Eksperimentalna studija o zaštitnom efektu ukupnih glikozida Cistanche (CTG) na renalnu ishemijsku reperfuzijsku ozljedu
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU Jun, ZHAO Xi
sažetak:Cilj Uspostaviti štakorski model hemoragičnog šoka i reanimacije kako bi se uočio zaštitni učinakcistanche ukupni glikozidi(CTG)na bubrezimaishemijsko-reperfuziona povreda. Metode SD štakori su randomizirani u lažnu - operacijsku grupu, grupu za šok i reanimaciju (eksperimentalnu grupu) i CTG grupu, sa po 10 pacova u svakoj. Nakon modeliranja, pacovi u CTG grupi primili su intraperitonealnu injekciju CTG 400 mg/kg. U eksperimentalnoj grupi i grupi lažnih operacija ubrizgan je fizički fiziološki rastvor od 3 ml. Određeni su nivoi Cr, BUN i Cys － C da bi se otkrila funkcija bubrega u svakoj grupi. Protočna citometrija je korištena za otkrivanje brzine apoptoze bubrežnih stanica. ELISA je korištena za otkrivanje ekspresije XIAP u tkivu bubrega. Rezultati U poređenju sa eksperimentalnom grupom, nivoi Cr, BUN i Cys － C su očigledno smanjeni uCTGgrupa (P < {{0}}}.01),="" a="" apoptoza="" bubrežnih="" ćelija="" je="" smanjena="" (p="">< 0,01).="" ctg="" je="" značajno="" poboljšao="" ekspresiju="" xiap=""><0.05). conclusion="">CTGdonosi zaštitni efekat naishemijska reperfuzijaozljeda bubrega kod pacova, koja je vjerovatno povezana s promocijom ekspresije XIAP.
【Ključne riječi】 Bubreg; Ishemijska reperfuzijska povreda; Cistanche Total Glycosides; XIAP; Cell apoptosis
Ishemijsko-reperfuzijska (I/R) povredaje čest patofiziološki fenomen oštećenja bubrega u procesu hemoragičnog šoka, teške traume, transplantacije bubrega i operacije tumora bubrega. Studije su pokazale da je apoptoza važna karika u oštećenju bubrežne funkcije uzrokovane I/R ozljedom [1]. Inhibitor proteina apoptoze vezan na X-hromozom (XIAP) jedan je od najjačih endogenih inhibitora apoptoze do sada pronađenih [2]. Postoji nekoliko studija o antiapoptotičkom efektu XIAP u bubrežnom tkivu nakon I/R ozljede.Cistanche ukupni glikozidi(CTG) su sa liste jedinjenja feniletanol glikozida iz kojih se ekstrahujuCistancheimaju različite biološke funkcije. Postoji nekoliko studija o njegovoj bubrežnoj zaštiti nakon I/R ozljede. U ovom eksperimentu je uspostavljen pacovski model reanimacije hemoragičnog šoka, a uspostavljen je i sistemski model I/R ozljede kako bi se istražio zaštitni efekat CTG predtretmana na bubreg od I/R ozljede i istražio njegov mogući mehanizam.
Efekti cistanche: spriječitiIshemijsko-reperfuzijska (I/R) povreda
1 Materijal i metode
1.1 Eksperimentalni materijali
1.1.1 Laboratorijske životinje 30 zdravih mužjaka SD pacova čistog kvaliteta, koje je obezbijedio Eksperimentalni centar Šangajskog univerziteta tradicionalne kineske medicine, broj certifikata za životinje: SYXK (Shanghai) 2009-0069, tjelesna težina (320 ± 30) g.
1.1.2 Eksperimentalni reagensCTG(kupljeno od Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., serijski broj: 20081516); natrijum pentobarbital (serijski broj: P3761), propidijum jodid (PI), rodamin123 (oba kupljena (od Sigme, SAD); komplet za određivanje XIAP za pacove ELISA Kit (kupljeno od Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., serijski broj CSB-ELO26172) .
1.1.3 Laboratorijski instrument Čitač mikroploča (American Thermo Company); Višeparametarski fiziološki detektor (kupljen od kompanije NIHON KOHDEN, Japan); Protočni citometar (kupljen od kompanije Becton-Dickinson, SAD); 24 G trokar (Shandong Jierui Medical Equipment Company).
1.2 Eksperimentalne metode
1.2.1 Priprema životinjskog modela SD štakori su gladni 12 sati prije eksperimenta i anestezirani intraperitonealnom injekcijom natrijum pentobarbitala (50 mg/kg). Štakori su fiksirani u ležećem položaju, a u lijevom donjem dijelu trbuha napravljen je rez od 3 cm i odvojen. U femoralnu arteriju se ubacuje trokar 24 G, priključuje se multiparametarski fiziološki tester, heparinizira se špric od 20 ml, a krvni tlak pada na 40 mm Hg. Krvni pritisak pada na 40 mm Hg. Smatra se da je šok započeo, a krvni pritisak se održava 90 minuta. To je (13 ± 3) ml, a zatim se autologna krv u špricu polako vraća. Potrebno je oko 30 minuta da se krvni pritisak vrati na više od 90 posto osnovne vrijednosti. Smatra se da je reanimacija uspješna [3]. Izvucite iglu trokara, podvezite femoralnu arteriju i zašijte rez. Nakon što su pacovi bili budni, vraćeni su u kavez na posmatranje i imali su slobodan pristup hrani i vodi. 24 sata nakon reanimacije, pacovi su anestezirani pentobarbital natrijumom (50 mg/kg) intraperitonealnom injekcijom, laparotomijom, a 5 ml krvi je uzeto iz donje šuplje vene. Pacovi su odmah ubijeni, a levi i desni bubreg izvađeni na upotrebu.
1.2.2 Grupiranje životinja i primjena 30 pacova je nasumično podijeljeno u grupu lažne operacije, grupu za reanimaciju šoka (eksperimentalna grupa) i CTG grupu, sa 10 pacova u svakoj grupi.
Eksperimentalnoj grupi je intraperitonealno ubrizgano 3 ml fiziološke otopine 2 sata prije puštanja krvi. UCTGgrupi, CTG je davan 2 sata prije puštanja krvi pacova, a doza je ubrizgana u trbušnu šupljinu u dozi od 400 mg/kg. Grupa lažne operacije samo je podvrgnuta anesteziji, laparotomije i odvajanju trokara femoralne arterije i incizijama šavova itd., puštanje krvi i reanimacija nisu rađeni, a ostalo je isto kao i eksperimentalna grupa.
1.3 Indikatori i metode ispitivanja
1.3.1 Određivanje kreatinina u krvi (Cr), azota uree (BUN), cistatina C Cr, BUN i cistatina C određuje se u laboratoriji naše bolnice. Cistatin C je endogeni marker promjena u brzini glomerularne filtracije. Kada je bubrežna funkcija oštećena, brzina glomerularne filtracije se smanjuje i koncentracija cistatina C u krvi može porasti više od 10 puta. Dijagnostička tačnost cistatina C je značajno bolja od serumskog kreatinina.
1.3.2 Određivanje brzine apoptoze ćelija Protočna citometrija je korišćena za otkrivanje brzine apoptoze ćelija bubrega. Uzmite bubreg i isjeckajte ga sečivom, dodajte malo PBS-a i prebacite u epruvetu. Dodajte 0,3 posto tripsina za varenje u vodeno kupatilo od 37 stepeni i inkubirajte 20 min. Kada supstanca u epruveti postane zamućena, dodajte dva puta PBS da zaustavite varenje, filtrirajte sa 300 mesh najlonskom mrežicom, odbacite nečistoće i koristite centrifugu na niskoj temperaturi Centrifuge na 1500 g/s za 5 minuta, bacite supernatant, podesite koncentraciju ćelija na 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / ml, uzmite 0,4 ml gornje suspenzije ćelija i dodajte 10 ul / ml rodamina123 0 ．4 ml, inkubirajte u Vodeno kupatilo od 37 stepeni zaštićeno od svetlosti, zatvorite epruvetu, isperite dva puta PBS nakon 30 minuta, zatim centrifugirajte na 1500 g/s 5 minuta, bacite supernatant i ponovo isperite na isti način. Dodajte PI 0,4 ml, bojite 15 minuta i provjerite postotak normalnih, nekrotičnih i apoptotičkih stanica u bubregu. Prema afinitetu ove dvije boje u različitim tipovima ćelija, poznato je da su samo ćelije obojene PI mrtve ćelije, samo Rhodamin123 obojene ćelije su žive ćelije, a obe obojene ćelije su apoptotičke ćelije.
1.3.3 Enzimski imunotest (ELISA) je korišten za otkrivanje ekspresije XI-AP u tkivima bubrega pacova. Uzimani su bubrezi svake grupe, a svježa bubrežna tkiva tretirana su lizatom tkiva. Centrifugirajte na 1500 g/s u niskotemperaturnoj centrifugi 5 min. Uzmite supernatant i radite prema uputama XI-AP ELISA kompleta. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. je odgovoran za testiranje.
1.4 Statistička obrada
Svi podaci su statistički analizirani pomoću softvera SPSS17.0, a podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (x ± s) i P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
cistanche ukupni glikozidi
2 rezultata
2.1 Indeksi funkcije bubrega Cr, BUN, Cystatin C Poređenje Cr, BUN, Cystatin C u eksperimentalnoj grupi bili su značajno viši od onih u grupi lažne operacije (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
U poređenju sa eksperimentalnom grupom, vrednosti Cr, BUN i Cistatin C uCTGgrupi su značajno smanjeni, a razlika je bila statistički značajna (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabela 1 Poređenje indeksa bubrežne funkcije Cr, BUN i Cystatin C štakora u svakoj grupi (x ± s)
Napomena: U poređenju sa lažnom operativnom grupom, a P＜{{0}}.01; u poređenju sa eksperimentalnom grupom, bP<>
2.2. Brzina apoptoze bubrežnih ćelija i ekspresija XIAP u bubrežnom tkivu. Samo nekoliko ćelija u bubrežnom tkivu grupe lažne operacije prolazi kroz apoptozu.
Broj apoptoze u eksperimentalnoj grupi je značajno povećan, a razlika je statistički značajna u poređenju sa grupom lažne operacije (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
Grupa lažne operacije imala je samo slabu ekspresiju XIAP, dok je eksperimentalna grupa imala značajno povećanje ekspresije XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabela 2 Poređenje brzine apoptoze i ekspresije XIAP ćelija bubrega pacova u svakoj grupi (x± s)
Napomena: U poređenju sa lažnom operativnom grupom, aP＜{{0}}. 01; U poređenju sa eksperimentalnom grupom, b P<0. 05,=""><0.>
3 Diskusija
Mehanizam I/R povrede bubrega je veoma komplikovan. To je patološki proces koji se odvija kroz mnoge puteve pod dejstvom različitih faktora, kao što su preopterećenje jonima kalcijuma, oštećenje lipidnom peroksidacijom, apoptoza i nekroza, među kojima su endogene kaspaze Apoptoza zavisna od kaspaze jedan je od glavnih oblika bubrežnog tubularnog epitela. oštećenje ćelija uzrokovano I/R ozljedom bubrega [4]. Inhibitor porodice proteina apoptoze (IAP) jedini je inhibitor kaspaze pronađen u ćelijama sisara do sada, koji može efikasno sprečiti pojavu apoptoze. XIAP je najjači inhibitor kaspaze član porodice IAP, koji može inhibirati ćelijsku apoptozu uzrokovanu različitim patološkim stimulansima i imati zaštitni učinak na oštećene organe [5].
Trenutno je metoda uspostavljanja životinjskih modela s I/R ozljedom bubrega uglavnom uklanjanje jedne strane bubrega i stezanje druge strane bubrežne pedikule ili bubrežne arterije [6] kako bi se simuliralo stanje transplantacije bubrega. Autor je u ovoj studiji koristio model hemoragijskog šoka/reanimacije, koji je bliži patofiziološkom procesu sistemske ishemije-reperfuzije koji se javlja u kliničkom traumatskom šoku. U ovom eksperimentu, BUN, Cr i cistatin u krvi SD pacova Količina C je značajno povećana i bubrežna funkcija je ozbiljno narušena. To je idealan životinjski model za proučavanje I/R oštećenja bubrega.
CTG je važna medicinska komponenta tradicionalne kineske medicineCistanche. Cistanche, koji je topao po prirodi, sladak i slan, pripada meridijanu bubrega i debelog crijeva i prvobitno se nalazio u Shennongovoj Materia Medica. "Ben Jing," kaže: "Održava pet trudova i sedam povreda, hrani sredinu, hrani pet unutrašnjih organa, jača jin i hrani suštinu i qi." Takođe."Cistanchekoristi se u mojoj zemlji dvije hiljade godina. U prošlosti je na prvom mjestu u formulama za povećanje snage, a na drugom mjestu nakon ginsenga u hranjivim formulama.Cistanchemogupoboljšavaju seksualnu funkciju, regulišu neuroendokrinu i poboljšavaju imunološku funkciju organizma. Antioksidansi, potiču metabolizam materijala, štite ishemijski miokard i druge funkcije. Kao glavni medicinski sastojakCistanche, CTG ima mnogo funkcija. Istraživanje cerebralnihishemija-reperfuzijamodel
Studije su to otkrileCTGmože smanjiti ekscitatorne aminokiseline u moždanom tkivu nakon ishemije-reperfuzije i zaštititi moždano tkivo SD štakora [7]. CTG ima antioksidativni učinak na tkiva miševa i ima određeni zaštitni učinak na akutnu cerebralnu hipoksiju kod miševa i oštećenje srčanog mišića kod miševa [8]. CTG može značajno poboljšati neuroponašanje Parkinsonovog modela miševa i inhibirati smanjenje broja dopaminskih neurona u supstanciji nigra [9]. Povećanjem aktivnosti enzima za uklanjanje slobodnih radikala, sprječavanjem peroksidacije lipida, inhibiranjem taloženja -amiloidnog peptida u mozgu i inhibiranjem apoptoze moždanih stanica, CTG značajno povećava sposobnost učenja i pamćenja kod miševa Alchajmerove bolesti izazvane -amiloidnim peptidom [10]. Ovo istraživanje je pokazalo da se nakon primjene CTG predtretmana sadržaj BUN-a, Cr i cistatina C u krvi SD štakora značajno smanjio, a oštećenje bubrežne funkcije smanjeno. CTG je povećao protein XIAP koji inhibira apoptozu u bubrežnim tkivima I/R ozljede i blokirao ćelije. Pojava apoptoze igra zaštitnu ulogu u oštećenju bubrega.
reference
[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S, et al. I darbepoetin alfa i karbamilirani eritropoetin sprječavaju disfunkciju transplantata bubrega zbog ishemije/reperfuzije kod štakora［J］． Transplantacija, 2011, 92 (3): 271-279.
[2] West T, Stump M, Lodygensky G, et al. Nedostatak X-vezanog inhibitora proteina apoptoze dovodi do povećane apoptoze i gubitka tkiva nakon neonatalne ozljede mozga［J］． ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.
[3] Fu X, Tian H, Wang D, et al. Višestruke povrede i otkazi organa uzrokovani šokom i reperfuzijom nakon prostrijelnih rana［J］． J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.
[4] Padanilam BJ. Smrt stanica uzrokovana akutnim oštećenjem bubrega: perspektiva o doprinosu apoptoze i nekroze［J］． Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Citoprotektivni efekti IAP-a otkriveni od strane antagonista malih molekula［J］． Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng, itd., Uspostavljanje i iskustvo modela akutne ishemije-reperfuzije bubrega kod miševa [J]. Medicinske informacije: Handbook of Surgery, 2007, 20 (12): 1103-1105.
[7] Zhu Zheng. Efekti glikozida Cistanche na ekscitatorne aminokiseline u moždanom tkivu pacova nakon cerebralne ishemije i reperfuzije [J]. Anhui Medicine, 2010, 14 (12): 1393 -1394.
[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Zaštitni učinak ukupnih glikozida cistanche deserticola na nedostatak kisika ［J］． Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang, et al. Zaštitni učinak ukupnih glikozida cistanhe na dopaminergičke neurone u substantia nigra kod miševa modela MPTP Parkinsonove bolesti
[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, itd. Učinak i mehanizam ukupnih glikozida cistanchea na učenje i pamćenje mišjeg modela Alchajmerove bolesti izazvanog -amiloidnim peptidom [J]. Kineski farmakološki bilten, 2006, 22 (5): 595-599.
