Razlike u sastavu i ljekovitoj djelotvornosti sirovih proizvoda i proizvoda prerađenih parom vina od Cistanches Herba

sažetak:

CiljUporediti promjene u hemijskom sastavu i ljekovitoj djelotvornosti Roucongrong (Cistanches Herba) prije i nakon obrade, kako bi se razjasnio princip dinstanja s vinom.

Metode LC-MS je primijenjen za identifikaciju tipova hemijskog sastava prije i nakon kuhanja Cistanches Herba, u kombinaciji sa multivarijantnom statističkom analizom kako bi se pronašao disparitet komponenti prije i nakon dinstanja s vinom. Razlika u efikasnosti dokazana je na pacovskom modelu hidrogenizovanog kortizonekularnog yang nedostatka.

RezultatiIdentifikovano je ukupno 45 hemijskih komponentiCistanches Herba uzorci; Jedinjenja su doprinijela razlikama izmeđuCistanches Herba i pirjani Cistanches Herbasuechinacoside, verbaskozid, izoakteozid i tubulozid B; Ekstrakt ukupnih feniletanoidnih glikozida iz Cistanches Herba ima bolji učinak na poboljšanje modela štakora s nedostatkom yanga bubrega od pirjanog u vinu Cistanches Herba. Zaključak Sastav Cistanchea se mijenja nakon dinstanja s vinom, a pojačan je i učinak na nedostatak janga bubrega. Sastojci transformacije iz Cistanches Herbato pirjanog vina Cistanches Herba mogu biti aktivni sastojci koji jačaju bubrege i podržavaju jang.

Ključne riječi: Cistanches Herba; pirjani u vinu Cistanches Herba;nedostatak janga bubrega;echinacoside;verbascoside; izoakteozid; tubulozid B

PRODAJE SE VISOKO KVALITETNO BILJE CISTANCHE

Služba podrške Wecistanche

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Poznat je kao "ginseng" i uglavnom se distribuira u Unutrašnjoj Mongoliji, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang i drugim regijama [1]. Cistanche je tople prirode, slatkog i slanog ukusa i ulazi u meridijane bubrega i debelog creva. Djeluje tako da njeguje jetru i bubrege, blagotvorno djeluje na esenciju i krv, te vlaže crijeva i ublažava zatvor. Može se koristiti kod nedostatka janga bubrega, impotencije i neplodnosti, bolova u struku i koljenima, slabosti mišića i kostiju, suvih crijeva i zatvora [2]. Savremena istraživanja pokazuju da mesnate stabljike s listovima ljuske Cistanche uglavnom sadrže razne hemijske komponente kao što su feniletanol glikozidi, ciklopentan eter terpeni i njihovi glikozidi, lignani, šećeri, itd. [3], te imaju višestruke farmakološke učinke kao što su npr.protiv starenja,antioksidans,anti-demencija,protiv umora, te vlaženje crijeva i ublažavanje zatvora [4].

Nakon dinstanja s vinom, Cistanche-e poboljšava toniziranje bubrega i jačanje janga. Princip obrade nije jasno objašnjen. Fan Yanan i dr. [5-7] je proučavao efekte Cistanchea na defekaciju štakora, imunološku funkciju, enteričke neurotransmitere i srodne genske ekspresije prije i nakon obrade. Da et al. koristio je utjecaj feniletanol glikozida prije i poslije obrade da objasni princip njegove obrade; Zhang Chao et al. [8] koristili su promjene u sadržaju feniletanol glikozida prije i nakon obrade kako bi objasnili princip obrade; Zhang Shuyun i dr. [9] koristili su promjene u sadržaju betaina prije i nakon obrade da objasne učinak obrade na Cistanche. Postojeća literatura o preradi Cistanchea uglavnom se fokusira na farmakologiju, a istraživanja komponenti također se fokusiraju na promjene u sadržaju specifičnih komponenti, bez sistematskog proučavanja razlika u komponentama. Ovaj eksperiment je koristio tehnologiju tečne hromatografije-masene spektrometrije (LC-MS) u kombinaciji sa multivarijantnom statističkom analizom da bi se identifikovale hemijske komponente u Cistancheu, da se pronađu markeri razlike između sirovog Cistanchea i proizvoda pirjanih u vinu, i da se prouči razlika u efikasnosti sirovi Cistanche i proizvodi pirjani u vinu kroz štakorski model nedostatka janga bubrega izazvanog hidrokortizonom, kako bi se objasnila materijalna osnovaCistanche u toniziranju bubrega i promoviranju jangai princip prerade Cistanche pirjanog vina.

PRODAJE SE VISOKO KVALITETNO BILJE CISTANCHE

1 Materijali

1.1 Instrumenti

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL elektrostatičko polje tandem jonska zamka maseni spektrometar visoke rezolucije (Thermo Fisher Scientific, SAD), Theraio Xcaliber radna stanica; BT125D 1/100000 elektronska vaga (Sartorius Instrument System, Njemačka); KQ500DE CNC ultrazvučni čistač (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); XHF-D brzi disperzer (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC čitač mikroploča (Thermo Scientific); HC-3518 centrifuga velike brzine (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B multifunkcionalni snimač dobrovoljnih aktivnosti štakora (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Droge

metanol čistoće masene spektrometrije (Fisher); mravlja kiselina kvaliteta masene spektrometrije (maseni udio 99%, Sigma Aldrich); voda (Watsons destilirana voda); Jinkui Shenqi pilule (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, serijski broj 1701653); hidrokortizon sukcinat natrijum so (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., serijski broj 011705067); komplet superoksid dismutaze (SOD) (broj serije 20170115) i komplet malondialdehida (MDA) (broj serije 20170117) kupljeni su od Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; testosteron (T) i estradiol (E2) su određeni u Qingdao Kechuang centru za inspekciju kvaliteta, a kreatinin (CREA) i azot ureje u krvi (BUN) su određeni u Centru za analizu i testiranje Medicinskog univerziteta Unutrašnje Mongolije.

1.3 Životinje

100 mužjaka SD pacova, težine 180-200 g, kupljeno je od eksperimentalne životinjske farme Xinglong u okrugu Haidian, Peking, broj licence: SCXK (Peking) 2016-0003. Ovaj eksperiment na životinjama je odobrio Etički komitet Pekinškog univerziteta kineske medicine, etički broj: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Uzorci

Profesor Li Xiangri sa Fakulteta kineske medicine Univerziteta kineske medicine u Pekingu identificirao je šest serija Cistanche deserticola kao autentične, a dobivene su od osušenih mesnatih stabljika s listovima ljuske Cistanche deserticola YC Ma, biljke iz porodice Orobanchaceae. Detaljne informacije o uzorcima prikazane su u tabeli 1.

Tabela 1 Informativni list uzoraka Cistanches Herba

2 Metode

2.1 Priprema uzorka

2.1.1 Priprema sirovih proizvoda Uzmite čistu Cistanche deserticolu, omekšajte je, narežite na debele kriške i osušite.

2.1.2 Priprema proizvoda od vina

Uzmite 100 g Cistanche deserticola kriške, dodajte 30 mL pirinčanog vina, dobro promiješajte i dinstajte dok se vino ne upije. Dinstati u vodi 12 h, izvaditi i ostaviti da se malo ohladi i osušiti. Vidi sliku 1 za uzorke sirove Cistanche deserticola i pirjane u vinu.

2.2. Studija o razlici sastojaka Cistanche deserticola prije i poslije dinstanja u vinu

2.2.1 Priprema rastvora

Uzmite oko {{0}}.2 g suhog uzorka praha (propuštenog kroz 65-mrežasto sito), precizno izmjerite, stavite u smeđu volumetrijsku tikvicu od 50 mL, dodajte 25 mL 50% metanola vodeni rastvor, dobro zatvoriti, izmeriti masu, potopiti 30 minuta, ultrazvučno tretirati 40 minuta (snaga 250 W, frekvencija 35 kHz), ohladiti, ponovo izvagati, dodati 50% vodeni rastvor metanola da nadoknadi izgubljenu masu, protresti dobro, ostavite da odstoji, filtrirajte supernatant kroz mikroporoznu filter membranu od 0,22 μm i stavite filtrat u smeđu bocu tečne faze da dobijete rastvor.

PRODAJE SE VISOKO KVALITETNO BILJE CISTANCHE

2.2.2 Uslovi hromatografije

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 hromatografska kolona (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm), temperatura kolone 35 stepeni; temperatura komore za uzorke 10 stepeni, zapremina uzorka 3 μL, metanol (A)-0.1% vodeni rastvor mravlje kiseline (B) kao mobilna faza, gradijent eluiranja: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanola; 4-18 min, 26%-40% metanola; 18-24 min, 40%-100% metanola; 24-28 min, 100% metanol. Zapreminski protok je bio 0,3 mL/min, a talasna dužina detekcije 330 nm.

2.2.3 Uslovi masene spektrometrije

Korišćen je elektrosprej jonizacioni izvor (ESI), skeniranje negativnih jona, temperatura kapilara je bila 350 stepeni, zapreminski protok gasa u omotaču je bio 30 arb, protok pomoćnog gasa je bio 10 arb, napon raspršivanja je bio 3

KV, kapilarni napon je bio -35 V, napon cijevnog sočiva je bio -110 V, opseg skeniranja je bio m/z 100-1 000, sistem za prikupljanje podataka je bio Xcalibur 2.1.

2.2.4 Analiza glavnih komponenti (PCA)

Nakon dobijanja dvodimenzionalne matrice tačnih parova podataka o vremenu zadržavanja mase, instrument tabla će prikazati sve automatski uvezene informacije o tačnom vremenu zadržavanja, a za analizu će se koristiti PCA metoda modula proširene statistike.

2.2.5 Ortogonalna parcijalna diskriminantna analiza najmanjih kvadrata (OPLS-DA) LCMS kombinuje visoko odvajanje tečne hromatografije sa visokom osetljivošću masene spektrometrije. Prikupljeni podaci su prilično veliki, a za obradu podataka potrebna je multivarijantna statistička analiza. OPLS-DA dijeli podatke u dvije grupe i koristi nadgledani statistički model za dobijanje velikog broja ortogonalizovanih spektra, koji jasno pokazuju razlike između dvije grupe uzoraka. U dodatnom formatu S-plot slike, svaka tačka predstavlja tačan par podataka o vremenu zadržavanja mase, X-osa predstavlja varijablu, što je tačka podataka dalje od nulte tačke, veći je doprinos tačke razlici uzorka ; Y-osa predstavlja korelaciju između uzoraka u istoj grupi uzoraka, što je tačan par podataka o masi i vremenu zadržavanja udaljeniji od nulte tačke, to je korelacija jača. Prema tome, parovi podataka o vremenu retencije sa tačnošću mase na oba kraja krivulje u obliku slova S predstavljaju najpouzdanije karakteristične jone iz svake grupe uzoraka.

PRODAJE SE VISOKO KVALITETNO BILJE CISTANCHE

2.2.6 Analiza strukture masene spektrometrije

Nakon dobijanja karakterističnih jona, izvršeno je usklađivanje sastava elemenata i spojeva izračunavanjem precizne relativne molekulske mase i kombinovanjem postojeće baze podataka i relevantne literature radi identifikacije diferencijalnih komponenti.

2.3 Studija o razlici u djelotvornosti prije i poslije dinstanja s vinom

2.3.1 Priprema ekstrakta Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (serijski broj 160901) i odgovarajući prah Cistanche deserticola pirjana u vinu ekstrahovani su prema uslovima pod "2.2.1", filtrirani nakon ultrazvučne obrade, ponovljeni dva puta, filtrat je spojen, koncentriran vakuum destilacijom i zamrznut- osušeni.

2.3.2 Grupiranje pokusa na životinjama i primjena lijeka

Slika 1 Cistanches Herba A i pirjani Cistanches Herba B

(1) Grupisanje: Pacovima je dat slobodan pristup vodi i ishrani. Nakon tjedan dana adaptivnog hranjenja, nasumično su podijeljeni u 5 grupa (Tabela 2), sa po 10 štakora u svakoj grupi, i to normalna grupa, model grupa, sirova Cistanche deserticola grupa (PR), pirjana Cistanche deserticola grupa (PW) i pozitivna kontrola Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Modeliranje: Osim normalne grupe, sve ostale četiri grupe su dobile injekciju hidrokortizon natrijum sukcinata im, u dozi od 20 mg/kg, tokom 14 uzastopnih dana. Normalnoj grupi je ubrizgana ista doza normalnog fiziološkog rastvora. Općenito stanje štakora u svakoj grupi je promatrano kako bi se utvrdilo da li pokazuju simptome kao što su strah od hladnoće, sklonost toplini, hladni udovi, bistar i dugačak urin, sklupčana i savijena leđa, dosadna i neuredna dlaka i mentalna depresija. Istovremeno je mjerena tjelesna težina, broj spontanih aktivnosti, unos hrane, unos vode, izlučivanje urina i drugi pokazatelji pacova u svakoj grupi.

(3) Primjena: Doza za pacove izračunata je na osnovu kliničke doze Jinkui Shenqi pilula i Cistanche deserticola. Doziranje svake grupe Cistanche deserticola iznosilo je 1,80 g/kg u odnosu na količinu sirovog lijeka. Specifična doza je prikazana u Tabeli 2. Svaki ekstrakt Cistanche deserticola i Jinkui Shenqi pilule pripremljen je u rastvorima određene koncentracije sa dejonizovanom vodom. Rastvor je davan intragastrično svaki dan sa intragastričnom zapreminom od 10 mL/kg tokom 30 uzastopnih dana. Normalna grupa i model grupa su davane intragastrično sa jednakom količinom dejonizovane vode svaki dan. Tjelesna težina je mjerena sedmično, a intragastrični volumen je prilagođen tjelesnoj težini pacova. Nakon davanja, pacovi su gladni 12 h. Nakon pentobarbitalne anestezije, uzeta je krv iz abdominalne aorte za detekciju serumskog indeksa. Uklonjeni su bubrezi, testisi, epididimis, sjemene vezikule i prostata radi detekcije relevantnog indeksa.