Efekat dekocije Bushen Huoxue Xiezhuo na apoptozu i fibrozu bubrežnog tkiva kod pacova sa 5/6 nefrektomijom na osnovu HIF-1 / PKM2
Jan 27, 2026
3.4 Učinci Bushen Huoxue Xiezhuo dekocije na proteinske ekspresije -SMA, TGF-, FN i kolagena-1 u bubrežnom tkivu CRF pacova
Kao što je prikazano na slikama 3~6, u poređenju sa lažno operisanom grupom, ekspresija proteina -SMA, TGF-, FN i kolagena-1 u bubrežnom tkivu modelne grupe je značajno povećana (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of α-SMA, TGF-β, FN, and collagen-1 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.
Tabela 2 Efekti Bushen Huoxue Xiezhuo decokcije na serumske nivoe uree, Scr i ₂-MG kod CRF pacova (x̄±s, n=10)
| Grupa | urea/(mmol/l) | Scr/(μmol/L) | ₂-MG/(mg/L) |
|---|---|---|---|
| Lažno upravljana grupa | 6.23±0.63 | 37.35±0.83 | 0.98±0.13 |
| Grupa modela | 23.02±0.73* | 118.57±1.03* | 3.95±1.07* |
| Grupa sa niskim dozama | 21.23±0.69# | 112.45±0.87# | 2.57±0.35# |
| Grupa sa srednjim dozama | 18.02±0.54# | 93.18±1.17# | 1.98±0.09# |
| Grupa sa visokim dozama | 15.23±0.33# | 87.24±1.08# | 1.13±0.17# |
| Benazepril grupa | 19.09±0.59# | 105.77±0.67# | 2.48±0.15# |
Napomena: *str<0.05 vs. sham-operated group; #P<0.05 vs. model group
3.5 Efekti Bushen Huoxue Xiezhuo decokcije na ekspresiju mRNA HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu CRF pacova
Kao što je prikazano na slici 7, u poređenju sa lažno operiranom grupom, ekspresije mRNA HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu modelne grupe su značajno povećane (P<0.05). Compared with the model group, the mRNA expressions of HIF-1α, PKM2, and HK2 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.
Slika 3. Učinci formule za toniranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenja na ekspresiju -SMA proteina u bubrežnom tkivu CRF pacova (ICH, ×400)
A. Grupa kojom upravlja lažno
B. Grupa modela
C. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti niske doze
D. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti srednje doze
E. Grupa formula za toniranje bubrega, aktiviranje krvi i eliminaciju zamućenosti visoke doze
F. Benazepril Grupa
Slika 4. Učinci formule za toniranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenja na ekspresiju TGF-proteina u bubrežnom tkivu CRF štakora (ICH, ×400)
A. Grupa kojom upravlja lažno
B. Grupa modela
C. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti niske doze
D. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti srednje doze
E. Grupa formula za toniranje bubrega, aktiviranje krvi i eliminaciju zamućenosti visoke doze
F. Benazepril Grupa
Služba podrške Wecistanche-Za više detalja o saradnji
Email:wallence.suen@wecistanche.com
3.6 Efekti Bushen Huoxue Xiezhuo dekocije na ekspresiju proteina HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu CRF pacova
Kao što je prikazano na slici 8, u poređenju sa lažno operiranom grupom, ekspresija proteina HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu modelne grupe je značajno povećana (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of HIF-1α, PKM2, and HK2 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.
3.7 Efekti Bushen Huoxue Xiezhuo dekocije na ekspresiju proteina Baxa, Bcl-2 i Caspase-3 u bubrežnom tkivu CRF pacova
Kao što je prikazano na slici 9, u poređenju sa lažno operisanom grupom, ekspresija proteina Baxa i Caspase-3 u bubrežnom tkivu modelne grupe je značajno povećana, dok je ekspresija proteina Bcl-2 značajno smanjena (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of Bax and Caspase-3 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased, and the protein expression of Bcl-2 was significantly increased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.
Slika 7. Efekti formule za toniranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenja na ekspresiju mRNA HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu CRF štakora
A. Grupa kojom upravlja lažno
B. Grupa modela
C. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti niske doze
D. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti srednje doze
E. Grupa formula za toniranje bubrega, aktiviranje krvi i eliminaciju zamućenosti visoke doze
F. Benazepril Grupa
Napomena: U poređenju sa lažnom grupom,
∗ P<0.05; Compared with the model group,
#P<0.05
Slika 8. Učinci formule za toniranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti na proteine HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu CRF štakora
A. Grupa kojom upravlja lažno
B. Grupa modela
C. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti niske doze
D. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti srednje doze
E. Grupa formula za toniranje bubrega, aktiviranje krvi i eliminaciju zamućenosti visoke doze
F. Benazepril Grupa
Slika 9. Učinci formule za toniranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti na ekspresiju proteina Bax, Bcl-2 i Caspase-3 u bubrežnom tkivu CRF pacova
A. Grupa kojom upravlja lažno
B. Grupa modela
C. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti niske doze
D. Grupa formula za toniziranje bubrega, aktivaciju krvi i eliminaciju zamućenosti srednje doze
E. Grupa formula za toniranje bubrega, aktiviranje krvi i eliminaciju zamućenosti visoke doze
F. Benazepril Grupa
Napomena: U poređenju sa lažnom grupom,
∗ P<0.05; Compared with the model group,
#P<0.05
4 Diskusija
Posljednjih godina broj oboljelih od CKD je u porastu, a značajno je porasla i njegova prevalencija. Na osnovu osnovne patogeneze CKD-a kao „nedostatka komplikovanog viškom“, profesor Tan Jinchuan je predložio terapijski princip toniranja bubrega i slezene, aktiviranja cirkulacije krvi i dreniranja zamućenja. Prethodne studije su pokazale da dekocija Bushen Huoxue Xiezhuo može regulirati puteve kao što su autofagija, apoptoza i fibroza kako bi se zaštitila bubrežna funkcija. Relevantne studije su pokazale da rabarbara, astragalus, anđelika, salvia miltiorrhiza i njihovi aktivni sastojci mogu inhibirati bubrežnu fibrozu i zaštititi funkciju bubrega [7]. Rezultati ove studije su pokazali da su u poređenju sa modelnom grupom, sve dozne grupe Bushen Huoxue Xiezhuo decokcije poboljšale nivoe uree, Scr i ₂-MG u serumu, kao i taloženje kolagenih vlakana u bubrežnom tkivu u različitom stepenu, što sugeriše da Bushen Huoxue Xiezhuo decoction igra važnu ulogu u delovanju fibroze.
Značajno je da su slični renalni zaštitni efekti prijavljeni za Cistanche tubulosa, klasičnu TCM biljku poznatu kao "pustinjski ginseng" i priznatu kao vrhunski medicinski materijal za ishranu bubrega [15]. U teoriji TCM, Cistanche tubulosa je visoko cijenjena zbog svoje sposobnosti da "oživi jang bubrega i nadoknadi esenciju", a moderna istraživanja su potvrdila da je bogata aktivnim sastojcima poput ehinakozida, verbaskozida i flavonoida [15]. Ove komponente mogu inhibirati apoptozu bubrežnih stanica, promovirati proliferaciju bubrežnih stanica, popraviti oštećeno bubrežno tkivo i proširiti bubrežne krvne žile – efekti koji su u skladu sa zaštitnim mehanizmima bubrega uočenim u Bushen Huoxue Xiezhuo dekociji [15]. Ovakvi nalazi naglašavaju potencijal TCM biljaka sa svojstvima koja njeguju bubrege u liječenju CKD.
Apoptoza je jedan od važnih mehanizama u osnovi patogeneze CRF-a. U fiziološkim uslovima, održava se delikatan dinamički balans između pro-apoptotičkih i anti-apoptotičkih članova porodice. Jednom kada se apoptoza prekomjerno aktivira, to će dovesti do patoloških promjena u glomerulima i bubrežnim tubulima, čime se oštećuje bubrežna funkcija. Kada se aktivira pro-apoptotički protein Bax, on inducira povećanje permeabilnosti vanjske membrane mitohondrija, što rezultira kolapsom potencijala unutrašnje membrane mitohondrija i oslobađanjem citokroma C (CytC) u citoplazmu, koji aktivira kaspazu-9 i dalje pokreće kaspazu-3-zavisnu appazu-8]. Relevantne studije su pokazale da u proksimalnim tubularnim epitelnim ćelijama, nokautiranje Bax gena ili povećanje ekspresije Bcl-2 može efikasno inhibirati proces apoptoze [9]. Ova studija je otkrila da sve doze Bushen Huoxue Xiezhuo decokcije značajno smanjuju ekspresiju pro-apoptotičkih faktora Bax i Caspase-3 i povećavaju ekspresiju anti-apoptotičkog faktora Bcl-2, sugerirajući da Bushen Huoxue Xiezhuo decoction može poboljšati funkciju bubrega blokiranjem apoptotičkog puta.
Bubrežna fibroza je kronična bolest bubrega posredovana višestrukim citokinima, regulirana višestrukim signalnim putevima i vođena više faktora. To je uobičajen put koji vodi do završne faze bubrežne bolesti, koju karakterizira oštećenje bubrežnog tkiva, upala, taloženje ECM-a i tubularni epitel-mezenhimski prijelaz. Bubrežna fibroza uključuje glomerularnu fibrozu i tubulointersticijsku fibrozu [8]. Istraživanja su potvrdila da je glavna patološka manifestacija ranog CRF-a renalna fibroza, a odlaganje progresije renalne fibroze je od velikog značaja za smanjenje oštećenja bubrega i ublažavanje progresije bubrežne insuficijencije [10]. TGF- je ključni podtip koji pokreće fibrozu, koji reguliše sintezu ECM preko Smad signalnog puta. FN je uključen u ćelijsku adheziju, migraciju i sastavljanje ECM-a. Glavni ćelijski izvor prekomjernog taloženja ECM su miofibroblasti, a njihova strukturna transdiferencijacija je ključni faktor u nastanku i razvoju renalne fibroze. Kolagen-1 je uglavnom izveden iz miofibroblasta, a -SMA, kao jedna od glavnih morfoloških karakteristika i markera aktivacije miofibroblasta, nivoi ekspresije oba su u pozitivnoj korelaciji sa stepenom renalne fibroze [11]. Relevantne studije su pokazale da su kod različitih hroničnih bubrežnih bolesti, mRNA i ekspresija proteina -SMA i kolagena-1 značajno povećana, praćena teškom bubrežnom fibrozom [12]. U ovoj studiji, Bushen Huoxue Xiezhuo decoction značajno je smanjio ekspresiju markera fibroze kao što su -SMA, TGF-, FN i kolagen-1, što ukazuje da Bushen Huoxue Xiezhuo decokcija ima važne efekte na poboljšanje funkcije bubrega i usporavanje progresije bubrežne fibroze.
HIF-1 /PKM2 signalni put je usko povezan s apoptozom. HIF-1 može promovirati apoptozu transkripcijskim aktiviranjem Baxa i inhibiranjem Bcl-2, a PKM2 može imati efekte regulacijom proteina povezanih s apoptozom kao što je p53 nakon nuklearne translokacije [13]. Kao jedan od ključnih regulatora hipoksičnog odgovora sisara, HIF-1 može pojačati ekspresiju TGF-a preko HIF-1 u hipoksičnim bubrežnim tubularnim epitelnim ćelijama u modelu intersticijalne fibroze bubrega, čime se aktiviraju putevi povezani sa Smadom i indukuje ekspresija -SMA markera kao što su -SMA1 i Colla markeri. Osim što učestvuje u regulaciji apoptoze, PKM2 također podržava energetske potrebe fibrotičnih stanica regulacijom glikolitičkog metabolizma [14]. Rezultati ove studije su pokazali da su nivoi HIF-1 , PKM2 i HK2 u bubrežnom tkivu grupe CRF modela značajno povećani, dok su oni u TCM grupama značajno smanjeni, što sugerira da decokcija Bushen Huoxue Xiezhuo može inhibirati apoptozu i odgoditi fibrozu bubrega supresijom {PKM2 aktivacije} /5} tkiva.
Ukratko, Bushen Huoxue Xiezhuo decoction može inhibirati apoptozu i fibrozu ćelija kod CRF pacova, poboljšati oštećenje bubrega kod pacova modela CRF, a njegov mehanizam može biti povezan s regulacijom HIF-1 /PKM2 signalnog puta.
Reference
[1] American Journal of Health-System Pharmacy. Kdigo 2024 vodič za kliničku praksu za procjenu i liječenje kronične bolesti bubrega[J]. Kidney International, 2024, 105(4S): 117-314.[2] Zhang L, Liu L, Bai M, et al. HE4 izazvan hipoksijom u tubularnim epitelnim ćelijama potiče akumulaciju ekstracelularnog matriksa i renalnu fibrozu putem NF-κB[J]. FASEB Journal, 2020, 34(2): 2554-2567.[3] Hu D, Wang L, Zhang Y, et al. Sanqi oralni rastvor ublažava fibrozu bubrega potiskivanjem aktivacije fibroblasta putem HIF-1 /PKM2/glikoliznog puta kod hronične bolesti bubrega[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2024, 335: 118679.[4] Palsson-Mcdermott EM, Curtis AM, Goel G, et al. Piruvat kinaza M2 reguliše Hif-1 aktivnost i IL-1 indukciju i kritična je determinanta Warburgovog efekta u LPS-aktiviranim makrofagima [J]. Cell Metabolism, 2015, 21(1): 65-80.[5] Vidi EJ, Cullen V. Komentar na ažuriranje KDIGO smjernica kliničke prakse za upravljanje krvnim tlakom kod kronične bolesti bubrega iz 2021. godine[J]. Nefrologija (Carlton, Vic), 2025, 30(1): e14414.[6] Wu ZH, Cao WX, Tan M, et al. Istraživanje efekata rabarbare Xiezhuo decokcije na autofagiju i apoptozu kod pacova sa hroničnim zatajenjem bubrega na osnovu mTORC1/p70S6K puta[J]. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research, 2023, 34(2): 321-324.[7] Wang J, Li YT, Liu DW, et al. Napredak u istraživanju mehanizma glavnih aktivnih komponenti antrakinona rabarbare protiv renalne fibroze[J]. Istraživanje tradicionalne kineske medicine, 2023, 36(10): 92-96.[8] Askari H, Seifi B, Kadkhodaee M, et al. Zaštitni efekti sumporovodika na hroničnu bolest bubrega smanjenjem oksidativnog stresa, upale i apoptoze[J]. EXCLI časopis, 2018, 17: 14-23.[9] Solà-Riera C, García M, Ljunggren HG, et al. Hantavirus inhibira apoptozu sprečavajući gubitak potencijala mitohondrijalne membrane kroz regulaciju faktora za preživljavanje BCL-2[J]. PLoS Pathogens, 2020, 16(2): e1008297.[10] Yuan L, Wang L, Wang H, et al. Ikariin inhibira hipermetilaciju Epo promotora, reguliše tranziciju pericita-miofibroblasta i poboljšava renalnu anemiju kod 5/6 nefrektomiranih pacova [J/OL]. Farmakologija i klinike kineske Materia Medica: 1-17 [2025-12-17]. https://doi.org/10.13412/j.cnki.zyyl.20250408.004.[11] Sravani S, Saifi MA, Godugu C. Riociguat ublažava ozljedu bubrega i fibrozu na životinjskom modelu[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020, 530(4): 706-712.[12] Li L, Zhou G, Fu R, et al. Polisaharidi ekstrahovani iz Balanophora polyandra Griff (BPP) poboljšavaju renalnu fibrozu i EMT inhibirajući Hedgehog put[J]. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2021, 25(6): 2828-2840.[13] Rana NK, Singh P, Koch B. CoCl₂-simulirana hipoksija inducira ćelijsku proliferaciju i mijenja obrazac ekspresije gena povezanih s hipoksijom uključenih u angiogenezu i apoptozu[J]. Biološka istraživanja, 2019, 52(1): 12.[14] Wang Z, Yu J, Hao D, et al. Transkriptomski potpisi koji odgovaraju na aktivator PKM2 TEPP-46 u hiperglikemijskim ljudskim bubrežnim proksimalnim epitelnim tubularnim ćelijama[J]. Frontiers in Endocrinology, 2022, 13: 965379.[15] Chengdu WeCistanche Bio-Tech., Co Ltd. Cistanche za njegu bubrega[EB/OL]. https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/cistanche-for-nourishing-kidney.html, 01.08.2022.
