Metode za kontrolu kvaliteta Cistanche deserticola

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei i dr.

Tradicionalna kineska medicinaCistancheje sočna stabljikaCistanche deserticolaYC Ma ili Cisanche tubulosa (Schenk) Wight sa suvim ljuskavim listovima. Ima funkcije toniziranja janga bubrega, hranjive esencije i krvi, vlaženja crijeva i laksativa itd. Najviše se koristi kod nedostatka janga bubrega, manjka esencije i krvi, impotencije i neplodnosti, bolova i slabosti u struku i koljenima, slabosti mišića i kostiju, suhoća crijeva i zatvor. Savremena farmakološka istraživanja to pokazujuCistancheima mnoge funkcije kao što su poboljšanje seksualne funkcije, otpor Alchajmerovoj bolesti i Parkinsonovoj bolesti, poboljšanje sposobnosti učenja i pamćenja, protiv starenja, protiv umora, zaštita jetre i laksativ [4]. Veliki broj studija je potvrdio da feniletanoidni glikozidi uCistanche deserticolaimaju očigledne efekte na poboljšanje sposobnosti učenja i pamćenja, otpornost na Alchajmerovu bolest i Parkinsonovu bolest (4, oligosaharidi i polioli imaju efekat laksativa i laksativa 64 ). "Farmakopeja Narodne Republike Kine" mjeri samo sadržaj feniletanoidnih glikozida ehinakozida i verbaskozida uCistanchedeserticola, ali ne mjeri aktivne komponente svog laksativnog djelovanja, pa je teško postići sveobuhvatnu analizu ljekovitog materijalaCistanchedeserticola. Kontrola kvaliteta. Kako bi se prevazišlo ovo ograničenje i uspostavio sistem evaluacije kvaliteta sa više indeksa koji se odnosi na glavne funkcije i indikacijeCistanchedeserticola, ova studija je koristila HPLCELSDP4 za uspostavljanje metode kvantitativne analize za betain, manitol, fruktozu, glukozu i saharozu u medicinskim materijalimaCistanchedeserticola. Osim toga, 58 serijaCistanchedeserticolalekovitih materijala različitog porekla i 10 serija lekovitih materijala odCistancheu oblasti Hotan u Xinjiangu su testirani, što može pružiti referencu za sveobuhvatnu kontrolu kvaliteta i evaluaciju medicinskih materijalaCistanchedeserticolau budućnosti.

Click to Cistanche ekstrakt koristi proizvode

1 Instrument i reagensi

1.1 Instrumenti

Sartorius elektronska vage BT25 S, BS 124 S (Peking Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 tečna hromatografija visokih performansi; ALLTECH 2000ES detektor evaporativnog raspršivanja svjetlosti (EISD); Ultrazvučni čistač KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reagensi

Kontrolna supstanca: betain (serija: {{0}}, čistoća: 99,2 posto), manitol (serija: 10053-201304, čistoća: 99,0 posto), D-fruktoza (serija: 111504-201703 , čistoća: 99,8 posto ), D - bezvodna glukoza (serijski broj: 110833-201506, čistoća: 99,9 posto), saharoza (broj serije: 111507-201303, čistoća: 99,8 posto), sve kupljeno od Kineskog nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova.

Lekoviti materijaliCistanchedeserticolaprikupljeni su u Unutrašnjoj Mongoliji, Xinjiangu, Gansuu i drugim mjestima, sa ukupno 58 serija. Profesor Tu Pengfei sa Farmaceutskog fakulteta Univerziteta u Pekingu identifikovao ih je kao osušene mesnate stabljikeCistanchedeserticolaYCMa biljke Lidangaceae, kao što je prikazano u tabeli 3.

Lekoviti materijaliCistanchedeserticolaprikupljeni su u oblasti Hotan, Xinjiang, u ukupno 10 serija. Identificirao ih je profesor Tu Pengfei sa Farmaceutskog fakulteta Univerziteta u Pekingu kao osušene mesnate stabljike sa ljuskavim listovima Cistanche tubulosa (Schenk) Wight biljke Liedangaceae, kao što je prikazano u Tabeli 4.

1.3 Reagensi

Acetonitril je hromatografski čist (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanol je hromatografski (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), a voda je ultra čista voda.

2 Metode i rezultati

2.1 Kromatografski uslovi

Kromatografska kolona je bila ShodexAshaipak NH2P-50 4E polimer gel kolona (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); mobilna faza je bila acetonitril-voda (77∶23); brzina protoka je bila 0,7 mL·min-1; temperatura kolone je bila 25 stepeni; Detektor raspršenja svjetlosti (ELSD): Temperatura drift cijevi je bila 100 stepeni, a brzina protoka plina nosača 3 L·min{15}}.

2.2 Priprema referentnog rastvora

Uzmite odgovarajuću količinu betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze referentne supstance, precizno je izmjerite, dodajte vodu da napravite miješanu otopinu koja sadrži 0.25 mg betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze po 1 mL, dobro promućkajte i uzmite.

2.3 Priprema rastvora za ispitivanje

Uzmite oko 1.0 gCistanchemedicinski prah (propušten kroz sito br. 4), precizno ga izmjeriti, staviti u smeđu volumetrijsku tikvicu od 100 mL, dodati precizno 50 mL 50 posto metanola, čvrsto zatvoriti, protresti, izvagati potopiti 30 min, a zatim ultrazvučno (snaga 250 W, frekvencija 35 kHz) 40 min, izvaditi, ohladiti, ponovo izvagati, dodati 50 posto metanola da se smanji masa, dobro promućkati i ostaviti stoji. Precizno aspirirajte 5 mL supernatanta, stavite u volumetrijsku tikvicu od 25 mL, razblažite do oznake sa 50 posto metanola, dobro protresite i filtrirajte kroz mikroporoznu membranu od 0,2 μm.

2.4 Metoda određivanja

Precizno izvucite 5 i 10 μL referentne otopine i 5 μL ispitne otopine, ubrizgajte ih u tečni hromatograf, zabilježite površinu pika i izračunajte prema logaritamskoj jednadžbi eksterne standardne metode dvije tačke.

2.5 Test podobnosti sistema

U skladu sa hromatografskim uslovima pod tačkom 2.1, precizno nacrtajte 5 μ referentne i ispitne otopine, respektivno, i ubrizgajte ih u tečnu hromatografiju visokih performansi, izmerite i snimite hromatogram, kao što je prikazano na slici 1. Kromatografski vrhovi testnog uzorka pokazao je isto vrijeme zadržavanja kao i hromatografski pikovi referentne supstance, rezolucija je bila dobra, a hromatografski uslovi su bili izvodljivi.

Napomena: A. Kontrolna supstanca; B.Cistanchebr. 49 uzorak; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. manibol ; 4. glukoza; 5. sucreve

Slika 1 HPLC profili referentne supstance i uzorka Cistanche br. 49

2.6 Ispitivanje linearnih odnosa

Uzmite odgovarajuće količine betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze kao referentnih supstanci, precizno ih izmjerite i dodajte vodu da svaki 1 mL sadrži betain 0.496 0 mg, manitol {{3} }.994 0 mg, voće 1.0126 mg, glukoza 1.0882 mg i saharoza 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760 μ, manitol 0.1988, 0.4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, fruktoza 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Kromatografski uslovi su ubrizgani i detektovani, a površina pika je snimljena; tada je logaritamska vrijednost X (ug) svake referentne količine ubrizgane supstance korištena kao apscisa, a vrijednost logaritma Y površine vrha je bila ordinata i nacrtana je standardna kriva. Rezultati su prikazani u tabeli 1.

Tabela 1 Rezultati istraživanja linearnog odnosa

2.7 Test preciznosti

Precizno nacrtajte test rastvor (uzorak br. 49), pod gore navedenim hromatografskim uslovima, kontinuirano ubrizgajte 6 puta, izmerite površinu pika svakog hromatografskog pika i izračunajte njegovu RSD vrednost. Rezultati Dinari vršnih površina betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze bili su 0,84 odsto, 2,56 odsto, 1,27 odsto, 2,62 odsto i 1,52 odsto, respektivno, što ukazuje da je preciznost instrumenta korišćenog u ova studija je bila dobra. 2.8 Test ponovljivosti

Uzmite 6 uzorakaCistanchedeserticola(uzorak br. 49), pripremiti rastvor za ispitivanje prema metodi iz tačke 2.3, izmeriti površinu pika svakog hromatografskog pika i izračunati odgovarajući sadržaj. Rezultati Prosečan sadržaj betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze (n=6) iznosio je 7,93 odsto, 7,27 odsto, 8,74 odsto, 2,75 odsto i 4,81 odsto, a dinara 2,83 odsto, {{1,94 odsto 18}},97 posto i 2,60, respektivno. posto, 1,40 posto, što ukazuje da metoda ima dobru ponovljivost. 2.9 Test stabilnosti

Uzmite ispitni rastvor (uzorak br. 49), ubrizgajte ga na 0, 4, 8, 12, 16 i 24 h nakon pripreme za merenje i izračunajte RSD vrednost svakog hromatografskog pika. Rezultati RSD betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze iznosili su 0,61 odsto, 1,92 odsto, 1,34 odsto, 2,83 odsto i 0,69 odsto, respektivno, što ukazuje da je test rastvor bio dobar stabilnost u roku od 24 sata. 2.10 Test oporavka

Uzmite 6 uzorakaCistanchedeserticolasa poznatim sadržajem (uzorak br. 49), tačno odmjerite 0.25g, stavite u smeđu volumetrijsku tikvicu od 50mL i precizno izvucite 25mL miješane referentne otopine u koncentraciji 1: 1 (koji sadrži {{10}}.7900 mg betaina). U uzorak su dodani ml-, fruktoza 0,7236 mg"mL-1, manitol 0,8812 mg·mL-1, glukoza 0,2708 mg·mL-1, saharoza 0,4883 mg'mL-'), a test rastvor je pripremljen prema metodi pod 2.3. Detektovano prema gore navedenim hromatografskim uslovima, izračunato njegovo obnavljanje, rezultati su prikazani u tabeli 2, što ukazuje da metoda ima dobru tačnost.

Tabela 2: Rezultati mjerenja stope obnavljanja uzorka od 5 komponenti koje treba testirati (n=6)

3 Diskusija

3.1 Izbor komponenti indeksa

Ukupni oligosaharidi odCistanchesu efektivni deloviCistancheza laksative. Autor je analizirao hemijski sastav ovog dijela pomoću LC-MS i referentne supstance i utvrdio da se ovaj dio sastoji uglavnom od betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze. Stoga je ovih 5 komponenti odabrano kao indeksne komponenteCistanchedeserticola, te je uspostavljena metoda određivanja sadržaja.

3.2 Izbor hromatografskih kolona

Pet komponenti koje treba testirati, betain, manitol, fruktoza, glukoza i saharoza, relativno su polarne i ne mogu se zadržati u Cn koloni obrnute faze. Općenito, vrhovi se pojavljuju u roku od 1-2 minuta, a komponente se ne mogu odvojiti. Amino kolone Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) i Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) za odvajanje šećera i poliola, i amino kolone na bazi polimera Prevail Carbohydrate ES ( Prevail Carbo250 mm ES ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm×4,6 mm, 5 μm). Rezultati pokazuju da amino kolona polimerne matrice može efikasno odvojiti ovih pet komponenti.

3.3 Izbor detektora

Pet komponenti koje se testiraju nemaju očiglednu UV apsorpciju, a sadržaj UV detektora ne može se direktno odrediti. Stoga je u ovom radu uspostavljena metoda kvantitativne analize komponenti šećernog alkoholaCistanchedeserticolakoristeći HPLC-EISD. Rezultati pokazuju da metoda ima visoku osjetljivost, dobru ponovljivost i visoku tačnost, te se može koristiti za kontrolu kvalitetaCistanchedeserticolai drugi medicinski materijali koji sadrže betain i šećerne alkohole.

3.4 Ispitivanje metode pripreme ispitnog rastvora

Upoređivani su različiti rastvarači za ekstrakciju uključujući vodu, 30 posto metanola, 50 posto metanola, 70 posto metanola, metanola itd. Rezultati su pokazali da osim nešto niže brzine ekstrakcije 70 posto metanola i metanolnog rastvarača, nije bilo značajnije razlike u ostalim otapalima, pa je napravljen direktan odabir. Kao rastvarač pod stavkom "Određivanje sadržaja" korišćen je 50-postotni metanolCistancheu Farmakopeji Narodne Republike Kine, a pripremljen je prema metodi pripreme odgovarajućeg test rastvora, a zatim razblažen 5 puta da bi se odredile komponente šećernog alkohola.

3.5 Detekcija i analiza uzoraka sa različitim bazama

U ovoj studiji, sadržaj 5 komponenti u 58 serijaCistanchedeserticolai 10 serijaCistanchedeserticolaodređivani su lekoviti materijali. Maseni udjeli betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze u 58 serijaCistanchedeserticolauzorci su bili 2,73 posto -17.65 posto, 2.46 posto -16.34 posto, 2.52 posto {{10}}, 74 posto, 0.97 posto -14.06 posto , 3,15 posto -27.16 posto ; Manitol, fruktoza i glukoza su bili 1.00 posto -13.04 posto, 2.98 posto -8.85 posto, 1.09 posto -5.33 posto u 10 serijaCistancheuzorci, odnosno betain i saharoza nisu detektovani. Sadržaj medicinskih materijala uvelike se razlikuje među serijama i ne postoji pravilo koje treba slijediti, što ukazuje na neophodnost uspostavljanja standarda za određivanje sadržaja radi kontrole kvaliteta ljekovitog materijala. Osim toga, ova metoda može efikasno razlikovati dvije vrsteCistanchebazne biljke, tj.Cistanchene sadrži betain i saharozu, dok je sadržaj ove dvije komponente veći uCistanche deserticola. Ovo također pruža osnovu za analizu razlika u teksturi i staništu dvaju ljekovitih materijalaCistanche deserticola. U poređenju sa lekovitim materijalomCistanche deserticola, tekstura je mekša, a lokalno je poznata i kao "Soft Dayun", dokCistanchenaziva se "Chai Dayun" jer sadrži saharozu (3,15 posto ~27,16 posto). ).Cistanche deserticolase uglavnom distribuira u Alxi u Unutrašnjoj Mongoliji, dokCistancheuglavnom se distribuira u području Hotan u Xinjiangu, gdje je temperatura viša od one u području Alxa, a navodnjavanje kapanjem se često koristi u lokalnom području, ali kada temperatura padne,Cistanchepretrpeće ozbiljnu štetu. Šteta od smrzavanja, s jedne strane, ima određenu vezu sa visokim sadržajem vode, as druge strane, ima veze sa sastojcima koje sadrži. Betain 243 je važna supstanca za osmotsko prilagođavanje, koja igra važnu ulogu u povećanju otpornosti biljaka na stres, kao što je otpornost na slanost, sušu, niske temperature i jako svjetlo. Upravo zbog visokog sadržaja betaina sadržanog uCistanche deserticolada ima bolju otpornost na slano-alkalne, suše i oštećenja od smrzavanjaCistanche, i ima relativno široku distribuciju.

3.6 Analiza odCistanchedeserticolauzorci različitog porijekla

Među 58 grupa pustinjecistancheuzorci medicinskog materijala, 45 serija je proizvedeno iz Alxa lige, Unutrašnja Mongolija, 3 serije su iz Wangyedi (Dengkou County), Unutrašnja Mongolija, a 1 serija je nepoznata. Svih 49 serija ljekovitog materijala imalo je različit sadržaj 5 komponenti. Međutim, nema značajne razlike. Razlog za analizu može biti taj što se svi lekoviti materijali proizvode u istom pustinjskom području, ekologija i geografsko okruženje su slični, a kvalitet proizvoda relativno ujednačen i stabilan. Postoje 3 serije proizvedene u okrugu Minqin, Gansu, i 6 serija iz Xinjianga. Prema analizi na slici 2, u poređenju sa lekovitim materijalima proizvedenim u Unutrašnjoj Mongoliji, glavna razlika se ogleda u sadržaju fruktoze i saharoze. Sadržaj saharoze u ljekovitom materijalu bio je relativno najveći, ali s obzirom na malu količinu uzoraka iz dva porijekla, ovaj zaključak treba provjeriti prikupljanjem više uzoraka. 3.7 Sažetak

U ovoj studiji ustanovljen je HPLC Wang ISD za istovremeno određivanje 5 aktivnih sastojaka laksativa, što je omogućilo pogodniju, efikasniju i precizniju metodu za kontrolu kvalitetaCistanche deserticola, te dao osnovu za unapređenje standarda kvaliteta i dalji razvojCistanchedeserticola. smislena referenca.

Reference

【1】 Državna farmakopejska komisija. Farmakopeja Narodne Republike Kine: A 【M】. Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Napredak istraživanja farmakološke aktivnostiCistancheIzložba. Kineska biljna medicina, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Status istraživanja farmakoloških efekata ukupnih glukozida u cilantru [J]. Kineski časopis za kliničku farmakologiju, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Napredak istraživanja neurofarmakologijeCistanche deserticolaIzložba [J]. Kineski časopis za farmaciju, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Napredak istraživanja farmakoloških efekataCistanche deserticolau liječenju Alchajmerove bolesti []. Šangajski časopis tradicionalne kineske medicine, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou, et al. Laksativni efekat izolovanih delovaCistanche deserticolaEksperimentalna istraživanja □. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen, et al.Cistanche deserticolaekstrakt galaktitola Studija o dozi i odgovoru na djelovanje stolice [J]. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, et al. Istraživanja o ljekovitim tvarimaCistanche deserticolaza istraživanje laksativa [J]. Moderna kineska medicina u Kini, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. Tri aktivnosti odCistanche deserticolapod različitim faktorima uticaja Kvantitativna analiza komponenti J. Kineska herbalna medicina, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. OdređivanjeCistanche deserticolaby HPLCEISD Content of Galactitol. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan, et al. HPLCELSD određivanjeCistanchei epruveta Sadržaj galaktitola uCistanche[J]. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao, et al. Učinak betaina na poboljšanje otpornosti biljaka na stres i njegov mehanizam djelovanja. Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. Pregled istraživanja gena otpornosti biljaka na hladnoću. Ruralna ekonomija i tehnologija, 2018, 29(8): 23-25.