Eksperimentalna studija zaštitnog efekta prethodnog tretmana glikozida Cistanche na oštećenje bubrežne ishemije-reperfuzije

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Odjel za hirurgiju, Okružna bolnica integrirane tradicionalne kineske i zapadne medicine Baoshan, Šangaj 201900)

【Apstrakt】Cilj Uspostaviti model reanimacije hemoragičnog šoka kod štakora i uočiti zaštitni učinakCistancheukupni glikozidi (CTG) kod ishemijsko-reperfuzijske povrede bubrega. Metode SD štakori su nasumično podijeljeni u 3 grupe: grupa lažnih operacija, eksperimentalna grupa (grupa za šok reanimaciju), grupa za CTG tretman, po 10 pacova u svakoj grupi. Eksperimentalna grupa i grupa za CTG tretman uspostavile su modele bubrežne ishemije-reperfuzije. Pacovima u tretiranoj grupi intraperitonealno je ubrizgan CTG 400 mg/kg, a eksperimentalnoj grupi i grupi lažne operacije ubrizgan je fiziološki rastvor. Sadržaj miokarda u krvi, sadržaj azota ureje i cistatin C u svakoj grupi su detektovani da bi se odredila bubrežna funkcija, analiza protočne citometrije je korišćena za detekciju brzine apoptoze bubrežnih ćelija; enzimski imunotest (ELISA) korišten je za otkrivanje veze X-hromozoma kod štakorabubregtkivna ekspresija X-vezanog inhibitora proteina apoptoze (XIAP). Rezultati Upoređujući CTG grupu sa eksperimentalnom grupom, Cr, BUN i Cystatin C u krvi su značajno smanjeni (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheimaju zaštitni učinak na oštećenje bubrežne ishemije-reperfuzije kod pacova, što može biti povezano sa promocijom ekspresije XIAP.

[Ključne riječi] bubreg; ishemijsko-reperfuziona povreda; ukupni glikozidi cistanhe; hromozomski vezan inhibitor proteina apoptoze; apoptoza; pacov

[Klasifikacioni broj Kineske biblioteke] R692 [Šifra za označavanje dokumenta] A [Broj artikla] 1008 -0392 (2015.) 02-0037 -04

Click to Cistanche EKSTRAKT PRAŠAK za bubrege

Ishemijsko-reperfuzijska (I/R) povreda je čest patofiziološki fenomen oštećenja bubrega u procesu hemoragičnog šoka, teške traume,bubregtransplantaciju, ibubregoperacija tumora. Studije su pokazale da je apoptoza važan dio oštećenja bubrežne funkcije uzrokovane I/R ozljedom (1). X-vezan inhibitor proteina apoptoze (XIAP) jedan je od najjačih endogenih inhibitora apoptoze do sada pronađenih (2). Postoji nekoliko studija o antiapoptotičkom efektu XIAP u bubrežnom tkivu nakon I/R ozljede.Cistancheukupni glikozidi (CTG) je feniletanoidno jedinjenje ukupnih glikozida ekstrahirano izCistanche, koji ima različite biološke funkcije. Postoji nekoliko studija o njegovoj bubrežnoj zaštiti nakon I/R ozljede. . Ovo istraživanje uspostavilo je model reanimacije hemoragičnog šoka kod pacova i uspostavilo model sistemske I/R ozljede kako bi se istražio zaštitni učinak ukupnih glikozida mesne kile nabubregod I/R ozljede i istražiti njen mogući mehanizam.

1Materijal i metode

1.1 Životinje i grupiranje

Postoji 30 čistih i zdravih mužjaka pacova koje obezbeđuje Eksperimentalni centar Šangajskog univerziteta tradicionalne kineske medicine, težine (320 ± 30) g. Nasumično podijeljeno u 3 grupe: grupa lažnih operacija, eksperimentalna grupa (grupa za šok reanimaciju), CTG grupa, svaka sa 10 pacova.

1.2 Glavni reagensi i instrumenti

Ukupni glikozidi ljepljivog pirinča (broj serije: 20081516) kupljeni su od Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; natrijum pentobarbital, Hoechst 33258, i propionil jodid kupljeni su od Sigme, SAD; Komplet za test proteina inhibitora apoptoze vezanog na X hromozom (XIAP) i ELISA komplet su kupljeni od Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; čitač mikropločica je kupljen od Thermo Company, SAD; višeparametarski fiziološki detektor je kupljen od kompanije Nihon Kohden, Japan; protočni citometar BDFACSAria je kupljen od Bectona, USA -Dickinson Company; 24G trokar je kupljen od kompanije Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Eksperimentalna metoda

1.3.1 Priprema životinjskog modela SD pacovi su držani na gladovanju 12 sati prije eksperimenta i anestezirani intraperitonealnom injekcijom natrijum pentobarbitala (50 mg/kg).

Štakor je fiksiran u ležećem položaju, napravljen je rez od 3 cm u lijevom donjem dijelu trbuha, odvojena femoralna arterija, umetnut trokar 24G i priključen multiparametarski fiziološki detektor. Prosječni krvni pritisak pacova izmjeren je kao (113 ± 15) mmHg, 20 ml šprica heparina. Krvni pritisak je spušten na 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) pomoću trosmjernog uređaja za hemijsku vezu. Smatralo se da je šok počeo, a krvni pritisak se održavao 90 minuta. Volumen puštanja krvi bio je (13 ± 3) ml, a zatim autologna krv u špricu. Spora reinfuzija traje oko 30 minuta, a krvni pritisak se vraća na više od 90 posto osnovne vrijednosti, te se reanimacija smatra uspješnom (3) . Trokar je izvučen, femoralna arterija je ligirana, a rez je zašiven. Nakon što su se pacovi probudili, vraćeni su u kavez na posmatranje i mogli su slobodno jesti i piti. 24 h nakon reanimacije, za anesteziju je korišćena intraperitonealna injekcija natrijum pentobarbitala (50 mg/kg), laparotomija, uzeto je 5 ml krvi iz donje šuplje vene, pacovi su odmah žrtvovani, a levi i desni bubreg izvađeni na koristiti.

1.3.2 Metode uzimanja lijekova Grupi koja je tretirana CTG-om dat je CTG 2 sata prije puštanja krvi pacova i ubrizgan u trbušnu šupljinu u dozi od 400 mg/kg. Eksperimentalnoj grupi je intraperitonealno ubrizgano 3 ml fiziološke otopine 2 sata prije puštanja krvi; grupa lažne operacije je samo podvrgnuta anesteziji, laparotomije i odvajanju femoralne arterije, postavljanju trokara i šavu reza, ali bez krvarenja i reanimacije. Ostali su bili isti kao i eksperimentalna grupa.

1. 4 indikatora i metode detekcije

1.4.1 Određivanje sadržaja BUN, Cr i cistatina C u krvi Cistatin C je endogeni marker promjena u brzini glomerularne filtracije. Kada je bubrežna funkcija oštećena, brzina glomerularne filtracije se smanjuje, koncentracija cistatina C u krvi može porasti 10 puta, a dijagnostička točnost cistatina C je znatno bolja od serumske mišićne intoksikacije. Sadržaj BUN, Cr i cistatina C u krvi dostavljen je u laboratoriju naše bolnice na određivanje.

1.4.2 Određivanje brzine apoptoze ćelija Protočna citometrija je korišćena za otkrivanje brzine apoptoze ćelija bubrega. Uzmite bubreg i isjeckajte ga oštricom, dodajte malo PBS-a i prebacite u epruvetu. Dodajte 0.3 posto tripsina da se probavi u 37 P vodenom kupatilu, inkubirajte 20 min, kada se sadržaj u epruveti zamuti, dodajte 2 puta PBS da zaustavite varenje, filtrirajte sa najlonsku mrežicu 300 mesh, odbacite nečistoće i centrifugirajte u niskotemperaturnoj centrifugi. Radijus centrifuge 8 cm, 12,000 r/min, centrifugirajte 5 min, bacite supernatant, podesite koncentraciju ćelije na 1 ~ 1,5 x 106/ml, uzmite 0,4 ml gornje ćelijske suspenzije i dodajte 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), tamno 37 t: inkubirajte u vodenom kupatilu, zatvorite epruvetu, isperite PBS nakon 5 min, radijus centrifuge 8 cm, 12 000 o/min, centrifugirajte 5 min , bacite supernatant, ponovo isperite na isti način. Dodajte 0,4 ml PI, obojenog 5 minuta, i otkrijte postotak normalnih, nekrotičnih i apoptotičkih stanica u bubregu. Prema afinitetu dviju boja različitih tipova ćelija, poznato je da su samo ćelije obojene PI mrtve ćelije, samo Hoechst 33258 obojene ćelije su apoptotičke ćelije, a nijedna od njih nije obojene normalne žive ćelije.

1.4.3 Enzimski imunotest (ELISA) za otkrivanje ekspresije XIAP u tkivima bubrega pacova Uzmite svaku grupu bubrega i tretirajte svježa tkiva bubrega lizatom tkiva. Centrifugirajte u niskotemperaturnoj centrifugi na 12 000 r/min 5 min. Uzmite supernatant i radite prema uputama XIAP ELISA kompleta. Šangajski Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. je odgovoran za testiranje.

1.5 Statistička obrada

Eksperimentalni podaci svake grupe predstavljeni su Yuan tlo s, i SPSS 17. Za statističku analizu se koristi softver 0. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche može poboljšati seksualnu funkciju

2 rezultata

Vrijednosti indeksa funkcije bubrega Cr, BUN i Cystatin C bili su statistički značajni (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabela 1 Indeksi funkcije bubrega Cr, BUN i Cistatin-C vrijednosti pacova u svakoj grupi Tab. 1 Indeksi bubrežne funkcije u tri grupe

U poređenju sa lažnom operativnom grupom, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mehanizam ishemijsko-reperfuzijske povrede bubrega je veoma komplikovan. To je patološki proces koji se na više načina javlja pod djelovanjem različitih faktora, kao što su preopterećenje ionima kalcija, oštećenje lipidnom peroksidacijom, apoptoza i nekroza stanica, među kojima je apoptoza stanica zavisna od kaspaze jedan od glavnih oblika bubrežnih tubularnih epitelnih stanica. oštećenje izazvano I/R ozljedom bubrega (4). Porodica inhibitora proteina apoptoze (IAP) jedini je endogeni inhibitor kaspaze pronađen u ćelijama sisara do sada, koji može efikasno sprečiti pojavu ćelijske apoptoze. XIAP je član sa najjačim inhibitornim efektom na kaspazu u porodici IAP. Može inhibirati ćelijsku apoptozu uzrokovanu raznim patološkim stimulansima i imati zaštitni učinak na oštećene organe (5).

Trenutno, većina metoda za uspostavljanje životinjskih modela bubrežne I/R ozljede je uklanjanje jednog bubrega i stezanje druge strane bubrežne pedikule ili bubrežne arterije ⑹ kako bi se simuliralo stanje transplantacije bubrega. Ova studija koristi model hemoragijskog šoka/reanimacije, koji je bliži patofiziološkom procesu sistemske ishemije-reperfuzije koja se javlja u kliničkom traumatskom šoku. U ovom eksperimentu, nivoi BUN, Cr i cistatina C u krvi SD pacova Značajno poboljšanje, ozbiljno oštećena bubrežna funkcija, idealan je životinjski model za proučavanje I/R oštećenja bubrega.

CTG je važan medicinski sastojak tradicionalne kineske medicine paste od mesa za djevojčice. Pasta od patlidžana, koja je topla po prirodi, slatka i slana, vraća se u meridijan bubrega i debelog crijeva i prvobitno je bila sadržana u Shennongovoj Materia Medica. "Ben Sutra": Glavnih pet trudova i sedam povreda, hrani sredinu, hrani pet unutrašnjih organa, jača jin, hrani suštinu i qi;Cistanchekoristi se u mojoj zemlji dvije hiljade godina. On je na prvom mjestu u formulama za povećanje snage u prošlosti i na 2. mjestu u hranjivim formulama nakon ginsenga. Studije su to pokazaleCistanchemogupoboljšati seksualnu funkciju, regulišu neuroendokrinu, ipoboljšati imunološku funkciju. , Antioksidansi, pospješuju metabolizam materijala, štite ishemijski miokard i druge funkcije. Kao glavni ljekoviti sastojak mesnih pirea, CTG ima mnogo funkcija. Istraživanja na modelima cerebralne ishemije-reperfuzije otkrila su da CTG može smanjiti ekscitatorne aminokiseline u moždanom tkivu nakon ishemijske reperfuzije i zaštititi moždano tkivo SD štakora (7). CTG imaantioksidativno dejstvona tkiva miševa i ima određeni zaštitni učinak na akutnu cerebralnu hipoksiju kod miševa i oštećenje srčanog mišića kod miševa (9). CTG može značajno poboljšati neuroponašanjeParkinsonovamodel miševa i inhibiraju smanjenje broja dopaminskih neurona u supstanciji nigra (9). Povećavajući aktivnost enzima za uklanjanje slobodnih radikala, sprečavajući peroksidaciju lipida, inhibirajući taloženje B-amiloidnog peptida u mozgu i inhibirajući apoptozu moždanih ćelija, CTG značajno poboljšava učenjeAlchajmerova bolestmiševi uzrokovani B-amiloidnim peptidom Sposobnost pamćenja w. Ova studija je pokazala da se nakon primjene CTG predtretmana značajno smanjio sadržaj BUN, Cr i cistatina C u krvi pacova, a oštećenje bubrega smanjeno. CTG je povećao protein XIAP koji inhibira apoptozu u I/R oštećenom bubrežnom tkivu i blokirao apoptozu ćelija. Pojava smrti ima zaštitni učinak na oštećenje bubrega.