Elastin čini elastični protein epidermalnog vezivnog tkiva sa kolagenom

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

sažetak:Novi ksanton glikozid, 135,6-tetrahidroksiksanton-C-4-D-glukopiranozid izolovan je iz metanolnog ekstrakta listova Mangifera Indica (Anacardiaceae) koji rastu u Egiptu. Struktura je razjašnjena 1D i 2D-NMR spektroskopskim podacima. Fizičko-hemijska svojstva jedinjenja kao što su lipofilnost, rastvorljivost i razmatranje formulacije su predviđeni in silico ADMET tehnikom koristeći SwissADME server. Ova tehnika je osigurala Lipinsko pravilo pet, kao što su apsorpcija iz GIT-a, distribucija, metabolizam i prožimanje kože. Procijenjene su in vitro inhibitorne aktivnosti protiv enzima posredovanih starenjem kao što su kolagenaza, elastaza, hijaluronidaza i tirozinaza. Jedinjenje je pokazalo izvanredne anti-kolagenazne, anti-elastazne, antihijaluronidazne i anti-tirozinazne efekte sa IC50 vrijednostima od 1,06,419,10, 1,65, odnosno 0,48 ug/mL, u poređenju sa pozitivnom kontrolom. Jedinjenje je pokazalo obećavajuću predviđenu topljivost u vodi i razumnu penetraciju u kožu, što sugerira prikladnost spoja za topikalnu formulaciju kao sredstvo protiv starenja za kozmetičke preparate.

Ključne riječi:ksanton; Mangifera indica; starenje; ceolagenaza; elastaza; tirozinaza; hijaluronidaza; in silico ADMET

1. Uvod

Proces starenja je složen biohemijski proces povezan sa oksidativnim stresom izazvan endogenim slobodnim radikalima kiseonika i dušika koji nastaju tokom očekivanog životnog veka, što može doprineti napredovanju manifestacija povezanih sa starenjem [1]. Patologije starenja kože kao što su bore, hiperpigmentacija, staračke mrlje, bore, melazma, pjege, lentigo, efelidi, nevusi, posmeđivanje i melanom se nastavljaju aktivacijom reaktivnih vrsta kisika (ROS) [2]. Slobodni radikali ili ROS mogu potencijalno izazvati promjenu strukturnog sastava stanica kože i oštetiti ćelijske membrane stimulirajući oksidaciju lipida i proteina, što dovodi do oštećenja DNK i smrti stanice [3,4]. Osim toga, ROS igraju značajnu ulogu u procesu starenja kože oštećujući glavne proteine ​​kože kao što su kolagen i elastin aktivacijom enzima kolagenaze i elastaze. Osim toga, slobodni radikali uzrokuju degradaciju hijaluronske kiseline kroz aktivaciju hijaluronidaze, što dovodi do nepravilne hidratacije kože [5,6]. Predviđanje ovih dinamičkih procesa smatra se ključnim pitanjem za dermokozmetičku oblast i značajan istraživački rad se troši na otkrivanje novih zaštitnih formulacija[7]. Antioksidansi su prirodni odbrambeni enzimi prisutni u koži i suprotstavljaju se prekomjernom stvaranju slobodnih radikala u tijelu. Međutim, oksidativna ravnoteža može biti poremećena nekoliko faktora uključujući ishranu i zagađenje vazduha koji dovode do oksidativnog stresa. U ovom oksidativnom stresu, opterećenje slobodnih radikala u tijelu je znatno veće od prirodnih antioksidansa. Stoga je vrlo važno koristiti vanjske antioksidanse iz izvora kao što su prehrana, kozmetika ili farmaceutski proizvodi za neutralizaciju slobodnih radikala i suzbijanje procesa starenja kože [5,8]. Moderne studije su otkrile da nekoliko prirodnih sekundarnih metabolita, uglavnom flavonoida i polifenola, značajno doprinose ukupnoj antioksidativnoj aktivnosti mnogih biljaka [9]. To je dovelo do interesa za istraživanje antioksidativne aktivnosti mnogih biljaka [10]. Prijavljeno je da je voće bogato ovim fenolima i flavonoidima, kao i vitaminima [11].

Molimo kliknite ovdje da saznate više

Elastin čini elastični protein epidermalnog vezivnog tkiva sa kolagenom i ima značajnu ulogu u prevenciji bora i čvrstoće kože[12]. Tokom starenja ćelije, matriks metaloproteinaze kao što su kolagenaza, elastaza i hijaluronidaza se povećavaju [13]. Supresija ovih enzima je jedna od najefikasnijih terapijskih strategija za upravljanje pogoršanjem stanja kože tokom starenja [14]. Fenolni spojevi biljnog porijekla su opisani kao moćni medijatori izbjeljivanja zbog svojih inhibitornih svojstava na tirozinazu [15] i neki (od njih bi mogli igrati ulogu u remodeliranju matriksa putem inhibitornog efekta elastaze [16].

Mangifera indica L. je jedna od najvažnijih jestivih biljaka koja pripada porodici Anacardiaceae rasprostranjena u mnogim zemljama, posebno u tropskim regijama [17]. Plodovi manga imaju imperativnu ulogu u poljima poljoprivrede, hrane, farmacije i ishrane više od 4000 godina [18]. Štaviše, plod manga je na 2. poziciji među industrijskim kulturama, nakon balane, po proizvodnji i pokrivenosti [19]. Različiti dijelovi Mangifera indica predstavljaju bogat izvor različitih fitokonstituenata uključujući flavonoide, ksantonoide, fenolne kiseline i triterpenoide s potencijalnom vrijednošću kao funkcionalni molekuli [18]. Osim toga, voće opskrbljuje ljudsko tijelo vitalnim komponentama kao što su ugljikohidrati, proteini, masti, minerali, vitamini, esencijalne aminokiseline, karotenoidi, dijetalna vlakna i fenoli [20]. Tradicionalno, različite kulture su objavile da se infuzija lista koristila za nekoliko bolesti kao što su dijareja, krvava dizenterija, anemija, astma, bronhitis, hipertenzija, nesanica, reumatizam, probavne smetnje, hepatitis, tetanus, pobačaj i krvarenje [21]. Nadalje, pare zapaljenog lišća su se udisale zbog štucanja i bolova u grlu [18]. Kora se koristila kao diuretik i u antireumatskim zavojima. Sjemenke su dobro poznate u liječenju prehlade, astme, dijareje i krvarenja. Prijavljeno je antioksidativno djelovanje, visok ukupni fenolni (TPC), ukupni sadržaj flavonoida (TFC), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) aktivnost i kapacitet inhibicije linolne kiseline dijelova biljke Mangifera indica [ 22].

Cistanche može protiv starenja

Ova studija je osmišljena da ispita in vitro inhibitorna svojstva novog jedinjenja ksantona dobijenog od 70 posto metanolnog ekstrakta listova Mangifera indica L protiv kolagenaze, elastaze, tirozinaze i hijaluronidaze. Nadalje, farmakokinetička svojstva kao što su apsorpcija, distribucija, metabolizam i toksičnost (in silico ADMET predviđanje) provedena su korištenjem SwissADME i Lipinskog pravila pet za procjenu rastvorljivosti lijeka, permeabilnosti i potrebe za formulacijom.

2.Rezultati i diskusija

2.1. Razjašnjavanje strukture izolovanog jedinjenja

Jedinjenje je dobijeno u obliku žutih kristala (18,29 mg). Kromatografska analiza je otkrila blijedo-narandžasto-žutu mrlju na TLC-u pod dugom UV svjetlošću (365 nm) u DCM:MeOH (7:3) i BAW sistemima rastvarača. Kada je mrlja tretirana 1% metanolnom otopinom željeznog klorida, postala je tamnozelena i dala žutu boju prskanjem otopine amonijaka. Spektralni podaci lH-NMR, APT i HMBC jedinjenja su sastavljeni u tabeli 1. lH-NMR spektralna analiza (DMSO-dg, sobna temperatura) (slike Sl i S2) otkrila je prisustvo dva signala aromatičnog dubleta u niže polje na oH 7,57 i 6,79 sa konstantom spajanja od 8,24 Hz što ukazuje na prisustvo dva orto-sprežena protona. Štaviše, aromatično područje H-NMR spektra pokazalo je prisustvo singletnog signala na Su 5,96, što ukazuje na prisustvo jednog protona u aromatičnom prstenu. Anomerni proton C-glukozilne jedinice detektovan je na Su 4,60 ppm sa konstantnom vrednošću spajanja od 7 Hz koja je dodeljena za -anomer. Ovaj obrazac aromatičnih protona u H-NMR spektru izolovanog jedinjenja podseća na strukturu ksantona. Nadalje, prisustvo -anomernog protona na ou 4,60 sa karakterističnim hemijskim pomacima glukoze na 3,21 do 4,60 od lH-NMR (šećerna regija) ukazuje da postoji C-glikozidna veza između šećera i ksantona. Kao što je prikazano na slici S3, APT spektar jedinjenja otkrio je prisustvo devetnaest ugljičnih signala, koji predstavljaju ksanton i strukturu C-glukozida.cistanche tubulosa recenzijeAPT eksperiment je identificirao tri CH grupe (C-8,131.95;C-7,115.10;C-2, 95.35 ppm) u ksantonskom dijelu i anomernom C-1' C-glukoze na SH75,13 ppm. Proveli smo dvodimenzionalne NMR eksperimente (HMBC; Slika S4) da potvrdimo glikozidnu vezu C-glukoze na C-4ksantona. Obilni 2,3JCH logaritamski korelacijski signali su potvrdili ksantonsku kičmu s uočenim unakrsnim vrhovima od H-1'(6) 4,60) do C-4(6c 104,13 ppm) i C-3 (6c 158.95).bioflavonoidi citrusaZa ksantonski dio, 2,3JCH dugotrajna korelacija je također otkrivena od H-2(8) do C-4(6c 104,13 ppm), C-3 (8c 158,95), i C-4b(6c 107.45). Štaviše, otkrivena je 2-37-korelacija dugog dometa od H-8(8)7.57) do karbonilne grupe C-9( 6c 195.14), C-8a(6c 131.22) i C-6 (6c161.87). Za isti prsten, aJcH signalizira od H-7(6μ 6.79) do C{ {39}}a (6c 131.22) su uočeni. Ove korelacije su ilustrovane u strukturi jedinjenja na Slici 1. HSQC jedinjenja je pokazao korelaciju 1JcH između svakog protona i njegovog lociranog ugljenika kao što je prikazano na Slici S5. Eksperiment H,H COZY (Slika S6) otkrio je snažnu korelaciju između H-7 (δu 6.79) i H-8 (8H7.57). Nadalje, jedinjenje je otkrilo pik pseudomolekularnog jona [MH]- na m/z 421, što ukazuje na molekularnu formulu CgHngOrina u negativnom modu ESI-MS analize (Slika S7). Podaci iz 1H-NMR, APT, IH, H COSY, HMBC i HSQC naveli su nas da pretpostavimo da bi jedinjenje moglo biti 1,3,5,6-tetrahidroksiksanton-C-4- -D-glukopiranozid. Ovo je potvrđeno poređenjem sa NMR podacima prijavljenim za izomangiferin u literaturi [23,24].

2.2. In Silico farmakokinetičko predviđanje izolovanog jedinjenja

SwissADME online server je korišten za procjenu sposobnosti lijeka izolovanog jedinjenja procjenom Lipinskog pravila pet (RO5) za sličnost lijeku[25]. Lipinski je izvijestio da 90 posto oralno aktivnih lijekova koji su dostigli klinički status faze II imaju MWT manji ili jednak 500,logp manji ili jednak 5, donori H-veze manji ili jednaki 5, a akceptori H-veze manji od ili jednako 10[26].SwissADME predviđa dodatnih šest fizičko-hemijskih parametara povezanih sa sličnošću lijeka, kao što su lipofilnost [27], veličina, polaritet [28], rastvorljivost [29,30], fleksibilnost i zasićenost [31,32] kao što je prikazano na slici 2 i tabeli 2.cistanche UKSWISSADME dijagram sličnosti izolovanog jedinjenja sa lekom pokazao je da je većina fizičko-hemijskih svojstava jedinjenja unutar poželjnog opsega [33] osim broja akceptora H-veze, donora H-veze i polariteta jedinjenja od vrijednost PSA je 201,28 A2 (poželjni raspon (između 20 i 130 A2)[28]. Ovaj visoki polaritet se može pripisati prisutnosti šećera. Izolirano jedinjenje je pokazalo obećavajući predviđeni topološki log S(Ali) topološke rastvorljivosti u vodi[29 ] i Log S (ESOL)[30]. Ovo će olakšati buduću formulaciju ovog jedinjenja. Predviđena farmakokinetika je pokazala da jedinjenje ima nisku predviđenu apsorpciju iz GIT-a bez permeacije na BBB prema Dania modelu kuhanih jaja [34] koji je usvojio SwissADME online server[33].cistanche wirkungŠtaviše, jedinjenje nije pokazalo inhibitorne efekte na pet izoformi citokroma P450 (1A2,2C19,2C9,2D6 i 3A4) [35], što ukazuje na nisku mogućnost interakcije medikamenta. Predviđena permeacija kože izračunata je višestrukim linearnim regresijskim modelom koji korelira veličinu molekula i lipofilnost s propusnošću kože [36]. Što je log Kp negativniji (sa Kp u cm/s), to je molekul manje propustan za kožu [33,36].ekstrakt cistanche tubulosaPredviđeni log permeacije kože Kp u cm/s je -9.14 cm/s.

2.3. Procjena svojstava protiv starenja kože

2.3.1. Određivanje aktivnosti protiv kolagenaze i anti-elastaze

Kolagen i elastin su vitalni strukturni proteini epiderme koji zajedno sa hijaluronskom kiselinom održavaju elastičnost, kapilarni tonus i snagu kože [39]. Tokom procesa starenja, oksidativni stres i prekomjerno izlaganje UV svjetlu dovode do aktivacije enzima koji hidroliziraju kao što su elastaza, kolagenaza i hijaluronidaza, čime se gubi snaga i fleksibilnost kože, a pojavljuju se bore[40] . Inhibicija aktivnosti kolagenaze i elastaze jedna je od učinkovitih strategija za zaštitu kože od manifestacija starenja kože [41]. Kao što je pojašnjeno na slici 3A, jedinjenje je pokazalo umjereno svojstvo anti-kolagenaze sa ICso vrijednošću od 419,10 ug/mL, u poređenju sa fenantrolinom (IC50=182,80 ug/mL) kao standardom. Što se tiče inhibitornog efekta elastaze (slika 3B), pokazao je izvanredan učinak sa ICso vrijednošću od 1,06 ug/mL, dok je pozitivna kontrola, N-metoksisukcinil-Ala-Pro-Val-klormetil keton, pokazala ICso vrijednost od 0,63 ug /mL. U skladu sa ovim rezultatima, prethodna studija je izvijestila da je metanolni ekstrakt lista manga bio 10-putomoćniji inhibitor elastaze od standardnog tokoferola koji se pripisuje nekonkurentnom svojstvu inhibicije mangiferina[42]. Nadalje, prethodni izvještaji su dokazali antielastazno djelovanje polifenolnih spojeva zbog prisustva hidrofilnih grupa kao što su hidroksil ili karboksil koji mogu pozitivno utjecati na kompetitivnu inhibiciju enzima [43].

2.3.2. Određivanje aktivnosti antihijaluronidaze i antitirozinaze

Hijaluronska kiselina je najčešći glikozaminoglikan kože koji čuva njen sadržaj vlage[44]. Enzimski se hidrolizira hijaluronidazom što dovodi do narušavanja integriteta strukture kože i poremećaja propusnosti tkiva [45]. Supresija hijaluronidaze održava integritet kože, odgađa napredovanje starenja kože i zadržava hidrataciju kože [13]. Ranije studije su pokazale da prirodni inhibitori hijaluronidaze mogu dobro poslužiti kao agensi protiv starenja za razvoj proizvoda koji se odnose na zdravlje kože[46]. Kao što je ilustrovano na slici 4A, izolovano jedinjenje moglo bi značajno da oslabi aktivnost hijaluronidaze sa ICso vrednošću od 1,65 ug/mL, u poređenju sa 6-O-palmitoil L-askorbinskom kiselinom kao pozitivnom kontrolom (2,55 ug/mL）).

Među kliničkim manifestacijama starenja kože, hiperpigmentaciju kože može ubrzati enzim tirozinaza u prisustvu reaktivnih vrsta kiseonika (ROS)[46]. Tirozinaza, glikoprotein koji sadrži bakar, igra ključnu funkciju u sintezi melanina kroz hidroksilaciju L-tirozina u 3,4-dihidroksifenilalanin (DOPA), nakon čega slijedi oksidacija DOPA u DOPAkinon [47]. Stoga, supresija aktivnosti tirozinaze potencijalno smanjuje hiperpigmentaciju kože [48]. Iz ovog gledišta, jedinjenje potencijalno inhibira tirozinazu sa ICso vrijednošću od 0.48 ug/mL, u poređenju sa kojičnom kiselinom kao pozitivnom kontrolom (0.82 ug/mL) kao što je prikazano u Slika 4B. Prethodna studija o ekstraktu sjemena Mangifera indica pokazala je izvanredne rezultate protiv tirozinaze i antihijaluronidaze u korelaciji sa sadržajem polifenola [47]. Na molekularnom nivou, i tirozin i DOPA sadrže hidroksilne grupe koje se izražavaju kao esencijalni donori protona za aktivaciju tirozinaze [49]. Slično, spoj ima četiri hidroksilna dijela u svom skeletu koji se mogu ponašati kao kompetitivni inhibitori reagirajući kao supstrati na tirozinazu.

3. Materijal i metode

3.1. Biljni materijal

Sveži listovi Mangifera indica L.leaves dobijeni su u fazi plodonošenja iz privatne bašte u oblasti Abo-Zabal (N 30 stepen 1743.5336"E 3128.254), vlada Qualiobya, Egipat, 20. jula 2021. godine. Ljubazno ih je potvrdio Gospođa Treize Labib, specijalista za taksonomiju u botaničkoj bašti El-Orman, Giza, Egipat. Uzorci vaučera sa šifrom PHG-P-MI{11}} stavljeni su u galeriju odjela za farmakognoziju, Farmaceutskog fakulteta Univerziteta Ain Shams.

3.2. Ekstrakcija i hromatografska izolacija

Na zraku osušeni listovi Mangifera indica L. (1,56 kg) perkolirani su u 70 posto metanola (27L) tokom 5 dana, a zatim filtrirani. Filtrat je potpuno uparen u vakuumu na 47 stepeni do suva da bi se dobio osušeni ostatak (90.36 g; 5,79% w/w); prinos ekstrakcije je izračunat kao sljedeća jednačina: [ukupna težina osušenog ekstrakta/ukupna težina biljke za sjeme] × 100. Zatim je dobijeni ekstrakt primijenjen na Diaion HP{12}} frakcioniranje. Korišteno je eluiranje gradijenta (voda/metanol). Dobijeno je pet glavnih frakcija: 100 posto vode, 25 posto metanola, 50 posto metanola, 75 posto metanola i 100 posto metanola. Frakcija 50% rastvorljiva u metanolu (26,38 g) je izložena poliamidu i eluirana u početku sa 100% vode, zatim gradijentom eluirana sa vodom/metanolom (od 100:0 do 0:100,w/o) da bi se dobilo šest podfrakcija:100 posto vode, 20 posto, 40 posto, 60 posto, 80 posto i 100 posto metanola. Subfrakcija od 40 posto rastvorljiva u metanolu (2,36 g) nanesena je na Sephadex LH-20 upotrebom MeOH (izokratsko eluiranje) Slične frakcije su kombinovane i isparene da bi se dobile četiri glavne podfrakcije (A1-A4). A3(0.86 g) je primijenjen na preparativne ploče za tankoslojnu hromatografiju (TLC) koristeći butanooctenu kiselinu:vodu (BAW;4:1:5) kao razvijač mobilne faze da bi se jedinjenje izoliralo kao svjetlo- žuti amorfni prah.

3.3. Spektrometar nuklearne magnetne rezonance (NMR).

Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Švicarska) spektrometar je korišten u Centru za otkrivanje, istraživanje i razvoj lijekova, Farmaceutski fakultet Univerziteta Ain Shams. 3.4. Masena spektrometrija

Za masenu spektrometrijsku analizu korišten je Finnigan LCQ-DECA maseni spektrometar (San Jose, CA, SAD) spojen na PDA detektor. Uzorci su rastvoreni u HzO:MeOH kao mešavina i ubrizgani direktno u HPLC/ESI-MS sistem. I negativni i pozitivni ESI jonizacioni jonski modovi su primenjeni pod sledećim uslovima: gas za sušenje i raspršivanje, N2; temperatura kapilara, 250 stepeni; napon raspršivanja,4,48 kV; kapilarni napon, 39,6 V; napon sočiva cijevi,10.00 V; i način potpunog skeniranja u rasponu mase m/z 100-2000. ESI-MS analiza za izolovano jedinjenje izvedena je na Waters Xevo TQD masenom spektrometru sa UPLC Acquity modom (Milford, CT, SAD) u Centru za otkrivanje, istraživanje i razvoj lijekova, Farmaceutskog fakulteta Univerziteta Ain Shams.

3.5. In-Silico farmakokinetičko predviđanje

Lipinsko pravilo pet fizičko-hemijskih parametara kao što su lipofilnost, rastvorljivost i farmakokinetička svojstva kao što su apsorpcija iz GIT-a, distribucija, metabolizam i propusnost kože izolovanog jedinjenja sprovedeni su korišćenjem SwissADME online servera [36]. 3.6. Procjena svojstava protiv starenja kože

3.6.1. Određivanje aktivnosti protiv kolagenaze

Inhibicijska sposobnost izolovanog jedinjenja protiv aktivnosti kolagenaze procenjena je korišćenjem fluorometrijskog kompleta za skrining inhibitora kolagenaze (BioVision, kataloški br. K833-100) prema prethodno opisanoj metodi [50]. Referentna kontrola je (1,10)-fenantrolin. Testirano jedinjenje i referentna kontrola pripremljeni su u koncentracijama od 1,10,100 i 1000 ug/mL za analizu. Testirano jedinjenje je pripremljeno u 96-ploči sa bunarima sa ravnim dnom. Prvo, supstrat kolagenaze je otopljen u puferu za ispitivanje kolagenaze (CAB). Uzorak za analizu je pripremljen mešanjem jedinjenja sa kolagenazom i CAB. Priprema kontrolnih uzoraka inhibitora obavljena je mešanjem inhibitora ((1,10)-fenantrolina (80 mM)) sa razblaženim enzimom kolagenaze i CAB puferom. Kontrola enzima je pripremljena miješanjem razrijeđene kolagenaze sa CAB. CAB pufer je korišten kao pozadinska kontrola. Svi uzorci su inkubirani na sobnoj temperaturi 15 minuta. Tokom ovog vremena, reakciona smeša je pripremljena mešanjem kolagenaze sa CAB. U sljedećem koraku, reakciona smjesa je temeljito pomiješana sa pripremljenim uzorcima. Fluorescencija je odmah izmjerena na talasnoj dužini ekscitacije od 490 nm i talasnoj dužini emisije od 520 nm pomoću čitača mikroploče (FilterMax F5, Thermo Fisher). Merenje je sprovedeno u kinetičkom režimu na 37 stepeni u trajanju od 60 minuta. Uzorci su pripremljeni u duplikatu, a inhibitorni efekat kolagenaze testiranog jedinjenja je izračunat primenom sledeće jednačine:

3.6.2. Određivanje anti-elastazne aktivnosti

Anti-elastazna aktivnost jedinjenja je ispitana korišćenjem EnzChek§Elastase Assay Kit (E-12056) u skladu sa prethodno objavljenom metodom [51]. Testirano jedinjenje i referentna kontrola pripremljeni su u koncentracijama od 0.1,10 i 100 ug/mL za analizu. Jedinjenje je pripremljeno u 96-pločama sa čistim dnom za fluorometrijski test. Ukratko, rastvori enzima elastaze, supstrat elastaze i kontrola inhibitora pripremljeni su prema preporuci. Zatim je u jažice dodan razrijeđen rastvor elastaze. Testirano jedinjenje, kontrola inhibitora i kontrola enzima dodani su u sljedeće jažice. Uzorci su pomešani na šejkeru i zatim inkubirani 5 minuta na 37 stepeni. Pufer za ispitivanje je pomešan sa supstratom da bi se pripremila fluorometrijska reakciona mešavina, koja je zatim dodana i temeljno promešana sa svakim uzorkom. Fluorescencija je izmjerena odmah na talasnoj dužini ekscitacije od 400 nm i talasnoj dužini emisije od 505 nm pomoću čitača mikroploče (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, SAD). Svi testirani uzorci su pripremljeni i analizirani u duplikatu, a efekat inhibicije elastaze testiranog jedinjenja je izračunat primenom sledeće jednačine:

gdje:

△RFU=promjena relativnih jedinica fluorescencije EC=kontrola enzima

3.6.3. Određivanje aktivnosti anti-tirozinaze

Inhibitorne aktivnosti ulja su testirane protiv kolagenaze korišćenjem kompleta za kolorimetrijski test Abcam@Tyrosinase Inhibitor Screening (kataloški broj ab204715). Analiza je obavljena prema priloženom priručniku. Standardni inhibitor tirozinaze je kojična kiselina. Testirano jedinjenje je pripremljeno u koncentracijama u rasponu od 0,1 do 10 ug/mL za analizu. Oko 2 uL obezbeđene tirozinaze je pomešano sa 48 uL pufera za ispitivanje tirozinaze. Uzorci eteričnih ulja ili postolja (20 uL) pomiješani su sa mješavinom enzima (50 μL) i inkubirani na 25 stupnjeva 10 min. Zatim je 30 μL rastvora supstrata tirozinaze dodato u jažice eteričnih ulja i standarda. Nakon toga, ploča je mjerena spektrofotometrijski na talasnoj dužini od 510 nm tokom 30-60 min na 25 stepeni.

3.6.4. Određivanje antihijaluronidazne aktivnosti

Aktivnost hijaluronidaze je procijenjena spektrofotometrijski mjerenjem količine N-acetilglukozamina formiranog iz natrijum hijaluronata [52]. Testirano jedinjenje i referentna kontrola pripremljeni su u koncentracijama u rasponu od 0.1 do 10 ug/mL za analizu. Pedeset mikrolitara goveđe hijaluronidaze (7900 jedinica mL-1, (Sigma, St. Louis, MO, USA) rastvorenog u 0,1 M acetatnom puferu (pH=3.5)) pomešano je sa 100 μL naznačenog koncentracija jedinjenja rastvorenog u 5% DMSO i zatim inkubirana u vodenom kupatilu na 37 stepeni 20 min.Kontrolna grupa je tretirana sa 100 μL 5% DMSO umesto uzorka.Opticka gustina reakcione smeše je izmerena na 585 nm spektrofotometrijom.

3.7.Statistička analiza

Svi eksperimenti su izvedeni u tri primjerka. Podaci za ICso inhibitorne aktivnosti enzima su statistički ispitani korištenjem jednosmjerne analize varijanse (ANOVA). Statističke analize su obavljene pomoću GraphPad Prism 5.0. 4. Zaključci i buduće perspektive

Prirodni proizvodi biljnog porijekla su veoma traženi na svjetskom tržištu za razvoj novih sredstava za kozmetičke dizajne[4]. U ovoj studiji, novo jedinjenje ksantona, 1.3.5,6-tetrahidroksiksanton-C-4- -D-glukopiranozid, izolovano je iz ekstrakta lista M. indica. Na osnovu testova inhibicije enzima, ovo jedinjenje bi moglo pokazati dobra svojstva protiv kolagenaze, anti-elastaze, antihijaluronidaze i anti-tirozinaze, dajući tako sveobuhvatan efekat slabljenja na enzime povezane sa starenjem kože. Nadalje, in silico fizičko-hemijski parametar i ADME studija podržavaju njegovu inkorporaciju u lokalne oblike doziranja jer pokazuje obećavajuću rastvorljivost u vodi i razumno predviđeno prodiranje u kožu. Stoga bi se ovaj spoj mogao primijeniti kao povoljan multifunkcionalni bioaktivni agens za nutraceutičke i kozmeceutske formulacije. Ipak, toksikološke i kliničke procjene su potencijalno obećavajuće.

Ovaj članak je preuzet iz Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules