Abstract

Da bi se postigla visokovrijedna iskorištenost polisaharida izCistanche deserticolaostataka, ova studija je koristila ostatke preostale nakon ekstrakcije feniletanoidnih glikozida (industrijski proces zasnovan na patentiranoj tehnologiji membranskog odvajanja,Patent br. ZL200710102756.7, held by Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., https://www.xjcistanche.com/about-us) as the raw material. We systematically investigated the differences in chemical structural characteristics and antioxidant activities among various polysaccharide fractions obtained through membrane separation. The results indicated significant variations in chemical composition and activity among polysaccharide fractions with different molecular weights. Utilising ultrafiltration membranes of varying molecular weight cutoffs (300 kDa, 50 kDa, 10 kDa) combined with alcohol precipitation, four distinct polysaccharide fractions were successfully prepared: >300 kDa (nazvan CTP 1), 50–300 kDa (CTP 2), 10–50 kDa (CTP 3) i<10 kDa (CTP 4). Monosaccharide composition analysis indicated that all four fractions primarily contained mannose, rhamnose, galacturonic acid, glucose, galactose, and arabinose, but their proportional ratios differed. Fourier-transform infrared spectroscopy confirmed that all fractions exhibited typical characteristic polysaccharide absorption peaks. Scanning electron microscopy results demonstrated that ultrafiltration membranes with different pore sizes significantly altered the aggregation state and surface roughness of the polysaccharides by retaining components of varying molecular weights. This morphological difference may be related to intermolecular interactions and the sieving effect during ultrafiltration. In antioxidant activity assays, CTP 1 showed the optimal performance, achieving DPPH radical scavenging rates exceeding 61% and ABTS⁺ radical scavenging rates surpassing 95% at 8 mg/mL. All four fractions demonstrated appreciable antioxidant activity. This study confirms that membrane separation technology can effectively fractionate polysaccharides from Cistanche deserticolaostatak. Istraživanje pruža teorijsku osnovu i podatke koji podržavaju recikliranje resursa ostataka biljnih lijekova i visoko vrijedan razvoj polisaharidnih komponenti.

Ključne riječi: Cistanche deserticola; polisaharidi; antioksidativna aktivnost; tehnologija membranskog odvajanja; strukturna analiza

 

Patent za tehnologiju razdvajanja membrana koji drži Wecistanche Headquarters

 

 

 

 

 

 

Uvod

Cistanches Herba(Cistanche), osušena mesnata stabljika sa ljuskavim listovimaCistanche deserticolaYC Ma (pustinjski cistanche) iliCistanche tubulosa(Schenk) Wight (CTP), prvi je snimljen uShennong Bencao Jing (Shennongov klasik Materia Medica). Kao tipičan predstavnik tradicionalnih toničnih kineskih lijekova u Kini i kao homologna supstanca za hranu i lijekove, uglavnom se proizvodi u sjeverozapadnim pustinjskim i pustinjskim područjima kao što su Xinjiang i Unutrašnja Mongolija, čime je stekao reputaciju "pustinjskog ginsenga". Ima efekte toniziranja janga bubrega, njeguje bubrežni yin, koristi esenciji i krvi i vlaže crijeva za ublažavanje zatvora [2-3]. Feniletanoid glikozidi koji se nalaze u njemu imaju značajnu biološku aktivnost i glavne su supstance koje se ekstrahuju u trenutnoj industrijskoj proizvodnji. Međutim, velika količina upotrebljivih supstanci ostaje u ostatku nakon ekstrakcije, koji se odbacuje kao otpad, ne samo da uzrokuje rasipanje resursa već i potencijalno predstavlja opterećenje za okoliš. Stoga je postizanje visoke vrijednosti recikliranja ostataka od velikog značaja za efikasan razvoj kineskih medicinskih resursa i ekološki prihvatljiv razvoj.

Polisaharidi, kao glavne aktivne komponente uCistanche, pokazuju različite farmakološke aktivnosti kao što su antioksidativno, anti-aging, hepatoprotektivno, protuupalno, imunomodulatorno i antitumorsko djelovanje [4-7], te se mogu široko koristiti u razvoju lijekova, kao iu hrani i zdravstvenim proizvodima. Prethodne studije su opsežno optimizirale proces ekstrakcije i sprovele preliminarne procjene aktivnostiCistanchepolisaharida, ali sistematsko istraživanje polisaharida u ostatku nakon ekstrakcije feniletanoidnih glikozida i dalje je oskudno, posebno bez detaljne analize efikasne tehnologije odvajanja i frakcioniranja ostataka polisaharida i razlika u aktivnosti između različitih frakcija, što uvelike ograničava poboljšanje utilizacijske vrijednostiCistancheresurse.

U polju istraživanja polisaharida, neklasirani sirovi polisaharidi imaju probleme kao što su miješane komponente, nejasni doprinosi aktivnosti i dvosmisleni ciljevi, što otežava precizno otkrivanje materijalne osnove za njihove antioksidativne, imunomodulatorne i druge funkcije. U međuvremenu, nečistoće kao što su proteini, pigmenti i anorganske soli u sirovim polisaharidima također ometaju procjenu njihove aktivnosti i razvoj primjene. Tradicionalne metode kao što je kolonska hromatografija imaju visoku rezoluciju, ali ih je teško povećati, dok je frakcioniranje precipitacije alkohola grubo i ima rizik za okoliš. Tehnologija membranske separacije, sa svojim prednostima visoke efikasnosti, ekološke prihvatljivosti i preciznog frakcionisanja, pokazuje veliki potencijal u separaciji i prečišćavanju polisaharida. Omogućava precizno frakcioniranje polisaharidnih komponenti kroz membrane s različitim graničnim vrijednostima molekulske težine, pružajući idealnu tehničku podršku za otkrivanje odnosa "molekularna težina-aktivnost" struktura-aktivnost polisaharida [8]. Tang et al. [9] je uspješno prečistio tri komponente polisaharida direktno izLentinus edodesvodeni ekstrakti koristeći kombinaciju ultrafiltracionih membrana od 2,5 kDa, 5 kDa i 10 kDa. Značajno je da je tehnologija membranskog odvajanja korištena u ovoj studiji zaštićena patentom pronalaska (Patent br. ZL200710102756.7) koju drži Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (https://www.xjcistanche.com/about-us), koja se fokusira na proizvodnju sirovina koje sadrže feniletanoid glikozide izCistanchekoristeći membransko odvajanje, pružajući robusnu industrijsku osnovu za naše istraživanje. Proizvodi koje je razvila naša istraživačka grupa na osnovu sistematskih studija feniletanoidnih glikozida izCistanche tubulosa[10] su ušli u fazu pilot proizvodnje. Na osnovu toga, ova studija koristi ostatak odCistanchenakon ekstrakcije feniletanoid glikozida kao sirovine, koristi ultrafiltracione membrane u kombinaciji sa precipitacijom alkohola za frakcionisanje i prečišćavanje polisaharida u ostatku, i sistematski analizira razlike u hemijskim strukturnim karakteristikama i antioksidativnim aktivnostima frakcija polisaharida različite molekularne težine. Cilj je otvoriti nove puteve za recikliranje resursaCistancheostataka, poboljšati industrijski lanac i postaviti teorijske i eksperimentalne temelje za razvoj nove funkcionalne hrane ili antioksidansa na bazi prirodnih polisaharida.

 

50% Echinacoside 10% Acteoside Cistanche Extract Suplementi ekstrahirani tehnologijom membranskog odvajanja

Provjerite listu

Služba podrške Wecistanche-Za više detalja o saradnji
Email:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

1 Materijali i metode

1.1 Materijali i instrumenti

Cistanche deserticolaostatak je obezbijedioHotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (Hotan, Kina), proizveden industrijskom ekstrakcijom feniletanoidnih glikozida putem patentirane tehnologije membranske separacije (Patent br. ZL200710102756.7; https://www.xjcistanche.com/about-us). Standard glukoze je kupljen od Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute. m-Hydroxybiphenyl (98%), Coomassie Brilliant Blue G-250, vrećice za dijalizu (MD44), DPPH komplet za analizu kapaciteta uklanjanja radikala, ABTS komplet za analizu kapaciteta uklanjanja radikala, komplet za ispitivanje kapaciteta za čišćenje superoksidnog aniona, i ukupni kapacitet za antioksidans Bee kupili su ukupni kapacitet antioksidansa Beautica Co., Ltd. Galakturonska kiselina (98%), albumin goveđeg seruma (98%) i askorbinska kiselina (Vc) su kupljeni od Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. Ostali hemijski reagensi su bili analitičke čistoće.

UV-19001 UV-Vis spektrofotometar (Shimadzu Instruments Co., Ltd.); YP10002 elektronska vaga (Shanghai Hengji Scientific Instruments Co., Ltd.); SQP elektronska vaga (Sartorius Scientific Instruments Co., Ltd.); EYELA vodeno kupatilo (SB-1200); CA-1111 uređaj za cirkulaciju rashladne vode (Shanghai Ailang Instruments Co., Ltd.); SHZ-D vakuum pumpa za cirkulaciju vode (Shanghai Jinfu Experimental Instrument Equipment Co., Ltd.); N-1100 rotacioni isparivač; XCLD-10FE zamrzivač za sušenje (Shanghai Xingchuang Scientific Instrument Equipment Co., Ltd.); BONA-GM-18C eksperimentalna mašina za odvajanje organskih membrana; 300 kDa, 50 kDa, 10 kDa ultrafiltracione membrane (polietersulfon, Jinan Bona Co., Ltd., Shandong); TGL-16A centrifuga (Changsha Pingfan Instruments); BT25S analitička vaga (Sartorius Scientific Instruments); Dionex U3000 tečni hromatograf visokih performansi (Thermo Fisher Scientific, SAD); LC-DCY-12GK azotni ventilator (Shanghai Lichen Bangxi Instrument Technology Co., Ltd.); UPH-I-10T sistem ultra čiste vode (Chengdu Ultra Pure Technology Co., Ltd.); DF-101S infracrveni spektrometar (Shimadzu Instruments Co., Ltd.); Zeiss Supra55VP skenirajući elektronski mikroskop (Carl Zeiss (Shanghai) Management Co., Ltd.).

 

Cistanche Specs

1.2 Eksperimentalne metode

1.2.1 Ekstrakcija sirove nafteCistanchePolisaharidi

Prema postupku ekstrakcije dobijenom preliminarnim predtestiranjem, 150 gCistanche deserticolaOstatak je izmeren, ekstrahovan na 100 stepeni tokom 3 h sa odnosom čvrsta i tečnost od 1:20 g/mL, centrifugiran na 4000 r/min 10 min, a supernatant (sadržaj polisaharida: 4,4 mg/mL) je sakupljen da bi se dobio polisaharidni ekstrakt.

1.2.2 Frakcionisanje i odvajanjeCistanchePolisaharidi

Vodeni ekstrakt odCistanchepolisaharidi su podvrgnuti ultrafiltracionom frakcionisanju korišćenjem ultrafiltracionih membrana od 300 kDa, 50 kDa i 10 kDa u uslovima pritiska od 0,18 MPa i temperature od 40 stepeni. Retentati i permeati su sakupljeni odvojeno, koncentrirani rotacijskim isparavanjem i dodano je 95% etanola da bi se postigla konačna koncentracija etanola od 80%. Smeša je postavljena na 4 stepena tokom 24 h, zatim centrifugirana na 4000 rpm tokom 10 minuta, a supernatant je odbačen da bi se dobio precipitat. Precipitat je ponovo otopljen u vodi, dijaliziran protiv vrećice za dijalizu od 3500 Da 48 h i osušen zamrzavanjem da se dobijeCistanche polysaccharides. Four fractions were obtained by collecting retentates and permeates: >300 kDa (nazvan CTP 1), 50–300 kDa (CTP 2), 10–50 kDa (CTP 3) i<10 kDa (CTP 4).

1.2.3 Određivanje hemijskih komponenti polisaharida

1.2.3.1 Određivanje ukupnog sadržaja šećera

Za određivanje sadržaja polisaharida u uzorcima korištena je metoda fenol-sumporne kiseline [11]. Standardna kriva je pripremljena upotrebom glukoze, sa 0,1 mg/mL standardne otopine glukoze. Precizne zapremine od 0,4 mL, 0,8 mL, 1,2 mL, 1,6 mL i 2,0 mL standardnog rastvora prebačene su u epruvete sa čepom od 10 mL i dodata je voda do ukupne zapremine od 2,0 mL. Zatim je dodano 1,0 mL svježe pripremljenog 6% rastvora fenola, dobro promiješano i brzo je dodano 5,0 mL koncentrovane sumporne kiseline duž stijenke cijevi. Smeša je promućkana, zagrevana u vodenom kupatilu od 90 stepeni 15 minuta, zatim uklonjena i ohlađena na sobnu temperaturu. Koristeći destilovanu vodu kao slijepu probu, mjerena je apsorpcija na 490 nm UV-Vis spektrofotometrom. Dobivena standardna kriva bila je y=16.196x+0.0834, sa R2=0.999. Pripremljena je otopina polisaharida od 0,1 mg/mL, a apsorbancija svake frakcije polisaharida je mjerena istom metodom. Ukupan sadržaj šećera svake frakcije izračunat je zamjenom u standardnu ​​krivu.

1.2.3.2 Određivanje sadržaja proteina

Za određivanje sadržaja proteina u uzorcima korištena je metoda Coomassie Brilliant Blue [12]. Standardna kriva je pripremljena korišćenjem albumina goveđeg seruma, sa 0,1 mg/mL standardnog proteinskog rastvora. Standardni rastvor proteina je razblažen do koncentracija od 0,02, 0,03, 0,05, 0,07 i 0,09 mg/mL. Zatim je u epruvete dodano 1 mL svake koncentracije standardnog proteinskog rastvora, a zatim 5,0 mL Coomassie Brilliant Blue hromogenog reagensa i pomešano mućkanjem. Koristeći destilovanu vodu kao slijepu probu, mjerena je apsorpcija na 595 nm nakon 10 minuta reakcije. Dobivena standardna kriva bila je y=0.0034x+0.7673, sa R2=0.996.. Absorbanca svake polisaharidne frakcije je izmjerena korištenjem iste metode, a sadržaj proteina svake frakcije je izračunat zamjenom u standardnu ​​krivu.

1.2.3.3 Određivanje sadržaja uronske kiseline

Za određivanje sadržaja uronske kiseline u uzorcima korištena je metoda m-hidroksibifenila [13]. Standardna kriva je pripremljena upotrebom galakturonske kiseline, sa 0,1 mg/mL standardnog rastvora galakturonske kiseline. Standardni rastvor je razblažen do koncentracija od 0,01, 0,02, 0,03, 0,05 i 0,1 mg/mL. Zatim je 1 mL svake koncentracije standardnog rastvora dodato u epruvete, i 6 mL rastvora natrijum-tetraborata-sumporne kiseline u uslovima kupatila sa ledom i vodom, pomešano mućkanjem, zagrevano u kipućoj vodi 5 minuta, ohlađeno na sobnu temperaturu, i 0,1 mL m-hidroksibifenila je dodano, stavljeno na sobnu temperaturu i ostavljeno je mešano reagens. 30 min. Koristeći destilovanu vodu kao slijepu probu, izmjerena je apsorpcija na 525 nm. Dobivena standardna kriva bila je y=7.5339x+0.0494, sa R2=0.995. Pripremljena je otopina polisaharida od 0,1 mg/mL, a apsorbancija svake frakcije polisaharida je mjerena istom metodom. Sadržaj uronske kiseline svake frakcije izračunat je zamjenom u standardnu ​​krivu.

 

Wecistanche Munufacturer

1.2.4 Određivanje sastava monosaharida

Hromatografski uslovi: Thermo U3000 sistem tečne hromatografije, opremljen Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 kolonom (4,6 mm × 250 mm, 5 μm). Mobilna faza je bila acetonitril:fosfatni pufer (12 g/L kalijum dihidrogen fosfata, pH podešen na 6,8 sa 2 mol/L NaOH) u volumnom odnosu 17:83, uz izokratsko eluiranje. Brzina protoka je bila 0,8 mL/min, temperatura kolone je bila 30 stepeni, talasna dužina detekcije je bila 250 nm, a zapremina injekcije je bila 10 μL.

Priprema standardnog rastvora: po 5 mg ramnoze, arabinoze, galaktoze, glukoze, ksiloze, manoze, galakturonske kiseline, glukuronske kiseline, glukozamin hidrohlorida i galaktozamin hidrohlorida, i 10 mg fukoze izvagano je uzastopno, rastvoreno je i dovedeno u standardnu ​​zapreminu do 10 ml.

Priprema rastvora uzorka: 5 mg svake od četiri frakcije polisaharida je izvagano, dodano u 1 mL 2 mol/L rastvora TFA i zagrejano na 121 stepen tokom 2 h. Azot je pročišćen da se osuši rastvor. Zatim je dodato 3 mL metanola za ispiranje i rastvor je ponovo osušen; ovaj korak ispiranja metanolom je ponovljen 2-3 puta. Ostatak je otopljen u 1 mL sterilne vode i prebačen u hromatografsku bočicu radi testiranja. Zatim je 0,2 mL polisaharidnog hidrolizata dodato u začepljenu konusnu centrifugalnu epruvetu, a zatim 0,2 mL 0,5 mol/L rastvora natrijum hidroksida i 0,5 mL 0,5 mol/L rastvora metanola PMP. Smjesa je miješana i reagovala u vodenom kupatilu na 70 stepeni 1 h. Nakon reakcije, dodato je 0,2 mL 0,5 mol/L hlorovodonične kiseline da se neutrališe natrijum hidroksid, dodat je 1 mL hloroforma i mešavina je tri puta vorteksana za ekstrakciju da bi se uklonio višak PMP. Sloj hloroforma je odbačen, uzeto je 0,3 mL vodenog sloja i dodana je voda do 1 mL. Zatim je 0,2 mL svakog od 11 standarda monosaharida derivatizovano istom metodom [14-15].

1.2.5 Fourier-transformska infracrvena spektroskopija (FT-IR) analiza

Odgovarajuća količina svake od četiri frakcije polisaharida stavljena je na stepen uzorka ATR pribora infracrvenog spektrometra, a FT-IR mjerenja su izvršena korištenjem Fourier-ovog infracrvenog spektrofotometra u opsegu frekvencija od 4000–400 cm⁻¹ [16].

1.2.6 Analiza skenirajuće elektronske mikroskopije (SEM).

Morfologija četiri polisaharidne frakcije analizirana je pomoću SEM [17]. Mala količina svake frakcije polisaharida jednoliko je fiksirana na tanku bakarnu ploču, a sloj zlatnog praha je isparen na površini uzorka pomoću jonskog raspršivanja. Morfologija površine promatrana je na 5,00 kV.

1.2.7 Određivanje in vitro antioksidativne aktivnosti

1.2.7.1 Određivanje DPPH· Kapaciteta čišćenja radikala

Koncentracije četiri polisaharidne frakcije su postavljene na 1, 2, 3, 4 i 8 mg/mL, a pozitivna kontrolna grupa (Vc) je također podešena na iste koncentracije. Određivanje je izvršeno u skladu sa uputstvima DPPH· kompleta za analizu kapaciteta uklanjanja radikala.

1.2.7.2 Određivanje kapaciteta čišćenja superoksidnih anjona

Koncentracije četiri polisaharidne frakcije su postavljene na 0,5, 1, 2, 4 i 8 mg/mL, a pozitivna kontrolna grupa (Vc) je također podešena na iste koncentracije. Određivanje je izvršeno prema uputama kompleta za ispitivanje kapaciteta hvatanja superoksidnih aniona.

1.2.7.3 Određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta

Koncentracije četiri polisaharidne frakcije su postavljene na 0,5, 1, 2, 4 i 8 mg/mL, a pozitivna kontrolna grupa (Vc) je također podešena na iste koncentracije. Određivanje je izvršeno prema uputama kompleta za analizu ukupnog antioksidativnog kapaciteta.

1.2.7.4 Određivanje ABTS⁺ kapaciteta za uklanjanje radikala

Koncentracije četiri polisaharidne frakcije su postavljene na 0,5, 1, 2, 4 i 8 mg/mL, a pozitivna kontrolna grupa (Vc) je također podešena na iste koncentracije. Određivanje je izvršeno prema uputstvima ABTS kompleta za analizu kapaciteta uklanjanja radikala.

1.3 Obrada podataka

Svaki eksperiment je ponovljen tri puta pod istim uslovima, a rezultati su izraženi kao srednja vrednost ± standardna devijacija. Za analizu značajnosti korišćen je softver SPSS 21.0, sa jednosmernom ANOVA za analizu jednog faktora; P < 0,05 se smatra statistički značajnim. Za crtanje korišćeni su Origin 2024 i GraphPad Prism 10.1.2.

 

Visokokvalitetne sirovine

Reference

[1] Državna farmakopejska komisija.Farmakopeja Narodne Republike Kine, tom I[M]. Peking: China Pharmaceutical Technology Press, 2020.

[2] GUO Y, CAO L, ZHAO Q, et al. Preliminarne karakteristike, antioksidativna i hepatoprotektivna aktivnost polisaharida izCistanche deserticola [J]. Međunarodni časopis za biološke makromolekule, 2016, 93: 678-685.

[3] ZHANG XY, JIANG QW, YANG SH, et al. Hemometrijska analiza i integrirani farmakološki pristup za dešifriranje efekta i mehanizama između sirovog i prerađenogCistanche tubulosa [J]. Časopis za etnofarmakologiju, 2024, 328.

[4] CHENG N, WANG H, HAO H, et al. Napredak istraživanja polisaharidnih komponentiCistanche deserticolakao potencijalni farmaceutski agensi [J].Evropski časopis za medicinsku hemiju, 2023, 245.

[5] TAO J, ZHONG X, LIN H, et al. Potencijal, izazovi i izgledi polisaharida iz rodaCistanchekao terapeutski agensi za bolesti povezane sa starenjem: Pregled [J].Međunarodni časopis za biološke makromolekule, 2025, 312.

[6] ZHOU S, FENG D, ZHOU Y, et al. Analiza aktivnih sastojaka i zdravstvene primjeneCistanche [J]. Granice u ishrani, 2023, 10.

[7] ZHANG X, LIU Z, LI Z, et al. Putevi feroptoze: otkrivanje neuroprotektivne moćiCistanche deserticolafeniletanoidni glikozidi [J].Časopis za etnofarmakologiju, 2024, 333.

[8] CAI M, XING H, TIAN B, et al. Karakteristike i aktivnost protiv umora gradiranih polisaharida izGanoderma lucidumodvojeno kaskadnom membranskom tehnologijom [J].Ugljikohidratni polimeri, 2021, 269: 118329.

[9] TANG W, LIU C, LIU J, et al. Prečišćavanje polisaharida izLentinus edodesvodeni ekstrakt membranskom separacijom i njegov hemijski sastav i karakterizacija strukture [J].Food Hydrocolloids, 2020, 105.

[10] Ainur Memetiturxun, GAO L, HUO SX, et al. Optimizacija procesa centrifugalne ekstrakcije za verbaskozid korištenjem Box-Behnkenove površinske metodologije [J].Kineski časopis moderne primijenjene farmacije, 2022, 39(23): 3086-3091.

[11] JIN W, ZHOU H, ZHAO H, et al. Izolacija, in vitro antioksidativni kapacitet, hipoglikemijska aktivnost i evaluacija imunoaktivnosti polisaharida izCoriandrum sativumL [J/OL].Antioksidansi, 2025, 14(2): 149. https://doi.org/10.3390/antiox14020149

[12] SPLITTGERBER AG, SOHL J. Nelinearnost u proteinskim testovima Coomassie blue dye-binding metodom [J].Analytical Biochemistry, 1989, 179(1): 198-201.

[13] CAI M, XING HY, XU J, et al. Postepeno odvajanje odGanoderma lucidumSirovi polisaharidi korištenjem membranske tehnologije i poređenje njihovih antioksidativnih aktivnosti [J].Nauka i tehnologija prehrambene industrije, 2021, 42(10): 29-35.

[14] GUO Y, WANG L, LIU K, et al. Brza i tačna UHPLC metoda za određivanje monosaharida u polisaharidima iz različitih izvoraRadix Astragalii analiza njegove imunološke aktivnosti [J/OL].Molekule, 2024, 29(10): 2287. https://doi.org/10.3390/molecules29102287

[15] DU C, LIU X, ALGADI H, et al. Optimizacija ekstrakcije polisaharida, sastav monosaharida i analiza antioksidativne aktivnosti različitih vrstaGastrodia elataBl. vazdušni delovi [J].Pretvorba biomase i biorafinerija, 2023, 14(23): 29353-29365.[16] HONG T, YIN JY, NIE SP, et al. Primjena infracrvene spektroskopije u strukturnoj analizi polisaharida: napredak, izazov i perspektiva [J].Hemija hrane: X, 2021, 12.[17] ZHOU S, HUANG G. Ekstrakcija, karakterizacija strukture i biološka aktivnost polisaharida iz kokosove kore [J].Hemijske i biološke tehnologije u poljoprivredi, 2023, 10(1).