiranjem aktivacije kaspaze-3 i kaspaze-83. Ehinakozid, glavna aktivna komponenta Herba Cistanches, dovoljan je da zaštiti neuronske ćelije od povrede rotenona aktivacijom Trk signalizacije4. Međutim, mehanizmi pomoću kojih GC poboljšava kognitivna oštećenja kod VD još uvijek su uglavnom nepoznati.

Tau protein je protein povezan s neuronskim mikrotubulama koji stabilizira neuronske mikrotubule. Fosforilacija tau proteina (P-tau) utiče na njegovu sposobnost interakcije sa mikrotubulama i utiče na sinaptički prenos. Nakupljanje neurofibrilarnih čvorova (NFT) sastoji se od P-tau proteina i jedna je od glavnih karakteristika Alchajmerove bolesti (AD)5. Poznato je da su VD i AD dvije najčešće bolesti demencije. Oni dijele zajedničku korelaciju sa vaskularnim faktorima rizika, kao što su hipertenzija, dijabetes melitus i hiperholesterolemija. Stoga, P-tau također može biti impliciran u VD.

Procijenili smo efekte GC-a nafunkcija učenja i pamćenjau pacovskom modelu VD i izvršio proteomičku i imunohistohemijsku analizu na hipokampusu VD pacova kako bi se pružio uvid u neuroprotektivne efekte GC. Naši rezultati su pokazali da GCpoboljšano učenje i pamćenjekod pacova VD, i promijenio nivoe proteina kao što je P-tau kod pacova VD.

Materijali i metode

Životinje

Šestomjesečni mužjaci pacova Wistar (težine 230- 270 g) su obezbjeđeni od centra za eksperimentalne životinje provincije Hubei, Kina. Svi eksperimentalni postupci na životinjama provedeni su u skladu sa smjernicama za brigu o životinjama i lokalnim etičkim propisima bolnice Wuhan br. 1, Kina. Broj etičkog odobrenja je 00014834. Životinje su bile smještene odvojeno u grupama od po 4 po kavezu na 25 stepeni sa ciklusom od 12-sat svjetlo/12-sat mraka i slobodan pristup hrani i vodi. Životinje (n=45) su nasumično dodijeljene u četiri grupe: grupa modela (n=12), lažno upravljana grupa (n=11), grupa tretirana GC-om (n{{14} }), i kontrolna grupa tretirana oksiracetamom (n=10).

Bilateralna ligacija zajedničke karotidne arterije (2-VO)

Pod dubokom anestezijom sa 10 posto hloral hidrata (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory reagens, Tianjin, Kina) (350 mg/kg tjelesne težine,

ip), bilateralne zajedničke karotidne arterije (CCA) pažljivo su odvojene od okolnih tkiva, a zatim čvrsto vezane šavom. Koža je naknadno rekonstruisana, a štakori su držani na sobnoj temperaturi i vraćeni u kućni kavez do reanimacije. Kontrolni pacovi lažno operisani podvrgnuti su istoj hirurškoj proceduri bez CCA ligacije. VD pacovi su tretirani GC (10 mg/kg tjelesne težine/d, ip) ili oksiracetamom (450 mg/kg tjelesne težine/d, ip) odmah nakon operacije 14 uzastopnih dana. Grupi modela je ubrizgan isti volumen normalnog fiziološkog rastvora.

Test Morris vodenog lavirinta

MWM test je izveden prema prethodno opisanoj metodi7. Područje za testiranje sastojalo se od kružnog bazena ispunjenog vodom (25 ± 1 stepen), koji je bio neproziran mlijekom tako da pacovi nisu mogli vidjeti podvodnu platformu 1 cm ispod površine vode. Bazen je podijeljen u četiri kvadranta (označene zone I, II, III i IV), a platforma je potopljena u zoni II. Vizuelni znakovi postavljeni su na zid prostorije za testiranje. Životinje su stavljene u vodu na jednu od četiri početne tačke kvadranta, koja je nasumično varirala tokom ispitivanja. Pacovima je dato 2 minute da pronađu platformu i sjede na njoj 15 s. Pacovi koji nisu uspjeli pronaći lokaciju u zadatom vremenu nježno su vođeni do platforme i ostavljeni su na njoj 15 s. Za snimanje puta plivanja, latencije, udaljenosti plivanja i vremena u svakoj zoni korišten je automatski sistem praćenja. Svi pacovi su žrtvovani dvije sedmice nakon MWM testa za naknadnu analizu.

Ekstrakcija proteina

Pod dubokom anestezijom sa 10 posto hloral hidrata, svi pacovi podvrgnuti MWM testu su obezglavljeni. Hipokampalna tkiva su brzo sakupljena na ledu, a zatim odmah zamrznuta u tečnom azotu. Sva tkiva su homogenizovana pod tečnim azotom pomoću maltera i tučka i sakupljena u puferu za lizu (7 M urea, 2 M tiourea, 2 procenta CHAPS, 20 mM Tris). Nerastvorljive čestice su uklonjene centrifugiranjem na 12,000 rpm tokom 20 minuta na 4 stepena. Kontaminirane nukleinske kiseline u uzorcima poremećene su povremenim zvučnim oscilacijama u trajanju od 5 min. Supernatanti su sakupljeni nakon centrifugiranja u istim uslovima kao što je gore opisano. Koncentracija proteina u supernatantima je mjerena Bradfordovim testom, a supernatanti su čuvani na 80 stepeni.

Dvodimenzionalna gel elektroforeza

Alikvoti proteina (120 µg) su podešeni puferom za rehidraciju (7 M urea, 2 M tiourea, 4 procenta CHAPS, 1 procenat wt/vol DTT, 0.5 procenata IPG pufera, i trag bromofenol plavog) u zapremini od 350 µL. Izoelektrično fokusiranje (IEF) je izvedeno u IPG trakama (pH 4-7, veličina 22 cm) na 300 V za 12 min, 700 V za 18 min, 1500 V za 1,5h, 9900 V za 3 h, 9990 V tokom 6,5 h, a zatim 600 V tokom 20 h na Ettan IPGphor II sistemu (GE ETTAN IPGPHOR3). Nakon IEF programa, trake su uravnotežene u IPG puferu za ravnotežu I (6 M urea, 2 posto SDS, 30 posto glicerol, 0,375 M Tris, pH 8,8, 20 mg/ml DTT, i trag bromofenol plavog), i zatim alkiliran (25 mg/ml jodoacetamida umjesto DTT u puferu za ekvilibraciju) 15 min. 2-DE je izveden na 12,5 posto SDS poliakrilamidnih gelova (24 cm × 19,5 cm × 1,0 mm) sa 0,5 posto agaroznog ljepila za zaptivanje, korištenjem Ettan DALT Six sistema elektroforeze (GE ETTAN DALTsix, PA, SAD). Elektroforeza je izvedena pri 2 W tokom 45 minuta, nakon čega je uslijedilo odvajanje na 17 W tijekom četiri sata sve dok bromofenol plavo nije skoro doseglo dno gelova. Proteinske mrlje su vizualizirane srebrnim bojenjem (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) u analitičkim gelovima. 2-DE ispirač formiran u tri primjerka i od tri nezavisne ekstrakcije proteina za svaku grupu.

Preparativna gel elektroforeza

Uzorci proteina (600 µg) iz četiri grupe pacova podvrgnuti su 2-DE prema gore opisanoj metodi. Proteinske mrlje su vizualizirane pomoću Coomassie briljantnog plavog bojenja (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) u preparativnim gelovima.

Snimanje i analiza slike

Gel slike su snimljene na {{0}}DE Image Scanning sistemu (UMAX Powerlook1100, VT, USA) i analizirane softverom Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, PA, USA). Proteinske mrlje su detektirane automatski, a zatim ručno uređivane kako bi se uklonile pruge, mrlje i artefakti.

Masena spektrometrija sa laserskom desorpcijom uz pomoć matriksa - vrijeme leta (MALDI-TOF-MS)

Za otiske prstiju peptidne mase i naknadnu analizu, gelovi su rezani, a Coomassie obojene mrlje su obojene i isprane sa 100 mM amonijum bikarbonata i acetonitrila, redukovane sa DTT na 60 stepeni tokom 40 minuta, a zatim alkilirane pomoću IAA 30 min u mraku. Gel je uključen u 50 µL 12 ng/µl modifikovanog rastvora tripsina u 50 mM amonijum bikarbonata (pH 8,6) na 37 stepeni preko noći. Peptidi su ekstrahovani iz gel čepa sa 1% mravlje kiseline/2% acetonitrila i koncentrirani pomoću C{13}} Zip-tipova. Digestije su uočene (četiri ponavljanja) na MALDI meti koristeći a-cijano 4-hidroksi cimetnu kiselinu (2 mg/ml u 50 posto acetonitrila, 0,1 posto TFA koja sadrži deset mM amonijum fosfata) kao matricu. Spektri su dobijeni na 4700 MALDI TOF/TOF masenom spektrometru (Applied Biosystems, NY, USA) i analizirani pomoću softvera GPS Explorer TM (Applied Biosystems).

Imunohistohemija

Presjeci koronalnog hipokampusa su fiksirani u 4 posto paraformaldehida prije nego što su ugrađeni u parafin, a zatim izrezani na 4-µm debele dijelove. Završeni koronalni rezovi hipokampusa obrađeni su kako bi se ugasila aktivnost endogene peroksidaze korištenjem 3 posto H2O2 u fiziološkom rastvoru puferiranom fosfatom. Nespecifične imunoreakcije su blokirane na sobnoj temperaturi 15 minuta. Sekcije su zatim inkubirane sa P-tau antitijelom i sekundarnim antitijelom na sobnoj temperaturi 30 min i vizualizirani su nakon reakcije 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorida (Dako, Tokio, Japan). Slike su snimljene svetlosnim mikroskopom (Olympus, Tokio, Japan) i obrađene pomoću softvera Photoshop (verzija 7.0, Adobe, San Jose, Kalifornija, SAD).

Statistička analiza

Kvantitativni podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Dvosmjerna analiza varijanse (ANOVA) izvršena je korištenjem softvera za analizu SPSS 10.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p < 0,05="" se="" smatra="">

Rezultati

GC promoviše učenje i pamćenje kod pacova VD

Da bismo procijenili efekte GC-a na kognitivne funkcije modela VD štakora, izvršili smo MWM test. U MWM testu, GC grupa je pokazala značajno manju latenciju bijega od VD grupe 4 i 5 dana nakon operacije, ali nije pokazala značajnu razliku u poređenju sa lažno operiranom grupom i kontrolnom grupom s oksiracetamom (Tabela I). Ovi podaci sugeriraju da GC promovira učenje i pamćenje kod VD štakora. GC mijenja proteomske profile hipokampusa pacova VD.

Proteomskom analizom hipokampusa pacova, otkrili smo da je 21 proteinska mrlja u GC grupi pokazala različite nivoe ekspresije u poređenju sa VD grupom. Među njima, četiri proteina su pokazala značajnu razliku u hipokampusu GC štakora (Tabela II): uključujući tri proteina koji su tioredoksin sličan protein 1 (TXNL 1), mitogenom aktiviranu protein kinazu kinazu 1 (MAPKK 1) i protein 2 povezan sa dihidropirimidinazom (DPYSL2); i jednu protein glutation sintetazu (GCL) smanjene regulacije. Tipični dvodimenzionalni profili gel elektroforeze (2-DE) DPYSL2 prikazani su na slici 1.

GC modulira nivo P-tau u hipokampusu VD pacova

Imunohistohemijskom analizom otkrili smo da je nivo P-tau proteina bio značajno viši u grupi VD modela nego u grupi koja je bila lažno operisana (p < 0.05).="" nakon="" gc="" tretmana,="" nivo="" p-tau="" proteina="" kod="" pacova="" modela="" vd="" pokazao="" je="" značajno="" smanjenje="" u="" poređenju="" sa="" vd="" grupom="" tretiranom="" fiziološkim="" rastvorom="" (p="">< 0,05),="" ali="" nije="" pokazao="" značajnu="" razliku="" u="" poređenju="" sa="" kontrolnom="" grupom="" sa="" oksiracetamom="" (slika="">

Diskusija

VD nastaje zbog oštećenja pamćenja i kognitivnog funkcioniranja uglavnom uzrokovanih cerebrovaskularnim bolestima8,9,10,11. Model dvožilne okluzije (2VO) je jednostavan i stabilan i prepoznat kao standardni model cerebralne ishemije. U ovoj studiji koristili smo 2VO model za uspostavljanje VD životinjskog modela. MWM testom smo otkrili da je VD grupa pokazala smanjenu kognitivnu sposobnost u odnosu na lažno operisanu grupu, potvrđujući da smo uspješno uspostavili VD model. Na osnovu ovog modela, otkrili smo da je GC tretman poboljšao prostornu kognitivnu sposobnost pacova VD u sličnoj mjeri sa oksiracetamom, pozitivnom kontrolom. Ovi podaci ukazuju da GC može promovirati prostorno učenje i oštećenje pamćenja kod VD.

Da bismo istražili mehanizam pomoću kojeg GC ispoljava neuroprotektivne efekte na VD, koristili smo proteomski pristup skriningu različito eksprimiranih proteina u hipokampusu pacova VD. Otkrili smo da je nekoliko proteina povezanih s energetskim metabolizmom, savijanjem proteina, signalnim putem i citoskeletom pokazalo različite ekspresije u hipokampusu pacova VD tretiranih GC u odnosu na one tretirane fiziološkom otopinom kao kontrolom.

Jedan od različito eksprimiranih proteina je DPYSL2, također poznat kao protein medijator kolapsinskog odgovora-2 (CRMP-2), koji je obogaćen u distalnom dijelu rastućih aksona primarnih neurona hipokampusa i ključan je za diferencijaciju aksona i izrastanje neurona12,13. Nadalje, CRMP-2 promovira sklapanje mikrotubula i posreduje u Ras signalizaciji kako bi se poboljšalo formiranje više aksona i polaritet neurona14,15. U ovoj studiji, nivo ekspresije proteina CRMP-2 povećan je za 2,28 puta u GC grupi u poređenju sa VD grupom, što ukazuje na važnu ulogu CRMP-2 u potencijalnim mehanizmima popravke formiranja neuronske mreže i održavanje neuronskog polariteta u VD.

Nadalje, u ovoj studiji smo pronašli veći P-tau u grupi VD modela, ali nižu ekspresiju P-tau nakon GC tretmana. Tau protein igra ključnu ulogu u morfogenezi neurona. U određenim patološkim situacijama, P-tau protein može stvoriti aberantne agregate koji su toksični za neurone, utječući na funkciju mitohondrija15. Prethodne studije sugeriraju da GC može poboljšati energetski metabolizam mitohondrija s antioksidacijskom funkcijom16,17,18. Zanimljivo je da je fosforilacija CRMP-2 također okarakterisana kao sastavni dio neurofibrilarnih spletova u AD.

Zaključci

CRMP2 je obično fosforiliran ciklin-ovisnom protein kinazom-5 (Cdk5) i glikogen sintazom kinazom-3 (GSK3) u mozgu pacijenata sa AD, istim kinazama koje fosforilišu tau protein za stvaranje NFTs19,20. Potrebne su daljnje studije kako bi se ispitalo da li GC reguliše nivo ekspresije P-tau i CRMP2 u VD regulacijom aktivnosti Cdk5 i GSK321,22,23. Ukratko, naši podaci sugeriraju da GC igra ključnu ulogu u zaštiti hipokampalnih neurona VD, smanjenjem fosforilacije P-tau i povećanjem nivoa ekspresije CRMP{17}}. Farmakološka manipulacija GC nudi novu priliku za razvoj terapije protiv VD.

Priznanja

Ova studija je podržana od strane Specijalne fondacije za Taishan naučnike i Nacionalnog fonda za prirodne nauke (30960520).

Sukob interesa

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

1)GORELICK PB, PANTONI L. Napredak u vaskularnom kognitivnom oštećenju. Stroke 2013; 44: 307-308.

2)CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba poboljšava učenje i pamćenje izazivanjem faktora rasta nerava. Behav Brain Res 2011; 216: 652-658.

3)TIAN XF, PU XP. Feniletanoidni glikozidi iz Cistanches salsa inhibiraju apoptozu izazvanu 1- metil-4-fenilpiridinijum jonom u neuronima. J Ethnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4)ZHU M, LU C, LI W. Prolazna izloženost ehinakozidu je dovoljna da aktivira Trk signalizaciju i zaštiti neuronske ćelije od rotenona. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5) MEDINA M, AVILA J. Nove perspektive o ulozi tau u Alchajmerovoj bolesti. Implikacije za terapiju. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6)NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. Genetski dokazi da je vaskularna demencija povezana s Alchajmerovom bolešću: genetska povezanost između tau polimorfizma i vaskularne demencije u kineskoj populaciji. Age Aging 2011; 40: 125-128.

7)CAIN DP, BOON F. Detaljna bihevioralna analiza otkriva i strategije zadataka i oštećenja prostorne memorije kod pacova koji su dobili bilateralni moždani udar srednje moždane arterije. Brain Res 2003; 972: 64-74.

8) ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. Pušenje je povezano sa povećanim rizikom od demencije: meta-analiza prospektivnih kohortnih studija sa istraživanjem potencijalnih modifikatora efekta. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9)NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. Spektralne karakteristike EEG-a razlikuju Alchajmerovu bolest i vaskularnu demenciju. Front Neurol 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat trening kod vaskularne demencije: motoričko poboljšanje i dalje! Aging Clin Exp Res 2015, 12. mart.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept poboljšava kognitivne performanse i povećava ekspresiju eNOS i BDNF tokom eksperimentalne vaskularne demencije kod dijabetesa izazvanog streptozotocinom. Curr Neurovasc Res 2015 11. mart.

12)ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. Protein medijatora za utišavanje kolapsinskog odgovora-2 reprogramira fenotip makrofaga i poboljšava zacjeljivanje infarkta u eksperimentalnom modelu infarkta miokarda. J Inflamm (Lond) 2015; 12:11.

13)WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. Diferencijalna regulacija fosforilacije proteina 2 medijatora odgovora na kolapsin (CRMP2) pomoću GSK3ß i CDK5 nakon traumatske ozljede mozga. Front Cell Neurosci 2014; 8: 135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. Lokalizirane promjene kinaze glikogen sintaze-3 i proteina medijatora odgovora na kolapsin-2 u mozgu zahvaćenom Huntingtonovom bolešću. Hum Mol Genet 2014; 23: 4051-4063.

15)BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Protein medijator 2 odgovora na kolapsin (CRMP2) stupa u interakciju sa N-metil-D-aspartat (NMDA) receptorom i Na plus /Ca2 plus izmjenjivačem i reguliše njihov funkcionalna aktivnost. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16)DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. Ultrazvukom potpomognuta vodena dvofazna ekstrakcija feniletanoidnih glikozida iz stabljika Cistanche deserticola YC Ma. J Sep Sci 2015 Jan 21. [Epub ispred štampe].

17) HU GS, JIA JM, KIM DH. Efekti hranjenja tirozinom i fenilalaninom na akumulaciju feniletanoidnih glikozida u kulturi suspenzije stanica Cistanche deserticola. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18)DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. Simultano određivanje feniletanoidnih glikozida i aglikona elektroforezom kapilarne zone sa aktivnim puferskim modifikatorom. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19)XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. Antihiperglikemijski i hipolipidemijski efekti Cistanche tubulosa kod dijabetičkih db/db miševa tipa 2. J Ethnopharmacol 2013; 150: 935-945.

20)LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. Svojstva adsorpcije i preparativno odvajanje feniletanoidnih glikozida iz Cistanche deserticola upotrebom makroporoznih smola. J Chromotor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21)CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. Regulacija neuronskih cav3.1 kanala pomoću ciklin-zavisne kinaze 5 (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22)CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. Ciljanje kinaze 5 ovisno o ciklinu sprječava agregaciju b-amiloida uključujući glikogen sintazu kinazu 3b i fosfataze. J Neurosci Res 2015, 24. februar. [Epub ispred štampe].

23)ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. Fosforilacija porodičnih mutanata prionskog proteina kinaze 5 zavisne od ciklina pogoršava konverziju u amiloidnu strukturu. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.