Određivanje ehinakozida u vodenom ekstraktu Cistanche Herba HPLC

sažetak:

Cilj Ustanovljena je HPLC metoda zaodređivanje ehinakozidauvodeni ekstrakt Cistancheaherba.

Metode Echinacoside je određen HPLC. Odvajanje je izvršeno na Inertsil ODS-SP C18 koloni sa mobilnom fazom koja se sastoji od acetonitrila(A) i 0.4% rastvora fosforne kiseline (B), eluiranjem u gradijentu. Talasna dužina detekcije je postavljena na 333 nm, a temperatura kolone je bila 30 stepena. Brzina protoka je bila 1,0 mL·min-1, a volumen ubrizgavanja je bio 10 μL. Rezultati Linearni odnos ehinakozida u opsegu koncentracije od 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 je bio dobar (r=0.999 8). Oporavak je iznosio 94,59%-105,31% (RSD= 2,93%,n=9). Sadržaj ehinakozida u vodenim ekstraktima Cistanche herba iznosio je 15.527,7.347,12.267 mg·g{29}}. Zaključak Uspostavljena HPLC metoda sa dobrom ponovljivošću je tačna, jednostavna i izvodljiva. Pogodan je za određivanje ehinakozida u vodenom ekstraktu Cistanche herba.

Ključne riječi:HPLC;vodeni ekstrakt biljke Cistanche herba; echinacoside; određivanje sadržaja

Cistanche deserticola je tonik tradicionalne kineske medicine koji se obično koristi u kliničkoj praksi i poznat je kao "pustinjski ginseng" [1]. Cistanche deserticola zabilježena u izdanju Kineske farmakopeje iz 2015. je osušena mesnata stabljika s ljuskavim listovima Cistanche deserticola YC Ma ili Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Toplo je, slatko i slano i vraća se u meridijane bubrega i debelog creva. Ima efekte hranjenja janga bubrega, obnavljanja esencije i krvi, vlaže crijeva i laksativa [2]. "Materia Medica od Shen Nonga", kaže da može "tonizirati sredinu, hraniti pet unutrašnjih organa, ojačati jin i hraniti suštinu". Cistanche deserticola uglavnom sadrži feniletanoidne glikozide, iridoide i njihove glikozide, lignane i njihove glikozide, polisaharide, esterske spojeve i alkaloide [3]. Feniletanol glikozidi su glavni aktivni sastojci Cistanche deserticola. Među njima, ehinakozid i verbaskozid su navedeni u Cistanche deserticola u kineskoj farmakopeji.

Indikativne komponente za identifikaciju i određivanje sadržaja. Farmakološke studije [4] pokazuju da Cistanche deserticola ima različite farmakološke efekte kao što su laksativ, zaštita jetre, anti-osteoporoza, antioksidans, protiv starenja i umora. Vodeni ekstrakt Cistanche deserticola može promovirati ekspresiju gena koštanog morfogenetskog proteina 2 u osteoblastima pacova, kiseloj fosfatazi rezistentnoj na tartrat, osteokalcinu u serumu miševa sa ovariektomijom i genima Smad1, mad5, transformirajući faktor rasta-, itd. u koštanoj srži. , ima efekte protiv osteoporoze [5-6].

Ehinacea može promovirati proliferaciju osteoblasta i promovirati diferencijaciju mezenhimalnih matičnih ćelija koštane srži uzgojenih in vitro u osteoblaste [7-9]. Posljednjih godina bilo je mnogo istraživačkih izvještaja o određivanju sadržaja ehinakozida i verbaskozida u etanolnom ekstraktu Cistanche deserticola i njegovim složenim preparatima [10-12], ali postoji nekoliko izvještaja o određivanju sadržaja indeksnih komponenti u Cistanche deserticola vodeni ekstrakt. U ovoj studiji, tečna hromatografija visokih performansi (HPLC) je korištena za određivanje sadržaja ehinaceaside u vodenom ekstraktu Cistanche deserticola.

1 materijal

1.1 Instrumenti

LC-20AT tečna hromatografija visokih performansi, SPD-20A detektor, SIL-20A autosampler, CTO-10ASvp peć na koloni, LC radna stanica za tečnu hromatografiju, Shimadzu Corporation of Japan; MES125P-OCE-DU elektronska analitička vaga, kompanija Sartorius, Njemačka; SHZ-D (Ⅲ) višenamjenska vakuum pumpa za cirkulirajuću vodu, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 rotacioni isparivač cirkulacioni sistem, RV 10 D S96 rotacioni isparivač, IKA Company, Nemačka; DK-S26

Električna vodena kupelj konstantne temperature, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; Stroj za ultračistu vodu serije UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Medicinski materijali i reagensi

Medicinski materijal Cistanche deserticola kupljen je od Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., serijski broj: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, glavni tradicionalni kineski farmaceut na Trećoj pridruženoj bolnici Kineskog Mediangži univerziteta, identifikovao je kao osušena mesnata stabljika sa ljuskavim listovima Cistanche deserticola YCMa. Uzorak je pohranjen u sobi za testiranje na lijekove Treće pridružene bolnice Univerziteta kineske medicine Guangzhou; Referentna supstanca glikozida ehinacee, sadržaj 89,7%, Kineski institut za kontrolu hrane i lijekova, broj serije: 111670-

201706; acetonitril je hromatografski čist (Merck, Njemačka); metanol i fosforna kiselina su analitički čisti (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); voda je ultra čista voda.

2 Metode i rezultati

2.1 Priprema vodenog ekstrakta Cistanche deserticola

Uzmite krupni prah ljekovitog materijala Cistanche deserticola, dodajte 10 puta veću količinu destilovane vode, zagrijte i refluksirajte za ekstrakciju dva puta, svaki put po 1 sat, filtrirajte, sjedinite filtrat i koncentrirajte filtrat pomoću rotacionog isparivača do sadržaja sirove droge od 0,100 g·mL-1, i čuvati na 4 stepena za kasniju upotrebu.

2.2 Kromatografski uslovi i prikladnost sistema

Kromatografska kolona: Inertsil ODS SP C18 kolona (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); mobilna faza: acetonitril (A)-0.4% rastvor fosforne kiseline (B), gradijent eluiranja: 0 ~ 5 min, 17%

A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; talasna dužina detekcije: 333 nm; temperatura kolone: ​​30 stepeni; brzina protoka: 1,0 mL·min{10}};

Zapremina ubrizgavanja: 10 μL. Pod ovim hromatografskim uslovima, razmak između vrhova ehinakozida i susednih komponenti je veći od 1,5, a broj teoretskih ploča na osnovu pika ehinakozida ne bi trebalo da bude manji od 4,000. Kromatogram je prikazan na slici 1.

2.3 Priprema rastvora

2.3.1 Otopina referentne supstance Izvažite odgovarajuću količinu referentne supstance ehinakozida, precizno je izvažite, stavite je u odmjernu tikvicu od 10 mL, dodajte metanol da se otopi i pripremite otopinu referentne supstance koja sadrži 898,794 ug ehinaceaside po ml, 4 stepena Sačuvajte za kasniju upotrebu.

2.3.2 Test rješenje

Precizno odmjeriti 2.0 mL vodenog ekstrakta Cistanche deserticola, ispariti do suhog u vodenom kupatilu, dodati metanol da se otopi, razrijediti do zapremine u volumetrijskoj tikvici od 10 mL, dobro promućkati i filtrirati sa dobiti mikroporoznu membranu od 0,22 μm.

2.4 Istraživanje linearnog odnosa

Precizno izmjerite {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL referentne otopine pod tačkom 2.3.1, stavite u volumetrijsku tikvicu od 5 mL, dodajte metanol da dopunite zapreminu i dobro promućkajte da dobijete gradijent koncentracije od 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 referentni rastvor, filtriran kroz mikroporoznu membranu od 0,22 μm. Izmjerite prema hromatografskim uslovima pod 2.2 i zabilježite površinu pika. Izvršite linearnu regresiju sa masenom koncentracijom referentne supstance kao apscisom (X, ug·mL-1) i površinom vrha kao ordinatom (Y) i dobije se jednačina regresije: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Rezultati pokazuju da ehinacea ima dobar linearni odnos u opsegu koncentracije od 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Test preciznosti

Uzmite 539.276 4 ug ·mL- 1 referentne otopine, ubrizgajte i mjerite 6 puta u kontinuitetu prema hromatografskim uslovima pod 2.2, i zabilježite površinu pika. Rezultati su pokazali da je RSD površine vrha ehinakozida 1,81%, što ukazuje na dobru preciznost instrumenta.

2.6 Test stabilnosti

Precizno odmjeriti 2.0 mL vodenog ekstrakta Cistanche deserticola, ispariti do suhog u vodenom kupatilu, dodati metanol da se otopi, razrijediti u volumetrijskoj tikvici od 10 mL, dobro promućkati, filtrirati {{ 7}}.22 μm mikroporozne membrane, pratite hromatografske uslove iz tačke 2.2 i postavite na 0 i 2 respektivno. , 4, 8, 12, 24 h mjerenje ubrizgavanja, snimite površinu vrha. Rezultati su pokazali da je RSD površine pika ehinakozida 1,16%, što ukazuje da je test rastvor imao dobru stabilnost u roku od 24 sata.

2.7 Test ponovljivosti

Precizno izmjeriti 2.0 mL vodenog ekstrakta Cistanche deserticola i paralelno pripremiti 6 test otopina prema metodi pod 2.3.2. Ubrizgajte uzorke za merenje u skladu sa hromatografskim uslovima pod 2.2 i zabeležite površinu pika. Rezultati su pokazali da je RSD odechinacosidemasena koncentracija iznosila je 1,28%, što ukazuje na dobru ponovljivost metode.

2.8 Test obnavljanja uzorka

Precizno izmjerite 9 porcija od 1.0 mL vodenog ekstrakta Cistanche deserticola, dodajte 0.8, 1.0 i 1,2 mL referentne otopine (1,552 mg·mL{{11 }}) odnosno ispariti do suva u vodenom kupatilu, dodati metanol da se rastvori i prilagoditi na 10 mL volumetrijsku tikvicu; Dobro promućkajte i filtrirajte kroz mikroporoznu membranu od 0,22 μm za pripremu testnih rastvora visoke, srednje i niske koncentracije. Pripremite 3 kopije svake koncentracije paralelno. Mjerite prema hromatografskim uslovima pod 2.2. Zabilježite površinu vrha i izračunajte oporavak uzorka. Rate. Rezultati su prikazani u tabeli 1.

2.9 Određivanje sadržaja uzorka

Precizno odmjeriti 3 porcije od 2.0 mL vodenog ekstrakta Cistanche deserticola, ispariti do suhog u vodenom kupatilu, dodati metanol da se otopi, razrijediti u volumetrijskoj tikvici od 10 mL, dobro promućkati, filtrirati sa mikroporoznu membranu od 0,22 μm i mjeriti prema hromatografskim uslovima pod 2.2. Zabilježite površinu vrha i izračunajte sadržaj ehinaceaside. Rezultati su prikazani u tabeli 2.

Tabela 1. Rezultati testova oporavka ehinakozida

Tabela 2. Rezultati određivanja sadržaja ehinakozida u vodenom ekstraktu Cistanche herba