Ekstrakcija, fizikalno-hemijska svojstva, anti-starenje i antioksidativna aktivnost polisaharida iz ostataka industrijske konoplje, 2. dio

2.8. Studija aktivnosti protiv starenja

2.8.1. Cell Viability

In vitro, eksperimenti citotoksičnosti se često koriste za procjenu toksičnosti testiranih uzoraka [37]. Efekti IHRP-a na vitalnost ćelija HDF-a i HEK-a, koji su bile najčešće korišćene epidermalne ćelijske linije, prikazani su na slici 5. IHRP-ovi gotovo da nisu imali citotoksičnost za HDF i HEK. Nadalje, IHRP bi mogli promovirati proliferaciju stanica između 100 i 800 µg/mL. Kako bismo osigurali da koncentracija uzorka ne utječe na vitalnost stanica, odabrali smo IHRP koncentracije ispod 400 µg/mL za sljedeće eksperimente.

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i može ukloniti reaktivne vrste kisika, spriječiti degradaciju kolagena izazvanu slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Cistanches Herba za antioksidanse

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

2.8.2. Scratch Assay HDF ćelija

Scratch test je in vitro metoda koja se široko koristi za procjenu doprinosa ćelijskih i molekularnih mehanizama ćelijskoj proliferaciji i migraciji [38]. Slike stanja zarastanja HDF ogrebotina prikazane su na slici 6. IHRP različitih koncentracija su svi bili korisni za zarastanje ogrebotina ćelija u poređenju sa kontrolom. Štaviše, kada je koncentracija IHRP-a bila između 50 i 200 µg/mL, IHRP bi mogli značajno promovirati zacjeljivanje ogrebotina na ćelijama. Stopa zarastanja HDF ogrebotina nakon 24 h bila je 64,51 ± 3,69 posto (p < 0.01), 58,03 ± 3,90 posto (p < 0,05) i 66,21 ± 6,60 posto (p < 0,01) RPIH respektivno koncentracija je bila 50, 100 i 200 µg/mL, kao što je prikazano u Tabeli 6. Osim toga, iscjeljujući učinak IHRP-a bio je vrlo blizu onom pozitivne kontrole TGF- (62,29 ± 4,69 posto, p < 0,01). Rezultati analize ogrebotina pokazali su da IHRP mogu ubrzati zacjeljivanje ćelijskih ogrebotina i promovirati ćelijsku proliferaciju.

2.8.3. qRT-PCR analiza ekspresije HDF gena

Provedeno je nekoliko studija kako bi se procijenio potencijal različitih biljaka protiv starenja [39,40]. Relativna kvantifikacija gena protiv starenja HDF-a prikazana je na slici 7. Kao što je prikazano na slici, TGF-, Vc i HA su korišteni kao pozitivna kontrola. Redoslijed relativne kvantifikacije AQP-3 bio je HA > TGF- > IHRPs > Vc. Redoslijed relativne kvantifikacije COL1A1 bio je TGF- > Vc > HA > IHRPs. Redoslijed relativne kvantifikacije COL3A1 bio je Vc > TGF- > HA > IHRPs. Redoslijed relativne kvantifikacije ELASTINA bio je TGF- > Vc > HA > IHRPs. Redoslijed relativne kvantifikacije MMP-1 bio je IHRPs > HA > Vc > TGF-. Stoga, u poređenju sa pozitivnom kontrolom, IHRP gotovo da nisu imali pozitivan efekat na ekspresiju AQP-3, COL1A1, COL3A1 i ELASTINA. Međutim, IHRP-ovi su značajno promovirali ekspresiju MMP-1. MMP-1 prvenstveno stvaraju keratinociti i uglavnom se koristi za razgradnju i fragmentaciju kolagenih vlakana kože [41]. Ukratko, IHRP bi mogli promovirati proliferaciju HDF-a i ekspresiju gena povezanih sa starenjem, što ukazuje na potencijal IHRP-a protiv starenja i obnavljanja kože.

3. Materijali i metode

3.1. Materijali i reagensi

IHR je obezbijedila Yunnan Hempmon Pharmaceuticals Co., Ltd. (Kunming, Kina). Fenol, -naftol, sumpornu kiselinu, karbazol, Coomassie blue G-250, fosfornu kiselinu, etanol, hloroform i kontrolu monosaharida isporučio je Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Šangaj, Kina). Galakturonska kiselina, glukuronska kiselina, guluronska kiselina i arbutin kupljeni su od Sigma-Aldrich Co., Ltd. (St. Louis, MO, SAD). Ljudski dermalni fibroblast (HDF), humani epidermalni keratinociti (HEK) i kompletan ćelijski medij kupljeni su od Sciencell Co., Ltd. (Carlsbad, Kalifornija, SAD). 12-ploče za jažice i 96-ploče za jažice ponudio je Corning Co., Ltd. (Corning, NY, SAD). Komplet za ispitivanje vitalnosti ćelija CCK-8 kupljen je od DOJINDO Biology Co., Ltd. (Tokio, Japan), a druge komplete za detekciju nudi Takara Co., Ltd. (Takara, Japan).

3.2. Optimizacija ekstrakcije IHRPs

3.2.1. Poređenje različitih metoda ekstrakcije

Perkolaciona ekstrakcija: 100 g IHR je dodato u 2000 mL dejonizovane vode. Ekstrakcija je izvedena sa protokom od 150 ± 50 mL/h nakon 2 h. Ekstrakcija zagrijavanjem: 100 g IHR je dodano u 2000 mL dejonizirane vode. Ekstrakcija je izvedena na 98 ◦C tokom 1 h i proces je ponovljen dva puta. Ekstrakcija uz pomoć ultrazvuka: 100 g IHR je rastvoreno u 2000 mL dejonizovane vode. Ekstrakcija je izvedena 0,5 h na 60 ◦C i proces je ponovljen dva puta.

Filtrati su koncentrirani pomoću vakuumskog rotacionog isparivača. Zatim je rastvor osušen u vakuum sušari. Sadržaj polisaharida je određen kako bi se odabrala odgovarajuća metoda.

3.2.2. Eksperimenti sa jednim faktorom

Za ekstrakciju IHRP-a, 100 g IHR je dodan određenoj količini dejonizovane vode. Temperatura ekstrakcije (40, 60, 80 i 98 ± 2 ◦C), odnos čvrsta i tečnost (1:6, 1:8, 1:10 i 1:15), vreme ekstrakcije (0,5, 1,0, 1,5 i 2 h), pH (3, 5, 7, 9 i 11) i nekoliko uzastopnih ekstrakcija (1, 2, 3, 4) proučavani su odvojeno kako bi se procijenio utjecaj pojedinačnih faktora na ekstrakciju IHRPs.

3.2.3. Ortogonalni eksperimentalni dizajn

Uslovi ekstrakcije su dodatno optimizovani ortogonalnim eksperimentalnim dizajnom. Kao što je prikazano u tabeli 7, četiri odabrane varijable bile su temperatura ekstrakcije (60, 80 i 98 ± 2 ◦C), RS/L (1:6, 1:8 i 1:10), broj uzastopnih ekstrakcija (1 , 2 i 3) i pH (4, 7 i 10). Ortogonalni eksperimenti su podijeljeni u 9 grupa. Težina polisaharida je smatrana kao cilj za procjenu uslova ekstrakcije.

3.3. Screen of IHRPs Alcohol Precipitation Conditions

Rastvor za ekstrakciju je dobijen u optimalnom stanju prema 3.2 i dodano je 400 mL etanola. Eksperimenti su sprovedeni na osnovu različitih brzina dodavanja alkohola, metode mešanja i brzine hlađenja u tabeli 8. Talog je dobijen nakon centrifugiranja i sušenja. Zatim su dobiveni težina i sadržaj polisaharida kako bi se odredili pogodni uslovi taloženja alkohola.

3.4. Određivanje prinosa polisaharida i hemijskog sastava IHRP

Sadržaj proteina je izračunat na osnovu Bradfordove metode, a kao standard je korišten goveđi serum albumin (BSA) [42]. Ukupni sadržaj šećera u IHRP dobijen je fenol-sulfatnom metodom, a kao standard je korištena glukoza [43]. Sadržaj uronske kiseline dobijen je metodom karbazol-sumporna kiselina [44]. Prinos polisaharida je dobiven pomoću jednačine (1).

gdje se YP odnosi na prinos polisaharida, mA se odnosi na težinu IHRP-a, a mB predstavlja težinu IHR-a koji se koristi za ekstrakciju polisaharida.

3.5. Pročišćavanje IHRP-a

Prvo je pripremljeno 100 g sirovog IHRP-a prema optimalnim uvjetima određenim u odjeljcima 3.2 i 3.3. Sirovi IHRP su dalje pročišćeni različitim metodama.

Adsorpcija aktivnog ugljena: 10 g sirovog IHRP-a je dodano u 200 mL dejonizovane vode. Aktivni ugljen od 1 posto, 2 posto, 4 posto i 8 posto težine IHRPs pomiješan je s otopinom, respektivno. Zatim je rastvor mešan na 60 ◦C 1 h i filtriran. Nakon ispiranja dejoniziranom vodom, filtrat je koncentriran i osušen.

Membranska filtracija: 10 g sirovog IHRP-a dodano je u 500 mL dejonizirane vode. Nakon toga, otopina je kontinuirano filtrirana membranama različitih molekulskih težina (30,000 Da, 10,000 Da, 1000 Da i 500 Da). Filtrat i retentat su sakupljeni i osušeni. Konačno, dobijeni su IHRP-ovi različite molekularne težine.

Savage metoda: 1 g sirovog IHRP-a je dodan u 100 mL dejonizirane vode. Zatim je rastvor pomiješan sa Sevage reagensom (n-butanol: hloroform=1: 5 (v/v)). Smjesa je miješana 15 min i prebačena u lijevak za odvajanje radi stratifikacije. Gore navedeni postupak je ponovljen 5 puta. Nakon toga, organska i vodena faza su osušene.

Kromatografija na koloni: 10 g slabo bazične anjonske izmjenjivačke smole potopljeno je u dejoniziranu vodu na 2 h, a zatim stavljeno u staklenu kolonu (2 × 30 cm). 10 g sirovog IHRP-a dodano je u 200 mL dejonizirane vode. Nakon toga, otopina je polako propuštena kroz sloj smole. Kolona je isprana sa 100 mL 30% etanola. Eluent je koncentrisan i osušen.

3.6. Analiza sastava monosaharida

Ispitivanje sastava monosaharida izvedeno je prema prethodnoj metodi uz neznatne modifikacije [45]; 5 mg IHRP je hidrolizovano sa 1 mL trifluorosirćetne kiseline (TFA, 2 M) tokom 6 h na 105 ◦C. Nakon toga, rastvor je osušen u atmosferi azota. Osušeni hidrolizat je dodat u 5 mL dejonizovane vode nakon što je TFA uklonjen metanolom. Nakon toga, 0.5 mL 0.3 M rastvora NaOH i 1 mL 0.5 M 1-fenil-3-metil-5- hidrolizatu je dodan rastvor metanola pirazolona (PMP). Dobijeni rastvor je držan u vodenom kupatilu 2 h na 70 ◦C radi derivatizacije. Zatim je za neutralizaciju dodan 0.5 mL rastvora HCl (0.3 M). Rastvor je pomešan sa 1 mL hloroforma za HPLC analizu. Nekoliko monosaharida je korišteno kao reference. Uslovi hromatografije: Mobilna faza A (82 procenta): 0,1 M rastvor KH2PO4. Mobilna faza B (18 posto): acetonitril. Kolona: C18 (5 µm, 4,6 × 250 mm). Zapremina injekcije: 10 µL. Brzina protoka: 1,0 mL/min. Talasna dužina detekcije: 245 nm. Temperatura kolone: ​​30 ◦C.

3.7. Infracrvena spektroskopija Fourierove transformacije (FT-IR)

Uzorci za FT-IR analizu pripremljeni su miješanjem 5 mg IHRP sa 125 mg KBr. FT-IR spektri uzoraka dobijeni su između 4000 i 500 cm−1.

3.8. Studija antioksidativne aktivnosti

3.8.1. DPPH Radical Scavenging Activity

DPPH aktivnost uklanjanja slobodnih radikala IHRP-a procijenjena je na osnovu objavljene metode sa nekoliko modifikacija [46]. Ukratko, 2 mL otopine uzorka (0.2, 0.4, 0.6, 0.8 i 1.0 mg/ mL) je pomiješan sa 2 mL otopine DPPH (0.1 mM). Smjesa je držana 30 minuta u mraku, a zatim je dobivena apsorpcija (Abs) na 517 nm. Brzina uklanjanja DPPH procijenjena je sljedećom jednačinom (jednačina (2)) i izbrojana je efektivna koncentracija od 50 posto (EC50).

gdje RSD predstavlja brzinu uklanjanja slobodnih radikala, Ai se odnosi na Abs reakcionog sistema (DPPH sa uzorkom), Aj je Abs pozadine uzorka (rastvarač sa uzorkom), a A0 je Abs negativne kontrole (DPPH sa rastvaračem).

3.8.2. ABTS Radical Scavenging Activity

Aktivnost uklanjanja ABTS IHRP-a procijenjena je na osnovu prethodne metode [47]. Ukratko, rastvor kalijum persulfata (2,45 mM) mešan je sa rastvorom ABTS (7 mM) u mraku 12 h. Dobijena ABTS otopina je razrijeđena 50 puta do Abs od 0.70 ± 0.02 na 734 nm. Zatim je 1 mL rastvora uzorka (0.2, 0.4, 0.6, 0.8 i 1.0 mg/mL) dodan u 4 mL ABTS rastvora. Smjesa je brzo mućkana 1 min i stavljena u mrak na 6 min. Zatim je izmjeren Abs na 734 nm i Vc je korišten kao pozitivna kontrola. Brzina čišćenja ABTS-a izračunata je pomoću jednačine (2).

3.9. Studija aktivnosti protiv starenja

3.9.1. Cell Culture

Ljudski dermalni fibroblast (HDF) i humani epidermalni keratinociti (HEK) su kupljeni od ScienCell Co., Ltd. Ćelije su kultivisane sa DMEM medijumom koji sadrži 10 procenata FBS. Uslovi kulture bili su 37 ◦C sa 5 posto CO2.

3.9.2. Cell Viability

Provedena je analiza kompleta za brojanje ćelija-8 (CCK-8) da bi se odredila citotoksičnost IHRP-a na HDF i HEK ćelije. Ćelije su kultivisane u 96-pločama sa koncentracijom od 2 × 104 ćelija/jažici tokom 48 h. Nakon toga je dodano 100 µL svježe podloge koja sadrži uzorke i jažice su inkubirane 24 h. Zatim je rastvor CCK-8 dodat u jažice prema uputstvu test kitova i ploča je inkubirana 2 h. Abs na 450 nm je dobijen za izračunavanje vitalnosti ćelije.

3.9.3. Scratch Assay

HDF je kultivisan na 37 ◦C sa 5 procenata CO2. Zatim su ćelije posađene u ploču sa 12-jažicom u koncentraciji od 1 × 105 ćelija/jažici. Nakon inkubacije od 48 sati, iglom šprica nastala je ogrebotina na ćelijskom sloju HDF-a. Ćelijski fragmenti su očišćeni PBS-om i dodani su uzorci različitih koncentracija. Nakon toga, zacjeljivanje ogrebotina ćelijskog sloja je uočeno nakon 24 h kako bi se procijenio učinak IHRP-a na proliferaciju HDF-a. Dobijene slike su kvantificirane pomoću softvera Image J [48]. Transformirajući faktor rasta (TGF-) je korišten kao pozitivna kontrola. Brzina izlječenja je izračunata prema jednačini (3).

gdje A1 predstavlja početno područje ogrebotine, a A2 se odnosi na završno područje ogrebotine.

3.9.4. Kvantitativna RT-PCR (qRT-PCR) analiza

Zatim su ćelije zasijane u 12-ploče sa koncentracijom od 1 × 105 ćelija/jažici. Nakon inkubacije od 48 h, uzorci su pomiješani i kultivirani još 24 h. Ekstrahirana je ukupna RNK i sintetizirana je cDNK. qRT-PCR analize za gen za akvaporin (AQP-3), gen za kolagen (COL1A1 i COL3A1), gen elastin (ELASTIN) i matriks metaloproteinazu (MMP-1) obavljene su koristeći real-time PCR sistem (Applied Biosystems Life Technologies, Inc., ABI StepOnePlus). Relativna kvantifikacija je provedena komparativnom CT metodom (2-∆∆Ct metoda). Kao pozitivna kontrola korišćeni su hijaluronska kiselina (HA), Vc i TGF-.

3.10. Statistička analiza

Rezultati su prikazani kao srednja vrijednost ± SD (n {{0}}). Statistička značajnost izvršena je ANOVA. Vrijednosti p < 0,05 smatrane su statistički značajnim.

4. Zaključak

U ovom radu je ekstrakcija polisaharida iz IHR optimizirana jednofaktorskim eksperimentima i ortogonalnim eksperimentalnim dizajnom. Optimalni uslovi zagrevanja ekstrakcije bili su temperatura ekstrakcije 98 ◦C, odnos čvrsta i tečnost od 1:10, vreme ekstrakcije 1 h, broj uzastopnih ekstrakcija 2 i pH 4. Odnos ekstrakcije i Sadržaj polisaharida bio je 2{{40}},12 posto i 12,35 posto u ovim uslovima. Dodatno, odgovarajući uslovi taloženja alkohola bili su pumpanje sa 2 L/h, neprekidno mešanje, i kupatilo sa ledom i vodom 4 h. Sirovi IHRP su dalje pročišćeni hromatografijom na koloni, a sadržaj polisaharida/proteina u pročišćenim IHRP bio je 34,44 posto i 1,61 posto. Sastav monosaharida IHRP je bio: fukoza (1,33 posto), arabinoza (19,60 posto), ramnoza (10,41 posto), galaktoza (20,87 posto), glukoza (27,42 posto), ksiloza (4,23 posto), riboza (3,12 posto), galacturo postotak (3,12 posto). kiselina (6,22 posto), guluronska kiselina (0,28 posto) i glukuronska kiselina (2,37 posto). FT-IR je pokazao polisaharidni skelet IHRP-a. Osim toga, vrijednosti EC50 ABTS i DPPH radikala bile su 0,34 i 0,47 mg/mL, što pokazuje veliku antioksidativnu aktivnost IHRP. IHRP bi također mogli promovirati ćelijsku proliferaciju HDF-a i HEK-a i zacjeljivanje ćelijskih ogrebotina. Štaviše, IHRP bi mogli značajno promovirati ekspresiju MMP-1. Stoga se vjeruje da bi se polisaharidi iz ostataka industrijske konoplje mogli razviti kao potencijalni antioksidansi i proizvodi protiv starenja za kozmetiku ili funkcionalnu hranu.

Doprinosi autora:TC, QZ i BZ su osmislili eksperimente. TC i HL (Hang Li) su izveli eksperimente i napisali početni nacrt. TC, HL (Hang Li), HL (Hongning Lv), XL i ML analizirali su podatke. MT, SH, QZ i BZ revidirali su rukopis. Svi autori su pročitali i pristali na objavljenu verziju rukopisa.

Finansiranje: Ovo istraživanje je finansirao Yunnan Hempmon Pharmaceuticals Co., Ltd.

Izjava institucionalnog odbora za reviziju:Nije primjenjivo.

Izjava o informiranom pristanku:Nije primjenjivo.

Izjava o dostupnosti podataka:Nije primjenjivo.

Sukobi interesa:Autori su izjavili da nema sukoba interesa.

Dostupnost uzorka:Uzorci jedinjenja IHR i IHRPs su dostupni od autora.

Reference

1. Kumar, P.; Mahato, DK; Kamle, M.; Borah, R.; Sharma, B.; Pandhi, S.; Tripathi, V.; Yadav, HS; Devi, S.; Patil, U. Farmakološka svojstva, terapeutski potencijal i pravni status Cannabis sativa L.: Pregled. Phytother. Res. 2021, 35, 6010–6029. [CrossRef] [PubMed]

2. Shoyama, Y.; Yagi, M.; Nishioka, I.; Yamauchi, T. Biosinteza kanabinoidnih kiselina. Phytochemistry 1975, 14, 2189–2192. [CrossRef]

3. De Meijer, ED; Van der Kamp, H.; Van Eeuwijk, F. Karakterizacija pristupa kanabisa o sadržaju kanabinoida o drugim biljnim karakterima. Euphytica 1992, 62, 187–200. [CrossRef]

4. Luca, SV; Roehrer, S.; Kleigrewe, K.; Minčeva, M. Pristup simultanoj izolaciji kanabidiola i uklanjanju pesticida iz ekstrakta konoplje tečno-tečnom hromatografijom. Ind. Crop. Prod. 2020, 155, 112726. [CrossRef]

5. Bonini, SA; Premoli, M.; Tambaro, S.; Kumar, A.; Maccarinelli, G.; Memo, M.; Mastinu, A. Cannabis sativa: Sveobuhvatan etnofarmakološki pregled ljekovite biljke s dugom istorijom. J. Ethnopharmacol. 2018, 227, 300–315. [CrossRef] [PubMed]

6. Hartsel, JA; Eades, J.; Hickory, B.; Makriyannis, A. Cannabis sativa i konoplja. In Nutraceuticals; Gupta, RC, ur.; Academic Press: Boston, MA, SAD, 2016; Poglavlje 53; str. 735–754.

7. Palmieri, S.; Mascini, M.; Oliva, E.; Viteritti, E.; Eugelio, F.; Fanti, F.; Compagnone, D.; Sergi, M. Profil kanabinoida u Cannabis sativa L. Uzorci pomoću LC-MRM/IDA/EPI analize: Novi pristup klasifikaciji sorti. J. Agric. Food Chem. 2022, 70, 3907–3916. [CrossRef]

8. Atalay, S.; Jarocka-Karpowicz, I.; Skrzydlewska, E. Antioksidativna i antiinflamatorna svojstva kanabidiola. Antioksidansi 2020, 9, 21. [CrossRef]

9. Small, E. Evolucija i klasifikacija Cannabis sativa (marihuana, konoplja) o ljudskoj upotrebi. Bot. Rev. 2015, 81, 189–294. [CrossRef]

10. Mazzara, E.; Carletti, R.; Petrelli, R.; Mustafa, AM; Caprioli, G.; Fiorini, D.; Scortichini, S.; Dall'Acqua, S.; Sut, S.; Nunez, S.; et al. Zelena ekstrakcija konoplje (Cannabis sativa L.) korištenjem mikrovalne metode za oporavak tri vrijedne frakcije (esencijalno ulje, fenolna jedinjenja i kanabinoidi): Centralna studija optimizacije kompozitnog dizajna. J. Sci. Food Agric. 2022, u štampi. [CrossRef]

11. Tan, MH; Chang, SL; Liu, JN; Li, H.; Xu, PW; Wang, PD; Wang, XD; Zhao, MX; Zhao, B.; Wang, LW; et al. Fizičko-hemijska svojstva, antioksidativna i antidijabetička aktivnost polisaharida iz sjemena kvinoje (Chenopodium quinoa Willd.). Molecules 2020, 25, 3840. [CrossRef]

12. Zhai, FG; Liang, QC; Wu, YY; Liu, JQ; Liu, JW Polisaharid crvenog ginsenga ispoljava antikancerogeno djelovanje kroz feroptozu izazvanu smanjenjem regulacije GPX4. Pharm. Biol. 2022, 60, 909–914. [CrossRef]

13. Zhou, X.; Afzal, S.; Wohlmuth, H.; Munch, G.; Leach, D.; Low, M.; Li, CG Sinergističko protuupalno djelovanje ekstrakta đumbira i kurkume u inhibiciji lipopolisaharida i interferonom-gama-induciranih proinflamatornih medijatora. Molecules 2022, 27, 3877. [CrossRef] [PubMed]

14. Zou, YF; Li, CY; Fu, YP; Jiang, QX; Peng, X.; Li, LX; Song, X.; Zhao, XH; Li, YP; Chen, XF; et al. Usporedba preliminarne strukture i crijevne protuupalne i antioksidativne aktivnosti polisaharida iz različitih dijelova korijena Angelica sinensis (Oliv.) Diels. J. Ethnopharmacol. 2022, 295, 115446. [CrossRef] [PubMed]

15. Huang, Z.; Zong, MH; Lou, WY Priprema, razjašnjavanje strukture i imunomodulatorna aktivnost polisaharida iz Millettia speciosa Champ. Ind. Crop. Prod. 2022, 182, 114889. [CrossRef]

16. Cao, WY; Wang, CX; Mayhesumu, X.; Pan, L.; Dang, Y.; Yili, A.; Abuduwaili, A.; Mansur, S. Izolacija, razjašnjavanje strukture, antioksidativna i hipoglikemijska aktivnost polisaharida Brassica rapa L. Molecules 2022, 27, 3002. [CrossRef] [PubMed]

17. Panggabean, JA; Adiguna, SP; Rahmawati, SI; Ahmadi, P.; Zainuddin, EN; Bayu, A.; Putra, MY Antivirusno djelovanje sulfatnih polisaharida na bazi algi. Molecules 2022, 27, 1178. [CrossRef]

18. Baeva, E.; Blaha, R.; Lavrova, E.; Sushytskyi, L.; Copikova, J.; Jablonsky, I.; Kloucek, P.; Synytsya, A. Polysaccharides from Basidiocarps of Cultivating Mushroom Pleurotus ostreatus: Isolation and Structural Characterization. Molecules 2019, 24, 2740. [CrossRef]

19. Xu, JQ; Zhang, JL; Sang, YM; Wei, YN; Chen, XY; Wang, YX; Xue, HK Polisaharidi iz medicine i materijala za homologiju hrane: Pregled njihove ekstrakcije, pročišćavanja, strukture i bioloških aktivnosti. Molecules 2022, 27, 3215. [CrossRef]

20. Haustveit, G.; Wold, JK Neki ugljikohidrati male molekularne težine prisutni u Cannabis sativa L. Carbohydr. Res. 1973, 29, 325–329. [CrossRef]

21. Hillestad, A.; Wold, JK; Paulsen, BS Strukturne studije vodotopivih glikoproteina iz Cannabis sativa L. Carbohydr. Res. 1977, 57, 135–144. [CrossRef]

22. Groce, JW; Jones, LA Sadržaj ugljikohidrata i ciklitola u kanabisu. J. Agric. Food Chem. 1973, 21, 211–214. [PubMed]

23. Wen, Z.-S.; Xue, R.; Du, M.; Tang, Z.; Xiang, X.-W.; Zheng, B.; Qu, Y.-L. Polisaharidi sjemena konoplje štite epitelne stanice crijeva od oksidativnog stresa izazvanog vodikovim peroksidom. Int. J. Biol. Macromol. 2019, 135, 203–211. [PubMed]

24. Bao-yao, BY-gW; Jie, TJ-wL Ekstrakcijska izolacija i pročišćavanje polisaharida topivih u vodi iz sjemena konoplje. Food Sci. Technol. 2004, 6, 157–161.

25. Guo, L.; Kong, N.; Zhang, X.; Ma, H. Multimode ultrazvučna ekstrakcija polisaharida iz make (Lepidium meyenii): Optimizacija, pročišćavanje i in vitro imunoregulatorna aktivnost. Ultrason. Sonochem. 2022, 88, 106062. [CrossRef]

26. Chi, YZ; Li, YP; Zhang, GL; Gao, YQ; Ye, H.; Gao, J.; Wang, P. Utjecaj tehnika ekstrakcije na svojstva polisaharida iz Enteromorpha prolifera i njihova primjena u heliranju željeza. Ugljikohidrati. Polym. 2018, 181, 616–623. [CrossRef] [PubMed]

27. Shi, MJ; Wei, X.; Xu, J.; Chen, BJ; Zhao, DY; Cui, S.; Zhou, T. Karboksimetilirani degradirani polisaharidi iz Enteromorpha prolifera: Priprema i in vitro antioksidativna aktivnost. Food Chem. 2017, 215, 76–83.

28. Ren, CJ; Zhang, Y.; Cui, WZ; Lu, GB; Wang, YW; Gao, HJ; Huang, L.; Mu, ZM Polisaharidni ekstrakt lista duda poboljšava metabolizam glukoze u jetri i signalizaciju inzulina kod štakora s dijabetesom tipa 2 izazvan dijetom s visokim udjelom masti i streptozotocinom. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 951–959.

29. Wu, JW; Li, P.; Tao, DB; Zhao, HT; Sun, RY; Ma, FM; Zhang, BQ Utjecaj procesa otopine plazme s vodikovim peroksidom na degradaciju i antioksidativno djelovanje polisaharida iz Auricularia auricula. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 117, 1299–1304.

30. Fan, SH; Li, JN; Bai, BQ Purification, strukturno razjašnjavanje i aktivnost polisaharida iz sjemena kvinoje (Chenopodium quinoa Willd.) za jačanje imuniteta in vivo. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2019, 83, 2334–2344.

31. Sun, YJ; Hou, ST; Song, S.; Zhang, B.; Ai, CQ; Chen, XF; Liu, N. Utjecaj kisele, vodene i alkalne ekstrakcije na strukturne karakteristike, antioksidativna aktivnost polisaharida Laminaria japonica. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 112, 985–995.

32. Patel, MK; Tanna, B.; Mishra, A.; Jha, B. Fizičkohemijska karakterizacija, antioksidativna i antiproliferativna aktivnost polisaharida ekstrahovanog iz listova psilijuma (P. ovata). Int. J. Biol. Macromol. 2018, 118, 976–987. [PubMed]

33. Palmieri, S.; Fanti, F.; Oliva, E.; Viteritti, E.; Sergi, M.; Pepe, A.; Compagnone, D. Hemijska karakterizacija i procjena antioksidativne aktivnosti različitih sorti Cannabis sativa L. iz regije Abruzzo. Nat. Prod. Res. 2022, 1–5. [CrossRef] [PubMed]

34. Li, H.; Zhao, Q.-S.; Chang, S.-L.; Chang, T.-R.; Tan, M.-H.; Zhao, B. Razvoj kanabidiol ulja punog spektra/2,6-di-Ometil- -ciklodekstrina inkluzijskog kompleksa sa poboljšanom rastvorljivošću u vodi, bioaktivnošću i termičkom stabilnošću. J. Mol. Liq. 2022, 347, 118318.

35. Chen, L.; Yang, W.; Gao, C.; Liao, X.; Yang, J.; Yang, B. Kompleksi kanabidiola posredovani premoštenim dimerima ciklodekstrina sa visokom solubilizacijom, in vitro antioksidativnom aktivnošću i citotoksičnošću. J. Mol. Liq. 2022, 345, 117017.

36. Russo, C.; Lavorgna, M.; Nugnes, R.; Orlo, E.; Isidori, M. Komparativna procjena antimikrobnih, antiradikalnih i citotoksičnih aktivnosti kanabidiola i njegovog propil analoga kanabidivarina. Sci. Rep. 2021, 11, 22494.

37. Khatun, B.; Baishya, P.; Ramteke, A.; Maji, TK Studija kompleksiranja strukturno modificiranog kurkumina sa hidroksipropil beta-ciklodekstrinom i njegovog efekta na antikancerogeno djelovanje. New J. Chem. 2020, 44, 4887–4897.

38. Bobadilla, AVP; Arevalo, J.; Sarro, E.; Byrne, HM; Maini, PK; Carraro, T.; Balocco, S.; Meseguer, A.; Alarcon, T. Metoda kvantifikacije migracije ćelija in vitro za testove grebanja. JR Soc. Interfejs 2019, 16, 20180709. [CrossRef]

39. Salem, MA; Radwan, RA; Mostafa, ES; Alseekh, S.; Fernie, AR; Ezzat, SM Upotreba neciljanog metabolomskog pristupa zasnovanog na UPLC/MS za procjenu antioksidativnog kapaciteta i potencijala odabranih biljaka protiv starenja. RSC Adv. 2020, 10, 31511–31524.

40. Campa, M.; Baron, E. Efekti odabranih biljaka protiv starenja: naučni dokazi i trenutni trendovi. Kozmetika 2018, 5, 54.

41. Freitas-Rodriguez, S.; Folgueras, AR; Lopez-Otin, C. Uloga matriksnih metaloproteinaza u starenju: remodeliranje tkiva i dalje. Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Res. 2017, 1864, 2015–2025.

42. Bradford, MM Brza i osjetljiva metoda za kvantitaciju mikrogramskih količina proteina korištenjem principa vezivanja ProteinDye. Anal. Biochem. 1976, 72, 248–254. [PubMed]

43. Dubois, M.; Gilles, KA; Hamilton, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetrijska metoda za određivanje šećera i srodnih supstanci. Anal. Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

44. Bitter, T.; Muir, HM A modificirana reakcija karbazola uronske kiseline. Anal. Biochem. 1962, 4, 330–334. [CrossRef]

45. Dai, J.; Wu, Y.; Chen, SW; Zhu, S.; Yin, HP; Wang, M.; Tang, JA Određivanje sastava šećera polisaharida iz Dunaliella salina modificiranom RP-HPLC metodom pre-kolone derivatizacije sa 1-fenil-3-metil-5-pirazolonom. Ugljikohidrati. Polym. 2010, 82, 629–635.

46. ​​Gao, J.; Zhang, T.; Jin, ZY; Xu, XM; Wang, JH; Zha, XQ; Chen, HQ Strukturna karakterizacija, fizičko-hemijska svojstva i antioksidativna aktivnost polisaharida iz Lilium lancifolium Thunb. Food Chem. 2015, 169, 430–438.

47. Xiao, H.; Fu, X.; Cao, C.; Li, C.; Chen, C.; Huang, Q. Sulfatna modifikacija, karakterizacija, antioksidativna i hipoglikemijska aktivnost polisaharida iz Sargassum pallidum. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 121, 407–414.

48. Allaw, M.; Manconi, M.; Aroffu, M.; Marongiu, F.; Porcedu, M.; Bacchetta, G.; Usach, I.; Rached, RA; Rajha, HN; Maroun, RG; et al. Ekstrakcija, karakterizacija i ugradnja ekstrakta Hypericum Scruglii u ad hoc formulirane fosfolipidne vezikule dizajnirane za liječenje kožnih bolesti povezanih s oksidativnim stresom. Farmaceutika 2020, 12, 1010.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】