Ekstrakt lista Glochidion Littorale pokazuje neuroprotektivne efekte kod Caenorhabditis Elegans putem DAF-16 aktivacije

Za više informacija obratite se na emailtina.xiang@wecistanche.com 
sažetak:Brojne biljke koje se koriste u narodnoj medicini u Tajlandu i istočnoj Aziji privlače interesovanje zbog visoke bioaktivnosti njihovih ekstrakata. Cilj ove studije bio je da se ispitaju jestivi ekstrakti listova 20 biljaka pronađenih na Tajlandu i istraži potencijalni neuroprotektivni učinak najbioaktivnijeg uzorka. Ukupni sadržaj fenola i flavonoida i aktivnost uklanjanja 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilradikala utvrđeni su za svih 20 ekstrakata lista. Na osnovu ovih testova, ekstrakt lista Glochidionlittorale (GLE), koji je pokazao visoku vrijednost u svim ispitivanim parametrima, korišten je u daljnjim eksperimentima za procjenu njegovih učinaka na neurodegeneraciju uCaenorhabditis elegans. GLE tretman je poboljšao oksidativni stres izazvan H2O2- tako što je smanjio akumulaciju reaktivnih vrsta kiseonika i zaštitio crve od neurodegeneracije izazvane 1-metil-4-fenilpiridinijumom izazvanom. Uočeni neuroprotektivni efekti mogu biti povezani sa aktivacijom transkripcionog faktora DAF-16. Karakterizacija ovog ekstrakta pomoću LC-MS identificirala je nekoliko fenolnih spojeva, uključujući miricetin, kuestrin, hlorogensku kiselinu i hesperidin, koji mogu igrati ključnu ulogu uneuroprotekcija. Ova studija izvještava o novoj neuroprotektivnoj aktivnosti GLE-a, koja se može koristiti za razvoj tretmana za neurodegenerativne bolesti kao što je Parkinsonov sindrom.

Ključne riječi: Caenorhabditis elegans; ekstrakt lista;neuroprotekcija; antioksidativna aktivnost; DAF-16

1. Uvod 

Neurodegenerativni poremećaji uključujući Alchajmerovu bolest i Parkinsonovu bolest (PD) predstavljaju velike zdravstvene i finansijske probleme za globalne zdravstvene organizacije [1]. Iako se ljudski životni vijek povećao u posljednjih nekoliko decenija u industrijaliziranim zemljama, povećana je i prevalencija bolesti povezanih sa starenjem. Očekuje se da će se učestalost kasnih poremećaja, kao što su neurološki poremećaji, brzo povećati u narednih nekoliko decenija. Stoga je ključno podsticati studije i provoditi klinička ispitivanja spojeva koji mogu imati potencijal da izliječe, spriječe ili barem odgode početak neurodegenerativnih bolesti [2]. Jedna od karakterističnih karakteristika PD je progresivni gubitak dopaminergičkih (DA) neurona u supstanciji nigra [3]. U patogenezi PD, povećana proizvodnja reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) igra ključnu ulogu u gubitku DA ćelija [4]. Stoga se smanjenje oksidativnog stresa smatra obećavajućim terapijskim pristupom u liječenju PD [5]. 1-metil-4-fenilpiridinijum (MPP plus), koji inhibira aktivnost mitohondrijalnog kompleksa I, može izazvati simptome slične PD kod ljudi i životinjskih modela [6].

UpotrebaCaenorhabditis eleganskao in vivo model pruža određene prednosti u proučavanju PD [7]. Nematoda je jednostavna, jeftina i ima kratak životni ciklus. Podržava studije koje uključuju analize velikih razmjera. Štaviše, neuronska mreža C. elegans je u potpunosti mapirana. Sadrži 8 DA neurona i PD homologne gene [8]. Neurodegeneracija, koja oponaša simptome Parkinsonove bolesti, može biti izazvana kod C. elegans tretmanom neurotoksinima kao što je MPP plus [9].
Prirodni antioksidativni spojevi predstavljaju atraktivne izvore za razvoj lijekova za liječenje neurodegenerativnih bolesti zbog svojih neuroprotektivnih učinaka na životinjskim modelima i niske toksičnosti [3]. Poznato je da su polifenoli među najzastupljenijim antioksidansima u ljudskoj ishrani [10]. Također je utvrđeno da su oksidativni procesi uključeni u mnoge patologije, uključujući neurodegeneraciju, rak, dijabetes, kardiovaskularne i protuupalne bolesti. Stoga bi pronalaženje polifenola koji pokazuju antioksidativna svojstva iz prirodnih izvora moglo doprinijeti prevenciji ili liječenju tih patologija. Ova studija se fokusirala na ekstrakte jestivih listova biljaka pronađenih na Tajlandu. Većina sorti koje se široko uzgajaju u sjevernom i južnom Tajlandu korištene su kao narodni lijek protiv općih ozljeda i bolesti; međutim, postoji nekoliko izvještaja o njihovim neuroprotektivnim efektima.
U ovoj studiji prvo smo pregledali ekstrakte jestivog lišća iz 20 biljaka uzgajanih na Tajlandu i procijenili njihov sadržaj fenola i fllflavonoida i njihovu aktivnost uklanjanja radikala 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH). Efekti ekstrakta lista Glochidion littorale (GLE), koji je pokazao visoku vrijednost u svim ispitivanim parametrima, procijenjeni su na C. elegans sa neurodegeneracijom. Nadalje, ispitani su potencijalni putevi uključeni u neuroprotektivni efekat GLE, zajedno sa identifikacijom glavnih komponenti u GLE.
Kako je poznato da transkripcijski faktor DAF-16 igra ključnu ulogu u regulaciji oksidativnog stresa [11], pretpostavljeno je da GLE može ciljati DAF-16. C. elegans soj CF1038, koji je DAF-16 mutantni soj sa gubitkom funkcije, korišten je za određivanje stope preživljavanja crva tretiranih sa i bez GLE. Kod H2O2-indukovanog oksidativnog stresa, GLE tretman nije povećao stopu preživljavanja transgenih crva (Slika 1C).

2. Rezultati

2.1. Pregled listova tajlandskih biljaka

Sirovi ekstrakti jestivih listova biljaka uzgajanih na Tajlandu pripremljeni su ultrazvučnom obradom. Ekstrakti listova 20 biljaka ispitani su na sadržaj fenola i flavonoida i antioksidativnu aktivnost DPPH testom uklanjanja radikala. Za nekoliko ispitanih uzoraka, kao što su Glochidion sphaerogynum i Mentha piperita, utvrđeno je da poseduju visoku aktivnost uklanjanja radikala sa niskim sadržajem fenola i flflavonoida, dok su određeni uzorci, kao što su Clinacanthus nutans i Ocimum × citriodorum, pokazali suprotan trend (Table ). Ekstrakt lista G. littorale pokazao je visoku aktivnost uklanjanja radikala DPPH, kao i visok sadržaj fenola i fllflavonoida. Stoga su bioaktivnosti povezane s G. littorale dalje istražene.

2.2. GLE poboljšana otpornost na oksidativni stres preko DAF-16 u C. Elegans

Istražen je učinak GLE-a na preživljavanje N2 crva pod oksidativnim stresom. Tretman s H2O2 (5 mM) inducirao je 75 posto smrti u kontrolnoj grupi, dok je istodobni tretman sa 50 µg/mL i višim koncentracijama GLE bio povezan sa visokom stopom preživljavanja (Slika 1A). Među testiranim koncentracijama GLE, 100 µg/mL i 200 µg/mL bile su povezane sa najvišim stopama preživljavanja (82,0 posto i 88,2 posto, respektivno). Stoga su ove dvije koncentracije korištene u narednim eksperimentima. Da bi se procijenio antioksidativni učinak GLE in vivo, mjereni su intracelularni nivoi ROS u nematodama divljeg tipa korištenjem 2',7'-dihlorodihidrofluorescein diacetata (H2DCF-DA), dobro poznate fluorescentne sonde za otkrivanje intracelularne proizvodnje ROS. Uočeno je značajno smanjenje intenziteta fluorescencije u grupama koje su tretirane GLE u poređenju sa onim u netretiranoj grupi (Slika 1B), što potvrđuje antioksidativno svojstvo GLE.

2.3. GLE tretman je smanjio smrtnost MPP plus -indukovane neurotoksičnosti DA preko DAF-16 kod C. Elegans C. elegans posjeduje 8 DA neurona [8]. Selektivna degeneracija ovih DA neurona je procijenjena nakon izlaganja MPP plus. Tretman divljeg tipa N2 crva sa 0.75 mM MPP plus rezultirao je značajnim smanjenjem preživljavanja (Slika 2). Međutim, zajednički tretman sa GLE značajno je povećao preživljavanje crva. Istražen je učinak GLE tretmana na daf{12}} mutantne crve. Kao što je prikazano na slici 3 i tabeli 2, GLE tretman nije povećao preživljavanje ovih crva nakon izlaganja MPP plusu u poređenju sa onim u kontrolnoj grupi. Ovi rezultati sugeriraju da je DAF-16 možda potreban za posredovanje neuroprotektivnog efekta GLE kod C. elegans. Zatim, DAF-2 mutantni soj sa gubitkom funkcije, CB1370, korišten je da se utvrdi da li je DAF-2 bio uključen u uočene neuroprotektivne efekte. Kao što je prikazano na slici 4 i tabeli 3, medijan i maksimalno preživljavanje su značajno povećani kod daf-2 mutantnih crva tretiranih GLE.

2.4. Efekti GLE-a na DAF-16 lokalizaciju

Pokazano je da je aktivacija DAF-16 regulirana njegovom nuklearnom akumulacijom [12]. Nakon toga, istražili smo da li GLE može izazvati nuklearnu akumulaciju DAF-16 u transgenom soju TJ356 koji eksprimira DAF-16::GFP fuzioni protein. Rezultati su pokazali da se nakon 48 h inkubacije sa 100 µg/mL GLE, intenzitet zelene fluorescencije DAF-16 u jezgru značajno povećao u poređenju sa onim u netretiranoj grupi (Slika 5).

2.5. Fitokemijska karakterizacija u GLE

LC-MS je proveden za profiliranje fitokemikalija u GLE, a rezultati su prikazani na slici6. Kromatografski pikovi su identificirani poređenjem MS podataka sa bazama podataka na osnovu pretraživanja m/z vrijednosti pikova molekularnih jona u pozitivan način rada [M plus H]plus. Posljedično, miricetin, kuestrin, hlorogenska kiselina i hesperidin su otkriveni kao glavna jedinjenja (Tabela4).

3. Diskusija

Biljni ekstrakti su bogat izvor prirodnih bioaktivnih jedinjenja. Mnoga istraživanja ocjenjivala su biljne ekstrakte koji se koriste u zemljama jugoistočne Azije, uključujući Tajland, gdje su ovi ekstrakti komponente narodne medicine [13,14]. U ovoj studiji su pregledani ekstrakti 20 jestivih listova biljaka sa Tajlanda, a G. littorale je odabran za dalja istraživanja jer je pokazao visok sadržaj fenola, sadržaj fllavonoida i aktivnost uklanjanja radikala. Nekoliko studija je istraživalo različite vrste iz roda Glochidion [15–19]; međutim, postoji nekoliko studija o funkcionalnim svojstvima i sastojcima G. littorale. Naši podaci su pokazali da GLE štiti C. elegans od H2O2-indukovanog oksidativnog stresa smanjujući intracelularnu akumulaciju ROS. To bi moglo biti zbog visokog sadržaja fenolnih spojeva kao što su flavonoidi, za koje je poznato da posjeduju snažno antioksidativno djelovanje [20]. Ovi nalazi su slični onima koje su dobili Duangjan et al. (2019), koji je pokazao da ekstrakti listova G. zeylanicum mogu zaštititi C. elegans od oksidativnog stresa [21]. Inzulinski/inzulinski signalni put (IIS) reguliše rast, reakciju na stres i dugovječnost kod C. elegans [22,23]. Otkrili smo da je daf-16 nulti mutant C. elegans tretiran GLE-om podložan oksidativnom stresu. Ovaj rezultat sugerira da je antioksidativni učinak GLE-a u smanjenju oksidativnog stresa kod nematoda možda uključen ne samo u aktivnost uklanjanja radikala, već iu regulaciju DAF-16 faktora transkripcije.

Ispitivani su zaštitni efekti GLE protiv MPP plus-indukovane toksičnosti kod C. elegans. DA neuroni u nematodama preuzimaju MPP plus uglavnom preko DA transportera visokog afiniteta, što je slično uočeno kod sisara. Akumulacija MPP plus unutar neurona inaktivira mitohondrijski kompleks I respiratornog lanca i inducira ćelijsku smrt [24-27]. Utvrđeno je da GLE tretman značajno smanjuje smrtnost povezanu s MPP plus tretmanom kod divljih vrsta crva. IIS put je moduliran peptidima sličnim insulinu kroz DAF-2 receptor u C. elegans [28]. U normalnim uslovima, IIS put inhibira fosforilaciju DAF-16 i sprečava njegovu nuklearnu translokaciju. U daf-2 nultim mutantima, GLE-tretirana grupa je preživjela duže od kontrolne grupe. Nasuprot tome, nije uočena razlika u preživljavanju između kontrolne grupe i grupe tretirane GLE-om koja je sadržavala daf-16 null mutantne crve. Poznato je da smanjena DAF{13}} signalizacija olakšava ulazak DAF-16 u jezgro, gdje može pojačati ekspresiju ciljnih gena i kontrolirati otpornost na stres i dugovječnost [29]. Ovo može objasniti zašto su daf{16}} mutantni crvi liječeni GLE pokazali relativno veće preživljavanje. Štaviše, povećana nuklearna akumulacija DAF-16 kod crva tretiranih GLE primećena je korišćenjem transgenog TJ356 DAF-16::GFPC. elegans. Kumulativno, ovi rezultati su pokazali da je GLE možda pokazao svoje neuroprotektivne efekte putem aktivacije DAF-16.

4.3. Ukupni sadržaj fenola Za određivanje ukupnog sadržaja fenola korištena je Folin-Ciocalteuova metoda. Ukratko, 11,4 µL ekstrakta (1 mg/mL) je pomešano sa 227,3 µL 2 procenta (w/v) rastvora Na2CO3, a zatim je smeša ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi 2 min. Nakon dodavanja 11,4 µL 10 posto (v/v) Folin-Ciocalteu reagensa. Inkubacija u mraku je trajala 30 min. Nakon toga, apsorbancija je izmjerena na 750 nm pomoću čitača mikroploča (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Galna kiselina je korištena kao standard za kalibracijsku krivulju. Ukupni sadržaj fenola izražen je kao ekvivalenti galne kiseline (mg ekvivalenta galne kiseline/g biljnog ekstrakta).

4.4. Ukupni sadržaj flavonoidaKorišćena je kolorimetrijska metoda aluminijum hlorida za merenje ukupnog sadržaja flavonoida. Ukratko, 25 µL ekstrakta (2 mg/mL) pomiješano je sa 7,5 µL 5 posto (w/v) otopine NaNO2 i 152,5 µL destilovane vode. Nakon 6 minuta, dodano je 15 µL 10 posto (w/v) rastvora AlCl3 i ostavljeno da stoji 5 minuta. Zatim je u smešu dodato 50 µL 1 M rastvora NaOH. Nakon toga, smjesa je inkubirana u mraku 15 minuta, a apsorbancija je izmjerena na 510 nm pomoću čitača mikroploče. Ukupni sadržaj flavonoida je izračunat generisanjem kalibracione krive koristeći kvercetin kao standard, a rezultati su izraženi kao kvercetin ekvivalent (mg ekvivalent kvercetina/g biljnog ekstrakta).4.5. Aktivnost uklanjanja slobodnih radikala Kapacitet uklanjanja slobodnih radikala je procijenjen korištenjem DPPH testova [32]. Ukratko, 100 µL ekstrakta (1 mg/mL) pomiješano je sa 100 µL otopine DPPH. Nakon 30 min, apsorbancija je izmjerena na 517 nm pomoću čitača mikroploče. Rezultati su izraženi kao procenat inhibicije DPPH radikala.

4.10. Nuklearna lokalizacija DAF-16Transgene C. elegans TJ356, koja eksprimira DAF-16-GFP fuzioni protein, korištena je za ispitivanje intracelularne distribucije DAF-16. Nematode L1 stadijuma tretirane su sa GLE tokom 48 h na 2{{30}} ◦C. Crvi su zatim prebačeni u podlogu od 2% agaroze na staklenom predmetu i anestezirani dodavanjem jedne kapi (približno 20 µL) 25 µM natrijum-azida na agarozni jastučić. Ekspresija GFP-a je ispitivana fluorescentnom mikroskopom (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Srednji intenzitet fluorescencije DAF-16 u jezgrima analiziran je pomoću softvera Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Fitokemijsko profilisanje pomoću LC-MS Ekstrakt lista je analiziran pomoću LCMS-8040 (Shimadzu). Maseni spektri su dobijeni u rasponu od m/z 50–1000 koristeći Q3 način skeniranja. Otopina je ubrizgana u Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokio Japan) na temperaturi kolone na 40 ◦C koristeći gradijent (A) 0,1 posto mravlje kiseline i (B ) acetonitril/voda (80/20) koji sadrži 0,1 posto mravlje kiseline. Korišćen je sledeći gradijent sa brzinom protoka od 0,2 mL/min: 0–100 procenata B (0–45 min), 100 procenata B (45–50 min) i 0 procenata B (50–60 min). Jedinjenja su navodno identifikovana upoređivanjem eksperimentalnih m/z vrednosti sa bibliotekom teoretskih izračunatih m/z vrednosti u bazama podataka, uključujući bazu podataka humanog metaboloma i bazu podataka METLIN. 4.12. Podaci statističke analize izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija za svaku grupu. Značajna razlika između dvije grupe procijenjena je pomoću t-testa, dok je razlika između tri i više grupa procijenjena korištenjem jednosmjerne ANOVA, nakon čega je uslijedio Tukeyjev post-hoc test poređenja. Statistička značajnost je postavljena na p < 0,001="" i="" p="">< 0,0001.="" za="" testove="" životnog="" vijeka,="" preživljavanje="" c.="" elegans="" je="" ucrtano="" korištenjem="" kaplan-meierovih="" krivulja="" preživljavanja="" i="" analizirano="" putem="" log-rank="" testova="" pomoću="" softvera="" graphpad="" prism="" (verzija="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vettem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 i Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

2Institut za biomedicinske nauke, Univerzitet Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

3 Škola agroindustrije, Univerzitet Mae Fah Luang, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Tajland;saroat@mfu.ac.th

4 Edisonov biotehnološki institut, Konneker Research Laboratories, Univerzitet Ohajo, Atena, OH 45701, SAD;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athens, OH 45701, USA

6 Visoka poljoprivredna škola, Univerzitet Kyoto, Kyoto 606-8502, Japan;

Doprinosi autora:

Doprinosi autora: Konceptualizacija, SR, DAV i SK; istraga, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV i KS; pisanje—priprema originalnog nacrta, AFB; pisanje—pregled i uređivanje, SK; nadzor, SN Svi autori su pročitali i pristali na objavljenu verziju rukopisa.
Finansiranje: Ovo istraživanje nije dobilo vanjsko finansiranje.
Izjava institucionalnog odbora za reviziju: Nije primjenjivo.
Izjava o informiranom pristanku: Nije primjenjivo.
Izjava o dostupnosti podataka: Podaci su dostupni od strane odgovarajućeg autora na razuman zahtjev.
Sukob interesa: Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.
Dostupnost uzorka: Uzorci jedinjenja nisu dostupni od autora

Reference

1 Pohl, F.; Lin, PKT Potencijalna upotreba biljnih prirodnih proizvoda i biljnih ekstrakata sa antioksidativnim svojstvima za prevenciju/liječenje neurodegenerativnih bolesti: in vitro, in vivo i klinička ispitivanja. Molecules 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Uloga oksidativnog stresa u neurodegenerativnim bolestima. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Zaštitni efekti ksiloketala B protiv neurotoksičnosti izazvane MPP plus u Caenorhabditis elegans i PC12 ćelijama. Brain Res. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Trimer, PA; Bennett, JP, Jr. Kibridni model sporadične Parkinsonove bolesti. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia štiti dopaminergičku neurodegeneraciju kod Caenorhabditis elegans. Pharm. Biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Neurohemijski nalazi u MPTP modelu Parkinsonove bolesti. J. Neural Transm. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Funkcionalna analiza VPS41-posredovane neuroprotekcije u Caenorhabditis elegans i modelima Parkinsonove bolesti kod sisara. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-butilideneftalid štiti od dopaminergičke degeneracije neurona i akumulacije -sinukleina u Caenorhabditis elegans modelima Parkinsonove bolesti. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Antiparkinsonski efekti Bacopa monnieri: Uvidi iz transgenih i farmakoloških Caenorhabditis elegans modela Parkinsonove bolesti. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polifenolni antioksidansi iz prirodnih izvora i doprinos promicanju zdravlja. U Polifenoli u ljudskom zdravlju i bolesti; Elsevier BV: Amsterdam, Holandija, 2014; str. 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulacija starenja i bolesti povezanih sa starenjem od strane DAF-16 i faktora toplotnog šoka. Science 2003, 300, 1142–1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf{1}} integriše razvojne i okolišne inpute za posredovanje u starenju nematode Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioksidativne i aktivnosti uklanjanja slobodnih radikala nekih biljaka koje se koriste u tajlandskoj narodnoj medicini. Pharm. Biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioksidativna aktivnost i ultrastrukturne promjene u ćelijskim linijama raka želuca izazvane ekstraktima jestivih narodnih biljaka sjeveroistočnog Tajlanda. BMC Complement. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Pojava triterpenoida i steroida u tri vrste Glochidion. Phytochemistry 1970, 9, 1099–1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, glukozid (7S,8R)-dihidrodeh idrodikoniferil alkohola iz listova glochidia obovatum. Phytochemistry 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Hemijski sastojci iz Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; On, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Hemijski sastojci iz Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Vrijednost nutrijenata i sadržaj antioksidansa autohtonog povrća iz južnog Tajlanda. Food Chem. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoidi kao antioksidansi. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum ekstrakti listova pokazuju svojstva koja produžavaju životni vijek i imaju svojstva otpornosti na oksidativni stres kod Caenorhabditis elegans preko DAF-16/FoxO i SKN-1/Nrf-2 signalnih puteva. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Ciljevi DAF-16 uključeni u Caenorhabditis elegans dugovječnost odraslih i formiranje dauera. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO Transkripcijski faktori u regulatornim mrežama dugovječnosti. J. Biochem. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergički gubitak neurona i motorni deficiti kod Caenorhabditis elegans koji prekomjerno izražava ljudski -sinuklein. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD neurotoksinom izazvana degeneracija dopaminskih neurona u Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. Smanjenje ATP-a je glavni uzrok MPP plus indukovane dopaminom neuronske smrti i smrtonosnosti crva u -sinuklein transgenom C. elegans. Neurosci. Bik. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus model Parkinsonove bolesti za visokopropusne provjere lijekova. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signali mladosti: Endokrina regulacija starenja kod Caenorhabditis elegans. Trends Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [CrossRef]