Učinci Cistanchea na anti-aging i imunološku funkciju kod modela štakora prije i poslije obrade

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Abstract: Cilj: Istražiti različite prerađene proizvodeCistanchesherba in D - funkcija galaktoze protiv starenja kod pacova i efekti funkcije imunoloških organa. Metode: Ekstrahirali smo različite prerađene proizvode Cistanches herba. SD štakori su nasumično podijeljeni u slijepu kontrolnu grupu, grupu modela starenja, grupu vitamina E, grupe sa visokim, srednjim i niskim dozama, grupe s visokom, srednjom i niskom dozom vina. Sa D - galaktozom uspostavljen je model starenja pacova, nakon tretmana smo detektovali sadržaj MDA, SOD i NO u serumu svake grupe pacova i izbrojali indeks slezine i indeks timusa; a zatim promatrali patološke morfološke promjene tkiva slezene i mtDNK u mozgu. Rezultati: MDA i NO u serumu starijih modelnih pacova značajno su porasli (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanchesherba može značajno smanjiti MDA i NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Ključne riječi: Cistanches herba; obrada; starenje; imun

Tradicionalna kineska medicinaCistanche deserticolaYC Ma iliCistanche deserticolaYC Ma ili C. tubulosa (Schenk) Wight je suha, ljuskava mesnata stabljikaCistanche deserticola(Schenk) Wight. Tople je prirode, slatkog i slanog ukusa, a nalazi se u meridijanu bubrega i debelog creva. Neophodan je za jačanje bubrega i jačanje janga. Lijek se zove „pustinjski ginseng“ (2). Cistanche je prvi put objavljen u "Shen Nong's Materia Medica". Naveden je kao najviši stepen. Ima efekte punjenja esencije i njeguje srž, njeguje bubrege i jača yang, ugodnu boju i produžava život, njeguje krv i hidratizira suvoću, itd. Može liječiti žensku neplodnost, mušku impotenciju, zatvor suhu od krvi, hladan struk i koljena . Bolesti kao što su bol, zaglavljivanje, kolaps krvi, itd.! 3_5]o Izdanje "Farmakopeje Narodne Republike Kine" iz 2010. sadržiCistanche tubulosaiCistanche E.

Kako tijelo stari, doći će do određene degradacije i fizioloških funkcija i morfološke strukture. To je ono što često nazivamo "starenjem". Njegove manifestacije su uglavnom propadanje organa, tkiva i stanica, kao što je smanjenje elastičnosti tkiva, atrofija organa i smanjenje broja stanica, što će uzrokovati postupno opadanje mnogih funkcija tijela. Eksperimenti su to potvrdiliCistancheima efekte protiv starenja "I", ali uporedne studije o efektima protiv starenjaCistancheprije i poslije obrade još nisu prijavljeni. Ovaj eksperiment uglavnom proučavaefekti protiv starenjaofCistancheprije i poslije obrade i pruža naučnu osnovu za proučavanje mehanizma starenja.

Echinacoside

1 Eksperimentalni materijal

1.1 Eksperimentalne životinje

SD pacovi, težine 180-220 g. SPF je obezbijedila Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., broj licence: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Lijekovi i reagensi

Cistanchekupljen je od pepela od divljeg mesa Alashan u Unutrašnjoj Mongoliji, a identificiran je kao suva mesnata stabljika sa ljuskavim listovimaCistanche deserticolaYC Ma od profesora Zhai Yanjuna iz naše bolnice; Metoda pripreme svake grupe ispitivanih supstanci je sljedeća, sirovi cistanche: sirovi. Uzmite kriške Cistanchea i ekstrahirajte ih 3 puta u vodi, zatim pomiješajte odvar i koncentrirajte do određene koncentracije. Priprema Cistanchea: Uzmite sirovi Cistanche i potopite u žuto vino 8 sati, dodajte 1:1, kuhajte na pari 16 sati, narežite na kriške debljine 6 mm i osušite na 70 T. Uzmite kriške Cistanchea i ekstrahirajte 3 puta vodom, zatim sjediniti odvar i koncentrirati ga do određene koncentracije. Vitamin E meke kapsule (broj serije 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galaktoza (serijski broj 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Komplet dušikovog oksida (NO) (serijski broj: BPE30262); Malondialdehid (serijski broj: BPE30262) MDA) komplet (serijski broj BPE30527); komplet superoksid dismutaze (SOD) (broj serije: BPE3O387); sve pruža Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; komplet za ekstrakciju životinjskog mitohondrijalnog DNK tipa kolone (kupljen od Beijing Lab Technology Co., Ltd.); PCR komplet (kupljen od TIANGEN Reagent Company); ostali reagensi su domaći čisti.

1.3 Eksperimentalna oprema

Genecycler (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Čitač mikroploča (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., SAD); Komora s konstantnom temperaturom i vlagom (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); TGL-16C tip govori o mašini za centrifugiranje na stolu (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vrtložni mikser (Šangaj Qingpu Huxi tvornica instrumenata); Elektronska vaga (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Vrtložni mikser (Tvornica instrumenata u Šangaju Qingpu Huxi).

2 Eksperimentalna metoda

2.1 Životinjski model i grupiranje

Nakon 1 sedmice adaptivnog hranjenja, pacovi su nasumično podijeljeni u praznu grupu, grupu modela, kontrolnu grupu,Cistanchegrupe visoke, srednje i niske doze i B. striata: grupe visoke, srednje i niske doze, od kojih je svaka bila 9 grupa po 8 komada. Osim slijepe grupe, ostalim grupama je ujutro subkutano ubrizgana D-galaktoza 167,5 mg/kg; slijepoj grupi je ubrizgan jednak volumen normalnog fiziološkog rastvora; u popodnevnim satima, visoke, srednje i niske doze mesnog pepela i vina su date 5,48 i 2 respektivno. 74, 1,37 g/kg rastvora ispitivanog proizvoda, pozitivnoj kontrolnoj grupi dato je 2,75 mg/mL vitamina E, grupi slepih uzoraka i grupi modela date su jednaku zapreminu normalnog fiziološkog rastvora intragastričnom primenom. Tokom 6 uzastopnih sedmica, konačno su ubijeni i mjereni su različiti pokazatelji.

2.2 Određivanje sadržaja SOD, MDA i NO u serumu pacova

Krv je sakupljena iz abdominalne aorte štakora, centrifugirana na 3000 r/min 15 minuta da se odvoji krvni serum i pohranjena na -20 Y za kasniju upotrebu. Određivanje sadržaja MDA.SOD.NO vrši se u skladu sa uputstvima testnog kompleta.

2.3. Utjecaj na težinu imunih organa kod modela pacova koji su stari

Pacovi u svakoj grupi su izvagani i žrtvovani nakon uzimanja krvi. Uzeti su slezena i timus, isprani fiziološkim rastvorom, osušeni i izvagani, te su izračunati koeficijenti slezine i timusa.

2.4 Promatranje morfologije tkiva slezine

Izvagane slezine su fiksirane sa 4 procenta paraformaldehida, stavljene u parafin, izrezane i obojene HE. Promjene u patološkim presjecima slezene u svakoj grupi promatrane su pod mikroskopom.

2.5 Statističke metode

Koristite SPSS softver da izvršite jednosmjernu analizu varijanse i LSD-t-test za poređenje u parovima.

2.6 Detekcija mutacija mtDNA u mozgu

Moždano tkivo pacova stavljeno je u malter sa tečnim azotom, brzo samleveno u prah, a zatim upućeno na literaturnu metodu, prema uputstvima kita za ekstrakciju mtDNA iz moždanog tkiva.

PCR amplifikacija detektuje deleciju mtDNA4834 fragmenta: prajmeri se odnose na kompletnu sekvencu genoma mtDNA pacova koju su objavili Gada-leta et al. (1898), a prajmere je sintetizovao Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

PCR reakcijski sistem: DNK šablon 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, po 2 prajmera. Uslovi amplifikacije: prva 95 Y denaturacija 5 min; 95 T denaturacija 30 s, 56 T žarenje 30 s, 72 T ekstenzija 45 s, ukupno 35 ciklusa; posljednji 72 T produžetak u trajanju od 7 minuta. Amplificirani proizvodi su podvrgnuti elektroforezi u 1,5 postotnom agaroznom gelu.

Acteoside

3 Rezultati i analiza

3.1 Efekat odCistanchena fizičke znakove starenja pacova

U poređenju sa slijepom grupom, stari pacovi su pokazivali tamnu i žutu dlaku, opuštenu i dosadnu kožu, opuštenu kožu, gubitak dlake, gubitak apetita, smanjenu spontanu aktivnost, usporenost pokreta, ispupčenje kralježnice, bezvoljnost, spor odgovor i druge manifestacije starenja. Što je duže vrijeme ubrizgavanja, simptomi su očigledniji. U poređenju sa grupom koja je starija, mentalno stanje pacova, boja dlake, apetit, oblik tijela i osjetljivost na reakciju poboljšali su se s povećanjem vremena primjene u svakoj grupi primjeneCistanche. Među njima, u osnovi nije bilo razlike između grupe proizvoda s visokim dozama i kontrolne grupe.

3.2 Efekat odCistancheo sadržaju MDA, SOD i NO u serumu pacova modela koji su stari

Rezultati su prikazani u Tabeli I. U poređenju sa blanko grupom, grupa modela mda.no je značajno povećana (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, MDA.N{0}} srednjih i niskih doza grupa Cistanchea je značajno smanjen (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3 Theefekat Cistancheana imunološku funkciju starenja modela pacova Chi

3.3.1 Utjecaj Cistanchea na indeks slezene i indeks timusa kod pacova modela starenja

Rezultati su prikazani u tabeli 2. U poređenju sa slijepom grupom, koeficijent timusa i slezene u modelnoj grupi je g

Postoji trend smanjenja, ali on nije statistički značajan. U poređenju sa modelnom grupom, koeficijenti timusa i slezene u svakoj tretiranoj grupi su značajno povećani (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Grupno poređenje, koeficijenti timusa i slezene srednje i niske doze grupeCistancheimaju tendenciju smanjenja

Potencijal; u poređenju sa visokom dozomCistanche deserticolagrupa sa visokim dozama, timus i slezena srednje i niske doze vinske paste grupe

Visceralni koeficijent ima opadajući trend; u poređenju sa visokom dozomCistanche deserticolagrupe sa visokim dozama, koeficijenti timusa i slezene visokodozne grupecistanche deserticolagrupe sa visokim dozama imaju opadajući trend. Ovaj rezultat pokazuje da je grupa s visokim dozama bolja od grupe s niskim dozama u usporedbi s različitim doziranim grupama, a učinak liječenja grupe proizvoda je bolji od grupe sirovih proizvoda u usporedbi s grupom iste doze.

Tabela 1 Poređenje sadržaja SOD.MDA.NO u krvi štakora u svakoj grupi (n. =8,x ±s)

Bilješka:. U poređenju sa I modelskom grupom, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2. Utjecaj patoloških promjena na slezeniCistancheostarjeli model pacova. Prazna grupa ima tanku i ujednačenu kapsulu slezene, jasne trabekule slezene bez otoka, jasno razdvajanje crvene i bijele pulpe, više čvorova slezene, iste veličine, u centru slezene. Broj ćelija u limfnoj ovojnici oko arteriole su guste. U grupi modela slezena je bila zadebljana, trabekula i korteks su otečeni, crvena i bijela pulpa je bila nejasna, bijela pulpa je značajno smanjena, broj limfocita je smanjen, veliki broj upalnih stanica je infiltriran i morfološka struktura je oštećena. Iako je veličina čvorova slezene u svakoj tretiranoj grupi bila različita, bijele i crvene granice pulpe bile su jasne. Broj ćelija u limfnoj ovojnici oko centralne male arterije slezene bio je gust, a morfologija i struktura su obnovljene. Štaviše, grupa destilatora sa visokim dozama uspela je da poboljša patološke promene. Bolji je od grupe vitamina E, u kojoj jeCistancheproizvod je bolji od grupe sirovih proizvoda, a grupa sa visokim dozama je bolja od grupe sa niskim dozama. Vidi umetak X-XI.1-10 je mtDNK u mozgu pacova u praznoj grupi, grupi modela, kontrolnoj grupi i grupi sa povišenim nivoom. mtDNA Slika 3 Rezultati elektroforeze proizvoda mtDNA PCR amplifikacije u mozgu štakora (primer PI.P2)

3.4 Delecija i mutacija mtDNK u mozgu

Prema prajmerima P3 i P4, može se dobiti konzervativni fragment mtDNK od oko 770 bp. Sa slike 2 možemo vidjeti da su ciljni fragmenti amplificirani u svih 9 traka, što ukazuje da je svih 9 grupa mtDNK uspješno ekstrahovano.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p i 750 bp u stazama 2, 4, 5, 7, 9 i 10. Fragmenti su pronađeni i poslani u Hangzhou Baocheng Biotechnology Company na sekvencioniranje. U poređenju sa sekvencom koju su objavili Gadateta et al. (1989), dokazalo je da postoji delecija fragmenata mtDNK od oko 4000-5000 bp. Dakle, pokazuje da postoji oko 4834 bp delecije mtDNK u mozgu grupe modela. Trake 1, 3 i 8 nemaju fragmenata, što ukazuje da nema delecija mitohondrijalnih fragmenata u 1, 3 i 8. Rezultati su pokazali da nije bilo fragmenata koji nedostaju u grupi kvasca sa visokim dozama destilatora, grupi pozitivnih lijekova, i prazna grupa, što sugeriše da grupa kvasca destilatora visoke doze može imati efekte protiv starenja. Pogledajte sliku 2~Slika 3.

1-10 je mtDNK u mozgu pacova u praznoj grupi, grupi modela, kontrolnoj grupi i grupi sa povišenim nivoom. mtDNA Slika 3 Rezultati elektroforeze proizvoda mtDNA PCR amplifikacije u mozgu štakora (primer PI.P2)

Cistanche: protiv starenja

4 Diskusija

Model starenja uzrokovan intragastričnom primjenom D-galaktoze trenutno je češće korišten model starenja. Model uglavnom smanjuje aktivnost raznih antioksidativnih enzima, tako da se u metabolizmu organizma stvara veliki broj slobodnih radikala, što dovodi do starenja organizma. Promjene u morfologiji tkiva slične su promjenama prirodnog starenja ⑻. Veliki broj eksperimenata je pokazao da D-galaktozom indukovano abnormalno povećanje sadržaja NO u mozgu i kori malog mozga i krvi ostarjelih miševa. Rezultati ovog istraživanja potvrdili su da je sadržaj krvi starijih pacova bio značajno veći nego kod normalne grupe, što je bilo slično rezultatima objavljenim u literaturi “-m.

U ovom eksperimentu, anti-aging učinak modela starenja štakora prije i nakon obradeCistancheje proučavan. Rezultati su pokazali MDA i N u serumu kod pacova koji su starili. Značajno povećan (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.